1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 28922
(51) C12N 7/00 (2006.01)
A61K 39/12 (2006.01)
КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ
МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2013/1322.1
(22) 08.10.2013
(45) 15.09.2014, бюл. №9
(72) Кутумбетов Леспек Бекболатович;
Мырзахметова Балжан Шайзадаевна; Даутпаева
Зауреш Жумагановна
(73) Товарищество с ограниченной
ответственностью "Казахский научно-
исследовательский ветеринарный институт"
(56) RU 2127602 C1, кл. A61K 39/12, C12N 7/00,
1999
(54) ШТАММ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОЙ
БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ КУР AV-0239,
ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ
ЖИВОЙ СУХОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ
ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ
КУР
(57) Изобретение относится к области ветеринарной
вирусологии и может быть использовано при
изготовлении вакцины против инфекционной
бурсальной болезни птиц.
Технический результат, обспечиваемый
изобретением, выражается в получении штамма
вируса инфекционной бурсальной болезни кур,
пригодного для изготовления слабореактогенной,
иммунологически эфективной живой сухой
вакцины.
Штамм вируса инфекционной бурсальной
болезни кур AV-0239 АПФ-2011 КазНИВИ
депонирован в лаборатории генофонда
микроорганизмов ТОО "Казахский научно-
исследовательский ветеринарный институт",
используемый для изготовления живой сухой
вакцины против инфекционной бурсальной болезни
кур.
(19)KZ(13)A4(11)28922

2. 28922
2
Изобретение относится к области ветеринарной
вирусологии и может быть использовано при
изготовлении вакцины против инфекционной
бурсальной болезни птиц.
Известен штамм вируса инфекционной
бурсальной болезни кур «БГ», культивируемый в
развивающихся куриных эмбрионах, используемый
для изготовления вакцины против инфекционной
бурсальной болезни кур. [Патент Российской
Федерации №2127602, кл. А61K 39/12, С12N 7/00,
1999].
Недостатком известного штамма вируса является
то, что он обладает повышенный реактогенностью
по отношению к цыплятам.
Задачей изобретения является получение штамма
вируса инфекционной бурсальной болезни кур,
способного репродуцироваться в развивающихся
куринных эмбрионах и обладающего пониженный
реактогенностью с сахранением высокой
иммунногенности.
Технический результат, обспечиваемый
изобретением, выражается в получении штамма
вируса инфекционной бурсальной болезни кур,
пригодного для изготовления слабореактогенной,
иммунологически эфективной живой сухой
вакцины.
Штамм вируса инфекционной бурсальной
болезни кур AV-0239 АПФ-2011 КазНИВИ
депонирован в лаборатории генофонда
микроорганизмов ТОО "Казахский научно-
исследовательский ветеринарный институт",
используемый для изготовления живой сухой
вакцины против инфекционной бурсальной болезни
кур.
Штамм вируса инфекционной бурсальной
болезни кур AV-0239 АПФ-2011 КазНИВИ
Штамм получен из слабо вирулентного вируса
инфекционной бурсальной болезни кур,
выделенного из фабрициевой бурсы курицы,
доставленной из птице фабрика Алматинской
области, путем последовательного пассирования в
развивающий куриных эмбрионах и фибробласт
куриных эмбрионах (РКЭ и ФКЭ).
Полученный штамм характеризуется
следующими признаками.
Назначение штамма: штамм вируса
инфекционной бурсальной болезни кур AV-0239
АПФ-2011 КазНИВИ не обладает патогенностью по
отношению к птице при различных местах
заражения, активно репродуцируется в РКЭ и ФКЭ.
Штамм вируса обладает высокой иммуногенной
эффективностью и используется для изготовления
сухой живой вакцины. Штамм вируса AV-0239
АПФ-2011 КазНИВИ получают путем репродукции
в РКЭ 7-9 суточный возраста и культуре клеток
ФКЭ.
Морфологические признаки. Размер вирионов в
пределах 60-65 нм. Культуральные свойства. Штамм
вируса инфекционной бурсальной болезни кур AV-
0239 АПФ-2011 КазНИВИ репродуцируется в РКЭ
7-9 суточный возраста и культуре клеток ФКЭ,
накапливается в титрах 105,00
-106,0
ЭИД50/г,
вызывающие 50% инфекционной эффект в РКЭ и
цитопатический в культуре клеток. Штамм вируса
инфекционной бурсальной болезни кур AV-0239
АПФ-2011 КазНИВИ репродуцируется в РКЭ и
культуре клеток ФКЭ без дополнительных
адаптационных пассажей и накапливается в
максимальных титрах на 4-5 сутки после
инфицирования.
Антигенные свойства. Штамм вируса
инфекционной бурсальной болезни кур AV-0239
АПФ-2011 КазНИВИ в репродуктивном виде в
организме иммунизированной птицы стимулирует
образование вируснейтрализующих,
комплементсвязывающих и преципитирующих
антител в титрах: 2,1,±0,3 log2, 5±1 log2, 3±0,5 log2,
соответственно.
Патогенные свойства: Штамм вируса
инфекционной бурсальной болезни кур AV-0239
АПФ-2011 КазНИВИ не обладает патогенностью по
отношению к воспримчивой птице при аэрогенном,
алиментарном, внутримышечном методах.
Иммуногенные свойства: Штамм вируса
инфекционной бурсальной болезни кур AV-0239
АПФ-2011 КазНИВИ, репродуцированный в РКЭ
или культуре клеток ФКЭ в дозе от 1000ЭИД50/г
/ТЦД50/см
3
обладает способностью стимулировать
напряженный иммунитет у птиц(кур), привитых
подкожным внутримышечным, энтеральным
способами.
Стабильность свойств при пассировании:
Основные иммуннобиологические свойства штамма
вируса инфекционной бурсальной болезни кур AV-
0239 АПФ-2011 КазНИВИ при пассировании в РКЭ
и культуре клеток ФКЭ сохраняются на протяжении
не менее 10 пассажей.
Сохраняемость. Штамм вируса инфекционной
бурсальной болезни кур AV-0239 АПФ-2011
КазНИВИ в виде тканевой и культуральной
суспензий не снижает свою биологическую
активность в течение 10 суток при температуре
4±1°С, 12 мес - при температуре минус 40°С.
Пример 1. Для приготовления сухой живой
вакцины против вируса инфекционной бурсальной
болезни кур в начале готовят биомассу вируса
инфекционной бурсальной болезни кур из штамма
AV-0239 путем репродукции его в РКЭ или
культуре клеток ФКЭ. Для этого РКЭ заражают в
желточный мешок штаммом вируса инфекционной
бурсальной болезни кур А-0239 АПФ-2011
КазНИВИ в дозе 103
-104
ЭИД50/см
3
. За РКЭ
наблюдают ежедневно в течение 4 сутки. Павшие
РКЭ бракуют, а выжившые через 96-120 ч
охлаждают при температуре минус 4-8°С в течение
24 часов. По истеченио указанного времени РКЭ
выскрывают ассептически,собирают эмбрионы,
удалив конечности и голову. Тело эмбрионов
размельчают до гомогенной массы с помощью
гомогенизатора, разбавляют фосфатно-буферным
раствором до 10% концентрации по объёму,
фильтруют через 4-х слойной марлевой фильтр и
центрифигуруют при 3000 д в теченя. Полученную
недосадочную жидкость подвергают контролю на
стерильность по ГОСТ 28085 и биологическую
активность титрованием в РКЭ 6-7 суточного

3. 28922
3
возраста. При соответствии полученной суспензии
вируса по стерильности требованием ГОСТ 28085 и
наличии титра вируса в ней не ниже 105,0
ЭИД50/см
3
,
разливают в стерильных условиях во флаконы
по 1,0-0,4 см3
, предварительно стабилизировав
смешиванием в равных объёмных пропорциях с
защитной средой, содержащей сахарозу - 8%,
пептон - 6% и желатин - 2%, и замораживают при
температуре минус 50°С и ниже в течение не менее
12 часов, а затем подвергают сублимации с
помощью специальной установки, создающей в
камере вакуум менее 100 мм.рт.ст, и температуру
конденсатора ниже минус 70°С. Сублимацию
проводят до достижения остаточной влажности в
препарате менее 5%. Высушенную таким образом
суспензию вируса, после герметизации тары
(фасовки) специальными резиновыми пробками и
закатывании аллюминиевыми колпачками,
используют в качестве живой сухой вакцины против
инфекционной бурсальной болезни кур (ИББК).
Для получения культуральной вакцины из
штамма AV-0239 вируса в дозе 0,01-0,05 ТЦД50/см
3
заражают культуру клеток ФКЭ, выращенную в 1,5-
литровых плоских матрасах с использованием
питательной среды Игла, содержащей 10%
сыворотки крови крупного рогатого скота. Культуру
клеток инкубируют при температуре 37,0±0,5°С в
течении 4-5 суток с однократный заменой
питательной среды через 2 суток. Ежедневно
монослой клеток микроскопируют и при развитии
ЦПД в 80%. По истечению указанного времени
культуру клеток в матрасах с питательной средой
замораживают при температуре минус 40°С и
использованием механического встряхивания.
Размороженную культуральную суспензию, ИББК
стабилизируют защитной средой, 6% пептона, 8%
сахароза, 2% желатина, путём смешивания в ровных
объёмных пропорциях. Смесь проверяют на
стерильность по ГОСТ 29085 и титр
репродуктивного вируса ИББК в культуре ФКЭ,
приготовленный в пенициллиновых флаконах.
Стерильную суспензию с титром вируса не ниже
105,0
ЭИД50/см
3
разливают в пенициллиновые
флаконы по 1 -4 см3
замораживают при температуре
минус 50°С и ниже и подвергают сублимационную
высушиванию. Флаконы с сухой массой
герметизируют и после стандартизации
иммунобиологических свойств, используют в
качестве вакцины.
Хранят сухую вакцину при температуре 2-8°С.
Вакцину подвергают стандартизации по
стерильности согласно требованиям ГОСТ 28085 на
безвредность.
Для проверки безвредности вакцину в трёх
флаконах растворяют физиологическим раствором
хлорида натрия объединямый в одном флоконе и без
дополнительного разведение инокулируют
внутримышечно 10 цыплятам 30 суточного возраста
в дозе по 0,5 см3
. За цыплятами наблюдают в
течение 10 суток. У всех привытых цыплят не
должны развиваться какие-либо патологии местного
и общего характера в течение всего периода
наблюдения.
Для проверки иммуногенности вакцину в дозе по
0,005 см3
вводят внутримышечно 20 цыплятам 30
суточного возраста. Столько же цыплят
аналогичного возраста оставляют в контроле без
прививки вакциной.
Через 21 сутки у всех 20 голов цыплят,
подвергнутых вакцинации и всех 20 цыплят,
находящихся в контроле собирают кровь, получают
из нее сыворотку. Сыворотку инактивируют в
течение 30 мин при температуре 56°С и используют
в реакции диффузионный преципитации в агарном
геле.
Реакцию ставят против антивируса ИББК.
Вакцина считается иммуногенной, если в
сыворотке крови привитых цыплят будут выявлены
антитела в титре не ниже 3log2. при отсутствии
таких антител в сыворотке крови контрольных птиц.
Имеющиеся иммунобиологические свойства
штамма AV-0239 АПФ-2011 КазНИВИ вируса
инфекционной бурсальной болезни кур позволяют
производить высокоиммуногенную, безвредную,
живую сухую вакцину, применение которой на
практике позволит эффективно регулировать
эпизоотическую ситуацию по инфекционной
бурсальной болезни кур среди промышленного и
приусадебного разведения.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Штамм вируса инфекционной бурсальной
болезни кур AV-0239 АПФ-2011 КазНИВИ,
депонирован в лаборатории генофонда
микроорганизмов ТОО «Казахский научно-
исследовательский ветеринарный институт»,
используемый для изготовления живой сухой
вакцины против инфекционной бурсальной болезни
кур.
Верстка Ж. Жомартбек
Корректор Е. Барч