1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 29936
(51) A61K 39/275 (2006.01)
C12N 7/00 (2006.01)
МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2014/0874.1
(22) 25.06.2014
(45) 15.06.2015, бюл. №6
(72) Мамбеталиев Муратбай; Табынов Кайрат
Казыбаевич; Ажибаев Азамат Жасуланович;
Абсатова Жаркинай Серикбаевна; Битешова
Эльмира Туракбаевна; Есимбекова Назым
Бейсехановна; Килибаев Санат Серикович;
Кенжебаева Маржан Кулкубековна; Валиева Айсулу
Дулатбековна; Булатов Ербол Акенович; Сансызбай
Абылай Рысбайулы
(73) Республиканское государственное предприятие
на праве хозяйственного ведения "Научно-
исследовательский институт проблем
биологической безопасности" Комитета науки
Министерства образования и науки Республики
Казахстан
(56) Baxby et al., 1975
(54) ШТАММ М-96 М-20-13/D ВИРУСА ОСПЫ
ВЕРБЛЮДОВ, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ДЛЯ
КОНТРОЛЯ БИОПРЕПАРАТОВ
СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ И
ДИАГНОСТИКИ ОСПЫ ВЕРБЛЮДОВ
(57) Получен высокорепродуктивный штамм М-96
вируса оспы верблюдов, семейства Poxviridae рода
Orthopoxvirus, предназначенный для контроля
биопрепаратов специфической профилактики и
диагностики оспы верблюдов.
Изобретение относится к области ветеринарной
вирусологии и биотехнологии и представляет собой
новый эпизоотический штамм вируса оспы
верблюдов, репродуцированный в культуре клеток
ПЯ и 12 сут РКЭ на ХАО с инфекционной
активностью 6,08±0,17 lg ТЦД50/см3
и 6,12±0,08 lg
ЭИД50/см3
, соответственно. Штамм М-96 является
вирулентным для верблюдов в возрасте от 6 мес до
7 лет, при инфицировании верблюдов наблюдается
характерная клиническая картина заболевания
оспой верблюдов.
Полученный штамм М-96 вируса оспы
верблюдов депонирован в Коллекции
микроорганизмов Республиканского
государственного предприятия «Научно-
исследовательский институт проблем
биологической безопасности» Комитета науки
Министерства образования и науки Республики
Казахстан (РГП НИИПББ КН МОН РК) под
регистрационным номером M-20-13/D и хранится в
лиофилизированном виде в ампулах под вакуумом
при температуре не выше минус 40°С, защитная
среда 6,5% пептон в соотношении 1:1 с вирусным
материалом. Жизнеспособность штамма в
стабильном состоянии поддерживается путем
освежения один раз в 5 лет на верблюдах в возрасте
от 6 мес до 7 лет.
(19)KZ(13)A4(11)29936

2. 29936
2
Изобретение относится к области ветеринарной
вирусологии и биотехнологии и представляет собой
новый эпизоотический штамм вируса оспы
верблюдов, предназначенный для контроля
биопрепаратов специфической профилактики и
диагностики оспы верблюдов.
Известен штамм Teheran вируса оспы верблюдов
(Ramyar et al., 1972; Baxby et al., 1975),
репродуцируемый на монослое первичной культуры
клеток почки ягненка (ПЯ) при температуре 37°С в
течение 96-120 ч после инокуляции. Титр
инфекционной активности вируса в культуре клеток
ПЯ достигает до 5,50 lg ТЦД50/см3
(Duraffour et al.,
2011). При проведении электронно-
микроскопических исследований штамма Teheran
обнаружены овальные частицы диаметром около
270 нм (Ramyar et al., 1972). Экспериментальное
инфицирование внутрикожным методом крупного
рогатого скота, овец, коз и лабораторных животных
показало не восприимчивость испытанных
животных к штамму Teheran. Тогда как для
верблюдов 10-месячного возраста штамм Teheran
был патогенным при внутрикожном инфицировании
в дозах от 0,18 до 5,50 lg ТЦД50. У верблюдов на
месте инъекции папулы начали развиваться на 5 сут
с дальнейшим преобразованием в пустулы и
везикулы на 6-8 сут. Оспенные корки начали
формироваться на 9-10 сут с дальнейшей
генерализацией инфекции на 9-11 сут после
инфицировании штаммом Teheran вируса оспы
верблюдов. Все инфицированные верблюды
выздоравливали через 28 сут после заражения.
(Baxby et al., 1975).
Ввиду отсутствия данных по вирулентности
штамма Teheran вируса оспы верблюдов в
отношении верблюдов старше 10-месячного
возраста, указанный штамм не пригоден для
контроля биопрепаратов специфической
профилактики оспы верблюдов.
Приведенный выше аналог является наиболее
близким предлагаемому изобретению по
совокупности существенных признаков и признан в
качестве прототипа.
Задачей настоящего изобретения являлось
получение штамма вируса оспы верблюдов,
обладающего высокой репродуктивной активностью
в системе культивирования и вирулентностью для
верблюдов разного возраста, пригодного для
контроля биопрепаратов специфической
профилактики и диагностики оспы верблюдов.
Предлагаемое изобретение включает штамм,
совокупность существенных признаков которого,
обеспечивает получение следующих технических
результатов.
Штамм М-96 вируса оспы верблюдов,
выделенный из пробы оспенной корочки больного
верблюда в Мангистауской области Республики
Казахстан в 1996 г., принадлежит к семейству
Poxviridae роду Orthopoxivirus.
Штамм М-96 вируса оспы верблюдов активно
репродуцируется на монослое первичной культуры
клеток ПЯ и на хориоаллантоисной оболочке (ХАО)
12-суточных развивающихся куриных эмбрионов
(РКЭ) при температуре 37°С в течение 96-120 ч
после инокуляции. Цитопатическое действие вируса
после инфицирования проявляется на 72 ч. Титр
инфекционной активности вируса в культуре клеток
ПЯ достигает до 6,08±0,17 lg ТЦД50/см3. Начиная с
96 ч после инфицирования РКЭ вирусом на ХАО
образуются бляшки характерные для оспы
верблюдов. На 120 ч культивирования в РКЭ титр
вируса достигает до 6,12±0,08 lg ЭИД50/см3
.
Штамм М-96 является вирулентным для
верблюдов в возрасте от 6 мес до 7 лет. У
верблюдов инфицированных внутрикожно и
методом скарификации с 4-5 сут после заражения
отмечено повышение температуры тела на
0,6-1,2°С. На 7-9 сут после заражения отмечалось
угнетение верблюдов, образование папул, везикул и
пустул на местах введения суспензии вируса. На 9-
10 сут у инфицированных верблюдов отмечена
генерализация оспенного процесса по всему телу
верблюдов (губы, наружные части крыльев носа,
промежности передних и задних ног, область паха,
голова). На 10-14 сут из пустул образовались
оспенные корочки. Выздоровление верблюдов
наступала на 28 сут после заражения вирусом с
образованием в сыворотках крови верблюдов
вируснейтрализирующих антител в титре 4-5 log2 в
реакции нейтрализации.
Выделенный штамм М-96 вируса оспы
верблюдов депонирован в Коллекции
микроорганизмов Республиканского
государственного предприятия «Научно-
исследовательский институт проблем
биологической безопасности» Комитета науки
Министерства образования и науки Республики
Казахстан (РГП НИИПББ КН МОН РК) под
регистрационным номером M-20-13/D и хранится в
лиофилизированном виде в ампулах под вакуумом
при температуре не выше минус 40°С, защитная
среда 6,5% пептон в соотношении 1:1 с вирусным
материалом. Жизнеспособность штамма в
стабильном состоянии поддерживается путем
освежения один раз в 5 лет на верблюдах в возрасте
от 6 мес до 7 лет.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Штамм М-96 вируса оспы верблюдов, семейства
Poxviridae, рода Orthopoxivirus, депонирован в
Коллекции микроорганизмов РГП НИИПББ КН
МОН РК под номером М-20-13/D, предназначенный
для контроля биопрепаратов, специфической
профилактики и диагностики оспы верблюдов.
Верстка Н.Киселева
Корректор К.Нгметжанова