1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 29278
(51) C12N 1/20 (2006.01)
МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2013/1998.1
(22) 30.12.2013
(45) 15.12.2014, бюл. №12
(72) Шегебаева Асемгул Амантаевна; Агыбаева
Акмарал Бейсенкуловна; Торина Асия Кенесовна;
Нечай Наталья Леонидовна; Рахимова Елена
Владимировна; Камаева Анара Аманжуловна;
Алмагамбетов Каиртай Хамитович
(73) Республиканское государственное предприятие
на праве хозяйственного ведения "Республиканская
коллекция микроорганизмов" Комитета науки
Министерства образования и науки Республики
Казахстан
(74) Суюндуков Мади Жмайевич
(56) RU 2086128 C1, кл. A01N 63/00, C12N 1/20,
1997
(54) ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS SUBTILIS
Г2, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ЗАЩИТЫ
ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ ПОЛЫНИ
ГЛАДКОЙ ARTEMESIA GLABELLA KAR. ET
KIR. И АЯНИИ КУСТАРНИЧКОВОЙ AJANIA
FRUTICULOSA (LEDEB.) POLJAK ОТ
ФИТОПАТОГЕННЫХ ГРИБОВ FUSARIUM
OXYSPORUM, ALTERNARIA ALTERNATA,
CLADOSPORIUM CLADOSPORIOIDES,
MACROSPORIUM COMMUNE,
COCHLIOBOLUS TUBERCULATUS.
(57) Изобретение относится к биотехнологии,
микробиологии и представляет собой новый штамм
бактерии Bacillus subtilis Г2, используемый для
защиты лекарственных растений полыни гладкой
Artemisia glabella Kar. et Kir. и аянии
кустарничковой Ajania fruticulosa (Ledeb.) Poljak от
широкого спектра фитопатогенных грибов Fusarium
oxysporum, Alternaria alternata, Cladosporium
cladosporioides, Macrosporium commune,
Cochliobolus tuberculatus.
Штамм обладает высокой антагонистической
активностью в отношении фитопатогенных грибов
Fusarium oxysporum, Alternaria alternata,
Cladosporium cladosporioides, Macrosporium
commune, Cochliobolus tuberculatus, о чем
свидетельствуют высокие значения величин зон
ингибирования роста фитопатогенных грибов
вокруг антагониста.
Штамм бактерии Bacillus subtilis Г2
рекомендуется в качестве продуцента биопрепарата
для защиты лекарственных растений от грибных
болезней.
(19)KZ(13)A4(11)29278

2. 29278
2
Изобретение относится к биотехнологии,
микробиологии и представляет собой новый штамм
бактерии, являющийся антагонистом по отношению
к широкому спектру фитопатогенных грибов.
Известен штамм Bacillus subtilis ИМП-215,
являющийся продуцентом бактофита - препарата
для защиты от мучнистой росы огурцов,
вертициллезного вилта хлопчатника, корневых
гнилей овощных и зерновых культур ("Проблемы
создания и применения микроорганических средств
защиты растений", М., 1989, с.253, 257-295).
Недостатком указанного штамма является его
недостаточно высокая эффективность против
фитопатогенных бактерий.
Известен штамм бактерий Bacillus subtilis М-22-
ВИЗР, обладающий высокой антагонистической
активностью в отношении широкого спектра
возбудителей бактериозов растений и являющийся
продуцентом биопрепарата гамаир. Штамм выделен
из окружающей среды в г. Киев (Украина) (Патент
РФ №2084152).
Известен штамм бактерий Bacillus subtilis N 10,
обладающий высокой антагонистической
активностью в отношении широкого спектра
возбудителей микозов растений и являющийся
продуцентом биопрепарата алирин Б. Штамм
выделен из зоокомпоста в Ленинградской области
(Патент РФ №2081167).
Наиболее близким аналогом является штамм
Bacillus subtilis 1С-5, обладающий
противогрибковой активностью (Патент РФ
№2086128). Недостатком известного штамма
является ограниченное действие, направленное на
отдельных грибковых возбудителей болезней
различных сельскохозяйственных культур.
Определяющим отличием предлагаемого штамма
от прототипов является его широкий спектр
антагонистического действия на возбудителей
грибковых заболеваний лекарственных растений
(полыни гладкой Artemisia glabella Kar. et Kir. и
аянии кустарничковой Ajania fruticulosa (Ledeb.)
Poljak). Новый штамм Bacillus subtilis Г2 обладает
высокой антагонистической активностью в
отношении фитопатогенных грибов Fusarium
oxysporum, Alternaria alternata, Cladosporium
cladosporioides, Macrosporium commune,
Cochliobolus tuberculatus.
Штамм бактерии Bacillus subtilis Г2 представляет
собой культуру микроорганизма, изолированного из
планосферы лекарственного растения - аянии
кустарничковой Ajania fruticulosa (Ledeb.) Poljak.
Штамм депонирован в Республиканской коллекции
микроорганизмов с целью гарантийного хранения и
патентной процедуры под номером B-RKM 0561.
Штамм бактерии Bacillus subtilis Г2
характеризуется следующими культурально-
морфологическими признаками.
При культивировании штамма на мясо-
пептонном агаре (МПА) при 37°С через 18-24 часов
образуются колонии телесного цвета, овальной или
округлой формы, размером 5-6 мм,
мелкоморщинистые с волнистыми краями,
слизистой консистенции. На мясо-пептонном
бульоне происходит помутнение среды, образование
на поверхности среды пленки и на дне осадка.
В мазках культуры обнаруживаются
грамположительные палочковидные клетки с
закругленными или "обрубленными" концами,
расположенные одиночно, попарно, цепочкой или
скученно. Клетки аэробно образуют эндоспоры.
Физиолого-биохимические свойства
Культура обладает каталазной активностью,
ферментирует глюкозу, сахарозу, ксилозу, маннит,
трегалозу, фруктозу с образованием кислоты без
газа, гидролизует крахмал, казеин, желатину. Не
растет в анаэробных условиях, не образует индол,
сероводород.
Штамм идентифицирован по определителю
бактерий и актиномицетов под ред. Н.А.
Красильникова (Москва-Ленинград 1949 г.),
краткому («Мир», М. 1980 г.) и полному
определителям («Мир», М. 1997 г.) бактерий
Берджи под ред. Дж. Хоулта. Результаты
генетического анализа штамма по фрагменту гена
16S рРНК подтвердили достоверность
идентификации.
Последовательность фрагмента гена 16S рРНК
AACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGG
ATAACTCCGGGAAACCGG
GGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGG
TTCAGACATAAAAGGTGGCT
TCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCA
TTAGCTAGTTGGTGAGGTAA
CGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACC
TGAGAGGGTGATCGGCCACA
CTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGG
GAGGCAGCAGTAGGGAATCT
TCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACG
CCGCGTGAGTGATGAAGGTT
TTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAA
CAAGTGCCGTTCAAATAGGG
CGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCA
CGGCTAACTACGTGCCAGCA GCCGCGGT
AATACGT AGGT GGC AAGCGTT GTCCGGAATT
ATTGGGCGT AAAGG
GCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAA
GCCCCCGGCTCAACCGGGGA
GGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAG
AAGAGGAGAGTGGAATTCCA
CGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAG
GAACACCAGTGGCGAAAGGC
GACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCG
AAAGCGTGGGGAGCGAACA GGATTA
Изучение антагонистической активности нового
штамма Bacillus subtilis Г2
Культуру испытуемой бактерии высевали
сплошным «газоном» на поверхность МПА в чашке
Петри и инкубировали при 37°С в течение 1-2 суток
для накопления в агаре ингибиторных соединений.
Затем вырезали агаровые блоки с выросшей
культурой нового штамма и устанавливали их в
другой чашке Петри на поверхности агаровой среды
Чапека, предварительно засеянной сплошным
«газоном» тест-культурами. В качестве тест-культур
использовали фитопатогенные грибы Fusarium
oxysporum, Alternaria alternata, Cladosporium

3. 29278
3
cladosporioides, Macrosporium commune,
Cochliobolus tuberculatus. Чашки инкубировали в
термостате при 28°С в течение 5-7 суток. О степени
антагонистической активности испытуемой
культуры нового штамма судили по величине зоны
ингибирования роста тест-культур вокруг агаровых
блоков. Данный эксперимент выполнен в пяти
повторностях.
Полученные в ходе эксперимента результаты
говорили о высокой антагонистической активности
штамма Bacillus subtilis Г2 по отношению к тест-
культурам. Значения величин зон ингибирования
роста тест-культур превышали 20 мм, что
свидетельствовало о высокой чувствительности
данных тест-культур к исследуемому антагонисту.
Результаты исследования представлены в таблице 1.
Таблица 1
Тест-культуры Радиус зоны подавления роста тест-культуры (мм)
Фитопатогенные грибы
Fusarium oxysporum 25-30
Alternaria alternata 30-35
Cladosporium cladosporioides 30-32
Macrosporium commune 20-23
Cochliobolus tuberculatus 33-35
Таким образом, приведенные данные
свидетельствуют о том, что предлагаемый штамм
Bacillus subtilis Г2 обладает высокой
антагонистической активностью в отношении
широкого спектра фитопатогенных грибов и может
быть использован в качестве продуцента
биопрепарата для защиты лекарственных растений
от грибных болезней.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Штамм бактерии Bacillus subtilis Г2,
депонированный в РГП «Республиканская
коллекция микроорганизмов» МОН РК под номером
B-RKM 0561, используемый для защиты
лекарственных растений полыни гладкой Artemisia
glabella Kar. et Kir. и аянии кустарничковой Ajania
fruticulosa (Ledeb.) Poljak от широкого спектра
фитопатогенных грибов Fusarium oxysporum,
Alternaria alternata, Cladosporium cladosporioides,
Macrosporium commune, Cochliobolus tuberculatus.
Верстка Ж. Жомартбек
Корректор К. Нгметжанова