1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 28903
(51) A61K 39/12 (2006.01)
C12N 7/00 (2006.01)
КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ
МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2013/1283.1
(22) 30.09.2013
(45) 15.09.2014, бюл. №9
(72) Сансызбай Абылай Рысбайулы; Баракбаев
Кайнар Базаркулович; Абдураимов Ергали
Орынбасарович; Булатов Ербол Акенович;
Кондибаева Жанат Буркитбаевна; Таранов Дмитрий
Сергеевич; Ершебулов Закир Джапарович; Аманова
Жанат Темирбаевна; Саметова Жанна Жумабековна
(73) Республиканское государственное предприятие
на праве хозяйственного ведения "Научно-
исследовательский институт проблем
биологической безопасности" Комитета науки
Министерства образования и науки Республики
Казахстан
(56) RU 2406535 C1, кл. А61K 39/295, А61Р 31/12,
2010
(54) СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ
АССОЦИИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ
ЧУМЫ МЕЛКИХ ЖВАЧНЫХ ЖИВОТНЫХ И
ОСПЫ ОВЕЦ
(57) Изобретение относится к области ветеринарии
и биотехнологии, в частности к применению
вакцинных препаратов для одновременной
специфической профилактики чумы мелких
жвачных животных (ЧМЖЖ) и оспы овец в
угрожаемых и неблагополучных зонах.
Предлагаемый способ предусматривает
культивирование вирусов ЧМЖЖ и оспы овец в
одной системе, определение продолжительности
культивирования, подбор оптимальной
стабилизирующей среды, изучена иммунизирующая
доза, а также продолжительность иммунитета у
животных.
(19)KZ(13)A4(11)28903

2. 28903
2
Изобретение относится к области ветеринарии и
биотехнологии, в частности к приготовлению
вакцинных препаратов для одновременной
специфической профилактики чумы мелких
жвачных животных (ЧМЖЖ) и оспы овец.
Известен патент на изобретение (RU 2406535C1,
кл A61K 39/295, A61P 31/12, 2010, Балышева В.М.,
Калантаенко Ю.Ф., Горшкова Т.Ф., Парилова С.В. г.
Покров, ГНУ ВНИИВВиМ - 2009) по теме
«Ассоциированная вакцина против оспы овец и
чумы мелких жвачных животных» в которой
описывается изготовление ассоциированной
вакцины против оспы овец и чумы мелких жвачных
животных. В работе использовали культуральные
вакцинные штаммы Б/5-96 вируса оспы овец и
45G37/35-K вируса чумы мелких жвачных
животных с активностью не менее 4,5 lg ТЦЦ50/см3
.
Указанные штаммы выращивают в первичных
культурах клеток почки ягненка (ПЯ) и
перевиваемых культурах клеток почки овцы (ПО) и
гонады козы (ГК). В качестве стабилизатора
используют (лактоза - 4,0%, пептон - 20,0%) и
(сахароза - 10,0%, желатин - 2,0%). Вакцина
обладает высокой иммуногенностью и
ареактогенностью, безвредна и стабильна при
хранении. Вирусвакцины против оспы овец и чумы
мелких жвачных безвредны для овец и коз, создают
напряженный иммунитет на 7 и 21 сутки
соответственно, продолжительностью не менее 12
месяцев. Прививная доза каждого штамма
составляет не менее 1000 ТЦД50.
Недостатками Российской вакцины является
раздельное культивирование вирусов, что
увеличивает срок наработки вируссодержащей
суспензии, а также большой процент содержания
стабилизирующих компонентов при составлении
вакцины.
Данное изобретение включает в себя разработку
параметров совместного культивирования вируса
ЧМЖЖ и оспы овец в культуре клеток, а также
составление ассоциированной вакцины пригодной
для профилактических целей в ветеринарии.
Результаты, полученные в ходе выполненной
работы, будут внедрены в ветеринарную практику
для одновременной профилактики против двух
инфекций.
Отличительной особенностью от российской
вакцины заключается в использовании вакцинных
штаммов «НИСХИ» вируса оспы овец и штамма
«G-45MK» вируса ЧМЖЖ. Указанные штаммы
культивируют совместно с одномоментным
заражением культуры клеток тестикулы ягнят (ТЯ),
срок культивирования составляет 7 сут.
Использование пептоно-лактозового стабилизатора
в низкой конечной концентрации 3,0-2,0%
соответственно. Прививная доза составляет 500-
1000 ТЦД50.
Разработка вакцины связана с внедрением
отечественных препаратов против ЧМЖЖ и оспы
овец для иммунизации овец и коз в Республике
Казахстан. Внедрение данной вакцины в Республике
Казахстан является актуальной задачей, решение
которой позволит ввести в ветеринарную практику
новое средство профилактики против данных
инфекций, а также для одновременной
профилактики чумы мелких жвачных животных и
оспы овец.
Способ выполняется следующим образом:
Для изготовления ассоциированной вакцины
использовали штамм «G-45MK» вируса ЧМЖЖ и
штамм «НИСХИ» вируса оспы овец с
инфекционной активностью не менее 5,66 lg
ТЦД50/см
3
. Культивирование вирусов проводили в
культуре клеток тестикулы ягнят (ТЯ), выращенные
в матрасах стационарным методом. Монослой
вышеуказанной культуры клеток инфицировали с
одномоментным внесением вируса ЧМЖЖ и оспы
овец в дозе 0,01 ТЦД50/кл и выдерживали при
температуре 37°С в течение 1 часа, для контакта
монослоя с вирусом. После контакта монослоя с
вирусом в матрасы (сосуды) с культурой клеток
вносили поддерживающую среду ПСП с
содержанием 2% инактивированной сыворотки КРС
и культивировали в течение 7 сут. Ежедневно
проводили визуальный контроль под световым
микроскопом для обнаружения характерных
деструктивных изменений в монослое клеток. По
достижению цитопатического действия в монослое
культуры клеток 75-90% матрасы замораживали в
низкотемпературном холодильнике при минус 20°С
в течении 18-20 час. Оттаивание проводили при
комнатной температуре. Полученную
вируссодержащую суспензию использовали для
определения биологической активности,
стерильности и приготовления ассоциированной
вакцины.
Биологическую активность вирусов ЧМЖЖ и
оспы овец в полученных пробах определяли
титрованием в культуре клеток ТЯ, по
общепринятой методике с использованием
специфических сывороток к данным вирусам.
Титром вируса, считали наибольшее его разведение,
вызывающее ЦПД в культурах клеток, который
вычисляли по Reed I.J., Muench Н.А.
Стерильность полученной ассоциированной
культуральной суспензии определяли путем высева
в пробирки, содержащие такие бактериологические
среды, как: мясопептонный бульон, мясопептонный
агар, Сабуро (жидкое и твердое). Посевы
выдерживали в термостате при (37+0,5)°С в течение
14 дней. Стерильными считали культуральные
суспензии, высевы которых не давали роста
посторонней микрофлоры.
При изготовлении ассоциированной вакцины
против ЧМЖЖ и оспы овец необходимо
приготовить стабилизирующий раствор. Для
приготовления 1 дм3
стабилизирующей среды
необходимо в 500 см3
деминерализованной воды
растворяют 60 г пептона и 500 см3
деминерализованной воды 40 г лактозы.
После растворения обоих компонентов растворы
объединяют в одной емкости, тщательно
перемешивают, доводят pH до 7,3-7,4 добавлением
10% раствора гидроксида натрия (NaOH). Сосуды с
раствором закрывают ватно-марлевыми пробками,
двукратно стерилизуют текучим паром (100 ± 1)°С

3. 28903
3
по 30 мин (промежуток между стерилизациями 18-
20 ч.), полученную стабилизирующую среду до
использования сохраняют при температуре (4 ± 1)°С
в течение 30 сут.
При лиофильном высушивании
ассоциированную вирусную суспензию объединяли
в соотношениях 1:1 со стабилизирующими средами,
с добавлением антибиотиков из расчета 500 000 ЕД
пенициллина, 0,5 мг стрептомицина и 25 000 ЕД
нистатина на 1 дм3
вакцинной жидкости (ВЖ).
После контакта с антибиотиками на протяжении 12
часов при плюс 4°С ассоциированную вакцинную
жидкость розливали в ампулы по 2 см3
и
лиофилизировали в сублимационной установке.
Продолжительность иммунитета у
вакцинированных животных составляет не менее
12 мес. при иммунизирующей дозе от
500-1000 ТЦЦ50.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ изготовления ассоциированной вакцины
против чумы мелких жвачных животных и оспы
овец, включающий внесение штамма вируса,
культивирование, отличающийся тем, что
используют штамм « G-45 МК» вируса чумы
мелких жвачных животных и штамм «НИСХИ»
вируса оспы овец, культивирование проводят в
культуре клеток тестикулы ягнят при дозе
заражения 0,01 ТЦД50/кл, длительность
культивирования составляет 7 сут, при этом
инфекционная активность составляет не менее
5,66 lg ТЦД50/см
3
, а при лиофилизации используют
пептоно-лактозовые стабилизирующие добавки.
Верстка Ж. Жомартбек
Корректор Е. Барч