1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 29711
(51) A61K 39/10 (2006.01)
G01N 33/531 (2006.01)
МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2014/0434.1
(22) 04.04.2014
(45) 15.04.2015, бюл. №4
(72) Барамова Шолпан Аузаровна; Мырзалиев Ахан
Жакангерович; Оспанов Ержан Калиолдинович;
Жанбырбаев Мухтар Жанбырбаевич; Түсіпқанұлы
Оралқан; Мәтіхан Нұрәли
(73) Товарищество с ограниченной
ответственностью "Казахский научно-
исследовательский ветеринарный институт"
(56) KZ 24838 B, 15.04.2014
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ SR-АНТИГЕНА
ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ ПРИ
ДИАГНОСТИКЕ БРУЦЕЛЛЕЗА И
ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА
ЖИВОТНЫХ
(57) Изобретение относится к области
ветеринарной микробиологии и может быть
использовано при изготовлении препаратов для
серологической диагностики бруцеллеза и
инфекционного эпидидимита животных.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в получении
высокоспецифичного антигена из S- и R-форм
бруцелл для постановки серологических реакций
при диагностике бруцеллеза и инфекционного
эпидидимита животных.
Способ получения SR-антигена для
серологических реакций при диагностике
бруцеллеза и инфекционного эпидидимита
животных, включающий выращивание культур
бруцелл на твердой питательной среде, их смыв,
отмывание, инактивацию и центрифугирование с
последующим ресуспендированием, в качестве S-
антигена используют штамм бактерии Brucella
abortus 2385, в качестве R-антигена используют
штамм бактерии Brucella ovis В-0176 КазНИВИ
№63/290 которые инактивируют в водяной бане при
температуре 80°С в течение 1 ч, полученную
суспензию центрифугируют при 6000 об/мин в
течение 30 мин, надосадочную жидкость удаляют,
после чего осадок S-антигена окрашивают 0,2%
раствором анилина голубого и щутелируют в
течение 24 ч, а осадок R-антигена ресуспендируют
физиологическим раствором до концентрации
200 млрд микробных клеток в 1,0 см3
по
оптическому стандарту мутности, затем
полученную микробную суспензию подвергают
воздействию ультразвуковых волн частотой 22 кГц
и мощностью 90 Вт/см2
, после чего полученный
дезинтеграт центрифугируют при 6000 об/мин в
течение 20 мин, затем полученную надосадочную
жидкость удаляют и осадок окрашивают 0,2%
раствором красный С 6, затем окрашенные взвесь
двух антигенов промывают физиологическим
раствором трехкратно, центрифугируют при
6000 об/мин в течение 20 мин, полученную
надосадочную жидкость отбрасывают, при этом
осадок ресуспендируют в 0,5%-ным
фенолизированном физиологическим раствором
соотношением 1:200, после этого окрашенные
антигены двух штаммов смешивают в соотношении
1:1 и доводят до концентрации 60 млрд в 1,0 см3
0,5%-ным фенолизированным физиологическим
раствором и получают целевой продукт.
(19)KZ(13)A4(11)29711

2. 29711
2
Изобретение относится к области ветеринарной
микробиологии и может быть использовано при
изготовлении препаратов для серологической
диагностики бруцеллеза и инфекционного
эпидидимита животных.
Известен способ получения SR-антигена для
серологических реакций при диагностике
бруцеллеза сельскохозяйственных животных,
включающий выращивание культур бруцелл на
твердой питательной среде, их смыв, отмывание,
инактивацию и центрифугирование с последующим
ресуспендированием [Патент Республики Казахстан
№24838, кл. А61K 39/10, 2010].
Недостатком существующего антигена является
низкая активность и специфичность препарата.
Задачей изобретения является разработка
способа приготовления антигена из S- и R-формами
бруцелл для реакции агглютинации (РА) и реакции
длительного связывание комплемента (РДСК),
обеспечивающего повышение результативности,
чувствительности названных реакций.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в получении
высокоспецифичного антигена из S- и R- форм
бруцелл для постановки серологических реакций
при диагностике бруцеллеза и инфекционного
эпидидимита животных.
Способ получения SR-антигена для
серологических реакций при диагностике
бруцеллеза и инфекционного эпидидимита
животных, включающий выращивание культур
бруцелл на твердой питательной среде, их смыв,
отмывание, инактивацию и центрифугирование с
последующим ресуспендированием, в качестве S-
антигена используют штамм бактерии Brucella
abortus 2385, в качестве R- антигена используют
штамм бактерии Brucella ovis В-0176 КазНИВИ
№63/290 которые инактивируют в водяной бане при
температуре 80°С в течение 1 ч, полученную
суспензию центрифугируют при 6000 об/мин в
течение 30 мин, надосадочную жидкость удаляют,
после чего осадок S-антигена окрашивают 0,2%
раствором анилина голубого и щутелируют в
течение 24 ч, а осадок R- антигена ресуспендируют
физиологическим раствором до концентрации
200 млрд микробных клеток в 1,0 см3
по
оптическому стандарту мутности, затем
полученную микробную суспензию подвергают
воздействию ультразвуковых волн частотой 22 кГц
и мощностью 90 Вт/см2
, после чего полученный
дезинтеграт центрифугируют при 6000 об/мин в
течение 20 мин, затем полученную надосадочную
жидкость удаляют и осадок окрашивают 0,2%
раствором красный С 6, затем окрашенные взвесь
двух антигенов промывают физиологическим
раствором трехкратно, центрифугируют при
6000 об/мин в течение 20 мин, полученную
надосадочную жидкость отбрасывают, при этом
осадок ресуспендируют в 0,5%-ным
фенолизированном физиологическим раствором
соотношением 1:200, после этого окрашенные
антигены двух штаммов смешивают в соотношении
1:1 и доводят до концентрации 60 млрд в 1,0 см3
0,5%-ным фенолизированным физиологическим
раствором и получают целевой продукт.
В изобретении используют штаммы бактерий
Brucella abortus 2385, Brucella ovis В-0176 КазНИВИ
№63/290, депонированные в Лаборатории по
изучению генофонда микроорганизмов
Товарищества с ограниченной ответственностью
«Казахский научно-исследовательский
ветеринарный институт» (КазНИВИ).
Штамм Brucella abortus В-0244 КазНИВИ №2385
характеризуется следующими признаками,
которыми обладает культура Brucella abortus
Происхождение штамма бактерий. Штамм
бактерий выделен от больной бруцеллезом коровы
из молока коровы, способ выделения - МПБ, МПА,
эритрит агар с добавками и отбора колоний в S-
форме по Уайт- Вильсону.
Идентифицирован по определителю бактерий
Bergey,s Manual of Systematic
Bacterology/Departament of Microbiology and
Molecular Genetics Michigan State University: USA,
2005, Part C, P.370-386.
Сравнен с типовым штаммом коллекционный
№ Brucella abortus 19 (вакцинный); Brucella abortus
544 (эталонный).
Назначение штамма бактерий. Штамм типовой
для приготовления диагностических и
профилактических препаратов.
Состав среды и условия культивирования.
Панкреатический гидролизат кильки, натрия
хлорид, тиамин-бромид, глюкоза, глицерин,
эритрит, агар-агар, дрожжевой экстракт, L-цистин.
Т° + 37-38°С.
Морфолого-культуральные свойства.
Вегетативные клетки растут на эритрит-агаре с
добавками, Т°+ 37-38°С, в течение 48 часов в
термостате.
Грамотрицательные коккобациллы, длиной 0,4-
2,5 мкм, шириной 0,4-0,6 мкм, неподвижны,
очертания концов округлые, клеточные стенки
содержат липополисахарид, консистенция S-формы.
Физиолого-биохимические свойства.
Принадлежность к трофической группе:
хемоорганотроф. Типы катабализма: аэроб.
Симбиотрофные отношения: внутриклеточный
паразитизм. Источники углерода: глюкоза,
глицерин. Источники азота: гидролизат животных
белков. Источники серы: цистин.
Другие характерные физиологические
особенности обмена: дифференцирующие и
диагностические ферменты уреаза, оксидаза,
каталаза, образует сероводород, не разжижает
желатин, не лизирует эритроциты, не образует
ацетилметилкарбинол.
Маркерные признаки штамма. Растет на средах с
пенициллином, обладает уреазной, оксидазной,
каталазной активностью.
Способ, условия и состав сред для хранения.
Основные биологические свойства штамма
стабильно сохраняются при многократных
пассажах.

3. 29711
3
В нативном состоянии не снижает активности 6
месяцев на твердых средах (эритрит-агар) при
температуре +4-+6°С.
Способ, условия и состав сред для размножения
штамма: эритрит агар с добавками (дрожжевой
экстракт, L-цистин, 1% глюкоза, 2% глицерин).
Штамм Brucella ovis В-0176 КазНИВИ №63/290
характеризуется следующими признаками,
которыми обладает культура Brucella ovis
Происхождение штамма бактерий. Штамм
бактерий получен из ВИЭМ им. Гамалеи в 1989 году
и выделен из организма на питательной среде -
гидролизная среда, печоночно-сывороточный агар
(ПСА), печеночно-амиднопептидный агар (ПАА).
Идентифицирован по определителю бактерий
Bergey,s Manual of Systematic
Bacterology/Departament of Microbiology and
Molecular Genetics Michigan State University: USA,
2005, Part C, P.370-386.
Назначение штамма бактерий. Штамм эталонный
для приготовления диагностических препаратов.
Состав среды и условия культивирования.
Панкреатический гидролизат кильки, натрия
хлорид, тиамин-бромид, глюкоза, глицерин,
эритрит, агар-агар, дрожжевой экстракт, L-цистин.
Т° +37-38°С.
Морфолого-культуральные свойства.
Вегетативные клетки растут на эритрит агаре с
добавками, Т+36-37,5°С, в течение 48 часов в
термостате с содержанием 10% СO2.
Овоиды, длиной 0,7-1,2 мкм, шириной
0,5-0,7 мкм, неподвижные, очертания концов
округлые, по Граму не окрашиваются,
окрашиваются по методу Козловского, не
кислотоустойчивы, тип размножения деление,
специализированные клетки не образуют.
Размер колоний 0,2-3,0 мм, круглые, менее
выпуклые, часть колонии не правильно
контурированные, R- форма, колоний плотные,
гладкие.
Рост в жидкой среде - вызывает помутнение
МПБ в течение суток, в дальнейшем хлопчатый
осадок и зона просветления над осадком.
Физиолого-биохимические свойства.
Принадлежность к трофической группе:
хемоорганотроф. Типы катабализма: аэроб.
Симбиотрофные отношения: внутриклеточный
паразитизм, фагом Тб не лизируется. Источники
углерода: глюкоза, глицерин. Источники азота:
гидролизат животных белков. Источники серы:
цистин.
Другие характерные физиологические
особенности обмена: дифференцирующие и
диагностические ферменты каталаза, не образует
сероводород и индол, не разжижает желатин, не
свертывает молоко, не разлагает сахарозу, лактозу,
глюкозу, манит, дульцит, сорбит, мочевину, не
редуцирует нитраты и нитрит, не лизирует
эритроциты, не образует ацетилметилкарбинол.
Маркерные признаки штамма. Растет на средах с
пенициллином, находится в стабильной R-форме,
обладает каталазной активностью.
Способ, условия и состав сред для хранения.
Эталонный штамм Brucella ovis В-0176 хранят в
сухом виде в запаянных под вакуумом ампулах при
температуре от 4 до 6°С. Пересев нативных культур
проводят один раз в 3-4 месяца.
Способ приготовления антигена из S-, R-форм
бруцелл состоит в следующем.
Пример 1. Культуры бактерий Brucella abortus
2385 выращивают на твердой питательной среде в
течение 3 сут с последующим их смывом 0,5%
фенолизированным раствором, полученную
бактериальную массу фильтруют через марлевый
фильтр в колбы и прогревают в водяной бане при
температуре 80°С в течение 1 ч при постоянном
помешивании. Затем полученную взвесь бруцелл
проверяют на чистоту и стерильность путем высева
на питательные среды. Полученные суспензии
центрифугируют при 6000 об/мин в течение 30 мин,
надосадочную жидкость удаляют, а осадок доводят
физиологическим раствором до 100 млрд.
микробных клеток в 1,0 см3
. После чего, стерильную
взвесь клеток бруцелл окрашивают 0,2% раствором
анилина голубого. В конической колбе объемом
1000,0 см3
растворяют 2 г сухого порошка анилина
голубого в 100,0 см3
дистиллированной водой рН-
5,5, выдерживают при периодическом помешивании
на водяной бане при температуре 90°С и после
полного растворения красителя доводят общий
объем до 1000,0 см3
дистиллированной водой. В
конечной стадии окраска раствора должна быть
темно-фиолетовой. Окрашивание антигена проводят
в течение 24 ч, помешивая на шуттель аппарате.
Окрашенные клетки бруцелл центрифугируют при
6000 об/мин в течение 30 мин. Затем окрашенные
клетки бруцелл промывают физиологическим
раствором трехкратно, путем центрифугирования
при 6000 об/мин в течение 30 мин, при этом
надосадок удаляют, а полученный осадок
ресуспендируют до 2%.
Культуру Brucella ovis В-0176 КазНИВИ
№63/290 выращивают на твердой питательной
среде, смывают, фильтруют через четырехслойной
марлевый фильтр, после чего, полученную
суспензию инактивируют при 70°С в течение 1 ч.
Затем бактериальную взвесь проверяют на чистоту и
стерильность микроскопический путем посева на
питательные среды. После чего центрифугирует при
6000 об/мин в течение 30 мин, надосадочную
жидкость удаляют, а осадок ресуспендируют
физиологическим раствором до концентрации
200 млрд микробных клеток в 1 см по оптическому
стандарту мутности ГНИИСК им. Л.А. Тарасевичва.
Полученную микробную суспензию подвергают
воздействию ультразвуковых волн частатой 22 кгц и
мощностью 70-90 вт/см2
, генерируемых аппаратом
УЗДН-1. После ультразвукового воздействия
полученный дезинтеграт центрифугируют при
6000 об/мин в течение 20 мин, после чего
надосадочную жидкость удаляет, осадок
ресуспендируют физиологическим раствором и
окрашивают 0,2%-ным водным раствором краски
красной 6С путем смешивания микробной
суспензии с раствором краски в соотношении 5:1.

4. 29711
4
Смесь выдерживают в течение двух часов при
постоянном встряхивании. Окрашенную взвесь
промывают физиологическим раствором
трехкратно, центрифугируют при 6000 об/мин в
течение 20 мин, полученную надосадочную
жидкость отбрасывают, при этом осадок
ресуспендируют в 0,5% фенолизированном
физиологическом растворе до концентрации 2%.
После этого окрашенные антигены бруцелл двух
штаммов, S- и R-форм смешивают в соотношении
1:1.
Пример 2. Постановку пробирочной РА при
исследовании сывороток крови животных проводят
в объеме 1,0 см3
в четырех разведениях. При этом
используется 2% раствор NaCl. Реакцию ставят в
чистых стеклянных пробирках, в четырех
разведениях при исследовании сывороток крови
пушных зверей и морских свинок - 1:10, 1:20, 1:40,
1:80; свиней, овец, коз, в разведениях 1:25, 1:50,
1:100, 1:200; крупного рогатого скота, лошадей и
верблюдов 1:50, 1:100, 1:200, 1:400.
Для исследования каждой испытуемой
сыворотки требуется 5 пробирок. После
приготовления основного разведения сывороток в
первом ряду, в пробирки третьего, четвертого и
пятого ряда вливают по 0,5 см3
раствор NaCl и
титруют мерными пипетками или дозаторами
Флоренского.
При исследовании сывороток крови животных на
бруцеллез, одновременно с испытуемыми пробами
ставят контроли с негативной и позитивной
бруцеллезной сыворотками, а при диагностике на
инфекционный эпидидимит баранов еще контроль с
овисной сывороткой.
После этого в каждую пробирку второго,
третьего, четвертого и пятого рядов с разведенными
сыворотками, вносят по 0,5 см антигена,
предварительно разбавленного в соотношении 1:10
раствором хлорида натрия. Тщательно
перемешивают до получения однородной массы и
помещают в термостат при температуре 37-38°С на
2 ч, затем выдерживают при комнатной температуре
в течение 20 мин, после чего проводят учет реакции.
Результаты реакций учитывают визуально и
определяют в крестах:
- четыре креста (++++) полное просветление
жидкости, микробные тела антигена осели на дно
пробирки в виде «зонтика», при легким
встряхивания, «зонтик» разбивается на хлопья и
комочки, а жидкость остается прозрачной (100%
агглютинация);
- три креста (+++) - полное просветления
жидкости и хорошо выраженный «зонтик» (75%
агглютинации);
- два креста (++) просветление жидкости,
«зонтик» умеренно выражен (50% агглютинации);
один крест (+) едва заметное просветление
жидкости, «зонтик» выражен слабо (25%
агглютинации);
- минус (-) - просветление жидкости и
образование «зонтика» не наступило, на дне
пробирки виден «пунктик» осевших микробов
антигена.
За диагностический титр антител принимают
последнее разведение сыворотки, в котором
произошла агглютинация не менее чем в 2 креста,
что соответствует количеству международных
единиц антител в 1,0 см3
сыворотки.
Пример 3. Постановка РДСК при исследовании
сывороток крови животных ставят в объеме 1 см (по
0,2 см3
каждого компонента). Испытуемые
сыворотки исследуют в разведении 1:5 и 1:10 (доза
сыворотки 0,04 см3
и 0,02 см3
со специфическим
антигеном, в разведении 1:5 с контрольным
антигеном (на специфичность) и без антигена (на
антикомплементарность).
Испытуемые и контрольные сыворотки
инактивируют в день постановки реакции в
разведенном виде при 63-64°С в течение 30 мин.
После завершения инактивации в первую пробирку
контрольных рядов вносит физиологический
раствор в дозировке 0,2 см3
, затем вносит во вторую
и третью пробирку контрольных рядов антиген в
рабочем титре в дозировке 0,2 мл.
Затем во все пробирки разливают комплемент по
0,2 см3
в зависимости от его рабочего разведения,
пробирки встряхивают и помещают в холодильник
на 16-18 ч при 2-6°С. На следующий день штативы
вынимают из холодильника и после выдерживания в
течение 20-30 мин при комнатной температуре во
все пробирки разливают гемолитическую систему в
рабочем титре. Штативы встряхивают и помещают в
водяную баню на 20 мин при 37-38°С.
Учет результатов РДСК проводят дважды:
первый раз - сразу после водяной бани, второй -
после оседания эритроцитов на дно пробирки (через
3-4 часа после водяной бани) или на следующий
день при хранении в холодильнике от 2° до 6°С.
Результаты реакций оценивают в крестах по
следующей схеме: ++++ (4 креста) - отсутствие
гемолиза, надосадочная жидкость прозрачная,
бесцветная; +++ (3 креста) - гемолиз 25%
эритроцитов; ++ (2 креста) - гемолиз 50%
эритроцитов; + (1 крест) - гемолиз 75%
эритроцитов; (минус) - полный гемолиз
эритроцитов, осадок отсутствует, жидкость
интенсивно окрашена гемоглобином.
Результаты реакций оценивает в крестах.
Реакцию считают положительной при задержке
гемолиза на 2-4 креста в одном или в двух
разведениях сыворотки (1:5 или 1:10) и полном
гемолизе эритроцитов в контрольной пробирке (без
антигена), сомнительной- при задержке гемолиза с
оценкой в один крест, отрицательной - при полном
гемолизе эритроцитов в разведениях сыворотки 1:5
и 1:10.
Пример 4. Специфичность и чувствительность
разработанного SR антигена в сравнении с
биофабричным единым бруцеллезным антигеном
определяли в РА и РДСК путем исследования 54
проб сывороток крови овец. Результаты реакций с
испытуемыми антигенами отражены в таблице 1.
Как видно из таблицы 1, при исследовании 54
проб сывороток крови овец в РА и РДСК
положительно реагировали с биофабричным

5. 29711
5
единым антигеном 18 проб, а с SR-антигенам 21
проба.
Эффективность разработанного SR антигена
испытывалась также в РА и РДСК при исследовании
сывороток крови 14 баранов положительно и
отрицательно реагирующих в РДСК с овисным
антигеном на инфекционный эпидидимит.
Полученные результаты по определению
эффективности и специфичности опытного антигена
отражены в таблице 2, из которой видно, что в РА и
РДСК с разработанным SR антигеном и в РДСК с
биофабричным овисным антигеном одинаково
положительно реагировало 4 барана.
Изучение специфичности опытного антигена в
серологических реакциях проводили путем
исследования гетерологичных и гомологичных
сывороток (таблица 3).
Из таблицы 3 видно, что при исследовании
гетерологичных и негативных сывороток в РА и
РДСК с опытным антигеном были получены
отрицательные результаты, что свидетельствующих
об их специфичности.
Эффективность приготовленного SR-антигена
изучали в лабораторных условиях при исследовании
сывороток крови от 873 голов крупного рогатого
скота (КРС) и 542 голов мелкого рогатого скота
(МРС) (всего 1415 голов животных) Алматинской и
Жамбылской областей, которые исследовались
одновременно в РА, РДСК с единым бруцеллезным
антигеном. Для подтверждения диагноза на
бруцеллез были исследованы бактериологически
пробы цельной крови от всех животных. Пробы
крови, полученные стерильно в вакутейнеры
высевали на специальные твердые и жидкие
питательные среды с целью получения
гемокультуры бруцелл. Полученные результаты
приведены в таблице 4.
Из таблицы 4 видно, что из 1415 исследованных
проб сывороток крови КРС и МРС в РА с
испытуемым SR антигеном положительно
реагировало 214, с биофабричным единым
бруцеллезным антигеном - 208 проб. Отмечено
преимущество показаний РА при исследовании
сывороток крови животных с опытным SR-
антигеном перед показаниями РА с единым
бруцеллезным антигеном. При этом было
установлено, что разработанный SR-антиген
дополнительно выявлял в РА 6 позитивно
реагирующих животных.
Общепринятый единый антиген выявлял в РДСК
219 положительно реагирующих животных, что
ниже показаний РДСК с разработанным SR-
антигеном на 7 случаев.
Таким образом, отмечена достаточно высокая
результативность РА и РДСК при исследовании
сывороток крови животных на бруцеллез и
инфекционный эпидидимит с помощью
испытуемым SR-антигеном. Результаты
серологических исследований КРС и МРС на
бруцеллез и инфекционный эпидидимит баранов
были подтверждены выделенными из крови 1
коровы культуры В.abortus, а также от 1 овцы и 1
козы культур B.melitensis.
Использование способа получения SR-антигена
для серологических реакций при диагностике
бруцеллеза и инфекционного эпидидимита
животных позволит повысить результативность,
чувствительность и специфичность серологических
реакций, тем самым ускорит выявление бруцеллеза
сельскохозяйственных животных.
Таблица 1
Результаты серологических исследований сывороток крови животных в РА и РДСК с испытуемым
антигеном
Испытуемый антигенБиофабричный един, антиген
SR антиген
Количество гол
РА РДСК РА РДСК
54 15 12 16 15
39 42 38 39
Всего 18 21
36 33
Примечание: числитель - положительный результат; знаменатель - отрицательный результат
Таблица 2
Результаты серологических исследований сывороток крови баранов в РА и РДСК с испытуемым антигеном
Испытуемый антигенБиофабричный овисный антиген
SR антиген
Кол-во гол
РДСК РА РДСК
14 4 4 4
10 10 10
Примечание: числитель - положительный результат; знаменатель - отрицательный результат

6. 29711
6
Таблица 3
Специфичность серологических реакций с опытным антигеном
Биофабричный
овисный антиген
Биофабричный единый антиген Испытуемый SR антигенИсследуемые сыворотки
РДСК РА РДСК РА РДСК
Сальмонеллезный - - - - -
Лептоспирозный - - - - -
Пастереллезный - - - - -
Хламидиозный - - - - -
Иерсиниозный - - - - -
Бруцеллезный - + + + +
Овисный + - - + +
Негативная - - - - -
Примечания: + - положительный результат; - - отрицательный результат
Таблица 4
Результаты серологического и бактериологического исследования животных на бруцеллез и инфекционный
эпидидимит
Испытуемые антигены Биофабричный
антиген
R антиген SR антиген
Наименование хозяйства К/во
исследов
анных
гол. РА РДСК РА РДСК
РА РДСК
Выд.
куль.
крови
КРС
Отгон «Боралдай» с/о
«Каражотинский»
Алматинской области
4 1/3 1/3 2/2 2/2 1/3 2/2 1
С. «Бауыржан» с/о
«Каратурук» Алматинской
области
150 0/150 0/150 0/150 0/150 0/150 0/150 0
с. «Ащисай» с/о «Каратурук»
Алматинской области
172 0/172 0/172 0/172 0/172 0/172 0/172 0
С.Ават Алматинской области 22 1/21 1/21 5/17 7/15 4/18 6/16 0
ТОО «Байсерке-агро» с/о
«Панфилов» Алматинской
области
525 0/525 0/525 0/525 0/525 0/525 0/525 0
Всего реагировало позитивно 2 1 7 9 5 8 1
МРС
Отгон «Боралдай» с/о
«Каражотинский»
Алматинской области
248 2/246 2/246 20/228 24/224 19/229 22/226 1
С.«Чадай» с/о «Каратурук»
Алматинской области
40 0/40 0/40 0/40 0/40 0/40 0/40 0
С.Ават Алматинской области 35 1/34 2/33 15/20 18/17 14/21 16/19 0
с/о «Пионер» Жамбылского
района Жамбылской области
219 2/217 2/217 172/47 175/44 170/49 173/46 0
Всего реагировало позитивно 5 6 207 217 203 211 1
ИТОГО реагировало
позитивно КРС и МРС
7 7 214 226 208 219 2
Примечание: числитель - положительный результат; знаменатель - отрицательный результат
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ получения SR-антигена для
серологических реакций при диагностике
бруцеллеза и инфекционного эпидидимита
животных, включающий выращивание культур
бруцелл на твердой питательной среде, их смыв,
отмывание, инактивацию и центрифугирование с
последующим ресуспендированием,
отличающийся тем, что в качестве S-антигена
используют штамм бактерии Brucella abortus 2385, в
качестве R- антигена используют штамм бактерии
Brucella ovis В-0176 КазНИВИ №63/290, которые
инактивируют в водяной бане при температуре 80°С
в течение 1 ч, полученную суспензию
центрифугируют при 6000 об/мин в течение 30 мин,
надосадочную жидкость удаляют, после чего осадок
S-антигена окрашивают 0,2%-ным раствором
анилина голубого и шутелируют в течение 24 ч, а
осадок R-антигена ресуспендируют

7. 29711
7
физиологическим раствором до концентрации
200 млрд микробных клеток в 1,0 см3
по
оптическому стандарту мутности, затем
полученную микробную суспензию подвергают
воздействию ультразвуковых волн частотой 22 кГц
и мощностью 90 Вт/см2
, после чего полученный
дезинтеграт центрифугируют при 6000 об/мин в
течение 20 мин, затем полученную надосадочную
жидкость удаляют и осадок окрашивают 0,2%
раствором красный С 6, затем окрашенную взвесь
двух антигенов промывают физиологическим
раствором трехкратно, центрифугируют при
6000 об/мин в течение 20 мин, полученную
надосадочную жидкость отбрасывают, при этом
осадок ресуспендируют 0,5%-ным
фенолизированном физиологическим раствором в
соотношении 1:200, после этого окрашенные
антигены двух штаммов смешивают в соотношении
1:1 и доводят до концентрации 60 млрд в 1,0 см3
0,5%-ным фенолизированным физиологическим
раствором и получают целевой продукт.
Верстка Ж. Жомартбек
Корректор К. Нгметжанова