1. p РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 29279
(51) C12N 7/00 (2006.01)
A61K 39/135 (2006.01)
МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2014/0160.1
(22) 11.02.2014
(45) 15.12.2014, бюл. №12
(72) Абишов Абдикалык Абдижаппарович;
Хайруллаева Куралай Амангельдиевна
(73) Товарищество с ограниченной
ответственностью "Казахский научно-
исследовательский ветеринарный институт"
(56) Бурдов А.Н. Штаммы вируса ящура,
используемые для производства и контроля вакцин
и диагностикумов: Ящур-М, Агропромиздат, 1990,
с.10
(54) ШТАММ PICORNAVIRUS APHTAE AV-
0266 ВИРУСА ЯЩУРА ТИПА АЗИЯ-1 ДЛЯ
ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И
ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ
(57) Изобретение относится к области ветеринарной
вирусологии и может быть использовано при
изготовлении диагностических и профилактических
биопрепаратов против ящура животных, обуслов-
ленного вирусом ящура типа Азия-1.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в получении штамма
вируса ящура типа Азия-1, пригодной для
изготовления инактивированной вакцины,
типоспецифического антигена и сыворотки для
серологической диагностики ящура животных.
Штамм AV-0266 вируса ящура типа Азия-1
депонирован в Лаборатории по изучению генофонда
микроорганизмов ТОО «Казахский научно-
исследовательский ветеринарный институт»
(КазНИВИ), используемый для изготовления
вакцинных и диагностических препаратов.
(19)KZ(13)A4(11)29279

2. 29279
2
Изобретение относится к области ветеринарной
вирусологии и может быть использовано при
изготовлении диагностических и профилактических
биопрепаратов против ящура животных,
обусловленного вирусом ящура типа Азия-1.
Известен производственный штамм №48/СССР
вируса ящура типа Азия-1, применяемый для
изготовления профилактических и диагностических
препаратов против ящура [А.Н.Бурдов. Штаммы
вируса ящура, используемые для производства и
контроля вакцин и диагностикумов // В кн.: Ящур -
М,: “Агропромиздат”, - 1990. с.10].
Недостатком данного штамма вируса является
то, что за давностью времени выделения и
получения, отличается по антигенной активности и
структуре от современных циркулирующих в
природе изолятов- возбудителей вируса ящура типа
Азия - 1.
Задачей изобретения является получение
иммуногенной, антигенной и биологической
активности и пригодности для изготовления
вакцинных и диагностических препаратов.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в получении штамма
вируса ящура типа Азия-1, пригодной для
изготовления инактивированной вакцины,
типоспецифического антигена и сыворотки для
серологической диагностики ящура животных.
Клон штамма вируса ящура типа Азия-1 AV-
0266 КазНИВИ «А-2003-12», используемый для
получения биологической массы репродуцируют в
перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13 и
клонируют методом предельного разведения.
Штамм AV-0266 вируса ящура типа Азия-1 А
депонирован в Лаборатории по изучению генофонда
микроорганизмов ТОО «Казахский научно-
исследовательский ветеринарный институт»
(КазНИВИ), используемый для изготовления
вакцинных и диагностических препаратов.
Штамм вируса ящура типа Азия-1 AV-0266
КазНИВИ «А-2003-12»
Штамм AV-0266 вируса ящура типа Азия-1
получен путем клонирования исходного штамма
методом предельного разведения с последующей
репродукцией на перевиваемой линии клеток ВНК-
21/13 и обозначен как штамм AV-0266 вируса ящура
типа Азия -1 КазНИВИ «А-2003-12».
Полученный штамм характеризуется
следующими признаками.
Штамм AV-0266 вируса ящура типа Азия-1
КазНИВИ «А-2003-12» обладает высокой
репродуктивной активностью на культуре клеток
ВНК- 21/13, антигенной и иммуногенной
активностью. Повышает эффективность
профилактических препаратов и диагностики ящура
животных. Штамм используют для изготовления
вакцинных и диагностических биопрепаратов.
Состав среды и условия культивирования: Среда
Игла-МЕМ, содержащий 5% сыворотки крови
крупного рогатого скота.
Морфологические признаки. Вирус ящура типа
Азия-1 относится к мелким вирусам парнокопытных
животных. Размер вириона 22-25 нм, имеет
сферическую (икосаэдрический) форму, состоит из
одноцепочечной линейной молекулы РНК,
заключенную в белковую оболочку, состоящей
главным образом из четырех структурных белков
VP1,VP2, VP3, VP4. Вирус содержит 31,5% РНК и
68,5% протеинов. Молекула белка состоит из 5
полипептидных цепей, который содержит 18
аминокислот.
Штамм AV-0266 КазНИВИ «А-2003-12» вируса
ящура типа Азия-1 обладает морфологическими
признаками, свойственными для возбудителя ящура
рода афтовирусов семейства пикорновирусов.
Культуральные свойства. Штамм AV-0266
КазНИВИ «А-2003-12» вируса ящура типа Азия-1
репродуцируется и накапливается в перевиваемой
линии клеток ВНК-21/13 в титре 109,25
lg TЦД50/см
3
.
В указанной перевиваемой культуре клеток штамм
AV-0266 КазНИВИ «А-2003-12» вируса ящура типа
Азия-1 активно размножается и начало
цитопатического действия отмечается через 7-9
часов после инфицирования, поражая к 25-32 часам
около 80-90% монослоя клеток.
Штамм вируса на уровне 7-8 пассажей в
культуре клеток ВНК-21/13 характеризуется
высокой репродуктивной активностью. Повышение
инфекционной и комплементсвязывающей
активности достигнуто в результате клонирования
исходного культурального штамма, путем
предельного разведения. Биологическая активность
клонированных вариантов штамма 9,25 lg ТЦД50/см
3
.
Антигенные свойства. Штамм AV-0266
КазНИВИ «А-2003-12» вируса ящура типа Азия-1 в
организме зараженных животных (белые мыши,
морские свинки, кролики, крупный рогатый скот)
вызывает образование вируснейтрализующих,
комплементсвязывающих и прецепитирующих
антител.
Патогенные свойства. Штамм AV-0266
КазНИВИ «А-2003-12» вируса ящура типа Азия-1 у
инфицированных мышат-сосунов и крольчат
вызывает развитие типичных клинических
признаков болезни ящура (парезы и параличи
конечностей, мышц туловищ и шеи),
заканчивающиеся гибелью животных в течение 18-
24 ч после заражения. В организме зараженных
лабораторных животных вирус накапливается в
титрах 108,5
- 109,3
ТЦД50/0,1 мл (летальная мышиная
доза, вызывающих 50% гибель мышат- сосунов).
Иммуногенная свойства. Штамм AV-0266
КазНИВИ «А-2003-12» вируса ящура типа Азия-1
репродуцированный в культуре клеток ВНК- 21/13,
инактивированный димером этиленимина и
добавленный масляного адъюванта при подкожном
введении крупному рогатому скоту в дозе 3 мл
стимулирует образования напряженного
противоящурного иммунитета. Все
иммунизированные животные при контрольном
заражении оставались клинически здоровыми в
течение 7 суток после их инфицирования
вирулентным вирусом ящура типа Азия-1.
Стабильность свойств при пассировании.
Основные биологические свойства штамма AV-0266
КазНИВИ «А-2003-12» вируса ящура типа Азия-1,

3. 29279
3
при культивировании в культуре клеток ВНК-21/13
сохраняются в течение 15 пассажей (срок
наблюдения).
Сохраняемость. Штамм AV-0266 КазНИВИ «А-
2003-12» вируса ящура типа Азия-1 в виде
культуральной суспензии не снижает
биологическую активность при температуре 4±1°С в
течение 40 сут, при минус 30°С - 18 мес, а в виде
фарша из тушек крольчат с консервантом
(глицерин + физиологический раствор аа) при pH
7,5 в течение 6 месяцев при температуре 4±1°С,
36 мес - при минус 40°С.
Пример 1. Для изготовления инактивированной
вакцины против ящура вирус из штамма AV-0266
КазНИВИ «А-2003-12» типа Азия-1 репродуцирует
суспензионным способом на перевиваемой линии
клеток ВНК-21/13 в питательной среде Игла-МЕМ,
после сбора биомассы, вирус инактивируют
раствором димера этиленимина в течение 20 ч и
смешивают с масляным адъювантом. Полученный
таким образом препарат применяют в качестве
противоящурной вакцины для иммунизации
животных.
Пример 2. Штаммом AV-0266 КазНИВИ «А-
2003-12» вируса ящура типа Азия-1 инфицируют
культуру клеток ВНК-21/13 в дозе 0,001 ТЦДкл. В
период максимального развития цитопатических
действий ферментер с пораженными клетками
останавливают, охлаждают до комнатной
температуры, сливают в сосуды и замораживают
при минус 20°С. В дальнейшем вирусная суспензия
используется для изготовления антигена.
Для этого вирусную суспензию размораживают
при температуре 22°С и центрифугируют при
5000 об/мин в течение 30 минут. Надосадочную
жидкость отсасывают в стерильную посуду и
инактивируют раствором димера этиленимина при
температуре 22°С в течение 24 часов, затем
центрифугируют при 3000 об/мин в течение 30 мин.
В готовый антиген добавляют стабилизаторы,
тщательно перемешивают, расфасовывают в
стерильные ампулы по 1 мл, подвергают
лиофилизации и получают целевой продукт.
Пример 3. Для получения типоспецифической
гипериммунной сыворотки к вирусу ящура
животных, штаммом AV-0266 КазНИВИ «А- 2003-
12» инфицируют культуру клеток ВНК-21/13 в дозе
0,01 ТЦДкл. Через 48 часов после инфицирования и
при поражении вирусом 80-90% монослоя клеток
сосуды замораживают при температуре минус 20°С,
затем размораживают при температуре 22°С и
центрифугируют при 5000 об/мин в течение 30 мин.
Вируссодержащую суспензию инактивируют
раствором димера этиленимина при температуре
22°С в течение 24 часов и добавляют масляный
адъювант, далее используют в качестве антигена
для иммунизации и гипериммунизации животных.
Их иммунизируют четырехкратно в дозе 2 мл
внутримышечно с интервалом в 7 дней. Через 14
дней после последней инъекции антигена,
осуществляют забор крови с последующим
получением сыворотки. Полученную сыворотку
инактивируют в водяной бане при температуре 56°С
в течение 30 мин. После чего разливают в
стерильные ампулы или флаконы по 1 мл,
подвергают сублимационной сушке и получают
готовый продукт.
Использование штамма AV-0266 вируса ящура
типа Азия-1 позволят повысит эффективность
профилактических и диагностических препаратов.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Штамм Picomavirus aphtae AV-0266 вируса
ящура типа Азия-1, депонирован в лаборатории по
изучению генофонда микроорганизмов ТОО
«Казахский научно - исследовательский
ветеринарный институт» под номером А-2003-12,
используемый для изготовления вакцинных и
диагностических препаратов.
Верстка Ж. Жомартбек
Корректор К. Нгметжанова