1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 29280
(51) C12N 7/00 (2006.01)
A61K 39/135 (2006.01)
МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2014/0162.1
(22) 11.02.2014
(45) 15.12.2014, бюл. №12
(72) Абишов Абдикалык Абдижаппарович;
Хайруллаева Куралай Амангельдиевна
(73) Товарищество с ограниченной
ответственностью "Казахский научно-
исследовательский ветеринарный институт"
(56) Бойко А.А., Шуляк Ф.С.
Иммунобиологические свойства вируса: Ящур-М,
Колос, 1971, с.19-23
(54) ШТАММ PICORNAVIRUS APHTAE AV-
0267 ВИРУСА ЯЩУРА ТИПА О ДЛЯ
ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И
ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ
(57) Изобретение относится к ветеринарной
вирусологии и может быть использовано при
изготовлении препаратов диагностики и
профилактики против ящура парнокопытных
животных, обусловленного вирусом ящура типа О.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в получении
биологической массы вируса ящура типа О с
высокой биологической активностью, пригодной
для изготовления инактивированной вакцины и
антигена, обладающие высокой иммуногенной и
диагностической эффективностью.
Штамм AV-0267 вируса ящура типа О
депонирован в Лаборатории по изучению генофонда
микроорганизмов ТОО «Казахский научно-
исследовательский ветеринарный институт»
(КазНИВИ), используемый для изготовления
вакцинных и диагностических препаратов.
(19)KZ(13)A4(11)29280

2. 29280
2
Изобретение относится к ветеринарной
вирусологии и биотехнологии и может быть
использовано при изготовлении препаратов
диагностики и профилактики против ящура
парнокопытных животных, обусловленного вирусом
ящура типа О.
Известен штамм вируса ящура типа О,
используемый для изготовления инактивированной
вакцины против ящура [А.А. Бойко, Ф.С. Шуляк
Иммунобиологические свойства вируса // в кн.:
Ящур - М.: Колос, 1971, с.19-23].
Недостатком указанного штамма вируса является
несоответствие по антигенной активности с
современными циркулирующими в природе
возбудителями ящура типа О и обладает слабой
иммуногенной активностью.
Задачей изобретения является повышение
иммуногенной, антигенной и биологической
активности и пригодности для изготовления
вакцинных и диагностических препаратов.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в получении
биологической массы вируса ящура типа О с
высокой биологической, иммуногенной и
антигенной активностью, пригодной для
изготовления инактивированной вакцины и
антигена, обладающие высокой протективной и
диагностической эффективностью.
Штамм AV-0267 вируса ящура типа О
депонирован в Лаборатории по изучению генофонда
микроорганизмов ТОО «Казахский научно-
исследовательский ветеринарный институт»
(КазНИВИ), используемый для изготовления
вакцинных и диагностических препаратов.
Штамм вируса ящура типа О AV-0267 КазНИВИ
«Д-05-12»
Штамм вируса ящура типа О AV-0267 КазНИВИ
«Д-05-12» получен путем клонирования исходного
штамма методом предельного разведения с
последующей репродукцией на перевиваемой линии
клеток ВНК-21/13 и обозначен как штамм вируса
ящура типа О AV-0267 КазНИВИ «Д-05-12».
Полученный штамм характеризуется
следующими признаками.
Штамм вируса ящура типа О AV-0267 КазНИВИ
«Д-05-12» обладает высокой репродуктивной
активностью на культуре клеток ВНК- 21/13,
антигенной и иммуногенной активностью.
Повышает эффективность профилактических
препаратов и диагностики ящура животных. Штамм
используют для изготовления вакцинных и
диагностических биопрепаратов.
Состав среды и условия культивирования: Среда
Игла-МЕМ, содержащий 5% сыворотки крови
крупного рогатого скота.
Морфологические признаки. Вирус ящура типа О
относится к мелким вирусам парнокопытных
животных. Размер вириона 22-25 нм, имеет
сферическую (икосаэдрический) форму, состоит из
одноцепочечной линейной молекулы РНК,
заключенную в белковую оболочку, состоящей
главным образом из четырех структурных белков
VP1, VP2, VP3, VP4. Вирус содержит 31,5% РНК и
68,5% протеинов. Молекула белка состоит из 5
полипептидных цепей, который содержит 18
аминокислот.
Штамм «Д-05-12» вируса ящура типа О обладает
морфологическими признаками, свойственными для
возбудителя ящура рода афтовирусов семейства
пикорновирусов.
Культуральные свойства. Штамм вируса ящура
типа О AV-0267 КазНИВИ «Д-05-12»
репродуцируется и накапливается в перевиваемой
линии клеток ВНК-21/13 в титре 109,00
lg ТЦД50/см
3
.
В указанной перевиваемой культуре клеток штамм
«Д-05-12» вируса ящура типа О активно
размножается и начало цитопатических изменений
отмечается через 8-10 часов после инфицирования,
поражая к 32-36 часам около 70- 80% клеток
монослоя.
Штамм вируса на уровне 10-12 пассажей в
культуре клеток ВНК-21/13 характеризуется
высокой репродуктивной активностью. Повышение
инфекционной и комплементсвязывающей
активности достигнуто в результате клонирования
исходного культурального штамма, путем
предельного разведения. Биологическая активность
клонированных вариантов штамма на культуре
клеток ВНК-21/13 9,00 lg ТЦД50/см
3
.
Антигенные свойства. Штамм вируса ящура типа
О AV-0267 КазНИВИ «Д-05-12» в организме
зараженных животных (белые мыши, морские
свинки, кролики, крупный рогатый скот)
вызывает образование вируснейтрализующих,
комплементсвязывающих и прецепитирующих
антител.
Патогенные свойства. Штамм вируса ящура типа
О AV-0267 КазНИВИ «Д-05-12» у инфицированных
мышат-сосунов и крольчат вызывает развитие
клинических признаков ящура (парезы и параличи
конечностей, мышц туловищ и шеи),
заканчивающиеся гибелью животных в течение 20-
26 ч после заражения. В организме зараженных
лабораторных животных вирус накапливается в
титрах 108,0-109’00 ЛД50/0,1 мл (летальная мышиная
доза, вызывающих 50% гибель мышат-сосунов).
Иммуногенная свойства. Штамм вируса ящура
типа О AV-0267 КазНИВИ «Д-05-12»
репродуцированный в культуре клеток ВНК-21/13,
инактивированный димером этиленимина и
добавленный масляного адъюванта при подкожном
введении крупному рогатому скоту в дозе 3 мл
стимулирует образования напряженного
иммунитета против возбудителя ящура. Все
иммунизированные животные при контрольном
заражении оставались клинически здоровыми в
течение 12 суток после их инфицирования
вирулентным вирусом ящура типа О.
Стабильность свойств при пассировании.
Основные биологические свойства штамма вируса
ящура типа О AV-0267 КазНИВИ «Д-05-12», при
культивировании в культуре клеток ВНК-21/13
сохраняются в течение 17пассажей (срок
наблюдения).
Сохраняемость. Штамм вируса ящура типа О
AV-0267 КазНИВИ «Д-05-12» виде культуральной

3. 29280
3
суспензии не снижает биологическую активность
при температуре 4+1°С в течение 40 сут, при минус
30°С - 20 мес, а в виде фарша из тушек крольчат с
консервантом (глицерин + физиологический раствор
аа) при pH 7,5 в течение 6 месяцев при температуре
4±1ºС, 36 мес - при минус 40°С.
Пример 1. Для изготовления инактивированной
вакцины против ящура вирус из штамма вируса
ящура типа О AV-0267 КазНИВИ «Д-05-12»
репродуцирует суспензионным способом на
перевиваемой линии клеток ВНК-21/13 в
питательной среде Игла-МЕМ, после сбора
биомассы, вирус инактивируют раствором димера
этиленимина в течение 22 ч и смешивают с
масляным адъювантом. Полученный таким образом
препарат применяют в качестве противоящурной
вакцины для иммунизации животных.
Пример 2. Штаммом вируса ящура типа О AV-
0267 КазНИВИ «Д- 05-12» инфицируют культуру
клеток ВНК-21/13 в дозе 0,001 ТЦДкл. В период
максимального развития цитопатических действий
ферментер с пораженными клетками останавливают,
охлаждают до комнатной температуры, сливают в
сосуды и замораживают при минус 20°С. В
дальнейшем вирусная суспензия используется для
изготовления антигена.
Для этого вирусную суспензию размораживают
при температуре 22°С и центрифугируют при 5000
об/мин в течение 30 минут. Надосадочную жидкость
отсасывают в стерильную посуду и инактивируют
раствором димера этиленимина при температуре
22°С в течение 22 часов, затем центрифугируют при
5000 об/мин в течение 30 мин.
В антигенную суспензию добавляют
стабилизаторы, тщательно перемешивают,
расфасовывают в стерильные ампулы или флаконы
по 1 мл, подвергают лиофилизации и получают
целевой продукт.
Пример 3. Для получения типоспецифической
гипериммунной сыворотки к вирусу ящура
животных, штаммом вируса ящура типа О AV- 0267
КазНИВИ «Д-05-12» инфицируют культуру клеток
ВНК-21/13 в дозе 0,001 ТЦДкл. Через 48 часов после
инфицирования и при поражении вирусом 70-80%
клеток монослоя сосуды замораживают при
температуре минус 20°С, затем размораживают при
температуре 22°С и центрифугируют при
5000 об/мин в течение 30 мин. Вируссодержащую
суспензию инактивируют раствором димера
этиленимина при температуре 22°С в течение 22
часов и добавляют масляный адъювант, далее
используют в качестве антигена для иммунизации и
гипериммунизации животных. Их иммунизируют
четырехкратно в дозе 2 мл внутримышечно с
интервалом в 7 дней. Через 14 дней после последней
инъекции антигена, осуществляют забор крови с
последующим получением сыворотки. Полученную
сыворотку инактивируют в водяной бане при
температуре 56°С в течение 30 мин. После чего
разливают в стерильные ампулы или флаконы по 1
мл, подвергают сублимационной сушке и получают
готовый продукт.
Использование штамма AV-0267 вируса ящура
типа О позволят повысит эффективность
профилактических и диагностических препаратов.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Штамм Picomavirus aphtae AV-0267 вируса
ящура типа О, депонирован в лаборатории по
изучению генофонда микроорганизмов ТОО
«Казахский научно - исследовательский
ветеринарный институт» под номером Д-05-12,
используемый для изготовления вакцинных и
диагностических препаратов.
Верстка Ж. Жомартбек
Корректор К. Нгметжанова