1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 28819
(51) C12N 1/14 (2006.01)
КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ
МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2013/0354.1
(22) 20.03.2013
(45) 15.08.2014, бюл. №8
(72) Умитжанов Мынбай; Боранбаева Райхан
Султанмуратовна
(73) Товарищество с ограниченной
ответственностью "Казахский научно-
исследовательский ветеринарный институт"
(56) RU 2084240 C1, кл. A61K 39/00, C12N 1/14,
1997
(54) ШТАММ ГРИБА MICROSPORUM
EQUINUM F-0182, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ
ИЗГОТОВЛЕНИЯ ИНАКТИВИРОВАННОЙ
ВАКЦИНЫ ПРОТИВ МИКРОСПОРИИ
ЛОШАДЕЙ
(57) Изобретение относится к ветеринарной
микологии и может быть использовано для
профилактики микроспории лошадей, кошек, собак
и пушных зверей, обусловленной грибом
Microsporum.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в получении
культуральной массы гриба рода Microsporum с
биологической активностью не менее 145×106
макроконидии путем ступенчатого отбора, по
признаку спорообразования наиболее быстро
растущих колоний с активным накоплением
макроконидий.
Штамм гриба Microsporum equinum F-0182
КазНИВИ №15, депонированный в лаборатории
генофонда микроорганизмов ТОО «Казахский
научно-исследовательский ветеринарный институт»,
используемый для изготовления инактивированной
вакцины против микроспории лошадей.
(19)KZ(13)A4(11)28819

2. 28819
2
Изобретение относится к ветеринарной
микологии и может быть использовано для
профилактики микроспории лошадей, кошек, собак
и пушных зверей, обусловленной грибом
Microsporum.
Известен штамм гриба рода Microsporum,
используемый для изготовления инактивированной
вакцины против микроспории собак [Патент
Российской Федерации №2084240, А61K 39/00,
С12N 1/14, 1997].
Недостатком указанного гриба является то, что
он обладает слабой иммуногенностью и
изготовленная из него вакцина недостаточно
эффективна.
Задачей изобретения является получение штамма
гриба с высокой антигенной активностью, а также
пригодной для изготовления эффективной
иммуногенной инактивированной вакцины против
микроспории лошадей.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в получении
культуральной массы гриба рода Microsporum с
биологической активностью не менее 145×106
макроконидий путем ступенчатого отбора, по
признаку спорообразования наиболее быстро
растущих колоний с активным накоплением
макроконидий.
Штамм гриба Microsporum equinum F-0182
КазНИВИ №15, используемый для изготовления
инактивированной вакцины против микроспории
лошадей.
Указанный штамм гриба Microsporum equinum F-
0182 КазНИВИ №15 депонирован в лаборатории
генофонда микроорганизмов ТОО «КазНИВИ».
Идентификацию штамма гриба проводят по
основным морфологическим, культуральным и
биохимическим свойствам, согласно определителю
патогенных, токсигенных и вредных для человека
грибов (П.Н. Кашкин, М.К. Хохряков,
А.П. Кашкин.,1979 г.).
Селекция штамма. Штамм Microsporum equinum
F-182 КазНИВИ №15 выделен из поверхности
кожного покрова больной лошади, принадлежащего
крестьянскому хозяйству «Сапа» Южно-
Казахстанской области Казыгуртского района с.
Шарбулак, путем направленного ступенчатого
отбора. После очищения полученного патматериала
(культуру гриба) засевали в питательную среду
(суслоагар) и ставили в термостат на 14-21 сут при
температуре 26-28°С. Далее из одной колонии
выращенного гриба делали повторный посев в
течение 5 раз. Методом разведения выделяли клоны
названного гриба выросших в чашках Петри на
суслоагаре, которые при дальнейшем посеве давали
наибольший рост. Накопление биомассы
определяли в камере Горяева по общепринятой
методике.
Таким образом, в результате проведенных
исследований был выделен полевой изолят гриба из
рода Microsporum, который был более
предпочтителен для дальнейшей работы.
Вакцинный штамм Microsporum equinum F-0182
КазНИВИ №15 получен путем направленного
ступенчатого отбора, по признаку спорообразования
быстро растущих колоний с активным накоплением
макроконидий. Полученный штамм отличается от
эпизоотических штаммов слабой вирулентностью,
высокой спорогенностью и активностью при
внутримышечном введении.
Штамм характеризуется следующими
признаками.
Морфологические признаки. Штамм гриба
Microsporum equinum F-0182 КазНИВИ №15
обладает морфологическими признаками,
характерными для возбудителя микроспории
лошадей. Окрашенные по Граму культуры гриба
грамположительные.
Культуральные свойства. Культуры гриба
быстрорастущие, рост колонии наблюдается на
2-5-й день в виде маленького пушистого
возвышения, окруженный зоной белесоватого
пушка; к 10-му дню достигают диаметра 4-5 см.
Растущий штамм гриба Microsporum equinum F-0182
КазНИВИ №15 ветвящийся, беловатый, сероватый
или бежевый, пушистый, бархатисто- мучнистый,
распростертый, овальный, растущий край
воздушного мицелия паутинистый. Размеры
шириной 0,6-3,5 мкм, септированный, изогнуты,
иногда гифы ракетообразные. микроконидии
немногочисленные, овальные, грушевидные,
размером 3-6×2,5-3,5 мкм, сидящие или
прикрепленные короткими ножками, встречаются не
постоянно, располагаются на конидиеносцах
различного размера; макроконидии
многочисленные, веретеновидной формы с
вытянутыми концами, с толстостенной гладкой или
зубчатой оболочкой, с 8-12 перегородками,
размером 50-120×15-25 мкм, располагающихся
иногда на равном расстоянии одна от другой по
ходу мицелия. Артроспоры гриба единичные или
отсутствуют. Хламидоспоры округлые,
интеркалярные диаметром 8-12 мкм, располагаются
на равном расстоянии друг от друга по ходу
мицелия, единичные или отсутствуют.
Биохимические свойства. Штамм гриба
Microsporum equinum F-0182 КазНИВИ №15 состоит
из углеводов, постоянно усваивает сахарозу,
глюкозу, мальтозу, манит; фактором роста являются
- тиамин, никотиновая, патнтотеновая,
парабензойные кислоты. Стимулятором роста -
железо, цинк, марганец, медь, молибден, кальций,
кобальт, никель, бор и др. Сероводород и индол не
образует.
Антигенные свойства. На введение культуры
штамма в организме кошек, собак и пушных зверей
(кроликов) образуются специфические агглютинины
в титрах 1:40 - 1:1280.
Маркерные признаки. Физиологические -
хемогетеротроф. По отношению к кислороду -
аэроб. Пептоны, аспарагин, глутоминовая кислота,
сусло агар, аминокислоты, углеводы: сахароза,
глюкоза, мальтоза, маннит; факторы роста (тиамин,
никотиновая, пантотеновая, парабензойная кислоты
и др.); стимуляторы роста (железо, цинк, марганец,
медь, молибден, кальций, кобальт, никель, бор и
др.).

3. 28819
3
Биохимические - на сусло агаре при рН 7,2-7,4 до
концентрации 60 -145 млн/см макроконидии
многочисленные, овальные размером 15-25×50-120
мкм; микроконидии округлые или грушевидные,
иногда продолговатые, размер 3-6×2,6-3,5 мкм,
встречается не постоянно.
Иммунохимические - в реакциях РСК и РИГА
титры антител составляет от 1:40 до 1: 1280;
отличается от эпизоотических штаммов слабой
вирулентностью, высокой спорогенностью и
активностью при внутримышечном введении.
Патогенные свойства. Штамм гриба Microsporum
equinum F-0182 КазНИВИ №15 патогенен для
лошадей, кошек, собак, пушных зверей и
мышевидных грызунов.
Иммуногенность. При двукратном
внутримышечном введении названного штамма в
дозе 20×106
макроконидии создает напряженный
иммунитет у привитых лошадей, кошек, собак и
пушных зверей (кроликов) к последующему
заражению микроспории продолжительностью не
менее 12 месяцев.
Безвредность. Штамм гриба Microsporum
equinum F-0182 КазНИВИ №15 безвреден для
лошадей, кошек, собак и пушных зверей (кроликов)
в дозе 20×106
макроконидии при внутримышечном
введении.
Реактогенность. Штамм гриба Microsporum
equinum F-0182 КазНИВИ №15 слабореактогенен
для лошадей, кошек, собак и пушных зверей
(кроликов) при внутримышечном введении, так как
вакцина приготовлена из убитых
(инактивированных) клеток дерматофитов. У
привитых животных спустя 15-25 дней на месте
инъекции развивается небольшой специфически
локализованный поверхностный очажок, который
самопроизвольно излечивается в течение 2-3 недель.
Спорообразование. Максимальный уровень
спорообразования на суслоагаре 60-145 млн/см3
.
Реверсабельность и реактогенность. Штамм
гриба Microsporum equinum F-0182 КазНИВИ №15
отличается от эпизоотических изолятов слабой
вирулентностью, отсутствием заражения при
контакте между животными, высокой активностью
при внутримышечном введении животным.
Стабильность свойств при пассировании.
Основные биологические свойства штамма гриба
Microsporum equinum F-0182 КазНИВИ №15
стабильно сохраняются на протяжении года (при 2-
3-х кратном пассаже в течение года) при пассаже
культуры на питательных средах (срок наблюдения).
Сохраняемость в лиофильно-высушенном
состоянии в присутствии жидкого обезжиренного
молока или 10% сахарозы и 1,5% желатина штамм
гриба Microsporum equinum F-0182 КазНИВИ №15
не снижает активности при температуре 2-10°С в
течении 12 месяцев, в нативном состоянии в течение
6 месяцев, в замороженном при минус 40°С в
течении 6 месяцев, при минус 20°С ниже в течение 2
лет. После растворения из лиофилизированного
состояния физиологическим раствором хлорида
натрия или дистиллированной водой с рН 7,2-7,4
гриб сохраняет биологическую активность при
температуре 26-28°С в течении 5 часов, при 4°С -
3 сут.
Пример. Для приготовления инактивированной
вакцины против микроспории лошадей используют
14-21 дневные культуры штаммов, выращенные в
матрасных колбах на суслоагаре (рН 7,2-7,4) при
температуре 26-28°С в течении 16-18 суток.
Выращенную гребницу культуры в условиях
асептики снимают с поверхности питательной среды
специальными скребками и помещают в стерильные
банки. Грибную массу гомогенизируют в миксерах,
а затем с помощью стерильной воды или
физиологическим раствором полученный гомогенат
ресуспензируют до концентрации макроконидии
20×106
/см3
.
Ресуспензирование проводят в присутствии
антибиотика (пенициллин или стрептомицин) из
расчета 100 ЕД/см гомогената.
К полученной суспензии грибной массы
добавляют равное количество стабилизатора
(рН 7,2-7,4) содержащего в воде 10% сахарозы и
1,5% желатина или жидкое обезжиренное молоко и
все это тщательно перемешивают и разливают в
стерильные флаконы или ампулы.
Вакцину применяют с профилактической и
лечебной целями внутримышечно, двух или
трехкратно в область бедра, сначала в одну
конечность, а через 10-14 суток - в другую. Для
каждого животного используют отдельную
стерильную иглу. Шприцы и иглы стерилизуют
кипячением, место инъекции дезинфицируют 70%
этиловым спиртом.
Приготовленный таким образом гомогенат из
штамма Microsporum equinum F-0182 КазНИВИ
№15 позволяет надежно профилактировать
заболеваемость поголовья лошадей от микроспории
в течение года.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Штамм гриба Microsporum equinum F-0182
КазНИВИ №15, депонированный в лаборатории
генофонда микроорганизмов ТОО «Казахский
научно-исследовательский ветеринарный институт»,
используемый для изготовления инактивированной
вакцины против микроспории лошадей.
Верстка Ж. Жомартбек
Корректор Е. Барч