1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 29270
(51) C12N 1/00 (2006.01)
C12N 1/02 (2006.01)
C12N 1/20 (2006.01)
МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2014/0159.1
(22) 11.02.2014
(45) 15.12.2014, бюл. №12
(72) Тен Виктор Борисович; Султанов Ахметжан
Акиевич; "бутəліп "спен; Аманжол Рафилбек
Аманжол(лы; Туяшев Есен Курмашевич; Нысанов
Ерсаин Салаватович; Тажбаева Даурия Талаповна;
Елеусинова Гульнар Талиповна
(73) Товарищество с ограниченной
ответственностью "Казахский научно-
исследовательский ветеринарный институт"
(56) KZ 16098 А4, 2005
(54) ТРАНСПОРТНАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА
ДЛЯ ПРЕДВАРИТЕЛЬНОГО ВЫРАЩИВАНИЯ
БРУЦЕЛЛ ИЗ КРОВИ БОЛЬНЫХ
БРУЦЕЛЛЕЗОМ ЖИВОТНЫХ
(57) Изобретение относится к области ветеринарной
микробиологии и может быть использовано для
транспортировки крови больных и подозреваемых
на заболевание бруцеллезом животных и
предварительного выращивания бруцелл.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в надежном
предварительном росте бруцелл, полученных из
крови больных бруцеллезом животных, на
транспортной питательной среде.
Транспортная питательная среда для
предварительного выращивания бруцелл из крови
больных бруцеллезом животных, включающая
ферментативный гидролизат инактивированный
массы бруцелл, агар-агар, натрия хлорид, глюкозу,
глицерин, дрожжевой экстракт и L-цистеин, она
дополнительно содержит цитрат натрия, при
следующем соотношении компонентов, мас.%:
агар-агар 1,0-3,5
натрия хлорид 0,5-1,0
глюкоза 0,5-3,0
глицерин 0,5-3,0
дрожжевой экстракт 0,5-3,0
L-цистеин 0,01-0,035
цитрат натрия 3,0-5,0
ферментативный гидролизат
инактивированной бактериальной
массы бруцелл остальное.
(19)KZ(13)A4(11)29270

2. 29270
2
Изобретение относится к области ветеринарной
микробиологии и может быть использовано для
транспортировки крови больных и подозреваемых
на заболевание бруцеллезом животных и
предварительного выращивания бруцелл.
Известна транспортная питательная среда для
предварительного выращивания бруцелл из
патологического материала животных, включающая
ферментативный гидролизат инактивированной
бактериальной массы бруцелл и дополнительно
включает агар-агар, натрия хлорид, глюкозу,
глицерин, дрожжевой экстракт, L-цистеин
[Предварительный патент РК № 16098, кл С12N
1/20 // (С12N 1/20, C12R 1: 01), 2005.].
Недостатком существующей питательной среды
является то, что исследуемая кровь больного
бруцеллезного животного при нанесении на
питательную среду свертывается.
Задачей изобретения является исключение
свертывания крови, полученной на анализ от
больных бруцеллезом животных, и повышение
эффективности выделения культур бруцелл.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в надежном
предварительном росте бруцелл, полученных из
крови больных бруцеллезом животных, на
транспортной питательной среде.
Транспортная питательная среда для
предварительного выращивания бруцелл из крови
больных бруцеллезом животных, включающая
ферментативный гидролизат инактивированный
массы бруцелл, агар-агар, натрия хлорид, глюкозу,
глицерин, дрожжевой экстракт и L-цистеин, она
дополнительно содержит цитрат натрия, при
следующем соотношении компонентов, мас.%:
агар-агар 1,0-3,5
натрия хлорид 0,5-1,0
глюкоза 0,5-3,0
глицерин 0,5-3,0
дрожжевой экстракт 0,5-3,0
L-цистеин 0,01-0,035
цитрат натрия 3,0-5,0
ферментативный гидролизат
инактивированной бактериальной
массы бруцелл остальное.
Для подбора питательной среды для
бактериологической диагностики бруцеллеза, были
апробированы различные процентные соотношения
компонентов.
Пример 1. Транспортную питательную среду для
предварительного выращивания бруцелл из крови
больных бруцеллезом животных используют при
следующем соотношении компонентов:
агар-агар 1,0%
натрия хлорид 0,5%
глюкоза 0,5%
глицерин 0,5%
дрожжевой экстракт 0,5%
L-цистеин 0,01%
цитрат натрия 3,0%
ферментативный гидролизат
инактивированной бактериальной
массы бруцелл остальное.
Пример 2. Транспортную питательную среду для
предварительного выращивания бруцелл из крови
больных бруцеллезом животных используют также,
как и в примере 1, при следующем соотношении
компонентов:
агар-агар 2,0%
натрия хлорид 0,7%
глюкоза 1,0%
глицерин 2,0%
дрожжевой экстракт 2,0%
L-цистеин 0,025%
цитрат натрия 4,0%
ферментативный гидролизат
инактивированной бактериальной
массы бруцелл остальное.
Пример 3. Транспортную питательную среду для
предварительного выращивания бруцелл из крови
больных бруцеллезом животных используют также,
как и в примере 1, при следующем соотношении
компонентов:
агар-агар 3,5%
натрия хлорид 1,0%
глюкоза 3,0%
глицерин 3,0%
дрожжевой экстракт 3,0%
L-цистеин 0,035%
цитрат натрия 5,0%
ферментативный гидролизат
инактивированной бактериальной
массы бруцелл остальное.
Питательную среду для бактериологической
диагностики бруцеллеза готовят следующим
образом.
Пример 4. Берут 20 г/л агар-агара и растворяют в
1 литре ферментативного гидролизата
инактивированной бакмассы бруцелл, затем берут
натрия хлорид 7,0 г/л, глюкозу 10,0 г/л, глицерин
20,0 мл/л, дрожжевой экстракт 20г/л, L-цистеин
250 мг/л, цитрат натрия 40,0 г/л, все компоненты
тщательно перемешивают и автоклавируют при
0,5 атм в течение 20 мин. После чего полученный
раствор фильтруют через плотную ткань и
устанавливают pH 7,0-7,2, далее среду стерилизуют
при 0,7-0,8 атм в течение 45 мин. Готовую
питательную среду разливают в стерильных
условиях в 20 мл флаконы (по 5 мл среды на один
флакон), закрывают резиновыми пробками и
запечатывают алюминиевыми колпачками. Затем
питательную среду для проверки стерильности
помещают на 48 ч в термостат. Дале проводят
искусственное заражение лабораторных животных
вакцинным штаммом В. abortus №19. Для этого 4
морским свинкам вводят 1 млрд бруцеллезную
взвесь (по стандарту мутности) в объеме 1 мл
подкожно в паховую область и через 15 дней
проводят сбор крови из сердца при помощи
одноразовых инъекционных шприцов в объеме 5 мл
и вносят в питательную среду. Далее флаконы со
средой помещают в термостат при 37°С и через
каждые 4 суток в течение 20 дней делают высев на
плотную питательную среду (эритрит-агар
коммерческий). В качестве контроля использовуют
питательный бульон для культивирования

3. 29270
3
микроорганизмов (изготовленный НПО
«Питательные среды», г. Махачкала, РФ).
Результаты проведенных исследований
представлены в таблице 1.
Из таблицы 1 видно, что по истечении 15 дней
после заражения из 4 исследуемых проб крови от
опытных животных при использовании питательной
среды на питательной основе из инактивированной
бактериальной массы бруцелл и контроля было
получено: 2; 3; 3; 2 - положительных результата
соответственно (рост культур бруцелл) после 4 дней
инкубации, 3; 4; 4; 2 - положительных результата
соответственно (рост культур бруцелл) после 8 дней
инкубации, 3; 4; 4; 3 - положительных результата
соответственно (рост культур бруцелл) после 12
дней инкубации, 3; 4; 4; 3 - положительных
результата соответственно (рост культур бруцелл)
после 16 дней инкубации, 4; 4; 4; 4 - положительных
результата соответственно (рост культур бруцелл)
после 20 дней инкубации. Пророста посторонней
микрофлоры не наблюдалось. Следовательно,
предложенная питательная среда в примерах 2 и 3
имеет преимущество при выделении культур
бруцелл из крови искусственно зараженных
лабораторных животных по сравнению с примером
1 и контролем, однако доверительные границы
процентного соотношения в примере 2 наиболее
целесообразнее может быть использовано в
лабораторной практике для бактериологических
исследований.
Предложенная питательная среда позволяет
повысить эффективность выделения гемокультур из
крови больных бруцеллезом животных в два раза
(по сравнению с контролем), что делает более
эффективной и продуктивной бактериологическую
диагностику в целом.
Таблица 1
Результаты выделения культур бруцелл из крови зараженных морских свинок
Предложенная питательная средаКол-во дней
инкубации
Кол-во исследуемых
голов животных (проб
крови)
Пример 1 Пример 2 Пример 3
Контроль
4 4 2 3 3 2
8 4 3 4 4 2
12 4 3 4 4 3
16 4 3 4 4 3
20 4 4 4 4 4
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Транспортная питательная среда для
предварительного выращивания бруцелл из крови
больных бруцеллезом животных, включающая
ферментативный гидролизат инактивированной
массы бруцелл, агар-агар, натрия хлорид, глюкозу,
глицерин, дрожжевой экстракт и L-цистеин,
отличающаяся тем, что она дополнительно
содержит цитрат натрия, при следующем
соотношении компонентов, мас. %:
агар-агар 1,0-3,5
натрия хлорид 0,5-1,0
глюкоза 0,5-3,0
глицерин 0,5-3,0
дрожжевой экстракт 0,5-3,0
L-цистеин 0,01- 0,035
цитрат натрия 3,0-5,0
ферментативный гидролизат
инактивированной бактериальной
массы бруцелл остальное.
Верстка Ж. Жомартбек
Корректор К. Нгметжанова