1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 28923
(51) C12N 7/00 (2006.01)
A61K 39/00 (2006.01)
КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ
МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2013/1344.1
(22) 16.10.2013
(45) 15.09.2014, бюл. №9
(72) Сансызбай Абылай Рысбайулы; Абдураимов
Ергали Орынбасарович; Баракбаев Кайнар
Базаркулович; Булатов Ербол Акенович; Ершебулов
Закир Джапарович; Таранов Дмитрий Сергеевич;
Саметова Жанна Жумабековна; Аманова Жанат
Темирбаевна
(73) Республиканское государственное предприятие
на праве хозяйственного ведения "Научно-
исследовательский институт проблем
биологической безопасности" Комитета науки
Министерства образования и науки Республики
Казахстан
(56) Балышева В.И., Сливко В.В., Жестерев В.И. и
др. Культивирование вируса блютанга в культурах
клеток животных. Доклады Российской академии
сельскохозяйственных наук, 2002, №6, с.46-48
(54) ШТАММ "ХУРОСОН-40/13/4"
IV СЕРОТИП ВИРУСА КАТАРАЛЬНОЙ
ЛИХОРАДКИ ОВЕЦ, ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ
ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И
ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ
(57) Изобретение относится к области ветеринарной
вирусологии, в частности, к аттенуированному
штамму вируса КЛО. Новый аттенуированный
культуральный штамм вируса КЛО получен, путем
пассирования в куриных эмбрионах, далее
адаптированный к культивированию в перевиваемой
линии культуры клеток почки сайги (ПС).
Изобретение может быть использовано для
изготовления вакцины, которое может быть
применено для производства вакцины против
заболевания овец в научно-исследовательских
учреждениях и различных отраслях биологической
промышленности.
Предлагаемый аттенуированный штамм
"Хуросон-40/13/4" 4-го серотипа имеет высокую
инфекционную активность 107,5
ТЦД50/см3
, он
является безвредным и иммуногенным в отношении
восприимчивых животных. При введении его
животным у последних образуется иммунитет к
4-му серотипу вируса.
Штамм адаптирован для культивирования в
перевиваемой культуре клеток почки сайгака (ПС) с
хорошо выраженным цитопатическим эффектом
(разрежение межклеточного вещества, округление
клеток, отделение их от стекла, с последующей
дезагрегацией клеточного монослоя и разрушением
клеточных оболочек), период культивирования
составляет 3 суток, в качестве питательной среды
используется среда Игла-MEM с содержанием 5%
сыворотки крови крупного рогатого скота
(инактивированной при 56°С в течение 30 минут)
при заражающей дозе 0,01-0,02 ТЦД50 на клетку,
рН среды 7,2-7,5.
(19)KZ(13)A4(11)28923

2. 28923
2
Изобретение относится к области ветеринарной
вирусологии, в частности, к аттенуированному
штамму вируса КЛО. Новый аттенуированный
культуральный штамм вируса КЛО получен, путем
пассирования в куриных эмбрионах, далее
адаптированный к культивированию в перевиваемой
линии культуры клеток почки сайги (ПС).
Изобретение может быть использовано для
изготовления вакцины и диагностических наборов.
Уровень техники
Известен 4 серотип вируса катаральной
лихорадки овец (В.И.Балышева, В.В.Сливко,
В.И.Жестерев и др. Культивирование вируса
блютанга в культурах клеток животных. Доклады
Российской академии сельскохозяйственных наук,
2002. №6, 46-48), полученный путем
культивирования вируса на культуре клеток ПСГК-
60 (почки сибирского горного козерога), с
инфекционной активностью 106,5
ТЦД50/см3
.
Иммунитет после первого введения
инактивированной вакцины из этого серотипа
проявляется на 21 сутки в виде образования
вируснейтрализующих антител в титрах 1:16.
Предлагаемый штамм получен путем
пассирования в куриных эмбрионах, далее
адаптированный к культивированию в перевиваемой
линии культуры клеток ПС, относится к семейству
Reoviridae, роду Orbivirus, депонирован 09.10.2013 г.
под номером М-11-13/Д в Коллекции
микроорганизмов РГП НИИПББ КН МОН РК,
отличием от вышеуказанного способа является то
что, полученный аттенуированный штамм
"Хуросон-40/13/4" 4-го серотипа имеет более
высокую инфекционную активность 107,5
ТЦД50/см3
,
а также он является безвредным и иммуногенным в
отношении восприимчивых животных, при
введении его животным у последних образуется
специфические антитела к вирусу КЛО в титре не
менее 1:200 в ИФА.
Аттенуацию вируса КЛО проводили методом
последовательного пассирования в 11-13 сут РКЭ,
проведено 40 последовательных пассажей с
определением инфекционной активности каждого
пассажного уровня и проведением контроля
аттенуации.
Для определения степени аттенуации
исследуемого штамма, проводили
интрацеребральное заражение 1-3 сут мышат. Для
инфицирования использовали 20% гомогенат
куриных эмбрионов. Степень аттенуации вируса,
оценивали с интервалом 5 последовательных
пассажа в куриных эмбрионах. В результате
проведенных работ установлено, что с 35 по 40
пассаж исследуемый штамм не вызывал гибели.
Исследована возможность восстановления
вирулентных свойств аттенуированного штамма при
культивировании в культуре клеток, для этого
эмбриональный материал (20% суспензия)
пропассирован в культуре клеток ПС, проведено 10
последовательных пассажа, с определением
инфекционного титра вируса, при этом на первом
пассаже вирус накапливался в титре 6,25±0,08 lg
ТЦД50/см3
, при дальнейшем пассировании
наблюдается подъем инфекционного титра до
7,25±0,12 lg ТЦД50/см3
.
Далее с целью определения реверсибельности
полученного аттенуированного вируса,
культуральный материал 10 пассажного уровня
пассировали на мышах 1-3 сут возраста и овцах
6-12 мес возраста. Для этого культуральный
материал мышатам вводили интрацеребрально по
0,02 см3
, а овцам внутривенно по 10 см3
. Мышата и
овцы остались живыми без проявления клинических
признаков инфекции в течение 14 сут (срок
наблюдения).
Таким образом, получен аттенуированный вирус,
который не обладал патогенными свойствами при
введении его восприимчивым животным.
Штамм адаптирован для культивирования в
перевиваемой культуре клеток почки сайгака (ПС) с
хорошо выраженным цитопатическим эффектом
(разрежение межклеточного вещества, округление
клеток, отделение их от стекла, с последующей
дезагрегацией клеточного монослоя и разрушением
клеточных оболочек), период культивирования
составляет 3 суток, в качестве питательной среды
используется среда Игла-MEM с содержанием 5%
сыворотки крови крупного рогатого скота
(инактивированной при 56°С в течение 30 минут)
при заражающей дозе 0,01-0,02 ТЦД50 на клетку,
рН среды 7,2-7,5.
С помощью электронно-микроскопических
исследований в культуральных концентрированных
и нативных вируссодержащих препаратах
обнаруживаются вирусные частицы размером
55-70 нм. Вирионы морфологически тождественны
представителям рода Орбивирусов семейства
Реовирусов, имеют типичную икосаэдрическую
форму симметрии и располагаются одиночно или в
виде скоплений.
Антигенные свойства, иммуногенность.
Внутримышечное введение вируса овцам в
исходном виде по 1,0 см3
вызывает образование
вируснейтрализующих антител в организме овец.
Устойчивость. При температуре 6±2°С в
нативном состоянии вирус сохраняется без
существенного снижения инфекционной активности
в течение 30 сут. Лиофилизированный вирус при
минус 20±1°С и ниже сохраняется в течение 5 лет.
Морфологические свойства, маркерные
характеристики, генетические свойства. Маркерной
характеристикой штамма "Хуросон-40/13/4" 4-го
серотипа вируса катаральной лихорадки овец
является V - признак, виремия обнаружение вируса
в крови в высоких титрах, а также ТС - признак,
способность вируса размножаться в культурах
клеток: почки сайгака (ПС) и почки сирийских
хомячков (ВНК-21). Генетические свойства штамма
(стабильность) постоянные и не подвержены
изменениям при пассировании на животных или
культуре клеток.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Штамм «Хуросон-40/13/4» IV серотип вируса
катаральной лихорадки овец, семейства Reoviridae,

3. 28923
3
рода Orbivirus, депонированный в Коллекции
микроорганизмов РГП «НИИПББ» КН МОН РК под
номером М-11-13/Д с инфекционной активностью
7,50 lg ТЦД50/см3
, для приготовления
диагностических и профилактических препаратов.
Верстка Ж. Жомартбек
Корректор Е. Барч