1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 28924
(51) C12N 7/00 (2006.01)
A61K 39/00 (2006.01)
КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ
МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2013/1345.1
(22) 16.10.2013
(45) 15.09.2014, бюл. №9
(72) Сансызбай Абылай Рысбайулы; Абдураимов
Ергали Орынбасарович; Баракбаев Кайнар
Базаркулович; Булатов Ербол Акенович;
Кондибаева Жанат Буркитбаевна; Ершебулов Закир
Джапарович; Таранов Дмитрий Сергеевич;
Саметова Жанна Жумабековна
(73) Республиканское государственное предприятие
на праве хозяйственного ведения "Научно-
исследовательский институт проблем
биологической безопасности" Комитета науки
Министерства образования и науки Республики
Казахстан
(56) RU 20775883 C1, кл. C12N 7/00,1997
(54) ШТАММ "RT/RIBSP-40/13/16"
XVI СЕРОТИП ВИРУСА КАТАРАЛЬНОЙ
ЛИХОРАДКИ ОВЕЦ, ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ
ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И
ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ
(57) Изобретение относится к области ветеринарной
вирусологии, в частности, к аттенуированному
штамму вируса КЛО. Новый аттенуированный
культуральный штамм вируса катаральной
лихорадки овец получен, путем пассирования в
куриных эмбрионах, далее адаптированный к
культивированию в перевиваемой линии культуры
клеток почки африканской зеленной мартышки
(Vero). Изобретение может быть использовано для
изготовления вакцины, которое может быть
применено для производства вакцины против
заболевания овец в научно-исследовательских
учреждениях и различных отраслях биологической
промышленности.
Предлагаемый аттенуированный штамм
"RT/RIBSP-40/13/16" 16-го серотипа имеет высокую
инфекционную активность 107,75
ТЦД50/см3
, он
является безвредным и иммуногенным в отношении
восприимчивых животных. При введении его
животным у последних образуется иммунитет к 16-
му серотипу вируса катаральной лихорадки овец.
Штамм адаптирован для культивирования в
перевиваемой культуре клеток почки африканской
зеленной мартышки (Vero) с хорошо выраженным
цитопатическим эффектом (разрежение
межклеточного вещества, округление клеток,
отделение их от стекла, с последующей
дезагрегацией клеточного монослоя и разрушением
клеточных оболочек), период культивирования
составляет 3-4 суток, в качестве питательной среды
используется среда Игла-MEM с содержанием 5%
сыворотки крови крупного рогатого скота
(инактивированной при 56°С в течение 30 минут)
при заражающей дозе 0,01-0,02 ТЦД50 на клетку,
рН среды 7,2-7,5.
(19)KZ(13)A4(11)28924

2. 28924
2
Изобретение относится к области ветеринарной
вирусологии, в частности, к аттенуированному
штамму вируса КЛО. Новый аттенуированный
культуральный штамм вируса катаральной
лихорадки овец получен, путем пассирования в
куриных эмбрионах, далее адаптированный к
культивированию в перевиваемой линии культуры
клеток почки африканской зеленной мартышки
(Vero). Изобретение может быть применено для
производства вакцины против заболевания овец и
диагностических наборов в научно-
исследовательских учреждениях и различных
отраслях биологической промышленности.
Известен 16 серотип вируса катаральной
лихорадки овец [RU 2077583 C1, Кл C12N 7/00,
1997.], используемый для изготовления
инактивированной вакцины), полученный путем
культивирования вируса на культуре клеток ПСГК
(почки сибирского горного козерога), с
инфекционной активностью 106,5-7,0
ТЦД50/см3
.
Сущность изобретения
Предлагаемый штамм получен путем
пассирования в куриных эмбрионах, далее
адаптированный к культивированию в перевиваемой
линии культуры клеток Vero, относится к семейству
Reoviridae, роду Orbivirus, депонирован 09.10.2013 г.
под номером М-10-13/Д в Коллекции
микроорганизмов РГП НИИПББ КН МОН РК,
отличием от вышеуказанного способа является то
что, полученный аттенуированный штамм
"RT/RIBSP-40/13/16" 16-го серотипа является
безвредным и иммуногенным в отношении
восприимчивых животных, при введении его
животным у последних образуется специфические
антитела к вирусу КЛО в титре не менее 1:200 в
ИФА.
Аттенуацию вируса КЛО проводили методом
последовательного пассирования в 11 -13 сут РКЭ,
проведено 40 последовательных пассажей с
определением инфекционной активности каждого
пассажного уровня и проведением контроля
аттенуации.
Для определения степени аттенуации
исследуемого штамма, проводили
интрацеребральное заражение 1-3 сут мышат. Для
инфицирования использовали 20% гомогенат
куриных эмбрионов. Степень аттенуации вируса,
оценивали с интервалом 5 последовательных
пассажа. В результате проведенных работ
установлено, что с 35 по 40 пассаж исследуемый
штамм не вызывал гибели.
Исследована возможность восстановления
вирулентных свойств аттенуированного штамма при
культивировании в культуре клеток, для этого
эмбриональный материал (20% суспензия)
пропассирован в культуре клеток Vero, проведено
10 последовательных пассажа, с определением
инфекционного титра вируса, при этом на первом
пассаже вирус накапливался в титре 6,75±0,12 lg
ТЦД50/см3
, при дальнейшем пассировании
наблюдается подъем инфекционного титра до
7,75±0,08 lg ТЦД50/см3
.
Далее с целью определения реверсибельности
полученного аттенуированного вируса,
культуральный материал 10 пассажного уровня
пассировали на мышах 1-3 сут возраста и овцах
6-12 мес возраста. Для этого культуральный
материал мышатам вводили интрацеребрально по
0,02 см3
, а овцам внутривенно по 10 см3
. Мышата и
овцы остались живыми без проявления клинических
признаков инфекции в течение 14 сут (срок
наблюдения).
Таким образом, получен аттенуированный вирус,
который не обладал патогенными свойствами при
введении его восприимчивым животным.
Штамм адаптирован для культивирования в
перевиваемой культуре клеток Vero с хорошо
выраженным цитопатическим эффектом
(разрежение межклеточного вещества, округление
клеток, отделение их от стекла, с последующей
дезагрегацией клеточного монослоя и разрушением
клеточных оболочек), период культивирования
составляет 3-4 суток, в качестве питательной среды
используется среда Игла-MEM с содержанием 5%
сыворотки крови крупного рогатого скота
(инактивированной при 56°С в течение 30 минут)
при заражающей дозе 0,01-0,02 ТЦД50 на клетку,
рН среды 7,2-7,5.
Антигенные свойства, иммуногенность.
Внутримышечное введение вируса овцам в
исходном виде по 1,0 см3
вызывает образование
вируснейтрализующих антител в организме овец.
Устойчивость. При температуре 6±2°С в
нативном состоянии вирус сохраняется без
существенного снижения инфекционной активности
в течение 30 сут. Лиофилизированный вирус при
минус 20±1°С и ниже сохраняется в течение 5 лет.
Морфологические свойства, маркерные
характеристики, генетические свойства. Маркерной
характеристикой штамма "RT/RIBSP-40/13/16" 16-го
серотипа вируса катаральной лихорадки овец
является V - признак, виремия обнаружение вируса
в крови в высоких титрах, а также ТС - признак,
способность вируса размножаться в культурах
клеток: почки африканской зеленной мартышки
(Vero) и почки сирийских хомячков (ВНК-21).
Генетические свойства штамма (стабильность)
постоянные и не подвержены изменениям при
пассировании на животных или культуре клеток.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Штамм «RT/RIBSP-40/13/16» XVI серотип
вируса катаральной лихорадки овец, семейства
Reoviridae, рода Orbivirus, депонирован в Коллекции
микроорганизмов РГП «НИИПББ» КН МОН РК под
номером М-10-13/Д с инфекционной активностью
7,75 lg ТЦД50/см3
, для приготовления
диагностических и профилактических препаратов.
Верстка Ж. Жомартбек
Корректор Е. Барч