1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 29844
(51) C12N 1/20 (2006.01)
A61K 39/08 (2006.01)
МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2014/0826.1
(22) 16.06.2014
(45) 15.05.2015, бюл. №5
(72) Сансызбай Абылай Рысбайулы; Орынбаев
Мухит Бармакулы; Султанкулова Куляйсан
Турлыбаевна; Рыстаева Рашида Аусекановна;
Керимбаев Аслан Амангельдиевич; Коспанова
Мадина Нургильдиевна
(73) Республиканское государственное предприятие
на праве хозяйственного ведения "Научно-
исследовательский институт проблем
биологической безопасности" Комитета науки
Министерства образования и науки Республики
Казахстан
(56) RU 2428202 С1, 2011
(54) ШТАММ БАКТЕРИЙ
CLOSTRIDIUM/SAIGAS/2010/ZKO/KZ
СЕМЕЙСТВА CLOSTRIDIACEAE, РОД
CLOSTRIDIUM, ВИД PERFRINGENS, ТИП А,
ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ
МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИХ
СВОЙСТВ И РАЗРАБОТКИ СРЕДСТВ
ПРОФИЛАКТИКИ И ДИАГНОСТИКИ
ИНФЕКЦИОННОЙ АНАЭРОБНОЙ
ЭНТЕРОТОКСЕМИИ
СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ И ДИКИХ
ЖИВОТНЫХ
(57) Получен штамм бактерий
Clostridium/Saigas/2010/ZKO/KZ, семейства
Clostridiaceae, род Clostridium, вид Perfringens, тип
А, предназначенный для изучения молекулярно-
биологических свойств и разработки средств
профилактики и диагностики инфекционной
анаэробной энтеротоксимии сельскохозяйственных
и диких животных.
Изобретение относится к области ветеринарной
микробиологии и представляет собой новый штамм
бактерий Clostridium/Saigas/2010/ZKO/KZ, который
может быть использован для приготовления
вакцины используемой с целью профилактики
инфекционной анаэробной энтеротоксемии
сельскохозяйственных и диких животных, а также
для получения антигена, пригодного как для
получения специфических сывороток, так и для
постановки серологических и иммунологических
реакций. По морфологическим, культуральным и
биохимическим свойствам выделенный штамм
Clostridium отнесен к виду Perfringens. По
токсинопрдуцирующей способности отнесен к типу
А.
Тесты на присутствие бактерий других родов и
грибную контаминацию показали стерильность
штамма в отношении посторонних бактериальных и
грибковых микроорганизмов.
Полученный штамм депонирован в Коллекции
микроорганизмов Республиканского
государственного предприятия «Научно-
исследовательский институт проблем
биологической безопасности» Комитета науки
Министерства образования и науки Республики
Казахстан (РГП НИИПББ КН МОН РК) под
регистрационным номером М-01-14/Д и хранится в
виде бактериальной суспензии в 25%-ном
глицерине в мясо-пептонном бульоне при минус
70°С в криопробирках. Жизнеспособность штамма в
стабильном состоянии поддерживается путем
освежения на питательных средах для
культивирования клостридий ежегодно.
(19)KZ(13)A4(11)29844

2. 29844
2
Изобретение относится к области ветеринарной
микробиологии и представляет собой новый штамм
бактерий Clostridium/Saigas/2010/ZKO/KZ, который
может быть использован для изучения
биологических и молекулярно-генетических
свойств, а также разработки современных средств
экспресс-диагностики для выявления инфекционной
анаэробной энтеротоксемии сельскохозяйственных
и диких животных с использованием генетических и
серологических методов.
Известен штамм №28 Clostridium perfringens тип
А из Всероссийской Государственной коллекции
штаммов микроорганизмов используемых, в
ветеринарии и животноводстве при Федеральном
государственном бюджетном учреждении
«Всероссийский государственный Центр качества и
стандартизации лекарственных средств для
животных и кормов», г.Москва (раздел - «перечень
штаммов бактерий, имеющихся в коллекции
штаммов микроорганизмов»; порядковый № - 97;
нозологическая принадлежность штамма -
Clostridium perfringens тип А; название и номер
штамма - 28; автор штамма (Ф.И.О., страна и год
выделения) - США; название учреждения,
представившего штамм в коллекцию - Польша в
1952г.; условия хранения штамма - в
лиофилизированном виде при 4-8°С; периодичность
проверки инфекционной активности штамма - 1 раз
в 3 года). Штамм №28 Clostridium perfringens тип А
используется при производстве ассоциированной
вакцины против анаэробной энтеротоксемии и
эшерихиозной диареи телят (Патент - RU 2428202
С1, патентообладатель-Федеральное
государственное учреждение "Федеральный Центр
токсикологической и радиационной безопасности
животных", г. Казань, авторы - Спиридонов Г.Н.,
Иванов А.А., Макаев Х.Н. и др.).
Недостаток штамма 28 Clostridium perfringens
тип А, выделенного в 1952 году в Соединенных
Штатах Америки состоит в том, что штаммы, по
истечении времени меняют свои культуральные и
биологические свойства. К тому же необходимо
отметить что бактериальные штаммы,
циркулирующие на территории США, отличаются
от штаммов существующих на территории
Республики Казахстан.
Приведенный выше аналог является наиболее
близким предлагаемому нами изобретению по
совокупности существенных признаков и признан в
качестве прототипа.
Целью настоящего изобретения является
получение нового казахстанского штамма
возбудителя инфекционной анаэробной
энтеротоксемии сайгаков, предназначенного для
изучения молекулярно-генетических и
биологических свойств штамма и разработки
современных средств профилактики и экспресс
диагностики данного заболевания.
Сущность изобретения состоит в том, что в
результате бактериологических исследований в 2010
году из патологического материала от сайгаков,
отобранных во время эпизоотий в поселке Борсы,
Жанибекского района, Западно-Казахстанской
области выделена бактериальная культура
Clostridium perfringens. Штамм
Clostridium/Saigas/2010/ZKO/KZ обладает макро- и
микроморфологическими, культуральными,
тинкториальными и биохимическими
характеристиками, позволяющими использовать
этот бактериальный штамм для изучения
молекулярно-генетических свойств методом
полимеразно-цепной реакции и приготовления
антигена, применяемого в постановке
серологических реакций для выявления возбудителя
инфекционной анаэробной энтеротоксемии
животных.
К моменту паспортизации изучены
культурально-морфологические, тинкториальные,
биохимические и сахаролитические свойства
штамма Pasteurella/Saigas/2010/ZKO/KZ.
Морфология. Clostridium perfringens
представляет собой толстые, неподвижные палочки
длиной 4-8, шириной 1-1,5 мкм со слегка
закругленными обрубленными концами. В молодых
культурах окрашивается по Граму положительно, в
организме животных образует капсулу. Споры
овальные, расположены в центре или
субтерминально, появляются при длительном
культивировании в безуглеводной среде с щелочной
реакцией.
Культуральные свойства. Бактериальная
культура Clostridium perfringens в мясо-пептонно-
печеночном бульоне образует равномерное
помутнение с сильным газообразованием, при
котором выделяющиеся пузырьки газа
скапливаются на поверхности среды в виде пены.
На кровяном агаре с 1% глюкозы растет в виде
выпуклых колоний с ровными или извитыми краями
и гладкой поверхностью с двойной зоной альфа и
бета гемолиза. В мазках из культур имеет вид
крупных грамотрицательных палочек.
Биохимические свойства. Штамм
Clostridium/Saigas/2010/ZKO/KZ лизирует
эритроциты, восстанавливает нитраты до нитритов,
редуцирует сульфиты, в молоке образует
характерный творожистый сгусток с отделением
прозрачной сыворотки, в глубине сахарного агара
формирует колонии в виде чечевицы, опрокинутого
аэропланчика и двухтрехрогих образований.
Сахаролитические свойства. Штамм
Clostridium/Saigas/2010/ZKO/KZ сбраживает
сахарозу, глюкозу, галактозу и лактозу с
образованием кислоты и газа, не ферментирует
инулин, дульцит, маннит и салицин.
Токсинопрдуцирующая способность.
Постановкой ПЦР с использованием праймеров
специфичных к гену сра альфа-токсина, гену cpb
бета-токсина, гену сре епсилон-токсина, гену cpi
йота-токсина было установлено, что выделенный
штамм продуцирует только альфа-токсин. По
данным Uzal F.A. и др. (2010) только альфа-токсин
продуцируют Clostridium perfringens типа A [Uzal
F.A., Vidal J.E., McClane В.А., and Gurjar A.A.
Clostridium Perfringens Toxins Involved in Mammalian
Veterinary Diseases // The Open Toxinology Journal. -
2010. - 3. - 24-42]. На основании полученных данных

3. 29844
3
выделенная культура была классифицирована как
Clostridium perfringens тип А.
Предлагаемое изобретение включает штамм,
совокупность существенных признаков которого
обеспечивает получение следующих технических
результатов:
1) при микроскопировании мазков-отпечатков,
окрашенных, по Граму бактериальные клетки
проявляются в виде толстых палочек со слегка
закругленными обрубленными концами
окруженные капсулой, в бульонных и агаровых
культурах капсулы отсутствуют;
2) контроль контаминации: штамм не
контаминирован посторонними бактериями и
грибами;
3) способ хранения: в виде бактериальной
суспензии в 25%-ном глицерине в мясо- пептонном
бульоне, разлитой в криопробирки, которые
замораживают при температуре минус 70°С.
Штамм Clostridium/Saigas/20l0/ZKO/KZ
резистентен к неомицину.
Выделенный штамм
Clostridium/Saigas/2010/ZKO/KZ депонирован и
хранится в Депозитарии возбудителей особо
опасных инфекций Республиканского
государственного предприятия «Научно-
исследовательский институт проблем
биологической безопасности» Комитета науки
Министерства образования и науки Республики
Казахстан с регистрационным номером М-01-14/Д.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Штамм Clostridium/Saigas/2010/ZKO/KZ,
семейства семейства Clostridiaceae, род Clostridium,
вид Peifringens, тип А, депонирован в Депозитарии
возбудителей особо опасных инфекций РГП
«НИИПББ» КН МОН РК под номером М-01-14/Д,
предназначенный для изучения молекулярно-
биологических свойств и разработки средств
профилактики и диагностики инфекционной
анаэробной энтеротоксемии сельскохозяйственных
и диких животных
Верстка Р. Талькенов
Корректор К. Сакалова