Tugas presentasi mata kuliah Bioteknologi. Disadur dari artikel ilmiah dengan judul serupa, ditulis oleh Nurminha, dkk.

1. KarakterisasiAplikasi
Antibodi Monoklonal
untuk DeteksiVirus
Dengue

2.  Isolasi virus merupakan gold standar untuk menegakkan diagnosis
pada infeksi virus Dengue menggunakan kultur sel.
 Kultur sel yang banyak digunakan adalah:
 sel AP/61 (Ae.pseudoscutellaris)
 sel C6/36 (Ae.albopictus), dan
 TRA-284 (Toxorrhynchites
 Hasil kultur biasanya diidentifikasi dengan menggunakan metode
imunofluoresen:
 DFA (Direct Immunofluorescent Assay), atau
 IFA (Indirect Immunofluorescent Assay)
atau metode imunositokimia (SBPC dan mikroskop cahaya).

3. Pendahuluan
 Metode imunositokimia dapat digunakan untuk mendeteksi virus
Dengue.
 Metode imunositokimia yang kini tersedia secara komersial
adalah Streptavidin Biotin PeroksidaseComplex (SBPC).
 Pemeriksaan sediaan imunositokimia dapat dilakukan hanya
dengan mikroskop cahaya.
 Diperlukan antibodi monoklonal spesifik terhadap virus Dengue
dalam deteksi infeksi virus Dengue mengunakan metode
imunositokimia SBPC.
 Tim Dengue UGM telah berhasil memproduksi sel hibrid penghasil
antibodi monoklonal WDSSB5.

4. Tujuan
Penelitian
 Melakukan karakterisasi dan mengaplikasikan antibodi
monoklonal WDSSB5 sebagai antibodi primer untuk mendeteksi
virus Dengue dari serum pasien yang (positif mengandung virus
Dengue).
 Diisolasi pada sel C6/36.
 Digunakan metode imunositokimia SBPC.

5. Mekanisme
Dasar Produksi
Antibodi
Monoklonal

6. Metode
Penelitian
 Sampel diambil dengan teknik purposive sampling yaitu sebanyak
29 pasien yang positif mengandung virus Dengue.
 Serum sampel diinokulasikan pada sel C6/36 dan diinkubasi pada
suhu 29°C-30°C tanpaCO2 selama 5-11 hari.
 Dibuat kontrol positif (strain virus Dengue berasal dari strain H-87
(prototipe), diinokulasikan pada sel C6/36 dan diinkubasi pada
suhu 29°C-30°C tanpaCO2 selama 1-4 hari), dan
 Kontrol negatif (sel C6/36 yang tidak diinfeksi virus Dengue
diperlakukan sama seperti sampel).

7. Hasil
 Dilakukan karakterisasi dan uji sensitivitas spesifitas pada antibodi
monoklonalWDSSB5 sebelum diujikan ke serum sampel dari
pasien.
 Hasil karakterisasi antibodi monoklonalWDSSB5 dengan metode
antigen mediated ELISA didapatkan bahwa antibodi monoklonal
WDSSB5 termasuk klas IgG dan subklas IgG1.
 Pada pemeriksaan mikroskopis sediaan imunositokimia SBPC
menggunakan antibodi primer WDSSB5 berhasil mendeteksi
antigen Dengue-3 pada sediaan sel C6/36 reaksi positif yang
ditunjukkan oleh warna coklat pada sitoplasma sel.

8. Antibodimonoklonal
WDSSB5dapat
diaplikasikansebagai
antibodiprimeruntuk
mendeteksi antigen
Dengue3padaselC6/36
denganmetode
imunositokimiaSBPC.
Kadarterendah2,2μg/μl.
Mendeteksi
infeksivirusDengue3
denganpositifrate100%.

9. Hasilujisensitivitasdan
spesifisitasantibodi
monoklonalWDSSB5pada
pemeriksaanmikroskopis
imunositokimiaSBPC.
AntibodiprimerWDSSB5
2,2μg/μlmampu
mendeteksi virusDengue1,
2,3,4padaselC6/36mulai
masainkubasi1hari.

10. Hasil
 Selanjutnya antibodi monoklonalWDSSB5 diaplikasikan sebagai
antibodi primer untuk mendeteksi antigen Dengue pada sediaan
sel C6/36 yang berasal dari serum pasien yang positif mengandung
virus Dengue.
 Diinokulasikan pada sel C6/36 dengan metode imunositokimia
SBPC.
 Hasil pemeriksaan mikroskopi didapatkan reaksi positif terlihat
warna coklat pada sitoplasma sel C6/36 kontrol positif serta
sitoplasma sel C6/36 yang terinfeksi virus Dengue yang berasal
dari serum pasien.
 Reaksi negatif terlihat warna biru pada kontrol negatif dan pada
sitoplasma sel C6/36 yang diinfeksi virus Dengue yang tidak diberi
antibodi primer saat pelaksanaan uji imunositokimia.

11. Positifrate-nyaberbeda-
bedatergantungdari
konsentrasivirusDengue
danwaktuinkubasisel
C6/36.
Dari29serumpasienyang
diinokulasikanpadasel
C6/36didapatkanhasil
96,5%positifyaitu28positif
dan1negatif.

12. Terima Kasih