Dokumen tersebut membahas tentang pemeriksaan ANA dengan metode imunofluoresens indirek. Metode ini digunakan untuk mendeteksi berbagai jenis antibodi antinuklear yang ada dalam serum pasien dengan pola fluoresensi nukleus berupa homogen, perifer, bercak atau nukleolar. Teknik TITERPLANE dari EUROIMMUN digunakan untuk standardisasi pemeriksaan ini dengan menggunakan substrat HEp-20-10 dan hati primata serta dil

1. 1
Tutor Imunologi
Pemeriksaan ANA
dengan
Metode Imunofluoresens
Indirek
Lulut Kusumawati – Betty A Tambunan

2. 2
PENDAHULUAN
Systemic Lupus Erythematosus atau SLE :
 Penyakit autoimun sistemik kronis
 Pembentukan berbagai antibodi yang
membentuk kompleks imun
 Inflamasi pada berbagai organ

3. 3
Gejala klinis SLE
Kulit Ginjal
Kardiopulmonal Limfadenopati Gastrointestinal
Otot-tulang Neuropsikiatri

4. 4
Diagnosis SLE
Klinis Laboratorium
Kriteria
Hematologi
ACR
Imunologi

5. 5
• Autoantibodi spesifik terhadap
asam nukleat dan nukleoprotein
• Antibodi yang sering ditemukan
dalam serum dan jaringan
penderita SLE
• Spesifik terhadap antigen
determinannya
ANA

6. 6
Pemeriksaan ANA
Pemeriksaan skrining
Sensitivitas 95%.
Spesifitas 90%
Beberapa metode : ELISA, IFA , imunobloting

7. 7
Pemeriksaan ANA dengan Metode
Imunofluoresens Indirek
Mendeteksi berbagai macam antigen
nukleus, termasuk DNA, RNA dan protein

8. 8
Pemeriksaan ANA dengan Metode
Imunofluoresens Indirek
4 tipe pola fluoresens :
Homogen • Inti sel berfluoresens homogen
• Inti sel berfluoresensi,
sebagian besar pada daerah
Perifer atau melingkar tepi inti.
• Inti sel tidak berfluoresens
secara rata dan nukleoli
Speckled atau bercak
tidak tercat.
• Nukleoli dapat homogen
atau tidak teratur.
Nukleolar

9. 9
Pemeriksaan ANA dengan Metode
Imunofluoresens Indirek

10. 10
EUROIMMUN

11. Prinsip Pemeriksaan 11
EUROIMMUN
 Dengan metode imunofluoresens indirek
 Antibodi antinuklear berikatan dengan antigen
(pada sel HEp-20-10 dan hati primata)
membentuk kompleks Ag-Ab
dideteksi menggunakan Ig berlabel fluoresens dan
diperiksa dengan mikroskop fluoresens.

12. 12
Bahan dan Alat
• Slide BIOCHIPS
• Larutan konjugat , volume 1,5 ml.
• Kontrol positif, volume 0,25 ml.
• Kontrol negatif, volume 0,1 ml.
• Garam untuk PBS, pH 7,2
• Tween 20, volume 2 ml.
• Embedding medium, volume 3 ml.
• Cover glass

13. 13
Peralatan lain
 Reagent tray
 Moist Chamber
 Pipet otomatis 1000 µl
 Pipet otomatis variabel 5-10 µl
 Tip
 Bak perendam berisi larutan PBS-Tween.

14. 14
Sampel Pemeriksaan
 Serum atau plasma EDTA, heparin atau
sitras.
 Stabil pada penyimpanan 2-80C selama 14
hari.
 Sampel yang sudah diencerkan harus
dikerjakan pada hari yang sama.

15. 15
Persiapan Pemeriksaan
 Slide BIOCHIPs : membuka pelindung slide inkubasi
pada suhu ruang (15 menit)
 Meletakkan larutan konjugat, kontrol positif, kontrol
negatif dan sampel pada suhu ruangan (20-260C),
dicampur sampai homogen.
 PBS-Tween. 1 bungkus garam PBS + 1 liter aqua
destilata + 2 ml Tween 20.
 Mengencerkan larutan kontrol dengan PBS-Tweeen.
 Mengencerkan serum sampel dengan PBS-Tween
dengan perbandingan 1:100.

16. 16
Tahap Pemeriksaan
EUROIMMUN - Teknik TITERPLANE
1. Prepare 6. Pipette
2. Dilute 7. Incubate
3. Pipette 8. Wash
4. Incubate 9. Embed
5. Wash 10.Evaluate

17. 17
Tahap Pemeriksaan
EUROIMMUN - Teknik TITERPLANE
PREPARE
 Mengecek reagent tray dan mempersiapkan slide
BIOCHIPs.
DILUTE
 Mengencerkan serum sampel sesuai dengan prosedur
PIPETTE
 Meneteskan 25 µl sampel pada reagent tray, jangan sampai
terbentuk gelembung udara.

18. 18
Tahap Pemeriksaan
EUROIMMUN - Teknik TITERPLANE
INCUBATE
 Meletakkan slide BIOCHIPs pada reagent tray untuk
memulai reaksi dan inkubasi selama 30 menit pada suhu
ruangan (18-250C) dalam moist chamber.
WASH
 Membilas slide BIOCHIP dengan PBS-Tween selama 1
detik, kemudian merendam slide dalam larutan PBS-Tween
selama 5 menit. Goyang-goyangkan slide beberapa kali dan
mengeringkan slide.

19. 19
Tahap Pemeriksaan
EUROIMMUN - Teknik TITERPLANE
PIPETTE
 Meneteskan 20 µl larutan konjugat pada reagent tray yang
bersih, jangan sampai terbentuk gelembung udara.
INCUBATE
 Meletakkan slide BIOCHIPs pada reagent tray untuk
memulai reaksi dan inkubasi selama 30 menit pada suhu
ruangan (18-250C) dalam moist chamber.

20. Tahap Pemeriksaan EUROIMMUN - 20
Teknik TITERPLANE
WASH
 Membilas slide BIOCHIP dengan PBS-Tween selama 1
detik, kemudian merendam slide dalam larutan PBS-Tween
selaa 5 menit. Goyang-goyangkan slide beberapa kali dan
mengeringkan slide.
EMBED
 Meneteskan 10 µl embedding medium pada cover glass dan
menempatkan slide BIOCHIP pada cover glass
EVALUATE
 Membaca dengan mikroskop fluoresens dengan
pembesaran 200x dan 450x

21. 21
Hasil Pemeriksaan
 Pemeriksaan dengan mikroskop fluoresens
dilakukan dengan segera.
 Lapangan pandang pemeriksaan harus
dicari dengan tepat dimana sel terdistribusi
dengan rata dan berfluoresensi dengan
rata.

22. 22
Hasil Pemeriksaan
Homogen Perifer

23. 23
EUROIMMUN
Speckled/bercak Nukleolar

24. 24

25. 25
PENDAHULUAN
Gejala klinis bervariasi :
 Kulit : makolupapular, “butterfly Rash”, purpura, urtikaria.
 Ginjal : glomerulonefritis akut / kronis, gagal ginjal.
 Limpadenopati perifer dan aksila, splenomegali.
 Kelainan kardiopulmonar : persisten takikardi, perdarahan
alveoli akut.
 Kelainan gastrointestinal : perforasi pada saluran cerna.
 Kelainan pada otot dan tulang : poliartritis, osteonekrosis.
 Kelainan neuropsikiatri : penurunan daya ingat, mania, bahkan
sampai terjadi shcizoprenia.
 Kelainan pada saat kehamilan.

26. 26
Pemeriksaan ANA dengan Metode
Imunofluoresens Indirek
 Pola fluoresensi nukleus menunjukkan jenis antibodi yang terdapat
dalam serum pasien, dan dikenal adanya empat pola dasar.
 Pewarnaan homogen atau difus, biasanya mencerminkan antibodi
terhadap kromatin, histon dan DNA rantai ganda.
 Pola pewarnaan melingkar atau perifer, paling sering menunjukkan
adanya antibodi terhadap DNA rantai ganda.
 Pola bercak, adalah pola yang paling umum dan menunjukkan adanya
bercak yang berukuran seragam atau berbeda-beda. Pola ini
menggambarkan adanya antibodi terhadap unsur nukleus non-DNA,
misalnya antibodi terhadap histon dan ribonukleoprotein. Contohnya
antigen SS-A dan SS-B.
 Pola nukleolar, menggambarkan adanya sedikit bintik-bintik fluoresensi
yang terputus di dalam nukleus yang memperlihatkan antibodi terhadap
RNA nukleolus. Pola ini paling sering dilaporkan terhadap para pasien
sklerosis sistemik.

27. 27
EUROIMMUN - Prinsip pemeriksaan :
 Substrat yang terdiri dari kombinasi HEp-20-10 dan hati
primata diinkubasi dengan serum penderita yang telah
diencerkan. Jika reaksi positif, antibodi spesifik kelas IgA,
IgG dan IgM akan berikatan dengan antigen. Selanjutnya
antibodi yang terikat diwarnai dengan antibodi anti-human
yang dilabel fluoresens dan dilihat dengan mikroskop
fluoresens.

28. 28
Bahan dan Alat
• Slide BIOCHIPS, terdiri dari 5 x 2 BIOCHIPS yang
dilapisi HEp-10-20 dan hati primata.
• Larutan konjugat yang berisi Fluorescein-labelled anti
human IgG dari kambing, volume 1,5 ml.
• Kontrol positif, berisi autoantibodi antinuklear (ANA)
dari manusia, volume 0,25 ml.
• Kontrol negatif, berisi autoantibodi negatif dari
manusia, volume 0,1 ml.
• Garam untuk PBS, pH 7,2
• Tween 20, volume 2 ml.
• Embedding medium, volume 3 ml.
• Cover glass

29. 29
Persiapan Pemeriksaan
 Mengencerkan larutan kontrol dengan PBS-Tweeen.
Larutan kontrol tahan selama 6 bulan pada suhu
penyimpanan 2-80C
 Mengencerkan serum sampel dengan PBS-Tween
dengan perbandingan 1:100. Caranya menambahkan 10
µl serum dengan 990 µl PBS-Tween, kemudian dicampur
dengan vortex selama 4 detik.
 PBS-Tween. Melarutkan satu bungkus garam PBS
dengan 1 liter aqua destilata, ditambah 2 ml Tween 20.
Larutan PBS-Tween yang sudah jadi dapat disimpan
selama 1 minggu pada suhu 2-80C, dan jika tampak
berkabut atau terkontaminasi larutan harus dibuang.

30. 30
EUROIMMUN
Tahap Pemeriksaan
EUROIMMUN mengembangkan teknik TITERPLANE untuk menstandardisasi uji imunologi ini.
 Meneteskan 25 µl sampel pada reagent tray, jangan sampai terbentuk gelembung udara.
 Meletakkan slide BIOCHIP pada reagent tray untuk memulai reaksi.
 Inkubasi slide selama 30 menit pada suhu ruangan (18-250C) dalam moist chamber.
 Membilas slide BIOCHIP dengan PBS-Tween selama 1 detik, kemudian merendam slide dalam
larutan PBS-Tween selama 5 menit. Menggoyang-goyangkan slide beberapa kali pada awal,
pertengahan dan akhir perendaman. Mengeringkan slide dengan cara meletakkan slide pada
posisi miring.
 Meneteskan 20 µl larutan konjugat pada reagent tray yang bersih, jangan sampai terbentuk
gelembung udara.
 Meletakkan slide BIOCHIP pada reagent tray untuk memulai reaksi.
 Inkubasi selama 30 menit pada suhu ruangan (18-250C) dalam moist chamber.
 Membilas slide BIOCHIP dengan PBS-Tween selama 1 detik, kemudian merendam slide dalam
larutan PBS-Tween selama 5 menit. Menggoyang-goyangkan slide beberapa kali pada awal,
pertengahan dan akhir perendaman.
 Mengeluarkan slide BIOCHIP dari PBS-Tween dan keringkan.
 Meneteskan 10 µl embedding medium pada cover glass dan menempatkan slide BIOCHIP pada
cover glass
 Membaca dengan mikroskop fluorosens dengan pembesaran 200x dan 450x.

31. 1. Ruam malar
2. Ruam discoid Kriteria 31
3. Fotosensitivitas
4. Ulkus mulut ACR
5. Artritis
6. Serositis : a. Pleuritis
b. Pericarditis
7. Gangguan ginjal : a. Proteinuria > 0,5 gr/24 jam atau + 3 persisten
b. Adanya cast seluler
8. Gangguan neurologi : a. Kejang atau
b. Psikosis
9. Gangguan hematologi : a. Anemia hemolitik
b. Leukopeni < 4.000/mm3 pada 2 kali pemeriksaan
c. Limfopeni < 1.500/mm3 pada 2 kali pemeriksaan
d. Trombopeni < 100.000/mm3
10. Gangguan imunologi :
a. Peningkatan kadar anti-dsDNA atau
b. Antibodi anti-Sm
c. Antibodi antifosfolipid positif berdasar pada :
1. Peningkatan kadar IgG atau IgM antibodi antifosfolipid
2. Lupus koagulan positif dengan metode standar yang dianjurkan
3. Positif palsu untuk sifilis ada selama 6 bulan
11. Peningkatan antibodi antinuclear

32. 32
AUTOIMMUNE DISEASES
Connective Tissue Diseases (CTD)
1. Rheumatoid Arthritis
2. Systemic Lupus Erythematosus
3. Antiphospholipid Antibody Syndrome
4. Raynaud Phenomenon
5. Systemic Sclerosis ( Scleroderma )
6. Idiopathic Inflammatory Myopathies
(Polymyositis & Dermatomyositis)
7. Sjögren Syndrome
8. Wegner Granulomatosis

33. Frequency (%) of autoantibodies in rheumatic diseases 33
RA SLE SjS DS LS PD WG
ANA 30-60 95-100 95 80-95 80-95 80-95 0-15
Anti-native DNA 0-5 60 0 0 0 0 0
Rheumatoid Fact 80 20 75 30 30 33 50
Anti-Sm 0 10-25 0 0 0 0 0
Anti-SS-A 0-5 15-20 65 0 0 0 0
Anti-SS-B 0-2 5-20 65 0 0 0 0
Anti SCL-70 0 0 0 33 20 0 0
Anti centromere 0 0 0 1 50 0 0
Anti Jo-1 0 0 0 0 0 20-30 0
ANCA 0 0-1 0 0 0 0 93-96
RA = Rheumatoid arthritis SLE = Systemic lupus erythematosus
SjS = Sjögren’s syndrome DS = Diffuse scleroderma
LS = Limited scleroderma (CREST syndrome )
PD = Polymyositis / dermatomyositis WG = Wegener’s granulomatosis

34. 34

35. 35

36. 36
Kriteria Laboratorium
Hematologi
 LE sel positif
 Adanya gangguan hematologi :
 Anemia hemolitik
 Leukopeni < 4.000/mm3 pada 2 kali pemeriksaan
 Limfopeni < 1.500/mm3 pada 2 kali pemeriksaan
 Trombopeni < 100.000/mm3

37. 37
Anti dsDNA
 Antibodies to dsDNA react with epitopes which are situated
in the deoxyribophosphat framework of the DNA (outer
region
 Antibodies to dsDNA are found exclusively in cases of
systemic lupus erythematosus
 Because of the correlation between antibody concentration
and disease activity, measurement of antibody titre
provides a suitable means of monitoring therapy

38. 38
Anti Smith
Anti-Sm are highly specific for a diagnosis of SLE (>99%),
but only about 25% of SLE patients have this antibodies
Anti-Sm are not strongly associated with specific clinical
features of SLE, but might appear with disease evolution
Titers can fluctuate with disease activity & treatment, but
serial monitoring does not effectively predict relaps
Immunodiffusion (ID) has been the standard technique for
determination of anti-Sm

39. 39
Anti RNP
 Anti-nRNP are detected in 100% of patients with MCTD &
approximately 30% of patients with SLE
 The presence of anti-nRNP is usually associated with
sclerodactily, Raynaud’s phenomenon, esophageal
dysmotility, pulmonary dysfunction, arthritis, myositis, & low
incidence of renal disease

40. 40
Anti Ro/SS-A dan Anti La/SS-B
Anti-Ro (SS-A) are present in about 50% of patients with
Sjogren’s syndrome & 30% of patients with SLE, associated
with subacute cutaneous LE & with congenital heart block
The incidence of anti-La in SLE & Sjogren’s syndrome is
approximately half that of anti-Ro

41. 41
Anti Ro/SS-A dan Anti La/SS-B
Anti-Ro & anti-La testing may help to confirm the diagnosis
of Sjogren’s syndrome. Neither is specific for SLE, but both
are very useful when anti-dsDNA is absent
Titers of anti-Ro & anti-La increase more slowly than anti-
dsDNA in relapse & quantitative reporting is unlikely to be
useful
The EIA now has become the most widely used method to
detect anti-Ro & anti-La

42. 42
Anti Jo 1
Anti-Jo-1 are directed againts the enzyme histidyl tRNA
synthetase
Anti-Jo-1 are detected in 30% of patients with polymyositis
or dermatomyositis
The presence of Anti-Jo-1 is often associated with
pulmonary involvement (pulmonary fibrosis)

43. 43
Anti Scl 70
 Anti-Scl-70 are a specific marker for scleroderma, because
these antibodies occur rarely in patient with other CTD
 Anti-Scl-70 are found in 22-40% of patients with scleroderma
 Its presence is correlated with diffuse cutaneous disease,
pulmonary fibrosis, cardiac involvement & longer disease
duration

44. 44
BIOCHIPs SLIDE
BIOCHIP Technology and Mosaics.
 BIOCHIP Technology: cover glasses coated with biological
substrates are cut into millimetre-sized fragments
(BIOCHIPs) on a machine. This makes it possible to obtain
ten or more first-class preparations of homogeneous quality
per tissue section, in the case of cultured cell substrates
even several thousands.
 BIOCHIP Mosaics™: using several BIOCHIPs coated with
different substrates side by side on one and the same
reaction field, antibodies against various organs or infectious
agents can be investigated simultaneously. Detailed
antibody profiles can thus be established with comparatively
little effort, allowing the reciprocal determination of the
results on different substrates.

45. 45
BIOCHIPs SLIDE

46. 46
FITC

47. 47
Primate Liver – Hep-2
 HEp-2 cells contain human antigens, while frozen
sections can generally only be produced from
tissue of animal origin
 Earlier, frozen sections of primate liver were
considered to be the standard substrate for the
identification of autoantibodies against cell nuclei

48. 48
Primate Liver
 Negative results can be more securely identified using liver
tissue. The cell nuclei are unquestionably free of
fluorescence, where as a green shimmer can often still be
seen in HEp-2 cells
 Antibodies against liver-specific antigens can be identified at
the same time
 Primate liver provides a first-class substrate for the
identification of antibodies against granulocyte cytoplasm
(cANCA, pANCA) and against endomyslum, with the result
that valuable additional information can often be obtained
concerning other related areas of diagnostics

49. 49
Hep 2 cell
 Corresponds more closely to the specificity of the human
antibodies being tested
 Cells can be propagated in definitely by cell culture with the
result that the substrate can be more easily standardised
 Hep 2 cell have larger and more impressive cell nuclel in
which the various cell nucleus antibodies can be more easily
differentiated by means of their fluorescence pattern
 Cells display a much higher proportion of mitoses than does
liver tissue.This allows identification of antibodies against
mitosis-specific structures and a more secure diagnosis of
antibodies against centromere

50. 50
Hep-20-10
 Compared to standard HEp-2 cells, HEp-20-10 cells
demonstrate 10-fold more mitotic cells. Antibodies
against mitotic-specific structures (centromeres, spindle
fibers, midbody, centrioles, NOR) can be more easily
identified than with conventional preparations.
 The cell line HEp-20-10 offers the full antigen spectrum
for cell nuclei antibody diagnostics.
 The BIOCHIP with HEp-20-10 can be supplemented
with additional substrates, for example, primate liver as
well as rat kidney and rat stomach

51. 51
Mikroskop Fluorescen

52. 52

53. Flow Chart for Clinical Antinuclear Antibody Testing 53
Clinician suspects LE or other rheumatic condition. ANA test
Table 2 is not
Yes No
indicated
Perform ANA test
Test positive Test negative No further autoantibody testing is
indicated. Follow patient clinically &
How should a (+) result be interpreted ? consider repeat test if indicated
clinically
Does the patient have one of the conditions in Table 2 ?
Is further testing indicated ? Further testing for other autoAb is driven by specific clinical
findings
Susp. LE but SLE has Susp. Susp. polymyositis Susp. Susp.
the diagnosis been Sjogren’s or dermatomyositis scleroderma drug
needs to be diagnosed syndrome or has established or has LE
confirmed this diagnosis established
Disease this Susp.
Information activity anti- diagnosis MCTD
anti- regarding needs to Ro/SS-A
dsDNA & anti- No further
prognosis is be & anti- anti-
anti-Sm Jo-1 testing is
desired assessed La/SS-B anti-Scl-70 RNP
serially indicated
anti-dsDNA Anti-Ro/SS-A
Correlate with clinical findings
Kavanaugh (2000). Arch Pathol Lab Med 124, 71-81

54. 54
Beda ANA-ELISA dan ANA-IFA
ANA IFA ANAELISA
• Dapat menentukan jenis • Bersifat kualitatif
autoantibodinya • Objektif, meminimalkan
• Keterbatasan : subyektif, risiko human error, kurang
memerlukan tenaga membutuhkan tenaga
terampil dengan risiko trampil dan ketelitian peme-
human error yang tinggi. riksa, sebab semua
prosedur dikerjakan secara
otomatis oleh alat.

55. 55

56. 56

58. Bagian-Bagian Inti Sel
• Membran inti
Bagian terluar dari inti sel. Fungsi membran inti sel secara keseluruhan
adalah mengadakan pertukaran zat dengan sitoplasma..
• Anak Inti (Nukleolus)
Nukleolus tersusun atas fosfoprotein, ortofosfat, DNA, dan berbagai jenis
enzim. Nukleolus berfungsi dalam proses sintesis RNA.
• Nukleoplasma
Cairan inti atau karotin yang bersifat transparan dan semisolid (kental). Di
dalam nukleoplasma, terdapat kromatin, granula, nukleoprotein dan
mengandung senyawa kimia kompleks
• Asam Nukleat dan protein Inti
Asam Nukleat dibedakan menjadi DNA dan RNA. DNA merupakan
komponen pembawa informasi genetik (gen). DNA tersusun dalam
kromosom. DNA merupakan susunan kimia makromolekular kompleks yang
terdiri atas 3 macam molekul, yaitu gula deoksiribosa, asam fosfat dan basa
nitrogen.
Protein inti merupakan struktur yang kompleks. Protein inti terdiri atas
beberapa komponen, meliputi protamin, histon, protein non histon dan
nukleohiston.

59. HISTON
• Bagian dari protein inti yang berfungsi
untuk mengikat DNA
• Histon mengandung 20% hingga 30%
arginin dan lisin. Selain itu, histon juga
mengandung histidin. protein nonhiston
adalah protein yang bersifat asam.

60. Figure 19. Diagram of histones binding DNA.
HISTON

63. Antibody Origin of the name
anti-CENP-B centromer-protein B
anti-ds-DNA double stranded DNA
anti-ss-DNA single stranded DNA
anti-histone histone protein
anti-Jo-1 patient name
anti-Ku or anti-SL patient name or sicca lupus antigen
anti-PM-Scl (PM1) polymyositis sclerodermie antigen 100 kDa
anti-Scl-70 scleroderma antigen 70 kDa
anti-Sm Smith-antigen
anti-SS-A/Ro Robert-antigen or soluble substance A nuclear
antigen
anti-SS-B/La Lane-antigen or soluble substance B nuclear
antigen
ant-U1-snRNP small nuclear uridine-rich ribonucleoproteins
PCNA proliferating cell nuclear antigen

64. Antibody Function of the antigen Localization
anti-CENP-B 80 kD protein of the centromer nucleus
anti-ds-DNA tamplate for transcription and replication nucleus
anti-histone components of chromatin nucleus
anti-Jo-1 histidyl-tRNA synthetase nucleus and
cytoplasma
anti-Ku or anti-SL ? repair DNA termini nucleus
anti-PM-Scl (PM1) Unknown nucleus
anti-Scl-70 DNA topoisomerase I nucleus
anti-Sm spliceosome components nucleus
anti-SS-A/Ro Unknown nucleus and
cytoplasma
anti-SS-B/La transcription termination factor nucleus and
cytoplasma
ant-U1-snRNP spliceosome components nucleus
PCNA auxiliary protein of DNA polymerase a nucleus

65. PBS
• is a buffer solution commonly used in biological
research.
• It is a water-based salt solution containing
sodium chloride (NaCl), sodium phosphate, and
(in some formulations) potassium chloride and
potassium phosphate.
• The buffer helps to maintain a constant pH. The
osmolarity and ion concentrations of the solution
usually match those of the human body
(isotonic).

66. PBS
One of the common composition of PBS
Salt Concentration Concentration
(—) (mmol/L) (g/L)
NaCl 137 8.00
KCl 2.7 0.20
Na2HPO4 • 2 H2O 8.1 1.44
KH2PO4 1.76 0.24
pH 7.4 7.4

67. Fluorofor
• FITC : hijau apel
Mempunyai puncak eksitasi dan emisi pada
panjang gelombang 495 nm/521 nm
• Rhodamine isothiocyanate : jingga
• Umbelliferone
• Lanthanide chelates