Uploaded byandreei
3,081 views

Tutor imunologi lulut

Dokumen tersebut membahas tentang pemeriksaan ANA dengan metode imunofluoresens indirek. Metode ini digunakan untuk mendeteksi berbagai jenis antibodi antinuklear yang ada dalam serum pasien dengan pola fluoresensi nukleus berupa homogen, perifer, bercak atau nukleolar. Teknik TITERPLANE dari EUROIMMUN digunakan untuk standardisasi pemeriksaan ini dengan menggunakan substrat HEp-20-10 dan hati primata serta dil

Embed presentation

1 Tutor Imunologi Pemeriksaan ANA dengan Metode Imunofluoresens Indirek Lulut Kusumawati – Betty A Tambunan
2 PENDAHULUAN Systemic Lupus Erythematosus atau SLE :  Penyakit autoimun sistemik kronis  Pembentukan berbagai antibodi yang membentuk kompleks imun  Inflamasi pada berbagai organ
3 Gejala klinis SLE Kulit Ginjal Kardiopulmonal Limfadenopati Gastrointestinal Otot-tulang Neuropsikiatri
4 Diagnosis SLE Klinis Laboratorium Kriteria Hematologi ACR Imunologi
5 • Autoantibodi spesifik terhadap asam nukleat dan nukleoprotein • Antibodi yang sering ditemukan dalam serum dan jaringan penderita SLE • Spesifik terhadap antigen determinannya ANA
6 Pemeriksaan ANA Pemeriksaan skrining Sensitivitas 95%. Spesifitas 90% Beberapa metode : ELISA, IFA , imunobloting
7 Pemeriksaan ANA dengan Metode Imunofluoresens Indirek Mendeteksi berbagai macam antigen nukleus, termasuk DNA, RNA dan protein
8 Pemeriksaan ANA dengan Metode Imunofluoresens Indirek 4 tipe pola fluoresens : Homogen • Inti sel berfluoresens homogen • Inti sel berfluoresensi, sebagian besar pada daerah Perifer atau melingkar tepi inti. • Inti sel tidak berfluoresens secara rata dan nukleoli Speckled atau bercak tidak tercat. • Nukleoli dapat homogen atau tidak teratur. Nukleolar
9 Pemeriksaan ANA dengan Metode Imunofluoresens Indirek
10 EUROIMMUN
Prinsip Pemeriksaan 11 EUROIMMUN  Dengan metode imunofluoresens indirek  Antibodi antinuklear berikatan dengan antigen (pada sel HEp-20-10 dan hati primata) membentuk kompleks Ag-Ab dideteksi menggunakan Ig berlabel fluoresens dan diperiksa dengan mikroskop fluoresens.
12 Bahan dan Alat • Slide BIOCHIPS • Larutan konjugat , volume 1,5 ml. • Kontrol positif, volume 0,25 ml. • Kontrol negatif, volume 0,1 ml. • Garam untuk PBS, pH 7,2 • Tween 20, volume 2 ml. • Embedding medium, volume 3 ml. • Cover glass
13 Peralatan lain  Reagent tray  Moist Chamber  Pipet otomatis 1000 µl  Pipet otomatis variabel 5-10 µl  Tip  Bak perendam berisi larutan PBS-Tween.
14 Sampel Pemeriksaan  Serum atau plasma EDTA, heparin atau sitras.  Stabil pada penyimpanan 2-80C selama 14 hari.  Sampel yang sudah diencerkan harus dikerjakan pada hari yang sama.
15 Persiapan Pemeriksaan  Slide BIOCHIPs : membuka pelindung slide inkubasi pada suhu ruang (15 menit)  Meletakkan larutan konjugat, kontrol positif, kontrol negatif dan sampel pada suhu ruangan (20-260C), dicampur sampai homogen.  PBS-Tween. 1 bungkus garam PBS + 1 liter aqua destilata + 2 ml Tween 20.  Mengencerkan larutan kontrol dengan PBS-Tweeen.  Mengencerkan serum sampel dengan PBS-Tween dengan perbandingan 1:100.
16 Tahap Pemeriksaan EUROIMMUN - Teknik TITERPLANE 1. Prepare 6. Pipette 2. Dilute 7. Incubate 3. Pipette 8. Wash 4. Incubate 9. Embed 5. Wash 10.Evaluate
17 Tahap Pemeriksaan EUROIMMUN - Teknik TITERPLANE PREPARE  Mengecek reagent tray dan mempersiapkan slide BIOCHIPs. DILUTE  Mengencerkan serum sampel sesuai dengan prosedur PIPETTE  Meneteskan 25 µl sampel pada reagent tray, jangan sampai terbentuk gelembung udara.
18 Tahap Pemeriksaan EUROIMMUN - Teknik TITERPLANE INCUBATE  Meletakkan slide BIOCHIPs pada reagent tray untuk memulai reaksi dan inkubasi selama 30 menit pada suhu ruangan (18-250C) dalam moist chamber. WASH  Membilas slide BIOCHIP dengan PBS-Tween selama 1 detik, kemudian merendam slide dalam larutan PBS-Tween selama 5 menit. Goyang-goyangkan slide beberapa kali dan mengeringkan slide.
19 Tahap Pemeriksaan EUROIMMUN - Teknik TITERPLANE PIPETTE  Meneteskan 20 µl larutan konjugat pada reagent tray yang bersih, jangan sampai terbentuk gelembung udara. INCUBATE  Meletakkan slide BIOCHIPs pada reagent tray untuk memulai reaksi dan inkubasi selama 30 menit pada suhu ruangan (18-250C) dalam moist chamber.
Tahap Pemeriksaan EUROIMMUN - 20 Teknik TITERPLANE WASH  Membilas slide BIOCHIP dengan PBS-Tween selama 1 detik, kemudian merendam slide dalam larutan PBS-Tween selaa 5 menit. Goyang-goyangkan slide beberapa kali dan mengeringkan slide. EMBED  Meneteskan 10 µl embedding medium pada cover glass dan menempatkan slide BIOCHIP pada cover glass EVALUATE  Membaca dengan mikroskop fluoresens dengan pembesaran 200x dan 450x
21 Hasil Pemeriksaan  Pemeriksaan dengan mikroskop fluoresens dilakukan dengan segera.  Lapangan pandang pemeriksaan harus dicari dengan tepat dimana sel terdistribusi dengan rata dan berfluoresensi dengan rata.
22 Hasil Pemeriksaan Homogen Perifer
23 EUROIMMUN Speckled/bercak Nukleolar
24
25 PENDAHULUAN Gejala klinis bervariasi :  Kulit : makolupapular, “butterfly Rash”, purpura, urtikaria.  Ginjal : glomerulonefritis akut / kronis, gagal ginjal.  Limpadenopati perifer dan aksila, splenomegali.  Kelainan kardiopulmonar : persisten takikardi, perdarahan alveoli akut.  Kelainan gastrointestinal : perforasi pada saluran cerna.  Kelainan pada otot dan tulang : poliartritis, osteonekrosis.  Kelainan neuropsikiatri : penurunan daya ingat, mania, bahkan sampai terjadi shcizoprenia.  Kelainan pada saat kehamilan.
26 Pemeriksaan ANA dengan Metode Imunofluoresens Indirek  Pola fluoresensi nukleus menunjukkan jenis antibodi yang terdapat dalam serum pasien, dan dikenal adanya empat pola dasar.  Pewarnaan homogen atau difus, biasanya mencerminkan antibodi terhadap kromatin, histon dan DNA rantai ganda.  Pola pewarnaan melingkar atau perifer, paling sering menunjukkan adanya antibodi terhadap DNA rantai ganda.  Pola bercak, adalah pola yang paling umum dan menunjukkan adanya bercak yang berukuran seragam atau berbeda-beda. Pola ini menggambarkan adanya antibodi terhadap unsur nukleus non-DNA, misalnya antibodi terhadap histon dan ribonukleoprotein. Contohnya antigen SS-A dan SS-B.  Pola nukleolar, menggambarkan adanya sedikit bintik-bintik fluoresensi yang terputus di dalam nukleus yang memperlihatkan antibodi terhadap RNA nukleolus. Pola ini paling sering dilaporkan terhadap para pasien sklerosis sistemik.
27 EUROIMMUN - Prinsip pemeriksaan :  Substrat yang terdiri dari kombinasi HEp-20-10 dan hati primata diinkubasi dengan serum penderita yang telah diencerkan. Jika reaksi positif, antibodi spesifik kelas IgA, IgG dan IgM akan berikatan dengan antigen. Selanjutnya antibodi yang terikat diwarnai dengan antibodi anti-human yang dilabel fluoresens dan dilihat dengan mikroskop fluoresens.
28 Bahan dan Alat • Slide BIOCHIPS, terdiri dari 5 x 2 BIOCHIPS yang dilapisi HEp-10-20 dan hati primata. • Larutan konjugat yang berisi Fluorescein-labelled anti human IgG dari kambing, volume 1,5 ml. • Kontrol positif, berisi autoantibodi antinuklear (ANA) dari manusia, volume 0,25 ml. • Kontrol negatif, berisi autoantibodi negatif dari manusia, volume 0,1 ml. • Garam untuk PBS, pH 7,2 • Tween 20, volume 2 ml. • Embedding medium, volume 3 ml. • Cover glass
29 Persiapan Pemeriksaan  Mengencerkan larutan kontrol dengan PBS-Tweeen. Larutan kontrol tahan selama 6 bulan pada suhu penyimpanan 2-80C  Mengencerkan serum sampel dengan PBS-Tween dengan perbandingan 1:100. Caranya menambahkan 10 µl serum dengan 990 µl PBS-Tween, kemudian dicampur dengan vortex selama 4 detik.  PBS-Tween. Melarutkan satu bungkus garam PBS dengan 1 liter aqua destilata, ditambah 2 ml Tween 20. Larutan PBS-Tween yang sudah jadi dapat disimpan selama 1 minggu pada suhu 2-80C, dan jika tampak berkabut atau terkontaminasi larutan harus dibuang.
30 EUROIMMUN Tahap Pemeriksaan EUROIMMUN mengembangkan teknik TITERPLANE untuk menstandardisasi uji imunologi ini.  Meneteskan 25 µl sampel pada reagent tray, jangan sampai terbentuk gelembung udara.  Meletakkan slide BIOCHIP pada reagent tray untuk memulai reaksi.  Inkubasi slide selama 30 menit pada suhu ruangan (18-250C) dalam moist chamber.  Membilas slide BIOCHIP dengan PBS-Tween selama 1 detik, kemudian merendam slide dalam larutan PBS-Tween selama 5 menit. Menggoyang-goyangkan slide beberapa kali pada awal, pertengahan dan akhir perendaman. Mengeringkan slide dengan cara meletakkan slide pada posisi miring.  Meneteskan 20 µl larutan konjugat pada reagent tray yang bersih, jangan sampai terbentuk gelembung udara.  Meletakkan slide BIOCHIP pada reagent tray untuk memulai reaksi.  Inkubasi selama 30 menit pada suhu ruangan (18-250C) dalam moist chamber.  Membilas slide BIOCHIP dengan PBS-Tween selama 1 detik, kemudian merendam slide dalam larutan PBS-Tween selama 5 menit. Menggoyang-goyangkan slide beberapa kali pada awal, pertengahan dan akhir perendaman.  Mengeluarkan slide BIOCHIP dari PBS-Tween dan keringkan.  Meneteskan 10 µl embedding medium pada cover glass dan menempatkan slide BIOCHIP pada cover glass  Membaca dengan mikroskop fluorosens dengan pembesaran 200x dan 450x.
1. Ruam malar 2. Ruam discoid Kriteria 31 3. Fotosensitivitas 4. Ulkus mulut ACR 5. Artritis 6. Serositis : a. Pleuritis b. Pericarditis 7. Gangguan ginjal : a. Proteinuria > 0,5 gr/24 jam atau + 3 persisten b. Adanya cast seluler 8. Gangguan neurologi : a. Kejang atau b. Psikosis 9. Gangguan hematologi : a. Anemia hemolitik b. Leukopeni < 4.000/mm3 pada 2 kali pemeriksaan c. Limfopeni < 1.500/mm3 pada 2 kali pemeriksaan d. Trombopeni < 100.000/mm3 10. Gangguan imunologi : a. Peningkatan kadar anti-dsDNA atau b. Antibodi anti-Sm c. Antibodi antifosfolipid positif berdasar pada : 1. Peningkatan kadar IgG atau IgM antibodi antifosfolipid 2. Lupus koagulan positif dengan metode standar yang dianjurkan 3. Positif palsu untuk sifilis ada selama 6 bulan 11. Peningkatan antibodi antinuclear
32 AUTOIMMUNE DISEASES Connective Tissue Diseases (CTD) 1. Rheumatoid Arthritis 2. Systemic Lupus Erythematosus 3. Antiphospholipid Antibody Syndrome 4. Raynaud Phenomenon 5. Systemic Sclerosis ( Scleroderma ) 6. Idiopathic Inflammatory Myopathies (Polymyositis & Dermatomyositis) 7. Sjögren Syndrome 8. Wegner Granulomatosis
Frequency (%) of autoantibodies in rheumatic diseases 33 RA SLE SjS DS LS PD WG ANA 30-60 95-100 95 80-95 80-95 80-95 0-15 Anti-native DNA 0-5 60 0 0 0 0 0 Rheumatoid Fact 80 20 75 30 30 33 50 Anti-Sm 0 10-25 0 0 0 0 0 Anti-SS-A 0-5 15-20 65 0 0 0 0 Anti-SS-B 0-2 5-20 65 0 0 0 0 Anti SCL-70 0 0 0 33 20 0 0 Anti centromere 0 0 0 1 50 0 0 Anti Jo-1 0 0 0 0 0 20-30 0 ANCA 0 0-1 0 0 0 0 93-96 RA = Rheumatoid arthritis SLE = Systemic lupus erythematosus SjS = Sjögren’s syndrome DS = Diffuse scleroderma LS = Limited scleroderma (CREST syndrome ) PD = Polymyositis / dermatomyositis WG = Wegener’s granulomatosis
34
35
36 Kriteria Laboratorium Hematologi  LE sel positif  Adanya gangguan hematologi :  Anemia hemolitik  Leukopeni < 4.000/mm3 pada 2 kali pemeriksaan  Limfopeni < 1.500/mm3 pada 2 kali pemeriksaan  Trombopeni < 100.000/mm3
37 Anti dsDNA  Antibodies to dsDNA react with epitopes which are situated in the deoxyribophosphat framework of the DNA (outer region  Antibodies to dsDNA are found exclusively in cases of systemic lupus erythematosus  Because of the correlation between antibody concentration and disease activity, measurement of antibody titre provides a suitable means of monitoring therapy
38 Anti Smith Anti-Sm are highly specific for a diagnosis of SLE (>99%), but only about 25% of SLE patients have this antibodies Anti-Sm are not strongly associated with specific clinical features of SLE, but might appear with disease evolution Titers can fluctuate with disease activity & treatment, but serial monitoring does not effectively predict relaps Immunodiffusion (ID) has been the standard technique for determination of anti-Sm
39 Anti RNP  Anti-nRNP are detected in 100% of patients with MCTD & approximately 30% of patients with SLE  The presence of anti-nRNP is usually associated with sclerodactily, Raynaud’s phenomenon, esophageal dysmotility, pulmonary dysfunction, arthritis, myositis, & low incidence of renal disease
40 Anti Ro/SS-A dan Anti La/SS-B Anti-Ro (SS-A) are present in about 50% of patients with Sjogren’s syndrome & 30% of patients with SLE, associated with subacute cutaneous LE & with congenital heart block The incidence of anti-La in SLE & Sjogren’s syndrome is approximately half that of anti-Ro
41 Anti Ro/SS-A dan Anti La/SS-B Anti-Ro & anti-La testing may help to confirm the diagnosis of Sjogren’s syndrome. Neither is specific for SLE, but both are very useful when anti-dsDNA is absent Titers of anti-Ro & anti-La increase more slowly than anti- dsDNA in relapse & quantitative reporting is unlikely to be useful The EIA now has become the most widely used method to detect anti-Ro & anti-La
42 Anti Jo 1 Anti-Jo-1 are directed againts the enzyme histidyl tRNA synthetase Anti-Jo-1 are detected in 30% of patients with polymyositis or dermatomyositis The presence of Anti-Jo-1 is often associated with pulmonary involvement (pulmonary fibrosis)
43 Anti Scl 70  Anti-Scl-70 are a specific marker for scleroderma, because these antibodies occur rarely in patient with other CTD  Anti-Scl-70 are found in 22-40% of patients with scleroderma  Its presence is correlated with diffuse cutaneous disease, pulmonary fibrosis, cardiac involvement & longer disease duration
44 BIOCHIPs SLIDE BIOCHIP Technology and Mosaics.  BIOCHIP Technology: cover glasses coated with biological substrates are cut into millimetre-sized fragments (BIOCHIPs) on a machine. This makes it possible to obtain ten or more first-class preparations of homogeneous quality per tissue section, in the case of cultured cell substrates even several thousands.  BIOCHIP Mosaics™: using several BIOCHIPs coated with different substrates side by side on one and the same reaction field, antibodies against various organs or infectious agents can be investigated simultaneously. Detailed antibody profiles can thus be established with comparatively little effort, allowing the reciprocal determination of the results on different substrates.
45 BIOCHIPs SLIDE
46 FITC
47 Primate Liver – Hep-2  HEp-2 cells contain human antigens, while frozen sections can generally only be produced from tissue of animal origin  Earlier, frozen sections of primate liver were considered to be the standard substrate for the identification of autoantibodies against cell nuclei
48 Primate Liver  Negative results can be more securely identified using liver tissue. The cell nuclei are unquestionably free of fluorescence, where as a green shimmer can often still be seen in HEp-2 cells  Antibodies against liver-specific antigens can be identified at the same time  Primate liver provides a first-class substrate for the identification of antibodies against granulocyte cytoplasm (cANCA, pANCA) and against endomyslum, with the result that valuable additional information can often be obtained concerning other related areas of diagnostics
49 Hep 2 cell  Corresponds more closely to the specificity of the human antibodies being tested  Cells can be propagated in definitely by cell culture with the result that the substrate can be more easily standardised  Hep 2 cell have larger and more impressive cell nuclel in which the various cell nucleus antibodies can be more easily differentiated by means of their fluorescence pattern  Cells display a much higher proportion of mitoses than does liver tissue.This allows identification of antibodies against mitosis-specific structures and a more secure diagnosis of antibodies against centromere
50 Hep-20-10  Compared to standard HEp-2 cells, HEp-20-10 cells demonstrate 10-fold more mitotic cells. Antibodies against mitotic-specific structures (centromeres, spindle fibers, midbody, centrioles, NOR) can be more easily identified than with conventional preparations.  The cell line HEp-20-10 offers the full antigen spectrum for cell nuclei antibody diagnostics.  The BIOCHIP with HEp-20-10 can be supplemented with additional substrates, for example, primate liver as well as rat kidney and rat stomach
51 Mikroskop Fluorescen
52
Flow Chart for Clinical Antinuclear Antibody Testing 53 Clinician suspects LE or other rheumatic condition. ANA test Table 2 is not Yes No indicated Perform ANA test Test positive Test negative No further autoantibody testing is indicated. Follow patient clinically & How should a (+) result be interpreted ? consider repeat test if indicated clinically Does the patient have one of the conditions in Table 2 ? Is further testing indicated ? Further testing for other autoAb is driven by specific clinical findings Susp. LE but SLE has Susp. Susp. polymyositis Susp. Susp. the diagnosis been Sjogren’s or dermatomyositis scleroderma drug needs to be diagnosed syndrome or has established or has LE confirmed this diagnosis established Disease this Susp. Information activity anti- diagnosis MCTD anti- regarding needs to Ro/SS-A dsDNA & anti- No further prognosis is be & anti- anti- anti-Sm Jo-1 testing is desired assessed La/SS-B anti-Scl-70 RNP serially indicated anti-dsDNA Anti-Ro/SS-A Correlate with clinical findings Kavanaugh (2000). Arch Pathol Lab Med 124, 71-81
54 Beda ANA-ELISA dan ANA-IFA ANA IFA ANAELISA • Dapat menentukan jenis • Bersifat kualitatif autoantibodinya • Objektif, meminimalkan • Keterbatasan : subyektif, risiko human error, kurang memerlukan tenaga membutuhkan tenaga terampil dengan risiko trampil dan ketelitian peme- human error yang tinggi. riksa, sebab semua prosedur dikerjakan secara otomatis oleh alat.
55
56
Bagian-Bagian Inti Sel • Membran inti Bagian terluar dari inti sel. Fungsi membran inti sel secara keseluruhan adalah mengadakan pertukaran zat dengan sitoplasma.. • Anak Inti (Nukleolus) Nukleolus tersusun atas fosfoprotein, ortofosfat, DNA, dan berbagai jenis enzim. Nukleolus berfungsi dalam proses sintesis RNA. • Nukleoplasma Cairan inti atau karotin yang bersifat transparan dan semisolid (kental). Di dalam nukleoplasma, terdapat kromatin, granula, nukleoprotein dan mengandung senyawa kimia kompleks • Asam Nukleat dan protein Inti Asam Nukleat dibedakan menjadi DNA dan RNA. DNA merupakan komponen pembawa informasi genetik (gen). DNA tersusun dalam kromosom. DNA merupakan susunan kimia makromolekular kompleks yang terdiri atas 3 macam molekul, yaitu gula deoksiribosa, asam fosfat dan basa nitrogen. Protein inti merupakan struktur yang kompleks. Protein inti terdiri atas beberapa komponen, meliputi protamin, histon, protein non histon dan nukleohiston.
HISTON • Bagian dari protein inti yang berfungsi untuk mengikat DNA • Histon mengandung 20% hingga 30% arginin dan lisin. Selain itu, histon juga mengandung histidin. protein nonhiston adalah protein yang bersifat asam.
Figure 19. Diagram of histones binding DNA. HISTON
Antibody Origin of the name anti-CENP-B centromer-protein B anti-ds-DNA double stranded DNA anti-ss-DNA single stranded DNA anti-histone histone protein anti-Jo-1 patient name anti-Ku or anti-SL patient name or sicca lupus antigen anti-PM-Scl (PM1) polymyositis sclerodermie antigen 100 kDa anti-Scl-70 scleroderma antigen 70 kDa anti-Sm Smith-antigen anti-SS-A/Ro Robert-antigen or soluble substance A nuclear antigen anti-SS-B/La Lane-antigen or soluble substance B nuclear antigen ant-U1-snRNP small nuclear uridine-rich ribonucleoproteins PCNA proliferating cell nuclear antigen
Antibody Function of the antigen Localization anti-CENP-B 80 kD protein of the centromer nucleus anti-ds-DNA tamplate for transcription and replication nucleus anti-histone components of chromatin nucleus anti-Jo-1 histidyl-tRNA synthetase nucleus and cytoplasma anti-Ku or anti-SL ? repair DNA termini nucleus anti-PM-Scl (PM1) Unknown nucleus anti-Scl-70 DNA topoisomerase I nucleus anti-Sm spliceosome components nucleus anti-SS-A/Ro Unknown nucleus and cytoplasma anti-SS-B/La transcription termination factor nucleus and cytoplasma ant-U1-snRNP spliceosome components nucleus PCNA auxiliary protein of DNA polymerase a nucleus
PBS • is a buffer solution commonly used in biological research. • It is a water-based salt solution containing sodium chloride (NaCl), sodium phosphate, and (in some formulations) potassium chloride and potassium phosphate. • The buffer helps to maintain a constant pH. The osmolarity and ion concentrations of the solution usually match those of the human body (isotonic).
PBS One of the common composition of PBS Salt Concentration Concentration (—) (mmol/L) (g/L) NaCl 137 8.00 KCl 2.7 0.20 Na2HPO4 • 2 H2O 8.1 1.44 KH2PO4 1.76 0.24 pH 7.4 7.4
Fluorofor • FITC : hijau apel Mempunyai puncak eksitasi dan emisi pada panjang gelombang 495 nm/521 nm • Rhodamine isothiocyanate : jingga • Umbelliferone • Lanthanide chelates

More Related Content

PPTX
Patologi klinik (5,6)
byAde Maria Ulfa
 
PPTX
Pemeriksaan agregasi trombosit.
byDian Jenova
 
PDF
Th5
byandreei
 
PPTX
Tibaru12
byandreei
 
PDF
Bun
byandreei
 
PDF
Tutor 2
bypdspatologikliniksby
 
PPT
Px gol.darah (4)
byNovita D. Bintari
 
PDF
Pemeriksaan Tinja : Parasit Cacing
bypjj_kemenkes
 
Patologi klinik (5,6)
byAde Maria Ulfa
 
Pemeriksaan agregasi trombosit.
byDian Jenova
 
Th5
byandreei
 
Tibaru12
byandreei
 
Bun
byandreei
 
Tutor 2
bypdspatologikliniksby
 
Px gol.darah (4)
byNovita D. Bintari
 
Pemeriksaan Tinja : Parasit Cacing
bypjj_kemenkes
 

What's hot

PPSX
Ti16
byandreei
 
PPTX
Enzim pada Organ Hati
bydimar aji
 
PPT
Tkik4
byandreei
 
PPTX
Pemeriksaan retraksi bekuan
byDian Jenova
 
PPTX
LED (Laju Endap Darah)
byDyah Asih Setiatin
 
PPTX
3.feses.pptx
bysridwijastuti3
 
PDF
Teknik elisa sandwich
bySyahrulMusthofa
 
PDF
Praktikum mikrobiologi blok 17 – sistem muskoskeletal
bySyscha Lumempouw
 
PPT
Transfusi Darah 3. pembuatan suspensi eritrosit 2% 50%
byDewi Fitriani
 
PDF
Sindroma antifosfolipid [compatibility mode]
byandreei
 
PDF
Verifikasi dan Validasi Metode Pemeriksaan Laboratorium Klinik Bagian 1
bySuryanata Kesuma
 
PPTX
Isi atlas sedimen urin
byMita Yurike
 
PPTX
Presentasi metode px mikroalbuminuria
byDiana Arwati
 
PPTX
Pemeriksaan anti sterptolisyn (asto) xi tlm
bymateripptgc
 
PPTX
PEMERIKSAAN HEMOGLOBIN ELEKTROFORESIS.pptx
byDikaraNovirmanPrayul
 
DOCX
MAKALAH UJI WIDAL
byWinniey Tillich Wahyuni
 
PPT
Pelatihan Quality Control
byferinurgianto
 
PPSX
Rkk22
byandreei
 
PPTX
PPT Imunologi CMIA.pptx
byIndahAipassa1
 
PPTX
Identifikasi Bakteri Staphylococcus Aureus
byAudree Geraldine Jonathan
 
Ti16
byandreei
 
Enzim pada Organ Hati
bydimar aji
 
Tkik4
byandreei
 
Pemeriksaan retraksi bekuan
byDian Jenova
 
LED (Laju Endap Darah)
byDyah Asih Setiatin
 
3.feses.pptx
bysridwijastuti3
 
Teknik elisa sandwich
bySyahrulMusthofa
 
Praktikum mikrobiologi blok 17 – sistem muskoskeletal
bySyscha Lumempouw
 
Transfusi Darah 3. pembuatan suspensi eritrosit 2% 50%
byDewi Fitriani
 
Sindroma antifosfolipid [compatibility mode]
byandreei
 
Verifikasi dan Validasi Metode Pemeriksaan Laboratorium Klinik Bagian 1
bySuryanata Kesuma
 
Isi atlas sedimen urin
byMita Yurike
 
Presentasi metode px mikroalbuminuria
byDiana Arwati
 
Pemeriksaan anti sterptolisyn (asto) xi tlm
bymateripptgc
 
PEMERIKSAAN HEMOGLOBIN ELEKTROFORESIS.pptx
byDikaraNovirmanPrayul
 
MAKALAH UJI WIDAL
byWinniey Tillich Wahyuni
 
Pelatihan Quality Control
byferinurgianto
 
Rkk22
byandreei
 
PPT Imunologi CMIA.pptx
byIndahAipassa1
 
Identifikasi Bakteri Staphylococcus Aureus
byAudree Geraldine Jonathan
 

More from andreei

PPT
Tibaru18
byandreei
 
PPT
Tibaru17
byandreei
 
PPTX
Tibaru16
byandreei
 
PPT
Tibaru15
byandreei
 
PPT
Tibaru14
byandreei
 
PPTX
Tibaru13
byandreei
 
PPT
Tibaru11
byandreei
 
PPTX
Tibaru9
byandreei
 
PPT
Tibaru11
byandreei
 
PPTX
Tibaru10
byandreei
 
PPTX
Tibaru8
byandreei
 
PPTX
Tibaru7
byandreei
 
PPT
Refhemabaru8
byandreei
 
PPT
Refhemabaru7
byandreei
 
PPT
Refhemabaru6
byandreei
 
PPT
Refhemabaru5
byandreei
 
PPT
12
byandreei
 
PPT
12
byandreei
 
PPT
11
byandreei
 
PPT
Tutor hematologi
byandreei
 
Tibaru18
byandreei
 
Tibaru17
byandreei
 
Tibaru16
byandreei
 
Tibaru15
byandreei
 
Tibaru14
byandreei
 
Tibaru13
byandreei
 
Tibaru11
byandreei
 
Tibaru9
byandreei
 
Tibaru11
byandreei
 
Tibaru10
byandreei
 
Tibaru8
byandreei
 
Tibaru7
byandreei
 
Refhemabaru8
byandreei
 
Refhemabaru7
byandreei
 
Refhemabaru6
byandreei
 
Refhemabaru5
byandreei
 
12
byandreei
 
12
byandreei
 
11
byandreei
 
Tutor hematologi
byandreei
 

Tutor imunologi lulut

  • 1.
    1 Tutor Imunologi Pemeriksaan ANA dengan Metode Imunofluoresens Indirek Lulut Kusumawati – Betty A Tambunan
  • 2.
    2 PENDAHULUAN Systemic Lupus Erythematosus atau SLE :  Penyakit autoimun sistemik kronis  Pembentukan berbagai antibodi yang membentuk kompleks imun  Inflamasi pada berbagai organ
  • 3.
    3 Gejala klinis SLE Kulit Ginjal Kardiopulmonal Limfadenopati Gastrointestinal Otot-tulang Neuropsikiatri
  • 4.
    4 Diagnosis SLE Klinis Laboratorium Kriteria Hematologi ACR Imunologi
  • 5.
    5 • Autoantibodi spesifik terhadap asam nukleat dan nukleoprotein • Antibodi yang sering ditemukan dalam serum dan jaringan penderita SLE • Spesifik terhadap antigen determinannya ANA
  • 6.
    6 Pemeriksaan ANA Pemeriksaan skrining Sensitivitas 95%. Spesifitas 90% Beberapa metode : ELISA, IFA , imunobloting
  • 7.
    7 Pemeriksaan ANA denganMetode Imunofluoresens Indirek Mendeteksi berbagai macam antigen nukleus, termasuk DNA, RNA dan protein
  • 8.
    8 Pemeriksaan ANA denganMetode Imunofluoresens Indirek 4 tipe pola fluoresens : Homogen • Inti sel berfluoresens homogen • Inti sel berfluoresensi, sebagian besar pada daerah Perifer atau melingkar tepi inti. • Inti sel tidak berfluoresens secara rata dan nukleoli Speckled atau bercak tidak tercat. • Nukleoli dapat homogen atau tidak teratur. Nukleolar
  • 9.
    9 Pemeriksaan ANA denganMetode Imunofluoresens Indirek
  • 10.
  • 11.
    Prinsip Pemeriksaan 11 EUROIMMUN  Dengan metode imunofluoresens indirek  Antibodi antinuklear berikatan dengan antigen (pada sel HEp-20-10 dan hati primata) membentuk kompleks Ag-Ab dideteksi menggunakan Ig berlabel fluoresens dan diperiksa dengan mikroskop fluoresens.
  • 12.
    12 Bahan dan Alat • Slide BIOCHIPS • Larutan konjugat , volume 1,5 ml. • Kontrol positif, volume 0,25 ml. • Kontrol negatif, volume 0,1 ml. • Garam untuk PBS, pH 7,2 • Tween 20, volume 2 ml. • Embedding medium, volume 3 ml. • Cover glass
  • 13.
    13 Peralatan lain  Reagent tray  Moist Chamber  Pipet otomatis 1000 µl  Pipet otomatis variabel 5-10 µl  Tip  Bak perendam berisi larutan PBS-Tween.
  • 14.
    14 Sampel Pemeriksaan  Serum atau plasma EDTA, heparin atau sitras.  Stabil pada penyimpanan 2-80C selama 14 hari.  Sampel yang sudah diencerkan harus dikerjakan pada hari yang sama.
  • 15.
    15 Persiapan Pemeriksaan  Slide BIOCHIPs : membuka pelindung slide inkubasi pada suhu ruang (15 menit)  Meletakkan larutan konjugat, kontrol positif, kontrol negatif dan sampel pada suhu ruangan (20-260C), dicampur sampai homogen.  PBS-Tween. 1 bungkus garam PBS + 1 liter aqua destilata + 2 ml Tween 20.  Mengencerkan larutan kontrol dengan PBS-Tweeen.  Mengencerkan serum sampel dengan PBS-Tween dengan perbandingan 1:100.
  • 16.
    16 Tahap Pemeriksaan EUROIMMUN - Teknik TITERPLANE 1. Prepare 6. Pipette 2. Dilute 7. Incubate 3. Pipette 8. Wash 4. Incubate 9. Embed 5. Wash 10.Evaluate
  • 17.
    17 Tahap Pemeriksaan EUROIMMUN - Teknik TITERPLANE PREPARE  Mengecek reagent tray dan mempersiapkan slide BIOCHIPs. DILUTE  Mengencerkan serum sampel sesuai dengan prosedur PIPETTE  Meneteskan 25 µl sampel pada reagent tray, jangan sampai terbentuk gelembung udara.
  • 18.
    18 Tahap Pemeriksaan EUROIMMUN - Teknik TITERPLANE INCUBATE  Meletakkan slide BIOCHIPs pada reagent tray untuk memulai reaksi dan inkubasi selama 30 menit pada suhu ruangan (18-250C) dalam moist chamber. WASH  Membilas slide BIOCHIP dengan PBS-Tween selama 1 detik, kemudian merendam slide dalam larutan PBS-Tween selama 5 menit. Goyang-goyangkan slide beberapa kali dan mengeringkan slide.
  • 19.
    19 Tahap Pemeriksaan EUROIMMUN - Teknik TITERPLANE PIPETTE  Meneteskan 20 µl larutan konjugat pada reagent tray yang bersih, jangan sampai terbentuk gelembung udara. INCUBATE  Meletakkan slide BIOCHIPs pada reagent tray untuk memulai reaksi dan inkubasi selama 30 menit pada suhu ruangan (18-250C) dalam moist chamber.
  • 20.
    Tahap Pemeriksaan EUROIMMUN- 20 Teknik TITERPLANE WASH  Membilas slide BIOCHIP dengan PBS-Tween selama 1 detik, kemudian merendam slide dalam larutan PBS-Tween selaa 5 menit. Goyang-goyangkan slide beberapa kali dan mengeringkan slide. EMBED  Meneteskan 10 µl embedding medium pada cover glass dan menempatkan slide BIOCHIP pada cover glass EVALUATE  Membaca dengan mikroskop fluoresens dengan pembesaran 200x dan 450x
  • 21.
    21 Hasil Pemeriksaan  Pemeriksaan dengan mikroskop fluoresens dilakukan dengan segera.  Lapangan pandang pemeriksaan harus dicari dengan tepat dimana sel terdistribusi dengan rata dan berfluoresensi dengan rata.
  • 22.
    22 HasilPemeriksaan Homogen Perifer
  • 23.
    23 EUROIMMUN Speckled/bercak Nukleolar
  • 24.
  • 25.
    25 PENDAHULUAN Gejala klinis bervariasi :  Kulit : makolupapular, “butterfly Rash”, purpura, urtikaria.  Ginjal : glomerulonefritis akut / kronis, gagal ginjal.  Limpadenopati perifer dan aksila, splenomegali.  Kelainan kardiopulmonar : persisten takikardi, perdarahan alveoli akut.  Kelainan gastrointestinal : perforasi pada saluran cerna.  Kelainan pada otot dan tulang : poliartritis, osteonekrosis.  Kelainan neuropsikiatri : penurunan daya ingat, mania, bahkan sampai terjadi shcizoprenia.  Kelainan pada saat kehamilan.
  • 26.
    26 PemeriksaanANA dengan Metode Imunofluoresens Indirek  Pola fluoresensi nukleus menunjukkan jenis antibodi yang terdapat dalam serum pasien, dan dikenal adanya empat pola dasar.  Pewarnaan homogen atau difus, biasanya mencerminkan antibodi terhadap kromatin, histon dan DNA rantai ganda.  Pola pewarnaan melingkar atau perifer, paling sering menunjukkan adanya antibodi terhadap DNA rantai ganda.  Pola bercak, adalah pola yang paling umum dan menunjukkan adanya bercak yang berukuran seragam atau berbeda-beda. Pola ini menggambarkan adanya antibodi terhadap unsur nukleus non-DNA, misalnya antibodi terhadap histon dan ribonukleoprotein. Contohnya antigen SS-A dan SS-B.  Pola nukleolar, menggambarkan adanya sedikit bintik-bintik fluoresensi yang terputus di dalam nukleus yang memperlihatkan antibodi terhadap RNA nukleolus. Pola ini paling sering dilaporkan terhadap para pasien sklerosis sistemik.
  • 27.
    27 EUROIMMUN- Prinsip pemeriksaan :  Substrat yang terdiri dari kombinasi HEp-20-10 dan hati primata diinkubasi dengan serum penderita yang telah diencerkan. Jika reaksi positif, antibodi spesifik kelas IgA, IgG dan IgM akan berikatan dengan antigen. Selanjutnya antibodi yang terikat diwarnai dengan antibodi anti-human yang dilabel fluoresens dan dilihat dengan mikroskop fluoresens.
  • 28.
    28 Bahan dan Alat • Slide BIOCHIPS, terdiri dari 5 x 2 BIOCHIPS yang dilapisi HEp-10-20 dan hati primata. • Larutan konjugat yang berisi Fluorescein-labelled anti human IgG dari kambing, volume 1,5 ml. • Kontrol positif, berisi autoantibodi antinuklear (ANA) dari manusia, volume 0,25 ml. • Kontrol negatif, berisi autoantibodi negatif dari manusia, volume 0,1 ml. • Garam untuk PBS, pH 7,2 • Tween 20, volume 2 ml. • Embedding medium, volume 3 ml. • Cover glass
  • 29.
    29 Persiapan Pemeriksaan  Mengencerkan larutan kontrol dengan PBS-Tweeen. Larutan kontrol tahan selama 6 bulan pada suhu penyimpanan 2-80C  Mengencerkan serum sampel dengan PBS-Tween dengan perbandingan 1:100. Caranya menambahkan 10 µl serum dengan 990 µl PBS-Tween, kemudian dicampur dengan vortex selama 4 detik.  PBS-Tween. Melarutkan satu bungkus garam PBS dengan 1 liter aqua destilata, ditambah 2 ml Tween 20. Larutan PBS-Tween yang sudah jadi dapat disimpan selama 1 minggu pada suhu 2-80C, dan jika tampak berkabut atau terkontaminasi larutan harus dibuang.
  • 30.
    30 EUROIMMUN Tahap Pemeriksaan EUROIMMUN mengembangkan teknik TITERPLANE untuk menstandardisasi uji imunologi ini.  Meneteskan 25 µl sampel pada reagent tray, jangan sampai terbentuk gelembung udara.  Meletakkan slide BIOCHIP pada reagent tray untuk memulai reaksi.  Inkubasi slide selama 30 menit pada suhu ruangan (18-250C) dalam moist chamber.  Membilas slide BIOCHIP dengan PBS-Tween selama 1 detik, kemudian merendam slide dalam larutan PBS-Tween selama 5 menit. Menggoyang-goyangkan slide beberapa kali pada awal, pertengahan dan akhir perendaman. Mengeringkan slide dengan cara meletakkan slide pada posisi miring.  Meneteskan 20 µl larutan konjugat pada reagent tray yang bersih, jangan sampai terbentuk gelembung udara.  Meletakkan slide BIOCHIP pada reagent tray untuk memulai reaksi.  Inkubasi selama 30 menit pada suhu ruangan (18-250C) dalam moist chamber.  Membilas slide BIOCHIP dengan PBS-Tween selama 1 detik, kemudian merendam slide dalam larutan PBS-Tween selama 5 menit. Menggoyang-goyangkan slide beberapa kali pada awal, pertengahan dan akhir perendaman.  Mengeluarkan slide BIOCHIP dari PBS-Tween dan keringkan.  Meneteskan 10 µl embedding medium pada cover glass dan menempatkan slide BIOCHIP pada cover glass  Membaca dengan mikroskop fluorosens dengan pembesaran 200x dan 450x.
  • 31.
    1. Ruam malar 2.Ruam discoid Kriteria 31 3. Fotosensitivitas 4. Ulkus mulut ACR 5. Artritis 6. Serositis : a. Pleuritis b. Pericarditis 7. Gangguan ginjal : a. Proteinuria > 0,5 gr/24 jam atau + 3 persisten b. Adanya cast seluler 8. Gangguan neurologi : a. Kejang atau b. Psikosis 9. Gangguan hematologi : a. Anemia hemolitik b. Leukopeni < 4.000/mm3 pada 2 kali pemeriksaan c. Limfopeni < 1.500/mm3 pada 2 kali pemeriksaan d. Trombopeni < 100.000/mm3 10. Gangguan imunologi : a. Peningkatan kadar anti-dsDNA atau b. Antibodi anti-Sm c. Antibodi antifosfolipid positif berdasar pada : 1. Peningkatan kadar IgG atau IgM antibodi antifosfolipid 2. Lupus koagulan positif dengan metode standar yang dianjurkan 3. Positif palsu untuk sifilis ada selama 6 bulan 11. Peningkatan antibodi antinuclear
  • 32.
    32 AUTOIMMUNE DISEASES Connective TissueDiseases (CTD) 1. Rheumatoid Arthritis 2. Systemic Lupus Erythematosus 3. Antiphospholipid Antibody Syndrome 4. Raynaud Phenomenon 5. Systemic Sclerosis ( Scleroderma ) 6. Idiopathic Inflammatory Myopathies (Polymyositis & Dermatomyositis) 7. Sjögren Syndrome 8. Wegner Granulomatosis
  • 33.
    Frequency (%) ofautoantibodies in rheumatic diseases 33 RA SLE SjS DS LS PD WG ANA 30-60 95-100 95 80-95 80-95 80-95 0-15 Anti-native DNA 0-5 60 0 0 0 0 0 Rheumatoid Fact 80 20 75 30 30 33 50 Anti-Sm 0 10-25 0 0 0 0 0 Anti-SS-A 0-5 15-20 65 0 0 0 0 Anti-SS-B 0-2 5-20 65 0 0 0 0 Anti SCL-70 0 0 0 33 20 0 0 Anti centromere 0 0 0 1 50 0 0 Anti Jo-1 0 0 0 0 0 20-30 0 ANCA 0 0-1 0 0 0 0 93-96 RA = Rheumatoid arthritis SLE = Systemic lupus erythematosus SjS = Sjögren’s syndrome DS = Diffuse scleroderma LS = Limited scleroderma (CREST syndrome ) PD = Polymyositis / dermatomyositis WG = Wegener’s granulomatosis
  • 34.
  • 35.
  • 36.
    36 Kriteria Laboratorium Hematologi  LE sel positif  Adanya gangguan hematologi :  Anemia hemolitik  Leukopeni < 4.000/mm3 pada 2 kali pemeriksaan  Limfopeni < 1.500/mm3 pada 2 kali pemeriksaan  Trombopeni < 100.000/mm3
  • 37.
    37 Anti dsDNA  Antibodies to dsDNA react with epitopes which are situated in the deoxyribophosphat framework of the DNA (outer region  Antibodies to dsDNA are found exclusively in cases of systemic lupus erythematosus  Because of the correlation between antibody concentration and disease activity, measurement of antibody titre provides a suitable means of monitoring therapy
  • 38.
    38 Anti Smith Anti-Sm are highly specific for a diagnosis of SLE (>99%), but only about 25% of SLE patients have this antibodies Anti-Sm are not strongly associated with specific clinical features of SLE, but might appear with disease evolution Titers can fluctuate with disease activity & treatment, but serial monitoring does not effectively predict relaps Immunodiffusion (ID) has been the standard technique for determination of anti-Sm
  • 39.
    39 Anti RNP  Anti-nRNP are detected in 100% of patients with MCTD & approximately 30% of patients with SLE  The presence of anti-nRNP is usually associated with sclerodactily, Raynaud’s phenomenon, esophageal dysmotility, pulmonary dysfunction, arthritis, myositis, & low incidence of renal disease
  • 40.
    40 Anti Ro/SS-A dan Anti La/SS-B Anti-Ro (SS-A) are present in about 50% of patients with Sjogren’s syndrome & 30% of patients with SLE, associated with subacute cutaneous LE & with congenital heart block The incidence of anti-La in SLE & Sjogren’s syndrome is approximately half that of anti-Ro
  • 41.
    41 Anti Ro/SS-A dan Anti La/SS-B Anti-Ro & anti-La testing may help to confirm the diagnosis of Sjogren’s syndrome. Neither is specific for SLE, but both are very useful when anti-dsDNA is absent Titers of anti-Ro & anti-La increase more slowly than anti- dsDNA in relapse & quantitative reporting is unlikely to be useful The EIA now has become the most widely used method to detect anti-Ro & anti-La
  • 42.
    42 Anti Jo 1 Anti-Jo-1 are directed againts the enzyme histidyl tRNA synthetase Anti-Jo-1 are detected in 30% of patients with polymyositis or dermatomyositis The presence of Anti-Jo-1 is often associated with pulmonary involvement (pulmonary fibrosis)
  • 43.
    43 Anti Scl 70  Anti-Scl-70 are a specific marker for scleroderma, because these antibodies occur rarely in patient with other CTD  Anti-Scl-70 are found in 22-40% of patients with scleroderma  Its presence is correlated with diffuse cutaneous disease, pulmonary fibrosis, cardiac involvement & longer disease duration
  • 44.
    44 BIOCHIPs SLIDE BIOCHIP Technology and Mosaics.  BIOCHIP Technology: cover glasses coated with biological substrates are cut into millimetre-sized fragments (BIOCHIPs) on a machine. This makes it possible to obtain ten or more first-class preparations of homogeneous quality per tissue section, in the case of cultured cell substrates even several thousands.  BIOCHIP Mosaics™: using several BIOCHIPs coated with different substrates side by side on one and the same reaction field, antibodies against various organs or infectious agents can be investigated simultaneously. Detailed antibody profiles can thus be established with comparatively little effort, allowing the reciprocal determination of the results on different substrates.
  • 45.
  • 46.
  • 47.
    47 Primate Liver – Hep-2  HEp-2 cells contain human antigens, while frozen sections can generally only be produced from tissue of animal origin  Earlier, frozen sections of primate liver were considered to be the standard substrate for the identification of autoantibodies against cell nuclei
  • 48.
    48 Primate Liver  Negative results can be more securely identified using liver tissue. The cell nuclei are unquestionably free of fluorescence, where as a green shimmer can often still be seen in HEp-2 cells  Antibodies against liver-specific antigens can be identified at the same time  Primate liver provides a first-class substrate for the identification of antibodies against granulocyte cytoplasm (cANCA, pANCA) and against endomyslum, with the result that valuable additional information can often be obtained concerning other related areas of diagnostics
  • 49.
    49 Hep 2 cell  Corresponds more closely to the specificity of the human antibodies being tested  Cells can be propagated in definitely by cell culture with the result that the substrate can be more easily standardised  Hep 2 cell have larger and more impressive cell nuclel in which the various cell nucleus antibodies can be more easily differentiated by means of their fluorescence pattern  Cells display a much higher proportion of mitoses than does liver tissue.This allows identification of antibodies against mitosis-specific structures and a more secure diagnosis of antibodies against centromere
  • 50.
    50 Hep-20-10  Compared to standard HEp-2 cells, HEp-20-10 cells demonstrate 10-fold more mitotic cells. Antibodies against mitotic-specific structures (centromeres, spindle fibers, midbody, centrioles, NOR) can be more easily identified than with conventional preparations.  The cell line HEp-20-10 offers the full antigen spectrum for cell nuclei antibody diagnostics.  The BIOCHIP with HEp-20-10 can be supplemented with additional substrates, for example, primate liver as well as rat kidney and rat stomach
  • 51.
  • 52.
  • 53.
    Flow Chart forClinical Antinuclear Antibody Testing 53 Clinician suspects LE or other rheumatic condition. ANA test Table 2 is not Yes No indicated Perform ANA test Test positive Test negative No further autoantibody testing is indicated. Follow patient clinically & How should a (+) result be interpreted ? consider repeat test if indicated clinically Does the patient have one of the conditions in Table 2 ? Is further testing indicated ? Further testing for other autoAb is driven by specific clinical findings Susp. LE but SLE has Susp. Susp. polymyositis Susp. Susp. the diagnosis been Sjogren’s or dermatomyositis scleroderma drug needs to be diagnosed syndrome or has established or has LE confirmed this diagnosis established Disease this Susp. Information activity anti- diagnosis MCTD anti- regarding needs to Ro/SS-A dsDNA & anti- No further prognosis is be & anti- anti- anti-Sm Jo-1 testing is desired assessed La/SS-B anti-Scl-70 RNP serially indicated anti-dsDNA Anti-Ro/SS-A Correlate with clinical findings Kavanaugh (2000). Arch Pathol Lab Med 124, 71-81
  • 54.
    54 Beda ANA-ELISA dan ANA-IFA ANA IFA ANAELISA • Dapat menentukan jenis • Bersifat kualitatif autoantibodinya • Objektif, meminimalkan • Keterbatasan : subyektif, risiko human error, kurang memerlukan tenaga membutuhkan tenaga terampil dengan risiko trampil dan ketelitian peme- human error yang tinggi. riksa, sebab semua prosedur dikerjakan secara otomatis oleh alat.
  • 55.
  • 56.
  • 58.
    Bagian-Bagian Inti Sel •Membran inti Bagian terluar dari inti sel. Fungsi membran inti sel secara keseluruhan adalah mengadakan pertukaran zat dengan sitoplasma.. • Anak Inti (Nukleolus) Nukleolus tersusun atas fosfoprotein, ortofosfat, DNA, dan berbagai jenis enzim. Nukleolus berfungsi dalam proses sintesis RNA. • Nukleoplasma Cairan inti atau karotin yang bersifat transparan dan semisolid (kental). Di dalam nukleoplasma, terdapat kromatin, granula, nukleoprotein dan mengandung senyawa kimia kompleks • Asam Nukleat dan protein Inti Asam Nukleat dibedakan menjadi DNA dan RNA. DNA merupakan komponen pembawa informasi genetik (gen). DNA tersusun dalam kromosom. DNA merupakan susunan kimia makromolekular kompleks yang terdiri atas 3 macam molekul, yaitu gula deoksiribosa, asam fosfat dan basa nitrogen. Protein inti merupakan struktur yang kompleks. Protein inti terdiri atas beberapa komponen, meliputi protamin, histon, protein non histon dan nukleohiston.
  • 59.
    HISTON • Bagian dariprotein inti yang berfungsi untuk mengikat DNA • Histon mengandung 20% hingga 30% arginin dan lisin. Selain itu, histon juga mengandung histidin. protein nonhiston adalah protein yang bersifat asam.
  • 60.
    Figure 19. Diagramof histones binding DNA. HISTON
  • 63.
    Antibody Origin of the name anti-CENP-B centromer-protein B anti-ds-DNA double stranded DNA anti-ss-DNA single stranded DNA anti-histone histone protein anti-Jo-1 patient name anti-Ku or anti-SL patient name or sicca lupus antigen anti-PM-Scl (PM1) polymyositis sclerodermie antigen 100 kDa anti-Scl-70 scleroderma antigen 70 kDa anti-Sm Smith-antigen anti-SS-A/Ro Robert-antigen or soluble substance A nuclear antigen anti-SS-B/La Lane-antigen or soluble substance B nuclear antigen ant-U1-snRNP small nuclear uridine-rich ribonucleoproteins PCNA proliferating cell nuclear antigen
  • 64.
    Antibody Function of the antigen Localization anti-CENP-B 80 kD protein of the centromer nucleus anti-ds-DNA tamplate for transcription and replication nucleus anti-histone components of chromatin nucleus anti-Jo-1 histidyl-tRNA synthetase nucleus and cytoplasma anti-Ku or anti-SL ? repair DNA termini nucleus anti-PM-Scl (PM1) Unknown nucleus anti-Scl-70 DNA topoisomerase I nucleus anti-Sm spliceosome components nucleus anti-SS-A/Ro Unknown nucleus and cytoplasma anti-SS-B/La transcription termination factor nucleus and cytoplasma ant-U1-snRNP spliceosome components nucleus PCNA auxiliary protein of DNA polymerase a nucleus
  • 65.
    PBS • is abuffer solution commonly used in biological research. • It is a water-based salt solution containing sodium chloride (NaCl), sodium phosphate, and (in some formulations) potassium chloride and potassium phosphate. • The buffer helps to maintain a constant pH. The osmolarity and ion concentrations of the solution usually match those of the human body (isotonic).
  • 66.
    PBS One of thecommon composition of PBS Salt Concentration Concentration (—) (mmol/L) (g/L) NaCl 137 8.00 KCl 2.7 0.20 Na2HPO4 • 2 H2O 8.1 1.44 KH2PO4 1.76 0.24 pH 7.4 7.4
  • 67.
    Fluorofor • FITC :hijau apel Mempunyai puncak eksitasi dan emisi pada panjang gelombang 495 nm/521 nm • Rhodamine isothiocyanate : jingga • Umbelliferone • Lanthanide chelates