Download to read offline
More Related Content
29932ip
- 1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН (19) KZ(13) A4 (11) 29932 (51) A61K 35/74 (2006.01) C12N 1/04 (2006.01) C12N 1/20 (2006.01) C12R 1/19 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ (21) 2014/0690.1 (22) 19.05.2014 (45) 15.06.2015, бюл. №6 (72) Бияшев Кадыр Бияшевич; Бияшев Биржан Кадырович; Макбуз Аманжол Жасбилим; Киркимбаева Жумагуль Слямбековна; Ермагамбетова Светлана Емелсовна; Сарыбаева Динара Амангельдиевна (73) Бияшев Кадыр Бияшевич (56) Инновационный патент №28311, 15.04.2014 г (54) ПРЕПАРАТ "АНТАКОН" ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ЖЕЛУДОЧНО- КИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ НОВОРОЖДЕННОГО МОЛОДНЯКА ЖИВОТНЫХ И ПТИЦ (57) Изобретение относится к области ветеринарии, в частности, к получению бактериального препарата для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний новорожденного молодняка животных и птиц. Препарат «Антакон» содержит лиофильно высушенную сухую массу из непатогенного штамма кишечной палочки, при этом в качестве основы препарата используют штамм Esherichia coli 64Г, являющегося представителем нормальной микрофлоры кишечника животных и птиц. Способ получения биопрепарата «Антакон» включает культивирование штамма в питательной среде, концентрирование, расфасовку во флаконы и лиофилизацию, при этом в качестве основы биопрепарата используют штамм Esherichia coli 64Г. Способ профилактики желудочно-кишечных заболеваний новорожденного молодняка животных и птиц включает однократное пероральное введение препарата «Антакон», причем препарат вводят телятам - 3*1010 К.О.Е.; ягнятам - 5*109 К.О.Е.; поросятам - 5*109 К.О.Е. и цыплятам - 109 К.О.Е. до первого кормления не позднее 30 минут после рождения. Полученный препарат «Антокон» обладает широким диапазоном антимикробного действия и высокой антагонистической активностью, повышает эффективность профилактики желудочно-кишечных заболеваний новорожденного молодняка животных и птиц. (19)KZ(13)A4(11)29932
- 2. 29932 2 Изобретение относится кобласти ветеринарии, в частности, к получению пробиотического препарата для лечения и профилактики желудочно- кишечных заболеваний новорожденного молодняка животных и птиц. Кишечные инфекции молодняка сельскохозяйственных животных и птиц наносят огромный ущерб животноводству вследствие высокой заболеваемости и падежа, затрат на лечебные мероприятия, снижения продуктивных качеств и племенной ценности животных, хотя в современных рыночных условиях ведения отрасли не представляется возможным оценить реальные масштабы экономических потерь, связанных с нарушением микроэкологии желудочно-кишечного тракта. В настоящее время на вооружении ветеринарной службы многих стран имеется достаточное количество пробиотических препаратов различного видового состава, предназначенных для профилактики желудочно-кишечных болезней молодняка животных и птицы. Однако мониторинг рынка пробиотиков показывает, что подавляющее большинство разработок не востребованы практикой. Указанное обстоятельство дает основание предполагать, что протективная активность многих пробиотических препаратов не обеспечивает заявляемого авторами эффекта. Пробиотические препараты на основе микроорганизмов родов бифидобактерии и лактобактерии являются видоспецифичными для того объекта, от кого они выделены. Известно, что род бифидобактерии объединяет 24 вида, род лактобактерии еще больше. Одни виды обитают только у животных определенных видов, другие - у животных многих видов, третьи - у животных и человека, четвертые - только у человека. Соответственно способность заселять кишечник у человека, животных или птиц различна. Препараты, включающие лакто - и бифидобактерии, могут быть неэффективны если производятся на основе медицинских или фармакологически неактивных в кишечнике животных и птицы штаммов микроорганизмов. Бактерии, составляющие основу препарата, должны отвечать следующим требованиям, предъявляемым к пробиотикам: являтся нормальными обитателями желудочно- кишечного тракта здоровых животных, быть непатогенными, нетоксичными; обладать способностью к адгезии на эпителии и приживанию в пищеварительном тракте; быть стабильными и способными длительное время оставаться жизнеспособными при хранении в производственных условиях. При селекции штаммов для пробиотиков необходимо обязательно учитывать эти и многие другие биологические свойства. Поэтому физиологическая активность и эффективность разных препаратов зависят от состава штаммов, технологии производства. Известно, что для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний животных применяют называемые пробиотические препараты бифидумбактерин, лактобактерин, споролакт, бификол, СБА активным началом которых является клетки живых бактерий - представители нормальной микрофлоры кишечника (Бифидобактерии и их использование в клинике, медицинской промышленности и сельском хозяйстве: Блохина И.Н., Дорофейчук В.Г. Дисбактериозы. Л., 1979; Антипов В., Субботин В.М. Эффективность и перспективы применения пробиотиков. - Ветеринария, 1980, №12; Сб. трудов МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского, 1986; Патент США №3876807, кл. C12N 1/20; Патент РФ №2018313, кл. С12N 1/20, 1994). Наиболее близкий по составу к предлагаемому препарат бифидумбактерин недостаточно эффективен в лечении и профилактике заболеваний, широко распространенных среди новорожденного молодняка животных и птиц. Имеет узкий спектр антагонистической активности, не обладает способностью к адгезии на эпителии и приживанию в пищеварительном тракте, коротким сроком жизнеспособности при хранении в производственных условиях, что значительно снижает лечебно-профилактическую эффективность препарата. Задачей изобретения является создание нового препарата - пробиотика «Антакон», обладающего широким диапазоном антимикробного действия и более высокой антагонистической активностью, способа получения препарата и способа лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний новорожденных животных и птиц. Препарат «Антакон» содержит лиофильно высушенную сухую массу из непатогенного штамма кишечной палочки, при этом в качестве основы биопрепарата используют штамм Escherichia coli 64Г, обладающий способностью к адгезии на эпителии и приживанию в пищеварительном тракте, продуцирующий микроцины, высокой антагонистической активностью по отношению к патогенным микроорганизмам, стабильностью аттенуации, маркировенный, способностью длительное время оставаться жизнеспособным при хранении в производственных условиях и эпизоотически безопасного для изготовления эффективного ветеринарного пробиотического препарата против желудочно-кишечных заболеваний новорожденных животных. (Инновационный патент №28311, зарегистрированный в Государственном реестре изобретений Республики Казахстан от 15.04.2014г.). Способ получения препарата «Антакон» включает культивирование штамма Е. coli 64Г в питательной среде, концентрирование, расфасовку во флаконы и лиофилизацию. Способ лечения и профилактики кишечных инфекций молодняка сельскохозяйственных животных и птиц включает однократное пероральное введение препарата «Антакон» новорожденным телятам, ягнятам, поросятам, цыплятам до первого кормления, не позднее 30 минут после рождения, в дозах: телятам - 3*1010
- 3. 29932 3 К.О.Е.; ягнятам -5*109 К.О.Е.; поросятам - 5*109 К.О.Е. и цыплятам - 109 К.О.Е. Штамм Escherichia coli 64Г получен генетическим методом из исходного производственного штамма Escherichia coli 64. Депонирован в ГУ «НЦМРЛДМВ» АПК МСХ РК в лаборатории «Национальная коллекция депонированных штаммов микроорганизмов» под номером 03-65. Присутствие в штамме E.coli 64Г двух мутаций, каждая из которых может снижать вирулентные свойства, служит убедительным доказательством стабильности и безопасности штамма-продуцента E.coli 64Г. Теоретическая частота обратной мутации одновременно по двум маркерам составляет примерно 10-20 , хотя практически невозможно. Наличие генетических маркеров позволяет дифференцировать штамм 64Г в лабораторных условиях на простых питательных средах в течение 16-20 часов от культур эпизоотического прототипа при подозрении на эшерихиоз или при выделении эшерихии в продуктах животного происхождения. Пример 1. Изготовление препарата. Штамм Esherichia coli 64Г засевают для получения матровой расплодки по 1 мл в два флакона с бульоном Хоттингера (объем среды 100 мл). Культуру выращивают в термостате 16-18 ч при 37-38°С (культура первичной генерации). Культуру первичной генерации проверяют на чистоту микроскопией мазков, окрашенных по Грамму и засевают 50 мл в бутыль, содержащую 10 л бульона Хоттингера, и культивируют 18-20 часов при 37°С (культура второй генерации). После проверки культуры второй генерации на чистоту и типичность роста выращивание культуры производят в АКМ-Ш (аппарат для культивирования микроорганизмов). С этой целью в АКМ-Ш, содержащий питательную среду в количестве 100-110 л, имеющую pH 7,6-7,8 в содержащую 200-250 мг% аминного азота, перекачивают матриксную культуру в объеме 8-10 л, которую распределяют по кюветам путем вращения аппарата и его лепестков. После 15-20- минутной выдержки посевного материала на кюветах излишек его сливают в бутыль. Выращивание культуры в аппарате производят в течение 16-18 ч под контролем приборов автоматики при температуре 37-38°С с 15-минутной аэрацией. После указанного срока выращивания бактериальной культуры в аппарат вводят стерильную смываемую жидкость (среду высушивания) в объеме 5-6 л и производят смыв путем вращения аппарата и его лепестков. Среда высушивания содержит 1,5-2% желатина, 10% - сахарозы, pH среды - 7,8-8,0. После проверки полученной микробной массы на чистоту и типичность роста ее доводит до концентрации 1010 К.О.Е. в 1 мл по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Тарасевича. Проверенную на стерильность, препарат расфасовывают в стерильные флаконы по 4 мл. Расфасовку препарата во флаконы проводят при непрерывном помешивании. Флаконы закрывают колпачками, подвергают замораживанию и высушиванию. День окончания лиофилизации считается датой изготовления препарата. Продолжительность сушки - 70-76 часов. После сушки флаконы с препаратом подают на закрутку колпачков. После закрытия флаконов проверяют визуально на отсутствие посторонней примеси, следов оттаивания, а при помощи аппарата Д*Арсонваля определяют наличие вакуума во флаконах и этикируют. Пример 2. Контроль препарата. Препарат проверяют на чистоту и типичность роста, безвредность и активность. Для определения чистоты и типичности роста используют 5 флаконов с препаратом. Содержимое каждого флакона разводят в 4 мл стерильного физиологического раствора. Проводят посев по 0,2 мл из каждого флакона на МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом, на агар Эндо. Через 24 часа на МПА в чашках Петри должен быть типичный рост полупрозрачных круглых колоний серого цвета с ровными краями штамма 64, на среде Эндо колонии малиново-красного цвета, в МПБ- равномерное помутнение. Препарат не должен содержать посторонней микрофлоры. Питательные среды с посевом выдерживают в течение 10 суток при температуре 37-38°С. Безвредность каждой серии препарата проверяют на 10 белых мышах массой 14-16 г, которым препарат вводят перорально, в дозе 107 К.О.Е. в объеме 0,2 мл. Для испытания используют два флакона препарата. Препарат считают безвредной, если в течение 10 суток наблюдения все подопытные белые мыши остаются живыми. Активность препарата проверяют на 10 белых мышах массой 14-16 г, которым препарат вводят перорально в дозе 107 К.О.Е. в объеме 0,5 мл. Спустя 24 часа всем подопытным (10) и 10 контрольным белым мышей вводят перорально вирулентную культуру Е. coli в смертельных дозах. Препарат считают активной при выживании всех подопытных и гибели не менее 8 контрольных мышей. Срок наблюдения 10 суток. Пример 3. Определение профилактической эффективности. Определение профилактической эффективности препарата из штамма Е. coli 64 проводили на новорожденных телятах, ягнятах, поросятах и цыплятах путем однократной пероральной выпойкой животных в соответствующих дозах (таб. 1). Спустя 24 часа опытным и контрольным животным вводили перорально вирулентную культуру в оттитрованной смертельной дозе. Результаты приведены в таблице 1. Как видно из данных табл. 1, оптимальной эффективной профилактической дозой препарата является телятам - 3*1010 К.О.Е.; ягнятам - 5*109 К.О.Е.; поросятам - 5*109 К.О.Е. и цыплятам- 109 К.О.Е. Пример 4. Определение лечебной эффективности. Определение лечебной эффективности препарата из штамма Е. coli 64 проводили на новорожденных телятах, ягнятах, поросятах и цыплятах. В начале
- 4. 29932 4 подопытным животным вводилиоднократно перорально вирулентные культуры сальмонелл, протеи, клебсиелл, бацилл, стрептококки в инфекцинирующих дозах (табл. 2). На 3 сутки после введения вирулентных культур опытным животным вводили перорально однократно препарат «Антакон». Контрольные животные препарат не получали. Результаты приведены в таблице 2. Как видно из данных табл. 2 препарат «Антакон» обладает высокой лечебной эффективностью. Пример 5. Применение препарата «Антакон» Препарат применяют с профилактической целью в хозяйствах, неблагополучных по желудочно- кишечным заболеваниям, вызванным патогенными микробами кишечной группы. Препарат «Антакон» показан новорожденным животным и птицам до первого кормления не позднее 30 минут после рождения. Препарат применяют однократно, перорально в дозах: телятам - 3*1010 К.О.Е.; ягнятам - 5*109 К.О.Е.; поросятам - 5*109 К.О.Е. и цыплятам - 109 К.О.Е. При необходимости рекомендуется повторное применение препарата через 3-5 суток. Срок годности препарата «Антакон» - 1 год со дня изготовления при условии хранения в сухом темном помещении при температуре + 4-15°С. Препарат «Антакон» безвреден для новорожденного молодняка сельскохозяйственных животных и птиц. Препарат апробирован в ряде хозяйств Республики Казахстан. Профилактическая эффективность препарата составляет 95-100%. Ожидаемый ежегодный экономический эффект от использования препарата «Антакон» составляет в среднем 70-90 тенге на один затраченный тенге. Полученный препарат «Антакон» обладает широким диапазоном антимикробного действия и высокой антагонистической активностью, повышает эффективность лечения и профилактики кишечных инфекций новорожденного молодняка сельскохозяйственных животных и птиц. Таблица 1. Вид Кол-во Доза Результат заражения вирулентной жив-го жив-го введения культурой Е. coli препарата Заражающая Пало Выжило Процент К.О.Е. доза, К.О.Е. выж-ти Телята 10 1010 2*1010 - 10 100 Телята 10 3*1010 2*1010 - 10 100 Телята 10 4*1010 2*1010 - 10 100 Телята 10 5*1010 2*1010 - 10 100 Телята 5 - 2*1010 5 - - (контроль) Ягнята 10 3*109 1010 - 10 100 Ягнята 10 5*109 1010 - 10 100 Ягнята 10 1010 1010 - 10 100 Ягнята 10 2*1010 1010 - 10 100 Ягнята 5 - 1010 5 - - (контроль) Поросята 10 3*109 1010 - 10 100 Поросята 10 5*109 1010 - 10 100 Поросята 10 1010 1010 - 10 100 Поросята 10 2*1010 1010 - 10 100 Поросята (контроль) 5 - 1010 5 - - Цыплята 10 5*108 109 - 10 100 Цыплята 10 109 109 - 10 100 Цыплята 10 2*109 109 - 10 100 Цыплята 10 3*109 109 - 10 100 Цыплята 10 - 109 10 - - (контроль) Таблица 2 Тест культуры (вирулентные) Результат введения препаратаВид жив-го Кол-во жив-го Наименование Доза введения К.О.Е. Доза введения К.О.Е. Пало Выжило % выж- ти Примечание Телята 5 S.typhimurium 109 4.1010 - 5 100 Телята 5 S.typhimurium 109 ----- 5 - --- на 7-8сут. Телята 5 P.vulgaris 109 4.1010 - 5 100 Телята 5 P.vulgaris 109 ----- 5 - --- на 6-8сут.
- 5. 29932 5 Тест культуры (вирулентные)Результат введения препаратаВид жив-го Кол-во жив-го Наименование Доза введения К.О.Е. Доза введения К.О.Е. Пало Выжило % выж- ти Примечание Телята 5 K.pneumoniae 109 4.1010 - 5 100 Телята 5 K.pneumoniae 109 ----- 5 - --- на 8-9сут. Телята 5 B.subtilis 109 4.1010 - 5 100 Телята 5 B.subtilis 109 ----- 5 - --- на 5-6сут. Телята 5 Strept. pneumoniae 109 4.1010 - 5 100 на 8-9сут. Телята 5 Strept. pneumoniae 109 ----- 5 - --- на 8-9сут. Ягнята 5 S.typhimurium 108 1010 - 5 100 Ягнята 5 S.typhimurium 108 ----- 5 - --- на 5-8сут. Ягнята 5 P.vulgaris 108 1010 - 5 100 Ягнята 5 P.vulgaris 108 ----- 5 - ---- на 6-8сут. Ягнята 5 K.pneumonia 108 1010 - 5 100 Ягнята 5 K.pneumonia 108 ----- 5 - ---- на 6-8сут Ягнята 5 B.subtilis 108 1010 - 5 100 Ягнята 5 B.subtilis 108 ----- 5 - --- на 6-8сут Ягнята 5 Strept. pneumoniae 108 1010 - 5 100 Ягнята 5 Strept. pneumoniae 108 ----- 5 - ---- на 6-8сут Поросята 5 S.typhimurium 108 1010 - 5 100 Поросята 5 S.typhimurium 108 ---- 5 - ---- на 4-7сут Поросята 5 P.vulgaris 108 1010 - 5 100 Поросята 5 P.vulgaris 108 ---- 5 - ---- на 7-8сут Поросята 5 K.pneumonia 108 1010 - 5 100 Поросята 5 K.pneumonia 108 ----- 5 - ---- на 6-8сут Поросята 5 B.subtilis 108 1010 - 5 100 Поросята 5 B.subtilis 108 ----- 5 - ---- на 6-8сут Поросята 5 Strept. pneumoniae 108 1010 - 5 100 ---Поросята 5 Strept. pneumoniae 108 ----- 5 - на 6-8сут Цыплята 10 S.typhimurium 106 109 10 10 100 Цыплята 10 S.typhimurium 106 109 10 10 ---- на 6-7сут Цыплята 10 P.vulgaris 106 109 10 10 100 Цыплята 10 P.vulgaris 106 109 10 10 ---- на 3-6сут Цыплята 10 K.pneumonia 106 109 10 10 100 Цыплята 10 K.pneumonia 106 1010 10 10 ---- на 5-7сут Цыплята 10 B.subtilis 106 1010 10 10 100 Цыплята 10 В.subtilis 106 1010 10 10 ---- на 5-7сут Цыплята 10 Strept. pneumoniae 108 1010 10 10 100 1010 Цыплята 10 Strept. pneumoniae 108 10 10 на 5-7сут ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Препарат «Антакон» для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний новорожденного молодняка сельскохозяйственных животных и птиц, содержащий лиофильно высушенную сухую массу из непатогенного штамма кишечной палочки, отличающийся тем, что в качестве основы препарата используют штамм Esherichia coli 64Г. 2. Способ получения препарата, включающий культивирование штамма в питательной среде, концентрирование, расфасовку во флаконы и лиофилизацию, отличающийся тем, что проводят культивирование штамма Esherichia coli 64Г. 3. Способ профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных и птиц, включающий однократное пероральное введение пробиотического препарата, отличающийся тем, что в качестве пробиотического препарата вводят препарат «Антакон» телятам - 3*1010 К.О.Е., ягнятам - 5*109 К.О.Е., поросятам - 5*109 К.О.Е. и цыплятам - 109 К.О.Е. до первого кормления не позднее 30 минут после рождения. Верстка Н.Киселева Корректор К.Нгметжанова