1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 28675
(51) A01P 7/04 (2006.01)
A61K 35/74 (2006.01)
КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ
МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2013/1138.1
(22) 29.08.2013
(45) 15.07.2014, бюл. №7
(72) Тен Олег Андреевич; Балпанов Дархан
Серикович; Чарыкова Ирина Владимировна;
Некрасова Нина Ивановна
(73) Товарищество с ограниченной
ответственностью "Научно-аналитический центр
"Биомедпрепарат"
(56) RU 2111667 С1,кл. A01N 63/00, 1998
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ
БИОЛОГИЧЕСКОГО ИНСЕКТИЦИДНОГО
ПРЕПАРАТА "БИОЛАРВИЦИД, ПАСТА"ДЛЯ
БОРЬБЫ С ЛИЧИНКАМИ РИСОВОГО
КОМАРИКА И КРОВОСОСУЩИХ КОМАРОВ
(57) Кровососущие комары являются
переносчиками более 150 возбудителей болезней
человека и теплокровных животных. Одним из
путей снижения риска заболевания человека и
животных трансмиссивными болезнями является
борьба с кровососущими комарами посредством
использования эффективных препаратов
химического и микробиологического синтеза.
Сущность изобретения: аспорогенный кристалл -
образующий штамм бактерии Bacillus thuringiensis
subsp israelensis 346-П выращивают в условиях
глубинного культивирования на жидкой
питательной среде, содержащей источники азота,
углерода и минеральных солей, полученную таким
образом культуральную жидкость концентрируют -
методом центрифугирования.
Далее в полученный концентрат
кристаллического комплекса культуры Bacillus
thuringiensis subsp israelensis шт. 346-П добавляют: в
качестве стабилизаторов и консервантов по 5%
сульфата аммония и хлористого натрия и 0,1%
уксусной кислоты для исключения развития
посторонней микрофлоры при любых
температурных условиях и стабилизации белка
энтомоцидного кристалла.
Полученный бактериальный инсектицидный
препарат «Биоларвицид, паста» обладает высокой
ларвицидной активностью по отношению к
личинкам комаров разных видов.
(19)KZ(13)A4(11)28675

2. 28675
2
Изобретение относится к биотехнологии, в
частности к производству биопестицидов на основе
живых культур микроорганизмов, и касается
способа получения эффективного бактериального
ларвицидного препарата для борьбы с личинками
рисового комарика и кровососущих комаров
(Aedes).
Повсюду имеются природные водоемы, которые
являются потенциальным источником заболеваний,
переносимых кровососущими комарами. Они
известны не только как назойливые кровососы
человека и животных, но и как переносчики
трансмиссивных заболеваний, т.е. таких
инфекционных и паразитарных болезней,
возбудителей которых переносят членистоногие. К
этим серьёзным заболеваниям относятся малярия,
филяриатозы, жёлтая лихорадка и лихорадка денге,
ряд энцефалитов человека и животных (японский,
Сан-Луи, западный и восточный лошадиные
энцефалиты), лихорадка долины Рифт, западно-
нильская лихорадка и другие заболевания.
Долгое время успешная борьба с комарами
велась различными химическими средствами. При
этом большой вред наносился другим обитателям
водоемов, в том числе рыбам.
Биопрепараты на основе Bacillus thuringensis
subsp israelensis обладают высокой токсичностью
только для комаров и мошек, но совершенно не
токсичны для других насекомых, обитающих в
водоемах, а также для рыб.
Известен препарат Бактокулицид, состоящий из
3,5-4,5% споротоксического комплекса,
Недостатком этого препарата является потеря 55%
активности через 60 дней после начала применения.
Данный препарат, состоящий из
спорокристаллического комплекса, остатков
питательной среды и наполнителя - хлористого
натрия (Патент RU 2111667 Биоларвицид для
борьбы с личинками комаров и способ его
получения). Недостатком этого препарата является,
то, что штамм - продуцент, являющийся его
основой, проявляет довольно высокие требования к
источникам питания, что затрудняет
широкомасштабное производство препарата.
Задачей изобретения является создание
технологичного способа получения эффективного
ларвицидного препарата, сохраняющего
энтомоцидную активность в отношении личинок
комаров разных видов, но не являющийся
спорогенным, соответственно экологически чистым.
Указанная задача решается за счет:
-использования в качестве основы препарата
аспорогенного кристалл-образующего штамма
Bacillus thuringensis subsp israelensis 346-П
обладающего высокой ларвицидной активностью в
отношении личинок комаров разных видов;
- выращивание штамма на оптимизированных
питательных средах на основе соевой муки,
кукурузного крахмала, глюкозы и минеральных
солей, обеспечивающей высокий выход целевого
продукта (кристаллов белка 5 -эндотоксина);
- применение глубинного способа
культивирования, обеспечивающего интенсивный
рост, кристалл - образование культуры и синтез
дельта -эндотоксина при длительности
культивирования 44 - 46 ч;
- проведение режима при непрерывном
перемешивании с частотой вращения ротора
мешалки 220 - 260 об/мин; аэрации с расходом
1÷1,5 л воздуха/1 л среды в минуту и
термостатировании (29 ± 1)°С;
- оптимизацию препаративной формы путем
концентрирования КЖ методом центрифугирования
при 3000 оборотах/мин в течение 30 минут с целью
получения пасты;
- добавление: в качестве стабилизаторов и
консервантов по 5% сульфата аммония и хлористого
натрия и 0,1% уксусной кислоты для исключения
развития посторонней микрофлоры при любых
температурных условиях и стабилизации белка
энтомоцидного кристалла.
Суть предлагаемого изобретения
иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1.
Для создания оптимальной питательной среды,
состав которой мог бы полностью удовлетворять
пищевые потребности культуры Bacillus thuringensis
subsp israelensis 346-П и способствовать
максимальному накоплению ларвицидной
активности подбирали источники углерода и
органического азота, которые оказывают
существенное влияние на продукцию бактериями
целевого продукта (кристаллов белка 5 -
эндотоксина).
В ходе дальнейшей оптимизации условий
культивирования нами было изучено влияние
различных источников углерода, азота, энергии на
синтез белка дельта-эндотоксина (табл. 1).
Таблица 1
Состав питательных сред для культивирования и показатели
Компоненты питательных сред,
%
Варианты сред
КДПС
(К)
Ф346
обогащенная
КДКМ Ф346
IVM
Кормовые дрожжи 3,0 3,0
Кукурузная мука 1,5 1,5
Соевая мука 3,5 2,0
Крахмал кукурузный 1,2

3. 28675
3
Компоненты питательных сред,
%
Варианты сред
КДПС
(К)
Ф346
обогащенная
КДКМ Ф346
IVM
Крахмал картофельный 1,0
Глюкоза 0,7
СаСl2 0,15 0,008 0,008 0,008
MnSO4 0,008 0,008 0,008
K2НРО4 0,13
NaCl 0,05
Mg SO4 0,02 0,02 0,02 0,02
Солодовый экстракт 0,8
Вода водопроводная до 100%
Показатели продуктивности, содержание белка дельта-эндотоксина, мг/мл
Bacillus thuringiensis subsp
israelensis шт. 346-П
6,8±0,27 10,5±0,42 7,52±0,31 8,7±0,26
Как видно из полученных данных
продуктивность культуры по содержанию белка
дельта-эндотоксина на питательной среде Ф346 -
IVM (на основе соевой муки, кукурузного крахмала,
солодового экстракта и минеральных солей) в
среднем составила 8,7 мг/мл, на питательной среде
Ф346 обогащенной (на основе соевой муки,
кукурузного крахмала, глюкозы и минеральных
солей) - 10,5 мг/мл и превысила продуктивность
контрольной паспортной среды КДПС (содержание
белка - 6,8 мг/мл) - в 1,54 раза.
На основании полученных результатов, а также с
целью повышения технико-экономических
показателей процесса для культивирования штамма
Bacillus thuringensis subsp israelensis 346-П отобрана
питательная среда Ф346 обогащенная.
Пример 1.
Бактериальный инсектицидный препарат
«Биоларвицид, паста» применялся для обработки
рисовых чеков против личинок рисового комарика
{Chironomus sp. Cricotopus) в Караутюбинском
опорном пункте ТОО «Казахский научно-
исследовательский институт рисоводства им.
И.Жихаева» Кызылординской области.
Обработка посева бактериальным
инсектицидным препаратом «Биоларвицид, паста»
проводилась в фазе массовых всходов риса, что
совпадает с периодом наибольшей вредоносности
личинок рисового комарика.
Результаты показали, что бактериальный
инсектицидный препарат «Биоларвицид, паста»
обладает достаточно высокой биологической
эффективностью (табл. 2).
Таблица 2
Биологическая эффективность бактериального инсектицидного препарата «Биоларвицид, паста» в борьбе с
рисовым комариком на посевах риса
Варианты опыта Норма расхода Повреждение растений
рисовым комариком, %
Биологическая
эффективность, %
Контроль (без обработки) 25,0 -
Актеллик (эталон) 500 -
химический инсектицид
0,05 мл/м2
3,9 84,4
Биоларвицид, паста -
биоинсектицид
0,2 г/м2
4,4 82,4
Биоларвицид, паста -
биоинсектицид
0,4 г/м2
2,4 84,0
Растения опытного участка, где проводился
эксперимент, сильно повреждены рисовым
комариком, в контрольном варианте из взошедших
всходов 25% повреждены. Опрыскивание
бактериальным инсектицидным препаратом
«Биоларвицид, паста» снизило повреждение
растений риса до 4,4 -4,0%, при этом биологическая
эффективность составила, при применении
биопрепарата Биоларвицид, в дозе 0,2 г/м2
- 82,4%, а
при дозе 0,4 г/м2
-84,0%, при применении
химического инсектицида - эталона Актеллик, в
норме расхода 0,05 мл/м2
- 84,4%. По биологической
эффективности препарат «Биоларвицид, паста» не
уступает сильному химическому инсектициду
Актеллик, что положительно отразилось на урожае
риса (табл.3).

4. 28675
4
Таблица 3
Хозяйственная эффективность бактериального инсектицидного препарата «Биоларвицид, паста»
Варианты опыта Норма расхода Урожай, ц/га Прибавка урожая к
контролю, ц/га
Хозяйственная
эффективность, %
Контроль (без
обработки)
- 19,1 - -
Актеллик (эталон)
500 - химический
инсектицид
0,05 мл/м2
29,9 10,8 56,5
Биоларвицид, паста
биоинсектицид
0,2 г/м2
27,6 8,5 44,5
Биоларвицид, паста
биоинсектицид
0,4 г/м2
29,8 10,7 56,5
Применение бактериального инсектицидного
препарата «Биоларвицид, паста» способствовало
повышению урожайности риса. Так на варианте, где
обработано препаратом Биоларвицид с нормой
расхода 0,2 - 0,4 г/м2
, урожайность риса составила
соответственно 27,6 и 29,8 ц/га, это на 8,5 и 10,7 ц/га
выше чем в контроле (19,1 ц/га), что повысило
хозяйственную эффективность препарата до 44,5 -
56,0%. На варианте, где в качестве эталона
применен химический инсектицид Актеллик с дозой
0,05 мл/м2
прибавка урожая составила 10,8 ц/га.
При использовании биологического
инсектицидного препарата «Биоларвицид, паста»
для борьбы с личинками рисового комарика и
кровососущих комаров, изготовленного способом,
включающим глубинное культивирование
аспорогенного кристалл - образующего штамма
Bacillus thuringensis subsp israelensis 346-П на
оптимизированной питательной среде па основе
соевой муки, кукурузного крахмала, глюкозы и
минеральных солей с последующим
концентрированием и стабилизацией до
пастообразного состояния, с использованием в
качестве стабилизаторов и консервантов по 5%
сульфата аммония и хлористого натрия и 0,1%
уксусной кислоты достигается высокая
биологическая эффективность препарата 82, 4 -
84,0%).
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ получения биологического
инсектицидного препарата для борьбы с личинками
рисового комарика и кровососущих комаров,
включающий глубинное культивирование
аспорогенного кристалл-образующего штамма
Bacillus thuringensis subsp israelensis 346-П на
оптимизированной питательной среде, на основе
соевой муки, кукурузного крахмала, глюкозы и
минеральных солей с последующим
концентрированием и стабилизацией до
пастообразного состояния, отличающийся тем, что
в качестве стабилизаторов и консервантов
используют по 5% сульфата аммония и хлористого
натрия и 0,1% уксусной кислоты для исключения
развития посторонней микрофлоры при любых
температурных условиях и стабилизации белка
энтомоцидного кристалла.
Верстка Ж. Жомартбек
Корректор Е. Барч