Этот документ представляет руководство по производству и контролю качества лекарственных препаратов, полученных с использованием технологии рекомбинантной ДНК (рДНК) в соответствии с директивами Европейского Союза. Он включает рекомендации по генетической разработке, контролю банков клеток, ферментации и очистке продукции, а также уделяет внимание важным аспектам контроля качества для обеспечения безопасности и эффективности лекарственных средств. Основная цель руководства - предоставить структурированные данные для регистрации полипептидных препаратов на основе рДНК, предназначенных для медицинского применения.

1. 1
пробная версия документа. По вопросам демо и приобретения писать на sales@pharmadvisor.ru
ПРОИЗВОДСТВО И КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ, ПОЛУЧЕННЫХ
ПО ТЕХНОЛОГИИ РЕКОМБИНАНТНОЙ ДНК
Название руководства Производство и контроль качества лекарственных препаратов,
полученных по технологии рекомбинантной ДНК
Законодательная база Директива 75/318/EEC1
с изменениями
Дата первого принятия Впервые принято в июне 1987 г.
Текущая версия принята в декабре 1994 г.
Дата вступления в силу Июль 1995 г.
Статус Последний пересмотр в декабре 1994 г.
Прежнее название/
прочие ссылки
III/3477/92
Дополнительные
примечания
Настоящее руководство направлено на содействие сбору и
подаче данных в обоснование заявлений о регистрации
полипептидных препаратов, полученных по технологии рДНК и
предназначенных для медицинского применения, в пределах
ЕЭЗ. Оно затрагивает применение разделов A–E части 2
Дополнения к Директиве 75/318/EEC2
с изменениями для целей
регистрации нового лекарственного препарата, полученного по
технологии рДНК.
СОДЕРЖАНИЕ
1. ВВЕДЕНИЕ
2. ВОПРОСЫ, ТРЕБУЮЩИЕ РАССМОТРЕНИЯ ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ
3. ГЕНЕТИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА
4. КОНТРОЛЬ БАНКОВ КЛЕТОК
5. ФЕРМЕНТАЦИЯ/КУЛЬТИВИРОВАНИЕ КЛЕТОК
6. ОЧИСТКА ПРОДУКТА
7. ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ СУБСТАНЦИЯ
8. ПОСТОЯНСТВО СВОЙСТВ И РУТИННЫЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА СЕРИЙ
НЕРАСФАСОВАННОЙ ГОТОВОЙ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ СУБСТАНЦИИ
9. СПЕЦИФИКАЦИЯ И СТАНДАРТНЫЕ МАТЕРИАЛЫ
10. ГОТОВЫЙ ПРЕПАРАТ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА
1
Утратила силу, и заменена Директивой 2001/83/EC с изменениями.
2
Ныне соответствуют Модулю 3 Общего технического документа.

2. 2
пробная версия документа. По вопросам демо и приобретения писать на sales@pharmadvisor.ru
ПРОИЗВОДСТВО И КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ, ПОЛУЧЕННЫХ
ПО ТЕХНОЛОГИИ РЕКОМБИНАНТНОЙ ДНК
1. ВВЕДЕНИЕ
Достижения молекулярной генетики и химии нуклеиновых кислот сделали возможным
идентификацию, подробный анализ, передачу между организмами и экспрессию в
контролируемых условиях генов, кодирующих естественные, биологически активные белки, в
целях синтеза соответствующего полипептида.
На сегодняшний день с помощью подобной технологии рекомбинантной ДНК (рДНК) можно
произвести достаточное количество лекарственных препаратов, которые ранее было сложно
получить из естественных источников. Кроме того, возможность синтезировать нуклеиновые
кислоты и осуществлять над ними манипуляции позволяет конструировать гены, кодирующие
модифицированные продукты, обладающие отличными от их естественных аналогов свойствами,
или даже принципиально новые продукты.
Стандартная стратегия разработки препаратов на основе рДНК заключается во внедрении
естественно встречающихся или преднамеренно модифицированных естественных
последовательностей или новых нуклеотидных последовательностей в вектор, который вносится в
подходящий организм хозяина, чтобы обеспечить эффективную экспрессию желаемого продукта
гена. Разработаны как прокариотические, так и эукариотические экспрессирующие системы
вектор/клетка-хозяин, которые используются в производстве. Факторы, влияющие на экспрессию
чужеродных генов, введенных в нового хозяина с использованием подходящего вектора, являются
сложными, поэтому важным аспектом разработки препарата является эффективная,
контролируемая экспрессия стабильных, клонированных ДНК-последовательностей.
В целях контроля качества этих препаратов необходимо придерживаться гибкого подхода, чтобы
по мере накопления опыта производства и применения, а также вследствие разработки новых
технологий можно было модифицировать приведенные рекомендации. Реализация этих
рекомендаций в отношении отдельного препарата должна отражать предполагаемое клиническое
применение.
Настоящее руководство предназначено для содействия сбору и подаче данных в обоснование
заявлений о регистрации препаратов на основе полипептидов, полученных по технологии рДНК и
предназначенных для медицинского применения, в Европейском Союзе. Оно неразрывно связано
с Европейскими Директивами и прочими специализированными руководствами.
2. ВОПРОСЫ, ТРЕБУЮЩИЕ РАССМОТРЕНИЯ ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ
На производство препаратов, полученных по методологии рДНК, распространяются
рекомендации для предприятий, на которых производятся биологические препараты (например,
Директива 91/356/EEC по GMP и Директива 90/219/EEC по ограниченному использованию
генетически модифицированных организмов), равно как и некоторые общие рекомендации по
контролю качества биологических препаратов.
Так, необходимо уделить должное внимание качеству всех реактивов, используемых в
производстве, включая компоненты среды культивирования; спецификации на них необходимо
включить в документацию, они должны соответствовать всем действующим европейским
рекомендациям (например, Руководству по минимизации риска передачи агентов губчатой
энцефалопатии животных посредством лекарственных препаратов для медицинского и
ветеринарного применения).
Испытания на активность, аномальную токсичность, пирогенность, стерильность и т.д.,
применяющиеся к препаратам, полученным стандартными методами, равным образом
применяются к препаратам, полученным по технологии рДНК. Использовать в производстве

3. 3
пробная версия документа. По вопросам демо и приобретения писать на sales@pharmadvisor.ru
агенты, известные своей способностью вызывать сенсибилизацию у некоторых лиц, такие как
пенициллин или другие -лактамные антибиотики, не рекомендуется.
Несмотря на важность всестороннего описания свойств готового препарата, необходимо уделить
большое внимание «внутрипроизводственному» контролю — концепции, которая показала свою
высокую эффективность для контроля качества бактериальных и вирусных вакцин, получаемых
стандартными методами.
Некоторые факторы способны негативно сказаться на постоянстве, безопасности и эффективности
препаратов рДНК, им необходимо уделить особое внимание (перечислены ниже):
a) Всем биологическим системам свойственна генетическая изменчивость, обусловленная
мутациями и селекцией; внедрение чужеродных генов в новые клетки хозяина может
увеличить генетическую нестабильность. Цель молекулярно-генетических исследований —
подтвердить то, что была получена правильная последовательность, которая была внедрена в
клетку-хозяина, а также, что как структура, так и количество копий внедренной
последовательности сохраняется в клетке в ходе культивирования до завершения
производства. Подобные исследования служат источником ценных сведений, которые вместе с
проведенными испытаниями на уровне белка необходимо учитывать при обеспечении
качества и постоянства свойств препарата.
b) Продукты, экспрессируемые чужеродными хозяевами, могут отличаться от их естественных
аналогов структурно, биологически или иммунологически. Подобные изменения могут
возникать на посттрансляционном уровне или в ходе производства или очистки и могут
приводить к нежелательным клиническим явлениям. В связи с этим их присутствие следует
обосновать и подтвердить наличие постоянного контроля над их содержанием.
c) Выбор технологии производства влияет на свойства, разнообразие и количество
потенциальных примесей в готовом препарате, а также определяет, в отношении каких
процессов очистки необходимо подтверждать их способность элиминировать примеси.
Примерами служат эндотоксины в препаратах, полученных из бактериальных клеток, и
посторонние агенты и ДНК в препаратах, получаемых из клеток млекопитающих.
d) Нежелательная вариация культуры в ходе производства может привести к изменениям,
которые будут благоприятствовать экспрессии других генов системы хозяин/вектор или
которые нарушат свойства препарата. Подобная вариация может приводить к различному
выходу продукта, изменению самого препарата (например, характер и степень
гликозилирования) и (или) качественным и количественным различиям в содержании
примесей. Вследствие этого обязательны процедуры, обеспечивающие постоянство условий
производства, а также готового препарата.
e) По мере перехода от лабораторной разработки к полномасштабному промышленному
производству происходит существенное укрупнение процессов ферментации и (или) очистки,
что может привести к значимым последствиям для качества препарата, включая влияние на его
конформационную структуру, выход и (или) качественные и количественные различия в
примесях. В связи с этим, в целях обеспечения эквивалентности, в ходе каждого
производственного цикла необходимы достаточные внутрипроизводственные контроли и
испытания по контролю качества.
Несмотря на то что рекомендации, изложенные ниже, следует рассматривать в качестве
общеприменимых, отдельные препараты при контроле качества могут вызывать существенные
затруднения. Таким образом, производству и контролю качества каждого препарата необходимо
уделять особое внимание, полностью учитывая все индивидуальные характеристики.
3. ГЕНЕТИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА
3.1 Искомый ген, вектор и клетка-хозяин
Необходимо представить подробное описание клонированного гена. Оно должно включать
сведения о его происхождении, идентификации и выделении, а также сведения о происхождении и
структуре экспрессирующего вектора. Необходимо представить описание штамма-хозяина или

4. 4
пробная версия документа. По вопросам демо и приобретения писать на sales@pharmadvisor.ru
клеточной линии, включая историю штамма или клеточной линии, их идентификационные
характеристики и потенциальные вирусные контаминанты. Особое внимание следует уделить
возможности перекрестной контаминации другими клетками или вирусами.
3.2 Экспрессирующая конструкция
В целях подтверждения, что конструкция идентична желаемой, необходимо представить полное
описание нуклеотидной последовательности искомого гена и фланкирующих контрольных
участков экспрессирующего вектора. Необходимо подробно описать этапы сборки
экспрессирующей конструкции. Необходимо представить детальную карту и полную
аннотированную последовательность функционально значимых участков вектора с указанием
участков, секвенированных в ходе конструкции, и участков взятых из литературы. Все
сочленения, полученные путем лигирования конструкции, напрямую попадающие в экспрессию
вставленного гена, следует подтвердить путем секвенирования. Необходимо идентифицировать
все известные последовательности, подвергающиеся экспрессии.
3.3 Статус рДНК внутри клетки-хозяина
Необходимо описать метод введения вектора в клетку-хозяина и статус рДНК внутри нее
(интегрирована или вне хромосомы, количество копий и т.д.). В отношении внехромосомных
экспрессирующих систем необходимо определить долю клеток-хозяев, сохраняющих
экспрессирующую конструкцию. Последовательность экспрессирующей конструкции,
кодирующую рекомбинантного продукта, необходимо верифицировать на этапе банков клеток. В
системах, в которых содержится множество интегрированных копий гена, которые могут быть
(или не быть) результатом амплификации, в целях получения убедительных данных о сохранности
экспрессирующего(их)ся гена(ов) помимо анализа последовательности молекул мРНК и кДНК
необходимо провести подробное исследование с использованием различных ферментов
рестрикции и Саузерн-блоттинга.
3.4 Экспрессия
Необходимо подробно описать стратегию обеспечения и контроля экспрессии релевантного гена в
ходе производства.
3.5 Стабильность экспрессирующей системы
Стабильность генетических и фенотипических характеристик хозяина/вектора необходимо
изучить до и после достижения удвоения популяции или числа поколений, используемого в
рутинном производстве (послепроизводственные клетки). В отношении каждого ГБК, по меньшей
мере, однократно необходимо проанализировать экспрессирующую конструкцию
послепроизводственных клеток.
По результатам исследований стабильности необходимо также получить подробные сведения о:
i) количестве копий генов по отношению к производительности клеточной культуры,
ii) делециях и (или) вставках, влияющих на какую-либо часть экспрессирующего вектора,
iii) полученном белке.
С этой целью, анализ следует проводить таким образом, чтобы результаты могли подтвердить, что
число вариантов ниже допустимого предела, который определяется в индивидуальном порядке в
зависимости от свойств препарата и его предлагаемого применения. Возможен анализ на уровне
белка и (или) ДНК. Независимо от использованного метода его необходимо валидировать и
указать предел обнаружения.
4. КОНТРОЛЬ БАНКОВ КЛЕТОК
Производство необходимо осуществлять на хорошо описанной системе главных и рабочих банков
клеток. При формировании банков не допускается одновременно работать с другими клеточными
линиями в той же лаборатории или тем же персоналом. Необходимо всестороннее описать
происхождение, форму, хранение, использование и ожидаемую продолжительность при

5. 5
пробная версия документа. По вопросам демо и приобретения писать на sales@pharmadvisor.ru
предполагаемой скорости использования всех банков клеток. Необходимо всесторонне описать
свойства новых рабочих банков клеток.
Критическая часть контроля качества включает полное описание клеток. Если в производстве
используются эукариотические клетки, в целях установления их подлинности ценными являются
отличительные генетические, фенотипические и иммунологические клеточные маркеры.
Аналогично, при использовании микробных культур необходимо описать специфичные
фенотипические характеристики, формирующие основу для идентификации.
Банки клеток следует испытать на предмет посторонних агентов (вирусных, бактериальных,
грибковых и микоплазменных). Особое внимание следует уделить вирусам, которые часто
заражают животных, из которых получены клеточные линии. Некоторые клеточные линии
содержат эндогенные вирусы, например, ретровирусы, которые иногда сложно элиминировать.
Необходимо учесть возможность мутаций эндогенных вирусов при длительном культивировании.
Более того, необходимо показать, что процесс очистки способен удалять и (или) инактивировать
любой такой вирус, который неизбежно присутствует в клетках в качестве эндогенного агента.
Банки клеток следует периодически испытывать на жизнеспособность, генетическую и
фенотипическую стабильность клеток и прочие релевантные параметры.
5. ФЕРМЕНТАЦИЯ/КУЛЬТИВИРОВАНИЕ КЛЕТОК
Необходимо дать четкое определение «серии» продукта, который подвергнется дальнейшей
обработке.
Независимо от процесса производства необходимо представить сведения о ферментации или
культивировании вместе с внутрипроизводственными контролями. Необходимо определить
критерии выбраковки сбора и досрочного прекращения культивирования.
На соответствующей стадии в конце каждого производственного цикла необходимо тщательно
изучить наличие, степень и природу любого микробного загрязнения емкостей для
культивирования. Необходимо представить подробные сведения, подтверждающие достаточную
чувствительность методов, использованных для обнаружения контаминации, и установить
допустимые пределы контаминации.
В идеале, в одной производственной зоне одновременно следует культивировать не более одной
клеточной линии. Если параллельно культивируются другие клеточные линии, необходимо вести
запись работы с клеточными линиями и представлять валидационные данные, подтверждающие
отсутствие перекрестной контаминации между ними.
5.1 Производство с однократным сбором
Необходимо определить максимально допустимое количество поколений или уровень удвоений
популяций при производстве, которые должны основываться на сведениях о стабильности
системы клетка-хозяин/вектор на предельном для производства клеточном возрасте in vitro и сверх
него. Необходимо представить данные об постоянстве роста культуры и поддержании выхода в
оговоренных пределах. Необходимо также осуществлять надлежащее наблюдение за
характеристиками клетки-хозяина/вектора в конце производственных циклов. Необходимо
представить подтверждение того, что вариабельность выхода не превышает установленные
пределы и что характер и качество препарата по определенным параметрам не меняются.
5.2 Производство с многократным сбором
Необходимо указать период непрерывного культивирования, который должен основываться на
сведениях о стабильности системы и постоянстве качества продукта до и сверх этого предела.
Необходимо осуществлять наблюдение за системой производства на протяжении
культивирования. Требуемая частота и вид наблюдения будут зависеть от ряда факторов, включая
природу экспрессирующей системы и препарата, а также общую продолжительность периода
непрерывного культивирования. Приемлемость сборов для последующей обработки должна
строго зависеть от использующегося режима наблюдения. Необходимо представить
подтверждение того, что вариабельность выхода не превышает установленные пределы и что
характер и качество препарата по определенным параметрам не меняются.

6. 6
пробная версия документа. По вопросам демо и приобретения писать на sales@pharmadvisor.ru
6. ОЧИСТКА ПРОДУКТА
6.1 Методы
Необходимо подробно описать, обосновать и валидировать методы очистки продукта и их
внутрипроизводственные контроли, включая пределы их спецификаций. Процедуры,
позволяющие использовать аффинную хроматографию, например, применение моноклональных
антител, должны сопровождаться надлежащими мерами, обеспечивающими отсутствие
негативного влияния этих веществ и любых других потенциальных контаминантов, образующихся
при их применении, на качество и безопасность готового препарата. Следует учитывать
руководства «Производство и контроль качества моноклональных антител» и «Руководство по
валидационным исследованиям на вирусы: дизайн, вклад и интерпретация исследований,
направленных на валидацию инактивации и элиминации вирусов».
Необходимо тщательно описать, валидировать и обосновать критерии повторной обработки
любого промежуточного или готового нерасфасованного материала.
6.2 Валидация процедуры очистки
Необходимо тщательно изучить возможности процесса очистки элиминировать проистекающие из
клетки-хозяина нежелательные белки, нуклеиновые кислоты, углеводы, вирусы и другие примеси,
включая родственные белки.
Необходимо провести исследования с использованием тщательно подобранной группы вирусов,
обладающих широким диапазоном физико-химических свойств, значимых для их поведения в
ходе очистки (см. «Руководство по валидационным исследованиям на вирусы: дизайн, вклад и
интерпретация исследований, направленных на валидацию инактивации и элиминации вирусов»),
намеренно привнесенных в неочищенный продукт (spiking). Необходимо также подтвердить
способность процесса очистки элиминировать/инактивировать прочие специфичные
контаминанты, такие как белки клетки-хозяина, прочие потенциальные производственные
примеси и ДНК, используя, при необходимости, избыточные по отношению к ожидаемым в ходе
нормального производства концентрации таких контаминантов. Необходимо определить фактор
снижения содержания таких контаминантов на каждом этапе очистки и суммарно.
Валидация процесса очистки также должна включать обоснование рабочих условий, таких как
емкости колонок, регенерация и очистка колонок и продолжительность их использования.
Колонки также необходимо валидировать на предмет вымывания лигандов (например, красителя
(пигмента), лиганда аффинности и т.д.) и (или) хроматографического материала на протяжении
ожидаемого срока службы колонки.
7. ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ СУБСТАНЦИЯ
7.1 Установление характеристик фармацевтической субстанции
7.1.1 Описание физико-химических свойств, относительная молекулярная масса, значение
pI
С помощью химических и биологических методов необходимо подробно установить
характеристики фармацевтической субстанции. Особое внимание следует уделить использованию
широкого набора аналитических методик, основанных на определении разных физико-химических
свойств молекулы, например, размера, заряда, изоэлектрической точки и гидрофобности.
Перечень аналитических возможностей не является предметом настоящего руководства. Далее
представлены лишь примеры разновидностей анализа.
7.1.2 Подтверждение структуры фармацевтической субстанции (включая сравнение со
стандартным образцом или естественным продуктом)
Необходимо получить достаточные сведения о последовательности, чтобы должным образом
охарактеризовать продукт гена. Необходимая степень верификации последовательности зависит
от величины и сложности молекулы и объема других испытаний по установлению характеристик.
В большинстве случаев определения всей последовательности можно достичь с помощью ВЭЖХ-
разделения и секвенирования пептидов, высвобожденных при ферментативном расщеплении.

7. 7
пробная версия документа. По вопросам демо и приобретения писать на sales@pharmadvisor.ru
Необходимо уделить внимание возможному присутствию N-терминального метионина и N-
формилметионина, сигнальным и лидерным последовательностям, прочим возможным N- и C-
концевым модификациям (протеолитический процессинг). При описании первичной структуры
необходимо использовать интегральную современную масс-спектрометрическую методологию.
7.1.3 Посттрансляционные модификации
Помимо протеолитического процессинга, потенциальными видами посттрансляционных
модификаций являются N- и O-гликозилирование и, к примеру, ацетилирование,
гидроксилирование и -карбоксилирование. Кроме того, существуют посттрансляционные
модификации, представляющие собой продукты деградации, образующиеся вследствие
дезаминирования и окисления.
Некоторые препараты рДНК являются гликопротеинами. Существует огромное множество
олигосахаридных структур, которые характеризуются гетерогенностью гликоформ как в их
естественной форме, так и образующиеся по технологии рДНК. На характер такой гетерогенности
влияют множество факторов, а профиль гликозилирования может играть важную роль в
реализации активности, особенно in vivo. Объем проводимого анализа зависит от роли, которую
играют углеводные группы, если она известна. Необходимо рассмотреть различные аналитические
методики, например, количественное изоэлектрическое фокусирование или капиллярный
электрофорез, анионообменная хроматография (в целях анализа моносахаридных компонентов и
определения олигосахаридов), лектиновая аффинная хроматография, масс-спектрометрия.
7.1.4 Конформационные данные о макромолекулах
В целях установления того, что продукт обладает желаемой конформационной структурой и
степенью агрегированности, рекомендуется включить подходящие испытания. Примерами
методик, подходящих для этих целей являются: электрофорез в полиакриламидном геле,
изоэлектрическое фокусирование, эксклюзионная, обращено-фазная ионообменная, гидрофобная
и аффинная хроматография, пептидное картирование с последующим аминокислотным
секвенированием, светорассеяние, УФ-спектроскопия, круговой дихроизм и масс-спектрометрия.
Источником ценных сведений могут служить дополнительное описание свойств продукта с
помощью, к примеру, ЯМР-спектров, рентгеновской кристаллографии и соответствующих
иммунохимических методов.
7.1.5 Установление биологических, иммунологических свойств, выражение дозировки
Установление биологических и иммунологических свойств следует проводить с помощью
множества соответствующих методик. Необходимо определить специфическую активность
высокоочищенного материала (единицы активности/масса препарата).
Если применимо, биологическую активность продукта и его физические характеристики, включая
аминокислотную последовательность, необходимо сравнить с таковыми высокоочищенного
продукта естественно встречающейся молекулы.
7.2 Чистота
Необходимо представить данные о контаминантах, присутствие которых ожидается в готовом
обработанном продукте. Необходимо обосновать степень контаминации, рассматриваемую в
качестве приемлемой; необходимо представить критерии приемлемости и отбраковки
промышленной серии. Методики, использованные для подтверждения чистоты, должны пройти
оценку с помощью широкого, насколько это возможно, круга методов, включая физико-
химические и иммунологические методики. Необходимо провести испытания на предмет
нежелательных материалов хозяина, а также материалов, которые могли быть привнесены в ходе
процессов производства или очистки, и, если применимо, контаминации вирусами и
нуклеиновыми кислотами.
8. ПОСТОЯНСТВО СВОЙСТВ И РУТИННЫЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА СЕРИЙ
НЕРАСФАСОВАННОЙ ГОТОВОЙ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ СУБСТАНЦИИ
В целях установления постоянства характеристик подлинности, чистоты и активности необходимо
провести всесторонний анализ начальных серий продукта. Впоследствии можно будет

8. 8
пробная версия документа. По вопросам демо и приобретения писать на sales@pharmadvisor.ru
ограничиться сокращенным набором испытаний, описанным ниже. Необходимо четко различать
аналитические испытания, проведенные на этапе разработки в целях полного установления
свойств фармацевтической субстанции, и испытания, рутинно проводимые с каждой
промышленной серией очищенного нерасфасованного продукта.
8.1 Постоянство свойств
В целях установления постоянства состава необходимо как можно более полно охарактеризовать
приемлемое количество, например, 5 (при достаточном обосновании могут быть приемлемы
меньшие количества) последовательных серий нерасфасованного обработанного продукта. Если в
производстве используется множество сборов, необходимо, как правило, исследовать серии,
полученные из разных ферментационных циклов. Исследования должны включать биологические,
химические и иммунологические методы характеристики и количественного определения
фармацевтической субстанции (включая методы, подтверждающие постоянство профиля
гликозилирования гликопротеинов) и методы обнаружения и идентификации примесей.
Необходимо документировать все найденные между сериями различия.
8.2 Рутинный серийный контроль качества
8.2.1 Подлинность
В целях подтверждения подлинности каждой серии препарата необходимо выбрать часть
испытаний, использованных для характеристики свойств очищенной фармацевтической
субстанции (см. 7.1). Используемые методы должны включать испытания физико-химических и
иммунологических характеристик, а также испытание на ожидаемую биологическую активность.
В зависимости от объема остальных испытаний на подлинность необходимо провести
верификацию количества аминокислот на N- или C-концах или пептидное картирование.
8.2.2 Чистота
Степень желаемой и достижимой чистоты зависит от нескольких факторов, включающих природу
и целевое назначение препарата, метод его производства и очистки, а также степень постоянства
процесса производства. В целом, с помощью современных производственных процедур в
отношении большинства препаратов достижима очень высокая степень чистоты.
Необходимо определить чистоту каждой серии, которая должна находиться в заданных пределах.
Анализ должен включать чувствительные и надежные методы количественного определения ДНК
клетки-хозяина и (или) вектора, которым следует подвергать каждую серию препарата,
приготовленную из клеточных линий млекопитающих, для которых необходимо задать верхние
пределы содержания. В отношении каждой серии нерасфасованного препарата, полученного из
других эукариотических клеточных систем, также рекомендуется проводить анализы ДНК и
устанавливать предельное ее содержание. Если уместно с точки зрения качества препарата,
необходимо проводить испытания на ДНК прокариотических систем экспрессии. Необходимо
также с помощью достаточно чувствительного (например, ppm) метода количественного
определения определять остаточное содержание клеточных белков и установить жесткое верхнее
предельное их содержание. В некоторых случаях, потенциальные примеси, такие как ДНК,
удается определить лишь в промежуточных продуктах очистки на более ранних этапах.
8.2.3 Испытание на активность (potency)
Необходимо, используя, где только возможно, соответствующий национальный или
международный стандартный препарат, калиброванный в единицах биологической активности
(см. раздел 9), определить активность каждой серии препарата (например, в единицах
биологической активности на мл).
Кроме того, значительную ценность представляют сведения о специфической активности
(единицах биологической активности на единицу массы препарата), их необходимо представить. В
целях стандартизации определения специфической активности требуется высоко очищенный
стандартный препарат (см. раздел 9).
Рекомендуется определить корреляцию между результатами определения активности с помощью
биологических испытаний и результатами физико-химических методов анализа, и представить

9. 9
пробная версия документа. По вопросам демо и приобретения писать на sales@pharmadvisor.ru
соответствующие сведения. По возможности, серии следует калибровать, используя точные
физико-химические испытания, и использовать биологические методы количественного
определения в целях подтверждения того, что препарат биологически активен «в оговоренных
пределах».
9. СПЕЦИФИКАЦИЯ И СТАНДАРТНЫЕ МАТЕРИАЛЫ
Исследования, описанные в разделе 7, позволяют составить окончательную спецификацию на
препарат, если они обоснованы данными, полученными при испытаниях последовательных серий,
и результатами серийного контроля качества, описанных в разделе 8.
Подходящую серию препарата, предпочтительно изученную клинически, необходимо полностью
описать с позиций ее химического состава, чистоты, активности (potency) и биологической
активности (biological activity), включая, по возможности, полное аминокислотное
секвенирование, и сохранить в целях использования в качестве химического и биологического
стандартного материала.
Необходимо установить критерии истечения срока годности и возможного повторного испытания
и повторной квалификации стандартных образцов.
10. ГОТОВЫЙ ПРЕПАРАТ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА
Необходимо подробно описать и обосновать разработку состава, особенно в части наличия и
содержания стабилизатора, таких как альбумин и (или) детергенты. Необходимо подтвердить, что
препарат в готовом контейнере соответствует требования европейских директив и фармакопей.
При невозможности этого производитель должен обосновать исключение испытаний.

10. 10
пробная версия документа. По вопросам демо и приобретения писать на sales@pharmadvisor.ru
ГЛОССАРИЙ
1. Банки клеток
a) Главный банк клеток (ГБК)
Однородная суспензия исходных клеток, предварительно трансформированных с помощью
экспрессирующего вектора, содержащего желаемый ген, разделенная в целях хранения (например,
морозильной камере с жидким азотом) на отдельные контейнеры. В некоторых случаях может
потребоваться сформировать отдельные главные банки клеток для экспрессирующего вектора и
клеток хозяина.
b) Рабочий банк клеток (РБК)
Однородная суспензия клеток, полученных из главного(ых) банка(ов) клеток, путем
ограниченного количества пересевов, разделенная в целях хранения (например, морозильной
камере с жидким азотом) на отдельные контейнеры.
Со всеми контейнерами обоих банков клеток при хранении работают идентично, после изъятия из
хранения контейнеры больше туда не возвращают.
2. Метод производства
a) Производство с помощью ограниченного пересева (один сбор)
Такой метод культивирования, для которого характерно ограниченное количество пересевов или
удвоения популяции, превышать которое в ходе производства не допускается.
b) Производство путем непрерывного культивирования (множественный сбор)
Количество удвоений популяции (или продолжительность культивирования в определенных
производственных системах) определяется на основании сведений о стабильности системы и
однородности препарата. Критерии прекращения должен определять производитель.
3. Нерасфасованный сбор
Это однородный пул отдельных сборов или лизатов, обрабатываемый в ходе одно цикла очистки.
4. Нерасфасованная готовая фармацевтическая субстанция
Готовый препарат после завершения процесса производства, получаемый из нерасфасованного
сбора. Его хранят в одном контейнере или, при необходимости, во множестве идентичных
контейнеров и используют для приготовления готовой лекарственной формы. Производитель
должен четко определить и недвусмысленно зарегистрировать получение такой готовой серии.
5. Готовый препарат
Из фармацевтической субстанции готовят лекарственную форму и заполняют ею готовые,
укупоренные контейнеры, содержащие препарат в виде готовой лекарственной форме, т.е.
готовый препарат. Контейнеры серии фасовки обрабатывают вместе, их содержимое и
биологическая активность однородны.