Recommended
More Related Content
What's hot
What's hot (20)
Viewers also liked
Viewers also liked (18)
Similar to Fitokimia Kromatografi lapis tipis
Similar to Fitokimia Kromatografi lapis tipis (20)
More from Sapan Nada
More from Sapan Nada (14)
Recently uploaded
Recently uploaded (20)
Fitokimia Kromatografi lapis tipis
- 1. KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS 1. Andi Sulang 2. Dwi Putri 3. Indri Cahyaningsih 4. Kartini 5. Moudi Ayuty V 6. Nurfauziah 7. Rini Indriani Juhardi 8.Vlorensya Sapan Tingkat : II.C
- 2. LINGKUP PEMBAHASAN ? PENGERTIAN PRINSIP KERJA FASE DIAM & FASE GERAK PROSEDU R KERJA CARA MENDETE KSI BERCAK
- 3. Kromatografi Lapis Tipis merupakan kromatografi adsorbsi dan adsorben bertindak sebagai fase stasioner (fase diam). Fase diam yang digunakan dalam KLT merupakan penjerap berukuran kecil dengan diameter partikel antara 10-30 µm (Gandjar dan Rohman, 2007)
- 4. NILAI RF Pada KLT, identifikasi senyawa dapat dilakukan dengan menghitung harga Rf Rf pembanding vs Rf sampel Harga Rf dipengaruhi oleh : 1. Struktur kimia dari senyawa yang sedang dipisahkan 2. Sifat penyerap dan derajad aktivitasnya 3. Tebal dan kerataan dari lapisan penyerap 4. Pelarut (dan derajad kemurniannya) fasa bergerak 5. Derajad kejenuhan dalam uap 6. Teknik percobaan 7. Jumlah cuplikan yang digunakan 8. Suhu 9. Kesetimbangan Harga Rx atau Rstd = Jarak yang ditempuh senyawa yang tidak diketahui Jarak yang ditempuh senyawa standart yang diketahui
- 5. Pereaksi semprot Komposisi Perlakuan Keterangan Vanilin asam sulfat 1 gram vanilin dalam asam sulfat pekat Disemprot dan dipanaskan hingga muncul warna Pereaksi umum yang digunakan. Terpen akan menghasilkan warna merah atau biru Asam fosfomolibdat Asam fosfomolibdat 5% b/v dalam etanol Disemprot dan dipanaskan hingga muncul warna Untuk mendeteksi terpen dengan bercak biru berlatar kuning Reagen Dragendorff 10 mL larutan KI 40% ditambahkan dengan 10 mL larutan 0,85 gram bismuth subnitrat dalam 10 mL asam asetat dan 50 mL air. Larutan tersebut diencerkan dalam 10 mL asam asetat dan 50 mL air Jika reaksi tidak spontan maka diperlukan pemanasan Deteksi alkaloid menghasilkan warna oranye pekat hingga merah
- 6. Proses pemisahan dengan kromatografi lapis tipis, terjadi hubungan kesetimbangan antara fase diam dan fasa gerak, dimana ada interaksi antara permukaan fase diam dengan gugus fungsi senyawa organik yang akan diidentifikasi yang telah berinteraksi dengan fasa geraknya PRINSIP KERJA
- 7. Fase diam biasa digunakan adalah alumina dari aluminium oksida. Selain fasa diam, dalam KLT juga diperlukan fasa gerak/eluent yang berperan penting pada proses elusi bagi larutan umpan (feed) untuk melewati fasa diam (adsorbent). FASE DIAM & FASE GERAK Empat macam adsorben yang sering dipakai ialah silica gel (asam silikat), alumunia (alumunium oxyde), selulosa dan kieselguhr.
- 8. NILAI KONSTANTA DIELEKTRIKUM PELARUT Pelarut Konstanta dielektrikum N-heksan 2,0 Etil asetat 6,0 Kloroform 4,8 Asam Asetat 6,2 Benzena 2,3 Etanol 24,3 Metanol 33,1 Air 80,4 Asam formiat 59 Asetonitrit 38 Aseton 21 Dietil eter 4,3 Karbontetraklorida 2,2
- 9. SILIKA GEL = Sifat polar Silika gel G Silika gel GF254 Silika gel H/silika gel N Silika gel S Silika gel PF 254 & 366 Silika gel F254
- 10. ALUMINA KURANG POLAR Alumina Al2O3 Alumina G Alumina F Alumina H Alumina P Alumina HF
- 11. SIFAT-SIFAT DASAR BEBERAPA ADSORBEN UNTUK TLC Adsorben Keasaman Aktivitas Efek Pemisahan Senyawa Yang Dapat Dipisahkan Silika gel Asam Aktif Adsorbsi + Partisi Hampir semua zat Alumina Basis Aktif Adsorbsi + Partisi Steroid, senyawa bersifat basis Magnesium Trisilikat - Lemah Adsorbsi Karetonoid, toko ferol Kalsium Sulfat (K2SO4) - Lemah Adsorbsi Asam lemak, gliserida Kieselghur Netral Inaktif Partisi Gula, farmasetika
- 12. FASE GERAK Petroleum eter Petroleum dietileter Metanol Etil asetat Kloroform CHCl3 / 119,38 Asetonitril Benzena C6H6 / 78,11 Karbon tetraklorida CCl4 / 153,82
- 13. MACAM-MACAM PENYERAP UNTUK KROMATOGRAFI LAPISAN TIPIS (KEALEY DAN HAINES, 2002) Zat padat Digunakan untuk memisahkan Silika Asam- asam amino, alkaloid, gula, asam-asam lemak, lipida, minyak esensial, anion, dan kation organic, sterol, terpenoid. Alumina Alkaloid, zat warna, fenol, steroid, vitamin-vitamin, karoten, asam-asam Amino Kieselguhr Gula, oligosakarida, asam- asam lemak, trigliserida, asam -asam amino, steroid. Bubuk selulosa Asam-asam amino, alkaloid, nukleotida Pati Asam-asam amino Sephadex Asam-asam amino, protein
- 14. PROSEDUR KERJA Meneteskan Sampel Sampel merupakan campuran senyawa yang akan dipisahkan, dilarutkan dalam zat pelarut yang mudah menguap, misalnya kloroform atau zat pelarut lain yang serupa yaitu memiliki titik didih antara 50-100oC. larutan sampel tersebut ditetskan pada plat dengan menggunakan pipet mikro atau pipa kapiler. Garis batas bawah kira-kira 1,5-2.0cm dari dasar, jumlah sampel yang diteteskan dapat berkisar antara 5-100mg dari larutan 0,1%.
- 15. Pengembangan Penegmbangan dilaksanakan dengan mencelupkan dasar plat KLT yang telah ditetesi sampel dalam system pelarut untuk proses pengembangan. Umunya dikerjakan dalam tempat yang tertutup dalam chamber yang ssebelumnya telah dijenuhkan dengan menggunakan kertas saring. Alasan penjenuhan chamber sebelum digunakan yaitu untuk menghilangkan uap air didalam chamber agar nantinya tidak mempengaruhi perambatan noda pada lempeng, selain itu agar tekanan yang ada didalam chamber tidak mempengaruhi proses perambatan noda dengan adanya penjenuhan chamber. Pengembangan dalam ruangan tertutup tersebut diakhiri setelah ujung zat pada plat telah mencapai kira-kira ¾ tinggi adsorben. Plat KLT-nya kemudian diambil dan dikeringkan, sebaiknya dengan menggunakan aliran gas N2. PROSEDUR KERJA
- 16. METODE PENGEMBANGAN (DEVELOPMENT) PADA KLT Berdasar arah pengembangan Menaik Menurun Berdasarkan Dimensi Pengembangan 1 dimensi > 1 tahap > lebih dari 1 tahap Pengembangan 2 dimensi
- 17. CARA MENDETEKSI BERCAK Menggunakan pendarflour Penunjukkan bercak secara kimia
- 18. MENGGUNAKAN PENDARFLOUR Fase diam pada sebuah lempengan lapis tipis seringkali memiliki substansi yang ditambahkan kedalamnya, supaya menghasilkan pendaran flour ketika diberikan sinar ultraviolet (UV). Itu berarti jika sinar UV disinarkan, maka sampel akan berpendar. Pendaran ini ditutupi pada posisi dimana bercak pada kromatogram berada, meskipun bercak-bercak itu tidak tampak berwarna jika dilihat dengan mata. Berarti jika disinarkan sinar UV pada lempengan, akan timbul pendaran dari posisi yang berbeda dengan posisi bercak-bercak. Bercak tampak sebagai bidang kecil yang gelap. Sementara UV tetap disinarkan pada lempengan, kita harus menandai posisi-posisi dari bercak-bercak dengan menggunakan pensil dan melingkari daerah bercak-bercak itu. Karena jika kita mematikan sinar UV tersebut, bercak- bercaknya tidak tampak kembali. –Ultraviolet light at 254 nm (shortwave UV). –Long wave UV (340 nm) is used less commonly.
- 19. Penampakan noda pada pegujian Kromatigrafi yaitu : a. Pada UV 254 nm Pada UV 254 nm, lempeng akan berflouresensi sedangkan sampel akan tampak berwarna gelap.Penampakan noda pada lampu UV 254 nm adalah karena adanya daya interaksi antara sinar UV dengan indikator fluoresensi yang terdapat pada lempeng. Fluoresensi cahaya yang tampak merupakan emisi cahaya yang dipancarkan oleh komponen tersebut ketika elektron yang tereksitasi dari tingkat energi dasar ke tingkat energi yang lebih tinggi kemudian kembali ke keadaan semula sambil melepaskan energi.
- 20. b. Pada UV 366 nm Pada UV 366 nm noda akan berflouresensi dan lempeng akan berwarna gelap. Penampakan noda pada lampu UV 366 nm adalah karena adanya daya interaksi antara sinar UV dengan gugus kromofor yang terikat oleh auksokrom yang ada pada noda tersebut. Fluoresensi cahaya yang tampak merupakan emisi cahaya yang dipancarkan oleh komponen tersebut ketika elektron yang tereksitasi dari tingkat energi dasar ke tingkat energi yang lebih tinggi kemudian kembali ke keadaan semula sambil melepaskan energi. Sehingga noda yang tampak pada lampu UV 366 terlihat terang karena silika gel yang digunakan tidak berfluororesensi pada sinar UV 366 nm.
- 21. c. Pereaksi Semprot H2SO4 10% Prinsip penampakan noda pereaksi semprot H2SO4 10% adalah berdasarkan kemampuan asam sulfat yang bersifat reduktor dalam merusak gugus kromofor dari zat aktif simplisia sehingga panjang gelombangnya akan bergeser ke arah yang lebih panjang (UV menjadi VIS) sehingga noda menjadi tampak oleh mata.
- 22. PENUNJUKKAN BERCAK SECARA KIMIA kromatogram dikeringkan kembali dan kemudian ditempatkan pada wadah bertutup (seperti gelas kimia dengan tutupan gelas arloji) bersama dengan kristal iodium. Uap iodium dalam wadah dapat berekasi dengan bercak pada kromatogram, atau dapat dilekatkan lebih dekat pada bercak daripada lempengan. Substansi yang dianalisis tampak sebagai bercak-bercak kecoklatan. Tetasan atau penotolan sampel harus sekecil mungkin dengan meneteskan berulang kali dengan dibiarkan mengering sebelum tetesan berikutnya dikerjakan. Pengeringan tetesan sampel pada plat sebaiknya dikerjakan dengan aliran gas N2, untuk mencegah terjadinya kerusakan sampel karena oksida
- 24. Penampak Bercak kimia, berdasarkan sifatnya: 1. Permanen: Asam sulfat pekat dan ninhidrin 2. Sementara: Uap Iodium Penampak Bercak kimia, berdasarkan spesifisitasnya: 1. Spesifik: ninhidrin: untuk zat dengan atom N (protein, Alkaloid dll) 2. Umum: Uap Iodium, Asam sulfat pekat (hampir semua zat)
- 25. ALAT
- 26. AN AUTOMATIC TLC PLATE SAMPLER
- 28. METODE NORMAL PENGEMBANGAN PLAT KLT
Editor's Notes
- VHV