More Related Content Similar to Analisis Imunokimia Similar to Analisis Imunokimia (19) 1. ANALISIS IMUNOKIMIA
UNTUK DETEKSI MIKROBA
PATOGEN DAN SENYAWA
RACUN
ANALISIS IMUNOKIMIA
UNTUK DETEKSI MIKROBA
PATOGEN DAN SENYAWA
RACUN
Marlia Singgih WibowoMarlia Singgih Wibowo
Sekolah FarmasiSekolah Farmasi--ITBITB
6. Analisis Imunokimia
AnalisisAnalisis berdasarkanberdasarkan reaksireaksi spesifikspesifik
antaraantara Antigen (Ag)Antigen (Ag) dandan AntibodiAntibodi ((AbAb))
AnalisisAnalisis kualitatifkualitatif maupunmaupun kuantitatifkuantitatif
PenggunaanPenggunaan senyawasenyawa “label”“label” untukuntuk
visualisasivisualisasi reaksireaksi
10. AntigenAntigen (antibody generator)(antibody generator)
ImunogenikImunogenik :: SenyawaSenyawa yangyang dapatdapat
memicumemicu sistemsistem imunimun mamaliamamalia
AntigenikAntigenik :: senyawasenyawa yangdapatyangdapat
bereaksibereaksi spesifikspesifik dengandengan antibodiantibodi
SyaratSyarat : BM: BM tinggitinggi (>5000),(>5000), strukturstruktur
kimiakimia komplekskompleks. (. (bilabila BMBM rendahrendah dapatdapat
dikonjugasidikonjugasi dengandengan protein carrierprotein carrier
agaragar bersifatbersifat imunogenikimunogenik))
11. Bahan yang dapat dianalisis
(sebagai Antigen) dengan metode
imunokimia
MikrobaMikroba patogenpatogen dandan
atauatau toksintoksin mikrobamikroba
ToksinToksin tanamantanaman,, hewanhewan
ProteinProtein spesifikspesifik atauatau
senyawasenyawa lain yanglain yang
berstrukturberstruktur spesifikspesifik
SenyawaSenyawa obatobat
((narkotiknarkotik,, psikotropikpsikotropik))
SenyawaSenyawa pestisidapestisida
18. SenyawaSenyawa ““LABELLABEL””
SenyawaSenyawa yangyang dikonjugasidikonjugasi padapada
antigenantigen atauatau antibodiantibodi untukuntuk dapatdapat
memmem--visualisasivisualisasi reaksireaksi AgAg--AbAb
DapatDapat berupaberupa enzimenzim,, senyawasenyawa
berfluoresensiberfluoresensi,, radioaktifradioaktif,, dlldll..
ReaksiReaksi amplifikasiamplifikasi dapatdapat dilakukandilakukan
sehinggasehingga dapatdapat diukurdiukur secarasecara
fisikokimiafisikokimia
19. BeberapaBeberapa contohcontoh “label”“label”
EnzimEnzim : Horse radish peroxidase (HRP),: Horse radish peroxidase (HRP),
Alkaline PhosphataseAlkaline Phosphatase
Senyawa berfluoresensiSenyawa berfluoresensi : Fluorescein,: Fluorescein,
Umbelliferon, Tetrametil rodhaminUmbelliferon, Tetrametil rodhamin
Senyawa LuminescenceSenyawa Luminescence : Luciferin: Luciferin
PartikelPartikel : Tanned erythrocyte, Colloidal,: Tanned erythrocyte, Colloidal,
microsphere , gold, silvermicrosphere , gold, silver
VesikelVesikel : liposom: liposom
20. MetodeMetode analisisanalisis imunokimiaimunokimia
berdasarkanberdasarkan labelnyalabelnya
EIAEIA (Enzyme(Enzyme ImmunoAssayImmunoAssay))
ELISAELISA (Enzyme Linked(Enzyme Linked--
ImmunosorbentImmunosorbent Assay)Assay)
RIARIA (Radio(Radio ImmunoAssayImmunoAssay))
IFAIFA ((ImmunoFluorescenceImmunoFluorescence Assay)Assay)
LIALIA (Luminescence(Luminescence ImmunoAssayImmunoAssay))
21. Bahan yang diperlukan dalam reaksi Ag-
Ab dalam analisis imunokimia
AntigenAntigen
AntibodiAntibodi
MediaMedia penyanggapenyangga reaksireaksi
LarutanLarutan DaparDapar pelarutpelarut
LarutanLarutan DaparDapar pencucipencuci
SenyawaSenyawa “Label”“Label”
SubstratSubstrat
SenyawaSenyawa penghentipenghenti reaksireaksi
InstrumenInstrumen pendeteksipendeteksi hasilhasil reaksireaksi
22. Suatu larutan atau suspensi antigen (dapat pula dilakukan
sebaliknya yaitu dengan memasukkan antibodi terlebih
dahulu) dimasukkan kedalam sumur pelat solid, lalu
diinkubasi pada suhu tertentu selama waktu tertentu pula
(sesuai dengan jenis antigen dan antibodi yang
digunakan), lalu ditambahkan larutan pem”blok” untuk
menghindari ikatan non-spesifik
23. Larutan antibodi B (anti-antigen A) dimasukkan kedalam sumur
pelat tersebut setelah proses pencucian. Kompleks A-B akan
terbentuk dengan kuat. Suatu konjugat antibodi C (anti-antibodi B)
dengan suatu Label (misalnya suatu Enzim) ditambahkan sehingga
akan membentuk kompleks A-B-C-Enz.
24. Penambahan substrat tertentu akan menyebabkan
terbentuknya warna dan reaksi warna dihentikan dengan
penambahan senyawa lain agar warna yang terbentuk
stabil pada saat pengukuran.
25. Warna yang terbentuk diukur intensitasnya dengan menggunakan
alat spektrofotometer. Konsentrasi yang terukur akan sebanding
dengan antigen yang terikat pada reaksi yang terjadi
26. Hal-hal yang perlu diperhatikan dalam
menggunakan kit pereaksi imunokimia:
ApakahApakah kitkit tersebuttersebut dilengkapidilengkapi dengandengan
brosurbrosur /booklet yang/booklet yang lengkaplengkap tentangtentang
metodemetode analisisanalisis yangyang digunakandigunakan??
ApakahApakah sudahsudah adaada parameterparameter evaluasievaluasi
dandan validasivalidasi yangyang dilakukandilakukan ??
MengevaluasiMengevaluasi sumbersumber--sumbersumber
kesalahankesalahan yangyang mungkinmungkin terjaditerjadi
SeleksiSeleksi awalawal kitkit pereaksipereaksi :: padapada tahaptahap
iniini perluperlu dilakukandilakukan
27. SeleksiSeleksi awalawal kitkit pereaksipereaksi :: padapada tahaptahap iniini perluperlu
dilakukandilakukan evaluasievaluasi terhadapterhadap kurvakurva standardstandard dandan
apakahapakah adaada reduksireduksi data yangdata yang dilakukandilakukan,,
Parameter evaluasi : accuracy, precision,
sensitivity, selectivity, specificity
MemahamiMemahami prosedurprosedur percobaanpercobaan :: EfekEfek matriksmatriks,,
perolehanperolehan kembalikembali,, reaksireaksi silangsilang,, pengaruhpengaruh dandan
penangananpenanganan sample,sample, modifikasimodifikasi prosedurprosedur,,
modifikasimodifikasi teknisteknis assay.assay.
Pengembangan data validasi : rentang normal, uji
terhadap kondisi abnormal, stimulasi, supresi,
rentang QC
30. KesalahanKesalahan acakacak
PipetingPipeting :: masalahmasalah desaindesain pipetpipet ituitu sendirisendiri,, caracara
menggunakanmenggunakan dandan halhal teknisteknis dalamdalam penggunaanpenggunaan
pipetpipet (volume yang(volume yang dikeluarkandikeluarkan,, dlldll))
PemisahanPemisahan padatanpadatan daridari cairancairan :: prosesproses pembtknpembtkn
endapanendapan yangyang tergantungtergantung padapada waktuwaktu,,
kecepatankecepatan,, suhusuhu,, dlldll,, pencucianpencucian yangyang tidaktidak
sempurnasempurna,, dlldll..
KondisiKondisi ReaksiReaksi BiokimiaBiokimia :: konstantakonstanta
kesetimbangankesetimbangan antibodiantibodi,, waktuwaktu,, suhusuhu
JumlahJumlah radioaktifradioaktif :: untukuntuk prosesproses RIARIA
IntensitasIntensitas fluoresensifluoresensi yangyang terjaditerjadi :: untukuntuk prosesproses
IFAIFA
KesalahanKesalahan spektrofotometrikspektrofotometrik
StabilitasStabilitas pereaksipereaksi
31. KesalahanKesalahan sistemsistem
KesalahanKesalahan mempipetmempipet :: masalahmasalah kalibrasikalibrasi
alatalat,, bentukbentuk pipetpipet,, dlldll
InterferensiInterferensi dalamdalam reaksireaksi :: terjadinyaterjadinya nonnon--
specific bindingspecific binding,, inhibisiinhibisi enzimenzim,, pendaranpendaran
cahayacahaya,, adanyaadanya pengaruhpengaruh enzimenzim endogen,endogen,
pengaruhpengaruh obatobat lain yanglain yang digunakandigunakan ,,
pengaruhpengaruh senyawasenyawa endogenendogen lainnyalainnya
((bilirubinbilirubin,, dlldll))
EfekEfek matriksmatriks
