1. TUTOR IMUNOLOGI PEMERIKSAAN ANTIBODI ANTI NUKLEAR PADA SLE dr. Sri Widyaningsih/ dr. SiswantoDarmadiSpPK(K) 1
2. PENDAHULUAN SLE merupakan penyakit autoimun Etiologi belum diketahui, hal yg mempengaruhi SLE meliputi faktor genetik, hormon, lingkungan, drug induced SLE Di Amerika, prevalensi SLE kira-kira 1 kasus per 2000 populasi Insiden berkisar 1 kasus per 10.000 populasi (Bartels, 2006) Menyerang wanita usia 15-40 th, dgn rasio wanita dan pria 5:1 Kriteria diagnosis SLE oleh American College of Rheumatology (ACR) 2
4. Penanganan Sampel Pengambilan darah secara aseptik 5 ml Sampel pemeriksaan ini adalah serum Sampel segera diperiksa, bila ditunda < 48 jam serum disimpan pada suhu 2-8ºC Jika > 48 jam serum disimpan pada suhu – 20°C Hindari freezing dan thawing yang berulang Hindari sampel hemolisis, ikterus, lipemik dan kontaminasi. 4
6. Sampel dan Reagen Sampel diencerkan dgn PBS 1:40 Slide Hep-2 sel kultur Kontrol positif serum manusia dgn ANA homogen Kontrol negatif serum manusia Anti human Ig G berlabel floresens isothiocyanate (FITC) Mounting medium PBS bufer Blotting paper ALAT Moist Chamber, Coplin jars, pipet, air suling Coverslips 24 X60mm, Mikroskop floresens 6
10. Nilai referen ANA HEp-2 Titer Negatif < 40 Positif ≥ 40 Keterbatasan : 10 % orang dewasa normal ANA positif Penentuan titer tergantung dari mikroskop floresens dan penilaian observer Sampel dan wash solution yang terkontaminasi bakteri atau fungi dapat menyebabkan pewarnaan tidak spesifik pada sel kultur 10
14. Sampel dan Reagen Sampel, cut-off kalibrator , kontrol diencerkan dengan sampel diluent 1:101 Kontrol positif dan kontrol negatif Kalibrator HRP konjugat Wash buffer, air suling TMB Stop solution ALAT Mikroplate, Elisa reader, timer, pipet, inkubator, microshaker, wash system 14
18. Hasil Pemeriksaan Nilai referen Indeks < 0,90 ANA negatif Indeks ≥ 1.10 ANA positif Indeks 0,91 – 1,09 borderline positif Absorbans sampel = Indeks sampel Mean absorbans kalibrator Absorbans sampel Index sampel Mean absorbans kalibrator 18
19. Keterbatasan 10 % orang dewasa normal ANA positif Diperlukan tes konfirmasi untuk hasil yang positif Beberapa obat mempengaruhi pemeriksaan ANA test 19
20. Pemeriksaan Euroline +P Prinsip Pemeriksaan + + Strip dilapisi antigen pd fase pdt Serum yg telah diencerkan Antigen-antibodi kompleks anti human globulin yg dilabel enzim, kmd ditambah substrat Produk berwarna 20
21. LangkahPemeriksaan Strip ygsudahdisiapkandibasahidgnbufer 1,5 ml Teteskan 1,5 ml serum ygtelahdiencerkan (1:100), inkubasiselama 30 menit pd suhuruangan Cuci strip dgn 1,5 ml buferselama 5 menit, diulangidgnbuferbarusebanyak 3 x Tambahkan 1,5 ml anti human Ig G yang dilabelenzim, inkubasiselama 30 menit pd suhuruangan 21
