TUTOR IMUNOLOGI<br />PEMERIKSAAN HEPATITIS B SURFACE ANTIGEN<br />EstiRohani, dr / SitiRochmatoen, dr, SpPK(K)<br />Jumat,...
Pendahuluan<br />Infeksi HBV :<br /><ul><li>Masalahkesehatandunia
5-10% menjadikronis
1/3 populasiduniapernahterinfeksi HBV
Prevalensidi Indonesia 3-17%</li></ul>Hepatitis marker: HBsAg, anti HBs, HBeAg, anti HBeAg, dll<br />Kegunaanpemeriksaan m...
HBsAg<br />Ditemukanth 1963 olehdr.Blumberg<br />Disebutaustralian antigen (AU Ag) krnditemukanpadapendudukasliaustralia.<...
HBV<br />                             Surface protein<br />                         Pre-core protein<br />                ...
Perubahan marker hepatitis padainfeksi virus akut<br />5<br />
Infeksi hepatitis B kronikdenganHBeAgpositif<br />6<br />
infeksi hepatitis B kronikdenganHBeAg negative<br />7<br />
PemeriksaanHBsAg<br />Paling pentingpada hepatitis B<br />Bahanpemeriksaan: serum, semen, saliva, urine dancairantubuhlain...
Metodeimunodifusi<br />Agar cair dibekukan<br />Sumuran-sumurandiberi Ag dan AB<br />Terjadigarispresipitasi<br />Agar<br...
Metodefiksasikomplemen<br />Prinsip: Serum + Ab + Complemen kompleks Ag-Ab-C<br />+ SDM tersensitisasi  (hemolisin)    <...
Metode Reverse passive hemagglutination assay (RPHA)<br />Prinsip : eritrosit (carrier) disensitisasidenganAbditambah seru...
Hasiltespenyaring<br />Positif : terjadiaglutinasi<br />Negatif : terjadiendapandidasartabung<br />Interpretasihasil<br />...
Teskonfirmasipada RPHA<br /><ul><li>Mengencerkan serum reaktif
Bandingkanaglutinasi yang terjadiantara yang diberi anti  HBs dan</li></ul>  yang tidak (selkontrol).<br />13<br />
Interpretasihasilteskonfirmasi<br />Interpretasiinconclusiveharusdiujiulangdenganmetode lain<br />14<br />
Metode Elisa<br />Metode yang paling banyakdipakaidilaboratorium<br />Sensitivitas & spesifitastinggi, sederhana,murah.<br...
ELISA  DOUBLE SANDWICH<br />16<br />
PEMERIKSAAN HBsAg DI LAB PK<br /><ul><li>menggunakanmetodeElisa double sandwich
bahan: serum, plasma
Reagen : hepalisaHBsAg
Upcoming SlideShare
Loading in …5
×

Tibaru8

1,015 views

Published on

Published in: Health & Medicine
1 Comment
0 Likes
Statistics
Notes
  • Be the first to like this

No Downloads
Views
Total views
1,015
On SlideShare
0
From Embeds
0
Number of Embeds
20
Actions
Shares
0
Downloads
0
Comments
1
Likes
0
Embeds 0
No embeds

No notes for slide

Tibaru8

  1. 1. TUTOR IMUNOLOGI<br />PEMERIKSAAN HEPATITIS B SURFACE ANTIGEN<br />EstiRohani, dr / SitiRochmatoen, dr, SpPK(K)<br />Jumat, 1 Oktober 2010<br />1<br />
  2. 2. Pendahuluan<br />Infeksi HBV :<br /><ul><li>Masalahkesehatandunia
  3. 3. 5-10% menjadikronis
  4. 4. 1/3 populasiduniapernahterinfeksi HBV
  5. 5. Prevalensidi Indonesia 3-17%</li></ul>Hepatitis marker: HBsAg, anti HBs, HBeAg, anti HBeAg, dll<br />Kegunaanpemeriksaan marker: skrining, diagnosis, prognosis, danpemantauanterapi.<br />2<br />
  6. 6. HBsAg<br />Ditemukanth 1963 olehdr.Blumberg<br />Disebutaustralian antigen (AU Ag) krnditemukanpadapendudukasliaustralia.<br />Au Ag berhubungandengan hepatitis B virus<br />marker serologikpertama yang tampakselamamasaprodromalinfeksi hepatitis B akut. <br />3<br />
  7. 7. HBV<br /> Surface protein<br /> Pre-core protein<br /> Core protein<br />DNA <br />surface antigen dan HBV DNA merupakan marker yang pertama kali terdeteksipadasaatinfeksiakut, munculsebelumtimbulgejalaataupeningkatan ALT. HBe antigen yang berasaldari pre-core protein merupakan marker HBV untukreplikasidaninfeksisitas. HBV core antigen tidakdapatterdeteksidalam serum, tetapiberupaantiboditerhadapnya.<br />4<br />
  8. 8. Perubahan marker hepatitis padainfeksi virus akut<br />5<br />
  9. 9. Infeksi hepatitis B kronikdenganHBeAgpositif<br />6<br />
  10. 10. infeksi hepatitis B kronikdenganHBeAg negative<br />7<br />
  11. 11. PemeriksaanHBsAg<br />Paling pentingpada hepatitis B<br />Bahanpemeriksaan: serum, semen, saliva, urine dancairantubuhlainnya.<br />Metodepemeriksaan:<br /> - generasi 1: imunodifusi<br /> - generasi 2: CIEP, CF<br /> - generasi 3: RPHA,RIA, ELISA, dll<br />8<br />
  12. 12. Metodeimunodifusi<br />Agar cair dibekukan<br />Sumuran-sumurandiberi Ag dan AB<br />Terjadigarispresipitasi<br />Agar<br />AgAb<br />Garispresipitasi<br />AgAb<br />9<br />
  13. 13. Metodefiksasikomplemen<br />Prinsip: Serum + Ab + Complemen kompleks Ag-Ab-C<br />+ SDM tersensitisasi (hemolisin)  <br /> - Lisis (negatif)<br /> - tidaklisis (pos)<br />Keuntungan : murah<br />Kekurangan : kurangsensitifuntukskriningrutin<br />sangatrumitdanbanyakmakan<br />waktu.<br />tidakspesifik, seringbereaksi<br />silangdengan HZV dan VZV.<br />10<br />
  14. 14. Metode Reverse passive hemagglutination assay (RPHA)<br />Prinsip : eritrosit (carrier) disensitisasidenganAbditambah serum  terjadiaglutinasi<br />Ada 2 tahap : <br />Tespenyaring : serum dimasukkankesumuranmicrotiterbentuk v atau u laludireaksikan dg eritrositygtelahdilapisi anti HBs. Positif (kemungkinanmengandungHBsAg) bilaterjadiaglutinasi .<br />Teskonfirmasi: serum reaktif yang mengandungHBsAgakanterjadinetralisasidenganpemberianantibodi yang spesifik (anti HBs)  penghambatanreaksiaglutinasi. <br />11<br />
  15. 15. Hasiltespenyaring<br />Positif : terjadiaglutinasi<br />Negatif : terjadiendapandidasartabung<br />Interpretasihasil<br />12<br />
  16. 16. Teskonfirmasipada RPHA<br /><ul><li>Mengencerkan serum reaktif
  17. 17. Bandingkanaglutinasi yang terjadiantara yang diberi anti HBs dan</li></ul> yang tidak (selkontrol).<br />13<br />
  18. 18. Interpretasihasilteskonfirmasi<br />Interpretasiinconclusiveharusdiujiulangdenganmetode lain<br />14<br />
  19. 19. Metode Elisa<br />Metode yang paling banyakdipakaidilaboratorium<br />Sensitivitas & spesifitastinggi, sederhana,murah.<br />Antibodidilekatkanpadafasepadat.<br />Ditambahkan serum pasien<br />Setelahdicuciditambahkanantibodiygdilabelenzim kompleksAb-Ag-Ab<br />15<br />
  20. 20. ELISA DOUBLE SANDWICH<br />16<br />
  21. 21. PEMERIKSAAN HBsAg DI LAB PK<br /><ul><li>menggunakanmetodeElisa double sandwich
  22. 22. bahan: serum, plasma
  23. 23. Reagen : hepalisaHBsAg
  24. 24. Sensitifitas 100%, spesifitas 97,7%</li></ul>17<br />
  25. 25. Alatdanbahan<br />Microwell : dilapisi anti HBs monoclonal tikus<br />Peroksidase solution: anti HBs marmot dankonjugatperoksidase.<br />kontrolpositif : serum manusia yang mengandungHBsAgpositif yang tidakaktif, konsentrasi 8 ng/ml<br />kontrolnegatif : serum yang non reaktifterhadap HBV<br />TMB substrate solution A : 3,3’,5,5’- tetramethylbenzidine<br />TMB substrate solution B : buffer asamsitrat yang berisi 0.03% H2O2.<br />Buffer pencuci : larutanpenyanggafosfat yang berisi tween-20.<br />Stop solution : 2N H2SO4<br />Mikropipet 50 dan 100 µl<br />Inkubatordengantemperatur 370C<br />Alatpencuci plate<br />ELISA reader : λ 450/650 nm.<br />18<br />
  26. 26. Prinsipreaksi<br />Serum pasien<br />Anti HBs.HRPO<br />KompleksAb-Ag-Ab.HRPO<br />Anti HBs<br />Lar.substrat TMB<br />KompleksAb-Ag-Ab.HRPO<br />2N H₂SO₄<br />Baca padaλ 450 atau 650 nm<br />19<br />
  27. 27. Cara kerja<br />50 µl kontrol (3xNC, 2xPC), + masing2 dg 50 µl spesimen. Sediakan 2 sumuranuntukblanko<br />serum inkubasi 20-30⁰C selama 30’<br />Reagen<br />atau<br />Tambahkan 50 µl lar.peroksidasedalam masing2 sumuran, kecuali 2 blanko. <br />Inkubasi plate pada 37+ 1⁰C, 80’<br />Cuci plate <br />Tambahkan 50 µl TMB A + 50 µl TMB B kedlmsumuran, campursecara hati2. <br />Buatcampuran dg volume samaantaralar. TMB A&B, tambahkan 100 µl kedlmsumuran<br />Inkubasipadasuhuruangan 30’ <br />Tambahkan 100 µl stop solution <br />Tentukanabsorbanpadaλ 450 nm atau 650 nm <br />20<br />
  28. 28. Perhitungan<br />Rerataabsorban control negatif (NCx) harus< 0,1<br />Rerataabsorbankontrolpositif (PCx) harus> 0,6<br />Nilai P-N : PCx – NCx , harus> 0,5<br />Nilai cut off : NCx + 0,025<br />21<br />
  29. 29. interpretasi<br />Nilaiabsorbanspesimenpasien < cut off = non-reaktifHBsAgnegatif<br />Nilaiabsorbanspesimenpasien> cut off = reaktifawalujiulang. BilahasilnyareaktifHBsAgpositif.<br />22<br />
  30. 30. TERIMA KASIH<br />Terimakasih<br />23<br />

×