peremajaan bakteri

1. Peremajaan Bakteri
Dan Pengujian
Growth Promotion
Testing (GPT)
ZULFIKAR HADISSABIL

2. Peremajaan Bakteri
Bakteri awal (induk) yang masih
dorman kemudian menjadi biakan
segar (fresh) yang siap dipakai utuk
pengujian
Apa itu?

3. Peremajaan Bakteri
Peremajaan bakteri bertujuan agar
bakteri memulai metabolisme kembali
setelah penyia- pan.
Kenapa
bakteri hatus
diremajakan?

4. Cara Kerja Peremajaan
Microbiologics Bakteri Quick stick
Ampul Bakteri Lyofilisasi

5. Cara Kerja Peremajaan
Microbiologics Bakteri Quick stick
Bakteri e.coli kwikstick dipecahkan pada
bagian bawah ampul agar tercampur dengan
cotton swab yang sudah menjadi satu
kemudian goreskan pada media chromocult
centrimide agar (cca).

6. Cara Kerja Peremajaan
Ampul Bakteri Lyofilisasi
Bakteri e.coli lyofilisasi ditambahakan
dengan 1mL larutan Nacl/Bpw
kemudian divortex hingga homogen
selanjutnya diambil dengan 1 ose lalu
kemudian goreskan pada media
chromocul centrimide agar (cca).

7. Cara Kerja kedalam Bactobank
1 ose yang sudah berisi bakteri
kemudian dimasukan kedalam
bactobank hingga ose tersebut
tenggelam pada cairan/media yang
ada pada bactobank tsb, kemudian di
vortex hingga homogen dan tunggu
5-10 menit setelah itu cairan yang
ada pada bactobank tersebut dibuang
hingga minyisahkan byte pada
bactobanknya saja, setelah itu baru
bisa disimpan disuhu dingin agar
bakterinya tetap hidup

8. Peremajaan Bakteri
Produk Fungsi
Bakteri Agar bakteri memulai metabolisme kembali setelah dalam
keadaan dorman menjadi biakan yang siap dipakai (fresh)
Cawan petri Wadah untuk menampung media yang sudah dibuat
Ose Untuk menginokulasikan bakteri kedalam cawan petri
Pipet Untuk mengambil dan membuang cairan
Bactobank Tempat atau wadah untuk mendormankan bakteri yang ingin
disimpan
Vortex Untuk menghomogenkan cairan atau bakteri yang ditanam pada
bactobank
Media Suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi untuk
menumbuhkan dan mengembangbiakan bakteri

9. Peremajaan bakteri disiapkan
untuk keperluan uji growth
promotion test (GPT) agar
bakteri yang digunakan fresh
dan mudah digunakan.
-Peremajaan Bakteri-

10. Growth Promotion Test (GPT)
Pengujian yang dilakukan terhadap media pertumbuhan
mikroorganisme spesifik maupun non spesifik sebagai control
kualitas media yang digunalkan Growth Promotion Test
merupakan uji kemampuan media untuk dapat menumbuhkan
mikroba (bakteri dan jamur) yang menjadi sasaran
pertumbuhan. Pada uji GPT ini mikroba ditambahkan dalam
jumlah yang sedikit (kurang dari 100 CFU).
Growth Promotion Test dilakukan untuk mencegah terjadinya
hasil negatif palsu, yaitu kondisi dimana hasil uji menjadi
memenuhi syarat akibat media tidak mampu menumbuhkan
mikroba.
Uji Penunjang
Pertumbuhan (GPT)

11. Growth Promotion Test (GPT)
Salah satu langkah yang harus dilakukan
adalah melakukan pengujian kinerja
media mikrobiologi menggunakan
certified reference microorganism
USP 36/NF
31

12. Persyaratan
Pada Uji Growth
Promotion Test
(GPT)
Growth Promotion Test (GPT)
a. Dilakukan setiap bets
media siap pakai dan setiap
bets media yang baru dibuat.
Berikut beberapa titik kritis
pada pembuatan media untuk
pengujian: penimbangan
bahan, Pemanasan media,
Sterilisasi media
b. Jumlah mikroba
yang ditanam pada
media untuk uji
GPT tidak lebih
dari 100 cfu
c. Mikroba yang
digunakan tidak
lebih dari
passage ke 5

13. Pengerjaan Uji Growth Promotion Test (GPT)
Terhadap Media
Microbial Enumeration
Test/Angka Lempeng Total
01 Test For Specified
Microorganism/Uji
mikroorganisme spesifik
02
Sterility Test/Tes Sterilitas
03

14. Microbial enumeration test atau bisa disebut
uji angka lempeng total dan angka kapang
khamir adalah analisis kuantitatif lengkap dari
suatu produk untuk menentukan jumlah total
mikroba dan jamur.
Microbial Enumeration Test

15. Microbial Enumeration Test

16. No Nama Media Growth Promotion
1 Soybean-Casein Digest Agar (SCDA) / Tryptic Soy Agar (TSA) Staphylococcus aureus ATCC 6538
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Bacillus subtilis ATCC 6633
Candida albicans ATCC 10231
Aspergillus niger ATCC 16404
2 Sabouraud Dextrose Agar (SDA) Candida albicans ATCC 10231
Aspergillus niger ATCC 16404
3 R2A Agar Staphylococcus aureus ATCC 6538
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Escherichia coli ATCC 8739
Salmonella enterica ser Thyphimurium ATCC 14028
4 Fluid Thioglycollate Medium (FTM) Staphylococcus aureus ATCC 6538
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Clostridium sporogenes ATCC 19409
5 Tryptic Soy Broth (TSB) Bacillus subtilis ATCC 6633
Candida albicans ATCC 10231
Aspergillus niger ATCC 16404
6 TSA with Lechitine Polisorbate 80 (CASO) Staphylococcus aureus ATCC 6538
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Bacillus subtilis ATCC 6633
Candida albicans ATCC 10231
Aspergillus niger ATCC 16404
*
1. Growth Promotion Test dilakukan pada media sebagai berikut:

17. Media Spesifik
Test Strains
Growth Promotion (tumbuh) Inhibitory/ non tumbuh
Mac Conkey Agar Escherichia coli ATCC 8739 -
Rappaport Vassiliadis Salmonella
Broth
Salmonella enterica ser
Thyphimurium ATCC 14028
Staphylococcus aureus ATCC
6538
Xylose Lysine Deoxycholate Agar
(XLDA)
Salmonella enterica ser
Thyphimurium ATCC 14028
-
Cetrimide Agar (CA) Pseudomonas aeruginosa ATCC
9027
Escherichia coli ATCC 8739
Mannitol Salt Agar (MSA) Staphylococcus aureus ATCC 6538 Escherichia coli ATCC 8739

18. Pengerjaan Uji Growth Promotion Test (GPT)
Terhadap Media
2. Growth Promotion Test dilakukan setiap batch pembuatan media.
3. Prosedur Growth Promotion Test adalah sebagai berikut :
A. Prosedur Pengenceran Kuman 10-100 CFU/ml
 Buat suspensi mikroba ½ Mc Farland dalam 2 ml larutan NaCl 0,9% steril.
 Pipet 1 ml larutan di atas, ditambahkan dengan 1 ml larutan NaCl 0,9% steril
a. Encerkan suspensi mikroba sampai (10-9)

 Pipet larutan sesuai dengan pengenceran bakteri masing-masing 1 ml suspensi mikroba
ke 2 cawan petri yang berisi media 15-20 ml, lakukan secara duplo.
 Inkubasikan pada suhu 30-35C selama 3 hari untuk media bakteri dan 20-25C selama
5 hari untuk media jamur.
 Amati pertumbuhan kuman dalam media dan hitung jumlah koloni yang tumbuh
 Syarat : terjadi pertumbuhan mikroba 10 -100 CFU/ml

19. Microbial Enumeration Test
b. Contoh pengujian Microbial Enumeration
Test pada media cair
Pada dasarnya pengujian Microbial Enumeration Test yang dilakukan
pada media cair sama dengan media agar, perbedaan hanya pada
pembacaan hasil inkubasi saja. Kriteria keberterimaan pada media
cair adalah dibandingkan tingkat kekeruhan pada media bets baru
dengan media bets sebelumnya yang sudah lulus uji GPT.

20. Test for Specified
Microorganism
Test for Specified Microorganism atau
uji mikroorganisme spesifik adalah
uji batas mikroba spesifik yang
mungkin terdeteksi dengan kondisi
dan metode yang sesuai. Metode uji
dirancang untuk menetapkan suatu
produk memenuhi kriteria mutu.

21. Test For Spesified Microorganism
Uji Fertilitas mikroba
yang digunakan ? 100
cfu
Contoh Uji GPT pada media
selektif Manitol Red Salt Agar:
- Inkubasi selama 3 hari kemudian baca hasilnya
- Pertumbuhan Staphylococcus aureus pada
media bets baru harus sebanding dengan media
bets sebelumnya yang telah lulus uji GPT
- Staphylococcus aureus yang tumbuh harus
berwarna putih/kekuningan dengan zona
berwarna kuning di sekeliling koloni

22. Sterility Test
Sterility test atau uji sterilitas adalah suatu
metode untuk mengetahui sedian farmasi atau
alat kesehatany ang dipersyaratkan harus
dalam keadaan steril. Dengan demikian sediaan
dan peralatan tersebut harus bebas dari
mikroorganisme.

23. Terima
Kasih

24. A picture is worth a thousand words