1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 29714
(51) A61K 39/35 (2006.01)
A61B 10/00 (2006.01)
МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2014/0673.1
(22) 15.05.2014
(45) 15.04.2015, бюл. №4
(72) Аманжол Рафилбек Аманжолұлы; Тажбаева
Даурия Талаповна; Сулейменов Маратбек
Жаксыбекович
(73) Товарищество с ограниченной
ответственностью "Казахский научно-
исследовательский ветеринарный институт"
(56) Шихобалова Н.П. Вопросы иммунитета при
гельминтозах. М.: Издательство АН СССР, 1950,
с.120-121
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛЛЕРГЕНА ДЛЯ
ДИАГНОСТИКИ ГЕМОНХОЗА ОВЕЦ
(57) Изобретение относится к ветеринарной
гельминтологии, в частности к способам получения
аллергена для диагностики гемонхоза овец.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в повышении
выявляемости больных гемонхозом овец.
Способ получения аллергена для диагностики
гемонхоза овец, включающий сбор половозрелых
гемонхусов, их сушку, растирание и
экстрагирование, высушенные и растертые
половозрелые гемонхусы разводят
физиологическим раствором, фильтруют через
фильтровальную бумагу, фильтрат концентрируют в
роторном испарителе при температуре 46°С в
течение 18 часов, полученный концентрат
автоклавируют при 1,0 атм в течение 40 минут,
затем смесь двукратно центрифугируют при
3000 об/мин в течение 20 минут, осадок удаляют, а в
полученный супернатант добавляют
физиологический раствор и доводят содержание
белка в нем до 5,0 мг/мл, после чего полученную
смесь консервируют в 0,2% растворе пропионовой
кислоты, лиофилизируют и используют в качестве
целевого продукта.
(19)KZ(13)A4(11)29714

2. 29714
2
Изобретение относится к ветеринарной
гельминтологии, в частности к способам получения
аллергена, применяемого для диагностики гемонхоза
овец.
Известен способ получения аллергена для
диагностики гемонхоза овец, включающий сбор
личинок гемонхусов, их сушку, растирание и
экстрагирование [Шихобалова Н.П. Вопросы
иммунитета при гельминтозах. - М. - Л., Издательство
АН СССР, 1950. с.120-121].
Недостатком данного способа является не высокая
специфичность чувствительности получаемого
аллергена.
Задачей изобретения является разработка способа
получения высокоактивного аллергена для выявления
гемонхоза овец и снижения себестоимости и
трудоемкости технологического процесса.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в повышении
выявляемости больных гемонхозом овец.
Способ получения аллергена для диагностики
гемонхоза, включающий сушку половозрелых
гемонхусов, растирание и экстрагирование,
высушенные и растертые гемонхусы разводят
физиологическим раствором, фильтруют через
фильтровальную бумагу, фильтрат концентрируют в
роторном испарителе при температуре 46°С в течение
18 часов, полученный концентрат автоклавируют при
1,0 атм в течение 40 минут, затем смесь двукратно
центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут,
осадок удаляют, а в полученный супернатант
добавляют физиологический раствор и доводят
содержание белка в нем до 5,0 мг/мл, после чего
полученную смесь консервируют в 0,2% растворе
пропионовой кислоты, лиофилизируют и используют
в качестве целевого продукта.
Способ получения аллергена для диагностики
гемонхоза овец осуществляют следующим образом.
Пример 1. Помещают половозрелые гемонхусы в
стерильную посуду, разводят физиологическим
раствором 1:1, и проводят фильтрацию этой жидкости
через фильтровальную бумагу, полученный фильтрат
концентрируют на ротационном испарителе типа ИР-
1М3 при температуре 46°С в течение 18 часов. Затем
концентрат автоклавируют в течение 12 часов при
1,0 атм в течение 40 минут, полученную смесь
центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут,
удаляют осадок, а надосадочную жидкость сливают и
вновь центрифугируют при 3000 об/мин в течение
20 минут, затем осадок удаляют, полученный
супернатант разводят стерильным физиологическим
раствором, при этом конечную концентрацию белка
доводят до 5,0 мг/мл. После чего полученный аллерген
консервируют 0,02% раствором пропионовой кислоты,
разливают в ампулы по 1,0 мл в стерильных условиях.
Стерильность препарата проверяют путем посева
на питательные среды.
МПА, МПБ в количестве 0,1-0,15 мл аллергена,
который вносят стерильной пипеткой. Среды
помещают в термостат при 37°С на 10 суток. При этом
на поверхности питательных сред должен
отсутствовать рост бактерий.
Пример 2. Безвредность препарата проверяют на
белых мышах весом 18-20 г в количестве 3 особей,
которым препарат вводят подкожно в область брюшка
по 0,5 мл. Наблюдение осуществляют в течение 5-10
суток. При осмотре места введения видимых
изменений не обнаруживают. Общее физиологическое
состояние мышей, при этом, должно быть
удовлетворительным.
Активность аллергена проверяют на 6 кроликах в
возрасте 3-3,5 месяцев, разделенных на две группы по
3 в каждой. Животные первой группы служат
контролем, они не подвергаются сенсибилизации, им в
область спины подкожно вводят физиологический
раствор. Кроликам второй группы в область спины
подкожно вводят аллерген в дозе по 1,0 мл, двукратно,
с интервалом двое суток.
Через двое суток после последнего введения
аллергена проводят аллергическое исследование. Для
этого аллерген вводят внутрикожно в дозе по 0,1 мл
всем опытным кроликам в область поясницы. Учет
аллергической реакции осуществлялся через 2 часа
после введения препарата.
У животных первой группы (контроль) видимых
изменений не наблюдается. У кроликов второй группы
(опытной) на месте введения аллергена отмечается
гиперемия и утолщение кожной складки на
12,0-19,0 мм.
Активность и специфичность аллергена
проверяется в производственных условиях.
Препарат вводят внутрикожно в подхвостовую
складку овец в дозе 0,2 см3
. Результаты аллергической
пробы учитывают через 2,5-3 часа, при утолщении
кожной складки на 2,0-2,5٠3,0-3,5 см и больше
аллергическая реакция считается положительной.
Таким образом, применение способа получения
аллергена позволит повысить выявляемость больных
гемонхозом овец и профилактировать данную
инвазию.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ получения аллергена для диагностики
гемонхоза овец, включающий сбор личинок
гемонхусов, их сушку, растирание и экстрагирование,
отличающийся тем, что высушенные и растертые
половозрелые гемонхусы разводят физиологическим
раствором, фильтруют через фильтровальную бумагу,
фильтрат концентрируют в роторном испарителе при
температуре 46°С в течение 18 часов, полученный
концентрат автоклавируют при 1,0 атм в течение
40 минут, затем смесь двукратно центрифугируют при
3000 об/мин в течение 20 минут, осадок удаляют, а в
полученный супернатант добавляют физиологический
раствор и доводят содержание белка в нем до
5,0 мг/мл, после чего полученную смесь консервируют
в 0,2% растворе пропионовой кислоты,
лиофилизируют и используют в качестве целевого
продукта.
Верстка Ж. Жомартбек
Корректор К. Нгметжанова