ИСПОЛЬЗОВАНИЕ «ЭНОАНТА» ДЛЯ КОРРЕКЦИИ ТОКСИЧЕСКИХ ПРОЯВЛЕНИЙ ПРОТИВООПУХОЛЕВО...Александр Ст
Среди хронических болезней человечества онкология занимает второе место в мире по смертности (после сердечно-сосудистых заболеваний). Ежегодно только в Украине диагностируется более 150 000 случаев заболеваний раком [1].
В практике клинической онкологии подавляющее большинство пациентов подлежат проведению лекарственной цитостатической терапии - либо как самостоятельного метода лечения, либо в комбинации с другими основными методами — хирургическим и лучевым. Противоопухолевые препараты не обладают достаточной специфичностью воздействия, поэтому каждый из цитостатиков имеет обширный спектр побочных эффектов [2,6,8,9,10,13]. Спектр токсических проявлений противоопухолевой терапии очень широк (ВОЗ классифицируют более 20 видов побочных действий противоопухолевой химической и лучевой терапии), а степень
2
проявлений может быть очень значительной. Практически все противоопухолевые препараты обладают более или менее выраженной гематологической токсичностью (поражение системы кроветворения), многие -гепатотоксичностью (повреждение функций печени) [3,4,6,10].
Все осложнения цитостатической терапии снижают качество жизни, а некоторые (тяжелые формы гематологической токсичности, нефротоксичности и др.) представляют непосредственную угрозу для жизни пациента. Такая особенность противоопухолевой терапии ставит вопрос о поиске новых фармакологических средств - протекторов для профилактики и борьбы с ее токсическими проявлениями [14].
The correction of Cisplatinum induced nephrotoxicity and hemotoxicity by grape polyphenol concentrate “Enoant”
Solyanik G.I., Pyaskovskaya O.N., Todor I.N., Dasyukevych O.I., Chekhun V.F. The goal of the study was to investigate the ability of grape polyphenols to reduce the injuries of normal tissues by Cisplatinum. It was shown that food concentrate of grape polyphenols “Enoant” provided significant protective effect on Cisplatinum-induced hemotoxicity and nephrotoxicity by increasing a red blood cell production, normalizing leukocyte level and improving a renal function. “Enoant” did not stimulate metastasis while showed antitumor activity against two tumor strains.
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ «ЭНОАНТА» ДЛЯ КОРРЕКЦИИ ТОКСИЧЕСКИХ ПРОЯВЛЕНИЙ ПРОТИВООПУХОЛЕВО...Александр Ст
Среди хронических болезней человечества онкология занимает второе место в мире по смертности (после сердечно-сосудистых заболеваний). Ежегодно только в Украине диагностируется более 150 000 случаев заболеваний раком [1].
В практике клинической онкологии подавляющее большинство пациентов подлежат проведению лекарственной цитостатической терапии - либо как самостоятельного метода лечения, либо в комбинации с другими основными методами — хирургическим и лучевым. Противоопухолевые препараты не обладают достаточной специфичностью воздействия, поэтому каждый из цитостатиков имеет обширный спектр побочных эффектов [2,6,8,9,10,13]. Спектр токсических проявлений противоопухолевой терапии очень широк (ВОЗ классифицируют более 20 видов побочных действий противоопухолевой химической и лучевой терапии), а степень
2
проявлений может быть очень значительной. Практически все противоопухолевые препараты обладают более или менее выраженной гематологической токсичностью (поражение системы кроветворения), многие -гепатотоксичностью (повреждение функций печени) [3,4,6,10].
Все осложнения цитостатической терапии снижают качество жизни, а некоторые (тяжелые формы гематологической токсичности, нефротоксичности и др.) представляют непосредственную угрозу для жизни пациента. Такая особенность противоопухолевой терапии ставит вопрос о поиске новых фармакологических средств - протекторов для профилактики и борьбы с ее токсическими проявлениями [14].
The correction of Cisplatinum induced nephrotoxicity and hemotoxicity by grape polyphenol concentrate “Enoant”
Solyanik G.I., Pyaskovskaya O.N., Todor I.N., Dasyukevych O.I., Chekhun V.F. The goal of the study was to investigate the ability of grape polyphenols to reduce the injuries of normal tissues by Cisplatinum. It was shown that food concentrate of grape polyphenols “Enoant” provided significant protective effect on Cisplatinum-induced hemotoxicity and nephrotoxicity by increasing a red blood cell production, normalizing leukocyte level and improving a renal function. “Enoant” did not stimulate metastasis while showed antitumor activity against two tumor strains.
Отчет
о результатах деятельности ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко и использовании закрепленного за ним государственного имущества
Отчет
о результатах деятельности ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко и использовании закрепленного за ним государственного имущества
1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 28649
(51) A61B 16/00 (2006.01)
G01N 33/48 (2006.01)
G01N 33/50 (2006.01)
КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ
МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2013/1244.1
(22) 20.09.2013
(45) 15.07.2014, бюл. №7
(72) Сарбаканова Шолпан Таупиковна; Латыпова
Залина Акрамовна; Анаятова Багдагуль
Жамалиевна; Омарбек Нуржан Сабажанулы
(73) Товарищество с ограниченной
ответственностью "Казахский научно-
исследовательский ветеринарный институт"
(56) http://www.refeFent.ru/17119807/similar,
30.11.2007
(54) СПОСОБ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКОЙ
ОЦЕНКИ ВОЗДЕЙСТВИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИ-
МОДИФИЦИРОВАННЫХ ОРГАНИЗМОВ
РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ НА
ОРГАНИЗМ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ
(57) Изобретение относится к медико-
биологической области и может быть использовано
при оценке безопасности генетически-
модифицированных организмов растительного
происхождения в опыте на лабораторных животных.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в разработке способа
медико-биологической оценки, основанного на
изучении отдаленного во времени действия
генетически-модифицированных организмов на
генеративные функции пренатальное и
постнатальное развитие потомства лабораторных
белых крыс до 5 поколения, с выявлением
структурных изменений на клеточном уровне при
гистологическом исследовании внутренних оргнов.
Способ медико-биологической оценки
воздействия генетически-модифицированных
организмов растительного происхождения на
организм лабораторных крыс, включающий
интегральные, гематологические, биохимические,
морфологические, иммунологические показатели,
дополнительно включает исследования
генеративных функций, пренатальное и
постнатальное развитие потомства лабораторных
животных, в рацион питания которых входил корм,
содержащий генетически модифицированные
организмы растительного происхождения, с
определением эмбриотоксичности и тератогенности
до 5 поколения и выявление воздействия
генетичеки-модифицированных организмов при
патологоанатомическом и гистологическом
рассмотрении на клеточном уровне, в качестве
экспериментальной модели используют
беспородных лабораторных белых крыс, затем
исследуют генеративные функции при ренатальном
и постнатальном развитии потомства лабораторных
крыс в более длительные сроки до 5 поколения с
выявлением патологических изменений в печени,
селезенке, репродуктивных органах проявляющихся
уменьшением размера матки, асимметрией ее
формы в виде гипоплазии одного из рогов матки,
отсутствием или уменьшением количества плодов,
незрелостью внутренних органов, отсутствием
одного из трех листков экто, энто-, мезо-дермы и
гистологическими изменениями в виде
неравномерной пролиферации желез с увеличением
количества бокаловидных клеток, инфильтрации
подслизистой основы лимфоцитами вплоть до
образования лимфоидных фолликул в желудке,
зернистой и гидропической белковой дистрофии
гепатоцитов с микрофокусами некроза в печени,
уменьшения размеров и количества лимфоидных
фолликул, отсутствия герминативных центров в
селезенке, гидропической, зернистой дистрофии
хрящевых клеток, фрагментацией, гипоплазии
миоцитов, частичной десквамации клеток
эктодермы плодов, которые дают оценку
воздействия генетически модифицированных
организмов на организм лабораторных животных,
устанавливают эмбриотоксичность и
тератогенность.
(19)KZ(13)A4(11)28649
2. 28649
2
Изобретение относится к медико-биологической
области и может быть использовано при оценке
безопасности генетически-модифицированных
организмов растительного происхождения в опыте
на лабораторных животных.
Известен способ медико-биологической оценки
генетически-модифицированных организмов
растительного происхождения, включающий
интегральные, гематологические, биохимические,
морфологические, иммунологические показатели, а
также исследования репродуктивной токсичности
ГМО на лабораторных животных, которые
включают изучение влияния на генеративную
функцию, эмбриотоксического и тератогенного
действий, регистрируемых в пренатальном и
постнатальном периодах развития
[http://www.referent.ru/l/119807/similar]
ПОСТАНОВЛЕНИЕ Главного государственного
санитарного врача РФ от 30.11.2007 N 80 "О
НАДЗОРЕ ЗА ОБОРОТОМ ПИЩЕВЫХ
ПРОДУКТОВ, СОДЕРЖАЩИХ ГМО". Дата
документа 30.11.2007. Приложение 1, Медико-
биологическая оценка безопасности генно-
инженерно-модифицированных организмов
растительного происхождения. Методические
указания МУ 2.3.2.2306-07.
Недостатком указанного способа является то, что
он не охватывает исследование отдаленного
действия генетически-модифицированных
организмов растительного происхождения на
генеративную функцию, пренатальный и
постнатальный периоды развития потомства
лабораторных животных до 5 поколения,
гистологические исследования внутренних органов.
В качестве лабораторной модели используют
дорогостоящих крыс линии Вистар.
Задачей изобретения является разработка
способа оценки репродуктивной токсичности
генетически-модифицированных организмов
растительного происхождения на организм
лабораторных животных.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в разработке способа
медико-биологической оценки, основанного на
изучении отдаленного во времени действия
генетически-модифицированных организмов на
генеративные функции, пренатальное и
постнатальное развитие потомства лабораторных
белых крыс до 5 поколения, с выявлением
структурных изменений на клеточном уровне при
гистологическом иследовании внутренних органов.
Способ медико-биологической оценки
воздействия генетически-модифицированных
организмов растительного происхождения на
организм лабораторных животных, включающий
гематологические, биохимические и
иммунологические показатели, дополнительно
включает исследование генеративных функций,
пренатальное и постнатальное развитие потомства
лабораторных животных, в рацион питания которых
входил корм, содержащий генетически-
модифицированные организмы, с определением
эмбриотоксичности и тератогенности до 5
поколения и выявление воздействия генетичеки-
модифицированных организмов при
патологоанатомическом и гистологическом
рассмотрение на клеточном уровне.
Изучают 5 поколений лабораторных белых крыс:
родительское (F0), первое (F1), второе (F2), третье
(F3), четвертое (F4) и пятое (F5). Исходная колония
крыс (самки и самцы, возраст - 40-50 дней).
Животных делят на две группы опытную и
контрольную. Каждая группа состоит из 50 белых
крыс (30 самок и 20 самцов). В рацион питания
животных «опытной» группы включают корм,
содержащий 5% генетически модифицированные
организмы растительного происхождения, крысы
«контрольной» группы получают традиционный
аналог исследуемого генетически-
модифицированного корма по 10 грамм на крысу.
Экспериментальные рационы животные получают
на протяжении всего срока эксперимента.
В каждой группе к началу спаривания не менее
15-20 самцов и 20-30 самок, у которых перед
началом опыта проверяют астральный цикл. Для
оплодотворения самок подсаживают к самцам в
соотношении 3:2 сроком на 1 эстральный цикл
(5 дней).
Крысят отсаживают от матерей на 30-й день
жизни, для продолжения эксперимента отбирают
потомство от разных самок (с целью рандомизации
исследований и избежание инцеста). В течение
эксперимента ведутся наблюдения за поедаемостью
корма.
Пренатальное и постнатальное развитие
потомства определяют на лабораторных животных.
Берут по 5 беременных самок из каждой группы,
подвергают эвтаназии на 19-20-й день
беременности. При вскрытии проводят
морфологическое исследование репродуктивных
органов: (матки и плаценты), плодов: определяют
количество мест имплантации и резорбции по
правому и левому рогу матки.
После чего проводят наблюдение постнатального
развития потомства. Для этого в первый день жизни
определяют величину помета в день родов,
подсчитывают количество живых и мертвых крысят,
особей разного пола, устанавливают внешние
уродства, измеряют массу тела. При эвтаназии у
лабораторных крыс осуществляют забор крови,
путем декапитации, в количестве 5-6 см3
для
дальнейших гематологических, биохимических и
иммунологических исследований.
Постнатальное развитие потомства оценивают в
течение первого месяца жизни. Для этого в первый
день жизни определяют величину помета в день
родов, подсчитывают количество живых и мертвых
крысят, особей разного пола, устанавливают
внешние уродства, измеряют массу тела. Массу тела
и краниокаудальный размер крысят измеряют на
2-е, 5-е, 10-е, 15-е, 20-е и 25-е сутки жизни. Также
определяли среднюю величину помета,
соотношение самцов и самок. Для продолжения
опыта отбирают второе поколение 30- дневных
белых крысят и сформировывают опытную и
контрольную группы по 30 самок и 20 самцов в
3. 28649
3
каждой. Далее повторяют серию опытов описанную
выше и так до пяти поколений.
Эмбриотоксичность и тератогенность
генетически-модифицированных организмов
растительного происхождения (ГМО) в
пренатальный и постнатальный периоды
определяют на лабораторных белых крысах и их
потомстве. У них устанавливают исходные
морфологические показатели органов размножения.
Для патоморфологических работ отбирают
образцы органов и тканей животных. После взятия
образцы фиксируют в 96° спирте и 10% растворе
формалина, далее подвергают парафиновой
проводке, заливке их в парафин. Для изучения
гистологической картины изготавливают
гистосрезы из опытных образцов тканей органов
экспериментальных животных. Срезы окрашивают
гемотоксилин эозином и рассматривают под
микроскопом.
Определяют следующие изменения в
постнатальном развитии потомства 3-5 поколений:
уменьшение общего количества крысят, средней
величины помета и процента выживаемости
животных; макро и микроскопические изменения у
животных: уменьшение размера матки, асимметрию
ее формы в виде гипоплазии одного из рогов матки.
Устанавливают отсутствие или уменьшение
количества плодов, а также определяют наличие и
количество гипоплазированных плодов.
Паренхиматозные органы, печень и селезенка,
дряблой консистенции. В печени наблюдают
зернистую и гидропическую белковую дистрофию
гепатоцитов с микрофокусами некроза. В селезенке
определяют уменьшение размеров и количества
лимфоидных фолликул, отсутствие герминативных
центров. Желудочно-кишечный тракта имеет
неравномерную пролиферацию подслизистой
основы лимфоцитами вплоть до образования
лимфоидных фолликул. У плодов животных
определяют незрелость внутренних органов,
отсутствие одного из трех листков (экто-, энто-,
мезо- дермы). Наблюдают гидропическую,
зернистую дистрофию хрящевых клеток,
фрагментацию, гипоплазию миоцитов, частичную
десквамацию клеток эктодермы.
Таким образом, после введения в рацион
кормления генетически-модифицированного корма,
лабораторным животным, изменяется макро и
микроскопическая структура внутренних органов
животных и их плодов, наблюдают признаки
эмбриотоксичности.
Заявляемый способ определения медико-
биологической оценки ГМО растительного
происхождения, отличается высокой
информативностью, поскольку феномен
репродуктивной токсичности высокочувствителен
ко всем изменениям. Срок проведения эксперимента
(до 5 поколений) дает возможность проследить
отдаленное действие ГМО растительного
происхождения на репродуктивную функцию и
организм животных в целом. Использование
разработаного способа отличается технической и
экономической доступностью.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ медико-биологической оценки
воздействия генетически-модифицированных
организмов растительного происхождения на
организм лабораторных животных, включающий
интегральные, гематологические, биохимические,
морфологические, иммунологические показатели,
исследование генеративных функций, пренатальное
и постнатальное развитие потомства лабораторных
животных, в рацион питания которых вводят корм,
содержащий генетически модифицированные
организмы растительного происхождения, с
определением эмбриотоксичности и тератогенности
и выявление воздействия генетически-
модифицированных организмов при
патологоанатомическом и гистологическом
рассмотрении на клеточном уровне,
отличающийся тем, что в качестве
экспериментальной модели используют
беспородных лабораторных белых крыс, у которых
исследуют генеративные функции при
пренатальном и постнатальном развитии их
потомства до 5 поколения, и, при выявлении
уменьшения размера матки, асимметрии ее формы в
виде гипоплазии одного из рогов, отсутствии или
уменьшении количества плодов, незрелости
внутренних органов, отсутствии одного из трех
листков экто-, энто-, мезодермы, а также, при
гистологических изменениях в виде неравномерной
пролиферации желез с увеличением количества
бокаловидных клеток, инфильтрацией подслизистой
основы лимфоцитами вплоть до образования
лимфоидных фолликул в желудке, зернистой и
гидропической белковой дистрофии гепатоцитов с
микрофокусами некроза в печени, уменьшении
размеров и количества лимфоидных фолликул,
отсутствии герминативных центров в селезенке,
частичной десквамации клеток эктодермы плодов, -
оценивают отдаленное отрицательное воздействие
генетически модифицированных организмов на
организм лабораторных животных.
Верстка Ж. Жомартбек
Корректор Е. Барч