Документ представляет собой описание изобретения для получения аллергена, используемого в диагностике трихинеллеза свиней. Изобретение направлено на повышение специфичности и эффективности диагностики, а также на снижение затрат на производство аллергена. Описан подробный процесс получения аллергена, включая экстракцию и проверку его активности на животных.

1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 29713
(51) A61K 39/35 (2006.01)
A61P 33/00 (2006.01)
МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2014/0439.1
(22) 04.04.2014
(45) 15.04.2015, бюл. №4
(72) Аманжол Рафилбек Аманжолұлы; Тажбаева
Даурия Талаповна; Сулейменов Маратбек
Жаксыбекович
(73) Товарищество с ограниченной
ответственностью "Казахский научно-
исследовательский ветеринарный институт"
(56) Шихобалова Н.П. Вопросы иммунитета при
гельминтозах. Издательство АН СССР, 1950, с.85-
87.
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛЛЕРГЕНА ДЛЯ
ДИАГНОСТИКИ ТРИХИНЕЛЛЕЗА СВИНЕЙ
(57) Изобретение относится к ветеринарной
гельминтологии, в частности к способам получения
аллергена для диагностики трихинеллеза свиней.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в повышении
выявляемости больных трихинеллезом свиней.
Способ получения аллергена для диагностики
трихинеллеза, включающий сбор личинок
трихинелл, их сушку, растирание, экстрагирование,
высушенные и растертые личинки трихинелл
разводят физиологическим раствором, фильтруют
через фильтровальную бумагу, фильтрат
концентрируют в роторном испарителе при
температуре 46°С в течение 18 часов, полученный
концентрат автоклавируют при 1,0 атм в течение
40 минут, затем смесь двукратно центрифугируют
при 3000 об/мин в течение 20 минут, осадок
удаляют, а в полученный супернатант добавляют
физиологический раствор и доводят содержание
белка в нем до 5,0 мг/мл, после чего полученную
смесь консервируют в 0,2% растворе пропионовой
кислоты, лиофилизируют и используют в качестве
целевого продукта.
(19)KZ(13)A4(11)29713

2. 29713
2
Изобретение относится к ветеринарной
гельминтологии, в частности к способам получения
аллергена, применяемого для диагностики
трихинеллеза свиней.
Известен способ получения аллергена для
диагностики трихинеллеза свиней, включающий сбор
личинок трихинелл, их сушку, растирание,
экстрагирование [Шихобалова Н.П. Вопросы
иммунитета при гельминтозах. - М. - Л., Издательство
АН СССР, 1950. с.85 - 87].
Недостатком данного способа является не высокая
специфичность чувствительности получаемого
аллергена.
Задачей изобретения является разработка способа
получения высокоактивного аллергена для выявления
трихинеллеза свиней и снижения себестоимости и
трудоемкости технологического процесса.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в повышении
выявляемости больных трихинеллезом свиней.
Способ получения аллергена для диагностики
трихинеллеза, включающий сбор личинок трихинелл,
их сушку, растирание, экстрагирование, высушенные и
растертые личинки трихинелл разводят
физиологическим раствором, фильтруют через
фильтровальную бумагу, фильтрат концентрируют в
роторном испарителе при температуре 46°С в течение
18 часов, полученный концентрат автоклавируют при
1,0 атм в течение 40 минут, затем смесь двукратно
центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут,
осадок удаляют, а в полученный супернатант
добавляют физиологический раствор и доводят
содержание белка в нем до 5,0 мг/мл, после чего
полученную смесь консервируют в 0,2% растворе
пропионовой кислоты, лиофилизируют и используют в
качестве целевого продукта.
Способ получения аллергена для диагностики
трихинеллеза свиней осуществляют следующим
образом.
Пример. Собирают личинки трихинелл из мяса
больных трихинеллезом убойных свиней в
стерильную посуду, разводят физиологическим
раствором 1:1, и проводят фильтрацию этой жидкости
через фильтровальную бумагу, полученный фильтрат
концентрируют на ротационном испарителе типа ИР-
1М3 при температуре 46°С в течение 18 часов. Затем
концентрат автоклавируют в течение 12 часов при
1,0 атм в течение 40 минут, полученную смесь
центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут,
удаляют осадок, а надосадочную жидкость сливают и
вновь центрифугируют при 3000 об/мин в течение
20 минут, затем осадок удаляют, полученный
супернатант разводят стерильным физиологическим
раствором, при этом конечную концентрацию белка
доводят до 5,0 мг/мл. После чего полученный аллерген
консервируют 0,02% раствором пропионовой кислоты,
разливают в ампулы по 1,0 мл в стерильных условиях.
Стерильность препарата проверяют путем посева
на питательные среды.
МПА, МПБ в количестве 0,1-0,15 мл аллергена,
который вносят стерильной пипеткой. Среды
помещают в термостат при 37°С на 10 суток. При этом
на поверхности питательных сред должен
отсутствовать рост бактерий.
Безвредность препарата проверяют на белых
мышах весом 18-20 г в количестве 3 особей, которым
препарат вводят подкожно в область брюшка по
0,5 мл. Наблюдение осуществляют в течение
5-10 суток. При осмотре места введения видимых
изменений не обнаруживают. Общее физиологическое
состояние мышей, при этом, должно быть
удовлетворительным.
Активность аллергена проверяют на 6 кроликах в
возрасте 3-3,5 месяцев, разделенных на две группы по
3 в каждой. Животные первой группы служат
контролем, они не подвергаются сенсибилизации, им в
область спины подкожно вводят физиологический
раствор. Кроликам второй группы в область спины
подкожно вводят аллерген в дозе по 1,0 мл, двукратно,
с интервалом двое суток.
Через двое суток после последнего введения
аллергена проводят аллергическое исследование. Для
этого аллерген вводят внутрикожно в дозе по 0,1 мл
всем опытным кроликам в область поясницы. Учет
аллергической реакции осуществлялся через 3 часа
после введения препарата.
У животных первой группы (контроль) видимых
изменений не наблюдается. У кроликов второй группы
(опытной) на месте введения аллергена отмечается
гиперемия и утолщение кожной складки на
12,0-19,0 мм.
Активность и специфичность аллергена
проверяется в производственных условиях.
Препарат вводят внутрикожно в подхвостовую
складку свиней в дозе 0,2 см3
. Результаты
аллергической пробы учитывают через 24 часа, при
утолщении кожной складки на 17,0-22,0 мм,
аллергическая реакция считается положительной.
Таким образом, применение способа получения
аллергена позволит повысить выявляемость больных
трихинеллезом свиней и профилактировать данную
инвазию.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ получения аллергена для диагностики
трихинеллеза свиней, включающий сбор личинок
трихинелл, их сушку, растирание, экстрагирование,
отличающийся тем, что высушенные и растертые
личинки трихинелл разводят физиологическим
раствором, фильтруют через фильтровальную бумагу,
фильтрат концентрируют в роторном испарителе при
температуре 46°С в течение 18 часов, полученный
концентрат автоклавируют при 1,0 атм в течение
40 минут, затем смесь двукратно центрифугируют при
3000 об/мин в течение 20 минут, осадок удаляют, а в
полученный супернатант добавляют физиологический
раствор и доводят содержание белка в нем до
5,0 мг/мл, после чего полученную смесь консервируют
в 0,2% растворе пропионовой кислоты,
лиофилизируют и используют в качестве целевого
продукта.
Верстка Ж. Жомартбек
Корректор К. Нгметжанова