I stafilococchi gram-positivi, in particolare Staphylococcus aureus, sono patogeni comuni con capacità di causare infezioni attraverso la produzione di tossine e l'invasione dei tessuti. Questi batteri possono essere trasmessi attraverso contatti interpersonali e alimenti contaminati, rappresentando un rischio significativo per la salute. La loro resistenza agli antibiotici, evolutasi rapidamente, ha reso difficile il trattamento e dilagano frequentemente in ambienti ospedalieri.

2. Cocchi Gram Positivi - Staphylococci Pus

3. Stafilococchi Gram + Presenza di Ponte Pentaglicinico nella struttura del peptidoglicano Immobili Aerobi facoltativi Fermentanti glucosio Ospite naturale della cute e delle mucose dei mammiferi

4. Stafilococchi Due sole specie: Staphylococcus aureus PATOGENO Staphylococcus albus NON PATOGENO La patogenicità è correlata soprattutto con la capacità di produrre coagulasi piuttosto che con la pigmentazione: tutti gli S. coagulasi+, di origine umana, vengono raggruppati come S. aureus . L’analisi delle sequenze degli acidi nucleici mostra che sono più simili ai bacilli che non agli streptococchi

5. Egg York Agar (7.5% NaCl)

6. Morfologia A grappoli Cell wall ed altre strutture di superficie cell wall tipico gram + Sensibile al lisozima acid teicoico e ribitolo antigeni specie specifici

7. Staphylococcus aureus Uno dei più comuni e virulenti patogeni batterici principale causa di morte prima dell’introduzione degli antibiotici

8. Habitat Normale pelle, ghiandole dell’epidermide, membrane mucose narici (25-30% dei portatori) Tratto intestinale Tratto genito-urinario

9. La crescita è più rigogliosa in condizioni aerobiche che anaerobiche Staphylococcus aureus Forma grosse colonie gialle in mezzo ricco Salt Tolerant (fino a 15% NaCl (Mannitol Salt Agar—7.5% NaCl)  -emolitico su agar sangue

10. Fisiologia La capsula lo protegge dalla fagocitosi dei leucociti polimorfonucleati Favorisce l’adesione a cateteri e materiali plastici Peptidoglicano 10-12 subumità alternate di NAMuramic ac e NAGlucosamina, Tetrapeptidi sono legati al NAM Ha attività endotossinica (ascessi) Il lisozima presente nelle lacrime, saliva e nei leucociti può idrolizzare il PG.

11. Staphylococcus Peptiglicano = N-acetyl muramic acid N-acetyl glucosamine Capsula o strato mucoso polisaccaridico Strato di peptidoglicano Polisaccaride A (acido teicoico) Proteina A Membrana citoplasmatica Fattore di coagulazione

12. Fisiologia La PROTEINA A è una proteina di superficie legata covalentemente con il PG. Extracellularmente induce produzione di Ab. polisaccaride A è un Acido ribitol-teicoico legato al PG e alla membrana citoplasmatica. è specie/specifico. L ‘ AT lega la fibronectina presente sulle mucose.

13. Ingresso di Staph nel corpo Desquamazione delle cellule epiteliali e loro inalazione contatti interpersonali Contatti con oggetti contaminati Aderenza fibrille superficiali composte di proteine e acido lipoteicoico Lega la fibronectina delle cellule dell’ospite capsula

14. Patogenesi Colonizza entra, aderisce, si moltiplica Moltiplicazione Sfugge alla risposta immunitaria Interferisce con la risposta immunitaria Danneggia i tessuti dell’ospite Trasmissione

15. Patogenesi Causa malattie sia con tossine sia per invasione e distruzione dei tessuti.

16. Ascessi Foruncoli in bulbi piliferei Crosticine; comune fra i bambini

17. Osteomyelitis– “an infection of the bone that occurs most frequently in the lower extremities . Most commonly, it develops after severe local trauma with an associated open fracture . The adjacent soft tissue structures are injured together with the bone, and can form a poorly vascularized and scarred tissue bed. Simple debridement and antibiotic therapy are often unsuccessful in treating lower extremity osteomyelitis. As a result, patients frequently present after multiple failed treatments and with resistant or polymicrobial bacterial infection .” http://www.microsurgeon.org/osteomyelitis.htm Osteomieliti

18. Avvelenamento da cibo Non richiede colonizzazione Produzione di enterotossina nel cibo prima dell’ ingestione intossicazione, non infezione i sintoni sono rapidi (4 hr) Cibi grassi Permettono la crescita di un gran numbero di organismi Cibi principalmente contaminati Carne insaccata Gelati, cibi a base di creme 10 5 organismi/gram 1  g produce sintomi Prodotti 10 5 organismi / giorno

19. STAFILOCOCCO AUREO Alimenti a rischio Habitat Come avviene la contaminazione? Latticini e gelati Alimenti molto manipolati Naso e gola dei portatori sani Ferite, anche piccole, a livello cutaneo Toccando gli alimenti Tossendo o starnutendo sul cibo Usando attrezzature non sanificate se le mani hanno abrasioni o ferite dopo aver tossito o starnutito Creme, carni trite

20. STAFILOCOCCO AUREO Prevenzione Sensibilità Sintomi Lavaggio frequente delle mani Rispetto norme igieniche nella lavorazione Rispetto delle temperature Uso di mascherina e guanti per lavorare alimenti che non subiranno cottura Bendaggi impermeabili per ferite alle mani tossina resistente Microrganismo sensibile al calore Vomito, diarrea, dolori addominali da 1-6 ore dall’ingestione

21. Enterotossina Stabile 100 o C, 30 minuti gastrico, enzimi Agisce sul nervo vago e localizza nello stomaco Stimola vomito acuto 1-5 hr Veloce come una neurotossina Stimola la peristalsi intestinale diarrea

22. Patogensi ed immunità S. areus produce molti fattori di virulenza tra cui almeno 5 tossine che danneggiano le membrane delle cellule ospiti. Emolisine a, b, d, g leukocidina tossina esfoliativa, tossina della toxic shock syndrome, 5 enterotossine.

23. Tossina ALFA E’ citotossica per un vasto tipo di cellule: Eritrociti di coniglio, leucociti, piastrine, fibroblasti, cellule muscolari lisce delle vene. Codificata sia da gene cromosomiale che plasmidico

24. Tossina ALFA causa necrosi Si inserisce direttamente nel lipid bilayer Forma pori Le cellule perdono soluti e poi lisano

25. Tossina Beta Chiamata anche Sfingomielinasi C (idrolizza I fosfolipidi di membrana), heat sensibile, tossica per molte cellule quali: eritrociti (soprattutto cavie), leukociti, macrofagi, fibroblasti. Causa l’ idrolisi dei P-lipidi di membrana Insieme alla Tox A è responsabile della distruzione tissutale e dell’abilità di Staph di proliferare in presenza di una risposta infiammatoria.

26. Tossine Delta e Gamma Delta : termostabile, ampio spettro di attività citolitica, distrugge le membrane come un detergente (non è specie-specifica). Gamma: distrugge eritrociti (coniglio, uomo e pecora) e cellule linfoblastiche Leukocidina: due sub-unità che separatamente non hanno attività. Insieme, causano cambiamente strutturali delle membrane, formazione di pori ed aumento di permeabilità (uomo e coniglio).

27. Esotossine Pirogene Membri di una famiglia di tossine correlate chiamate superantigeni Esotossine A, e B Enterotossine (groppo B Strep exotoxin A) TSST Tossina esfoliativa Codificate da plasmidi 30-50% di tutti i ceppi di Staph produce la tossina

28. Tossina Esfoliativa Due geni Cromosomale ( forma A ) Plasmidico ( forma B ) causa la separazione dello strato granuloso area si riempe di fluidi la pelle si stacca e desquamazione

29. Tossina esfoliativa dermatite esfoliativa del neonato impetigine bollosa

30. Toxic shock syndrome Dal 1978 in US Staph poco presente nella flora vaginale Generalmente in donne giovani che usano assorbenti interni durante il periodo mestruale conditioni che aumentano la crescita dello Staph e la produzone di tossine Assorbenti super absorbenti Ambiente aerobico negli assorbenti pH neutro Assorbimento di magnesio da parte dell’assorbente

31. Toxic shock syndrome Toxin-1 Esotossina TSST-1 Febbre, ipotensione, diversi organi coinvolti, eruzione cutanea Secreta da alcuni ceppi di S. aureus

32. Enterotossine Enterotossine Resistenti all’ idrolisi degli enzimi gastrici e sono stabili 30 min a 100°C. Meccanismo di azione non è ancora noto

33. Enzimi COAGULASI : Una forma LEGATA al cell wall converte il fibrinogeno in fibrina insolubile permettendo allo Staph di raggruparsi ed una LIBERA che si combina con un fattore trombina-like formando stafilotrombina. È un marcatore di virulenza La coagulasi formando uno strato di fibrina permette allo Staph di localizzarsi e di proteggersi dalla fagocitosi .

34. Coagulase test Slide method Test tube method (+) (-) (-) (+)

35. Enzimi Catalasi : Prodotta da tutti gli staph per convertire H 2 O 2 tossica dopo la fagocitosi. Ialurodinasi : Idrolizza l’acido iarulonico (un mucopolisaccaride dei tessuti connettivi) facilitando la diffusione del batterio nei tessuti. Oltre il 90% degli Staph produce questo enzima. Fibrinolisina, Lipasi, Nucleasi, e Pennicillasi una  -lattamasi

36. Catalase test (-) (+) Metabolizza l’ H 2 O 2 sintetizzato dai PMN e dai macrofagi in O 2 e H 2 O

37. DNase test 0.1% Toluidine blue 1N HCl

38. Una volta superata la pelle, lo Staph può evadere le difese dell’ ospite con diversi meccanismi anticorpi proteina A Lega la porzione Fc di anticorpi Interferisce con la fagocitosi

39. Difese Cellulari capsula Previene la fagocitosi tossina alpha Uccide le cellule target leokocidina due componenti che agiscono sinergicamente Danni ai PMN, leukociti

40. Difese Cellulari Coagulasi Non una tossina meccanismo Converte il fibrinogeno in fibrina forma coaguli Organismi ricoperti di fibrina Resistono alla fagocitosi

41. Difese Cellulari catalasi Metabolizza l’ H 2 O 2 sintetizzato dai PMN e dai macrofagi in O 2 e H 2 O complemento La capsula previene la formazione del complemento

42. Malattia se Staph. aureus supera le barriere dell’ ospite Infezioni della pelle generale suppurazione necrosi Formazione di ascessi

43. Transmissione/epidemiologia Flora intestinale di portatori Sopravvive a lunghi periodi in assenza d’acqua È tra i batteri più resistenti Epidemie ospedaliere

44. Trattamento Originariamente con penicillina (1941)   -lattamasi si sono manifestati in meno di 10 anni penicillina resistenti Codificata da un gene su di un plasmide Derivati della penicillina penicillinasi-resistenti nafcillina, oxicillina, dicloxicillina, vancomicina