1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 29359
(51) A61B 10/00 (2006.01)
G01N 33/53 (2006.01)
МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2014/0156.1
(22) 11.02.2014
(45) 25.12.2014, бюл. №12
(72) Сарбаканова Шолпан Таупиковна; Латыпова
Залина Акрамовна; Омарбек Нұржан Сабажанұлы
(73) Товарищество с ограниченной
ответственностью "Казахский научно-
исследовательский ветеринарный институт"
(56) «Биологическая безопасность. Сырье и
продукты пищевые. Метод идентификации
генетически модифицированных источников (ГМИ)
растительного происхождения». СТ РК 1346-2005
(ГОСТ Р 52173-2003, МОД). Комитет по
техническому регулированию и метрологии
Министерства индустрии и торговли Республики
Казахстан, с.20
(54) ПРАЙМЕРЫ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ
ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ
РАСТЕНИЙ НА ОСНОВЕ ПОЛИМЕРАЗНОЙ
ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ
(57) Изобретение относится к области
молекулярной биологии, в частности
идентификации генетически модифицированных
растений, и может быть использовано при
молекулярно-генетических исследованиях методом
полимеразной цепной реакции.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в использовании
эффективных праймеров для определения ДНК
генетически модифицированных организмов в
кормах и пищевых продуктах.
Праймеры для идентификации генетически
модифицированных источников растительного
происхождения, включающие 2 пары праймеров на
промотор 35 S и на терминатор nos,
использующиеся в конструкции при генетической
модификации, в следующей нуклеотидной
последовательности
35 S прямой 5'GCTCCTACAAATGCCATCA3'
35 S обратный 5'GATAGTGGGATTGTGCGTCA3'
nos прямой 5'GAATCCTGTTGCCGGTCTTG3'
nos обратный 5TTATCCTAGTTTGCGCGCTA3',
в качестве праймеров используются фрагменты
ДНК со следующими нуклеотидными
последовательностями:
35S - прямой праймер
5'GCCTCTGCCGACAGTGGT3' и обратный праймер
5'AAGACGTGGTTGGAACGTCTT С3' matK - прямой
праймер
5' CGTACТТТТATGTTTACAGGCТАА3'
и обратный праймер
5'GAGAAATCTTTTTCATTACTACAGTG3',
в качестве праймеров используются фрагменты
ДНК со следующими нуклеотидными
последовательностями:
35S - прямой праймер
5'GCCTCTGCCGACAGTGGT3' и
обратный праймер
5'AAGACGTGGTTGGAACGTCTT С3'
matK - прямой праймер
5'CGTACTTTTATGTTTACAGGCTAA3' и
обратный праймер 5'GAG АААТСТТТТТС ATT
ACT AC AGTG3'.
(19)KZ(13)A4(11)29359

2. 29359
2
Изобретение относится к области молекулярной
биологии, в частности идентификации генетически
модифицированных растений, и может быть
использовано при молекулярно-генетических
исследованиях методом полимеразной цепной
реакции.
Известны праймеры для идентификации
генетически модифицированных растений на основе
полимеразной цепной реакции, включающие 2 пары
праймеров на промотор 35S и на терминатор nos в
следующей нуклеотидной последовательности
35 S прямой 5'GCTCCTACAAATGCCATCA3'
35S обратный 5'GATAGTGGGATTGTGCGTCA3'
nos прямой 5'GAATCCTGTTGCCGGTCTTG3'
nos обратный 5′TTATCCTAGTTTGCGCGCTA3'
[СТ РК 1346-2005 «Биологическая безопасность.
Сырье и продукты пищевые. Метод идентификации
генетически модифицированных источников (ГМИ)
растительного происхождения» Издание
официальное. СТ РК 1346-2005 (ГОСТ Р 52173-
2003, МОД) Введен впервые. Астана: Комитет по
техническому регулированию и метрологии
Министерства индустрии и торговли Республики
Казахстан (Госстандарт), 20 с.]
Недостатком указанного способа является то, что
при определении генетически модифицированных
организмов используются 2 пары праймеров на
генетическую модификацию: промоторную и
терминаторную область, без идентификации
растительного происхождения ГМО.
Задачей изобретения является разработка
экономически эффективного набора праймеров для
идентификации генетически модифицированных
организмов растительного происхождения.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в использовании
эффективного набора праймеров для первичного
определения ДНК генетически модифицированного
организма растительного происхождения в кормах и
пищевых продуктах.
Праймеры для идентификации генетически
модифицированных источников растительного
происхождения, включающие 2 пары праймеров на
промотор 35 S и на терминатор nos,
использующиеся в конструкции при генетической
модификации, в следующей нуклеотидной
последовательности
35 S прямой 5’GCTCCTACAAATGCCATCA3’
35 S обратный 5'GATAGTGGGATTGTGCGTС А3'
nos прямой 5'GAATCCTGTTGCCGGTCTTG3'
nos обратный 5'TTATCCTAGTTTGCGCGCTA3;
в качестве праймеров используются фрагменты ДНК
со следующими нуклеотидными
последовательностями:
35S - прямой праймер
5'GCCTCTGCCGACAGTGGT3' и
обратный праймер
5'AAGACGTGGTTGGAACGTCTT С3'
matK - прямой праймер
5'CGTACTTTTATGTTTACAGGCTAA3' и
обратный праймер
5'GAGAAATCTTTTTCATTACTACAGTG3'.
Изобретение осуществляется следующим
образом.
Используются олигонуклеотидные прямой и
обратный праймеры только к 35S промоторной
регуляторной последовательности вируса мозаики
цветной капусты, использующегося при создании
генетически модифицированных организмов и
характерных для генетических модификаций без
использования праймеров к терминаторной - nos
области. Генетическая конструкция при создании
генетически модифицированных организмов
обязательно включает в себя промоторную область,
трансген, определяющий новое свойство, и
терминаторную область. Количество трансгенных
линий сои и кукурузы, которые можно обнаружить в
ГМ-продуктах с помощью методов детекции 35S-
промотора составляет приблизительно 92%.
Для первичного скрининга ГМО в кормах и
животноводческой продукции используются:
праймеры только на регуляторную 35S
промоторную область генетической модификации,
характерную для подавляющего большинства ГМО,
и на растительную ДНК в качестве внутреннего
контроля ПЦР - универсальные matK праймеры
(ДНК маркеры хлоропластов растений). Для
идентификации ДНК растительного происхождения
используются ДНК-маркеры хлоропластной ДНК в
отличие от митохондриальной ДНК,
использующейся для штрихкодирования животных,
что связано с низким уровнем изменчивости
хлоропластной ДНК.
Впервые для детекции растительных материалов
или продуктов и кормов для животных на их основе
для идентификации ГМО растительного
происхождения используется универсальный matK
праймер хлоропластной ДНК растения Pinus
thunbergii (Сосна Тунберга). Праймер matK является
универсальным праймером для амплификации ДНК
некодирующего района хлоропластов большой
таксономической области различных видов
растений. Он используется в качестве маркера в
популяционной биологии, при изучении эволюции
растений, внутри и межвидовой филогении.
Применение двух пар праймеров для
определения генетически модифицированных
источников только по одному из компонентов,
характерному для генетической модификации - 35
S-промотору и ДНК маркеру растений -
универсальному matK праймеру на основе
полимеразной цепной реакции позволит
идентифицировать ГМО растительного
происхождения.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Праймеры для идентификации генетически
модифицированных растений на основе
полимеразной цепной реакции, включающие 2 пары
праймеров на промотор 35 S и на терминатор nos в
следующей нуклеотидной последовательности:
35 S прямой 5'GCTCCTACAAATGCCATCA3'
35S обратный 5'GATAGTGGGATTGTGCGTСА3'
nos прямой 5'GAATCCTGTTGCCGGTCTTG3'

3. 29359
3
nos обратный 5'ТТАТCCTAGTTTGCGCGCTA3'
отличающийся тем, что в качестве праймеров
используют фрагменты ДНК со слудующими
нуклеотидными последовательностями:
35 S - прямой праймер
5'GCCTCTGCCGACAGTGGT3' и
обратный прймер
5'AAGACGTGGTTGGAACGTСТТС3'
matK - прямой праймер 5'
CGTACTTTTATGTTTACAGGCTAA3' и
обратный праймер
5'GAGАААТСТТТТТСАТТАСТАСAGTG3'.
Верстка А. Сарсекеева
Корректор К. Нгметжанова