This document discusses thyroid hormone tests (T3, T4, TSH, fT4) and their principles, procedures, and clinical significance. It describes the hormones T3 and T4, how they are regulated by the hypothalamus-pituitary-thyroid axis, and common thyroid disorders like hypothyroidism and hyperthyroidism. It provides details on specific assays for the hormones, including radioimmunoassay, immunoradiometric assay, enzyme immunoassay, and electrochemiluminescent assay. Reference ranges and clinical implications of test results are also covered.

1. TUTOR IMUNOLOGIPEMERIKSAAN HORMON TIROID (T3, T4, TSH, fT4)Lestari Ekowati,dr.SitiRochmatoenHarmadji, dr., SpPK(K)Selasa, 22 Maret 2011

2. PENDAHULUANTUTOR IMUNOLOGI2Kelainankelenjartiroidmempelajaridanmendiagnosis :Axis Hipotalamus- Hipofisis-Tiroid

3. hormon yang bekerjapada axis tersebut

4. pengaruhpada organ lainnya

5. pengaruhluarterhadap axis tersebutkelainanendokrinterseringkeduasetelah diabetes mellitusberpengaruhkehampirseluruhtubuh

6. HORMON TIROIDTUTOR IMUNOLOGI3Ada 2 :1. Tiroksin (Thyroxine = T4 = L-3,5,3’,5’-tetraiodothyronin) 2. Triiodothyronine (T3 = L-3,5,3’-triiodothyronine)Kuantitatifterbanyak : T4 T3 sedikit, tapiaktifsecarabiologis (potensi 3 x T4)T4 sebagaiprecursor / prohormonBiladiperlukanakandipecahdijaringanuntukmembentuk T3

7. PengaruhfisiologishormontiroidTUTOR IMUNOLOGI4

8. PengaturanhormontiroidTUTOR IMUNOLOGI5

9. MekanismeumpanbalikTUTOR IMUNOLOGI6

10. KELAINAN TIROIDTUTOR IMUNOLOGIKELAINAN TIROIDHIPOTIROIDGOITERHIPERTIROIDEUTIROIDOBATDIFUSNODULARUNINODULARMULTINODULAR7KLINISSUB KLINISKLINISSUB KLINIS

11. TUTOR IMUNOLOGITh 70-anTh 80-an8Radioimmunoassay (RIA)Immunoradiometric assay (IRMA)Enzyme immunoassay (EIA)Enzyme-linked immunoassay (ELISA)PEMERIKSAAN HORMON TIROIDElectrochemiluminescent assay(ECLIA)

12. RADIOIMMUNOASSAY (RIA)TUTOR IMUNOLOGI9DitemukanolehYallow and Bersonpadaakhirtahun 1950

13. MenggunakanRadioaktifsebagai label, seperti : 131I, 125I, 3H

14. Prinsipkompetitif : analit yang dideteksiberkompetisidengananalit yang berlabelradioaktifuntukberikatandenganantibodiAntibodipadafasepadatAg berlabelradioaktifAg takberlabel (sampel)Ikatan Ag-Abspesifik

15. IMMUNORADIOMETRIC ASSAY (IRMA)TUTOR IMUNOLOGI10Prinsip : ikatan non-kovalenreversibelantara antigen danantibodispesifik yang dilabeldenganradioaktifAntibodipadafasepadatAntibodiberlabelradioaktifIkatan Ag-AbspesifikSampel

16. ENZYME IMMUNOASSAY (EIA) TUTOR IMUNOLOGI11Menggunakanenzimsebagai label :horseradish peroxidase

17. glucose-6-phosphate-dehydrogenase

18. alkaline phosphatase

19. ß-D-galactosidaseEIA pertama kali menggunakanprinsipkompetitifsepertipada RIA

20. ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA) TUTOR IMUNOLOGI12Bagiandari EIANon kompetitif EIALebihsensitif(<1 pg/mL)Indirek: reagenberlabelenzymtidakikutbereaksipadaikatan Ag-AbawalSandwich = capture : jikaAb yang dilekatkanpadafasepadat

21. ELECTROCHEMILUMINESCENT ASSAY (ECLIA)13Emisicahayaakibatreaksielektrokimia, biasanyareaksiredoks, menghasilkaneksitasimolekul yang kembalike ground state.

22. Molekul yang seringdigunakansebagaichemiluminescense : luminol, acridium esters, ruthenium derivativesdannitrophenyl oxalate.

23. Paling sensitifdibanding RIA dan EIA.

24. Reagenstabildan non toksik.TUTOR IMUNOLOGI

25. PengambilansampelTUTOR IMUNOLOGITidakperlupersiapankhususBahan : serum, plasma EDTA atau heparinTidakperlumerubahpolamakan & aktifitasfisikDisimpan 2-8oC, 3-5 hariBeku : stabilsampai ± 30 hariObatberhentisampaitesselesaidikerjakanTidakhemolisisataulipemikAdajugaobat-obatan yang tetapdimintauntukdiminumkarenaingindiketahuipengaruhnya914

26. PEMERIKSAAN HORMON TIROID DI LAB. PK RSUD DR SOETOMO SURABAYATUTOR IMUNOLOGIT3, T4, TSH, fT4Senin, Rabu, Jum’atEIA, Thyrolisa, (Indec-Diagnostic)15

27. PEMERIKSAAN T3 TUTOR IMUNOLOGIVarian tirotoksik :kadar T3 ↑,T4 normal(T3 tirotoksikosis)Peningkatan T3 tanpapeningkatan T4 : gejalaawaltirotoksikosisrekurenpadapasien yang mendapatterapi16T4 dan T3 sebagianbesarterikatpadaThyroxineBinding Globuline(TBG)Konsentrasi T3 <<< T4Potensimetabolik T3 >>>

28. Prinsippemeriksaan T3TUTOR IMUNOLOGI117EIA KompetitifGoat anti-mouse IgGT3 conjugateMouse Ab anti-T3Sampel

29. Prosedurpemeriksaan T3TUTOR IMUNOLOGI1850 µLStandar/Sampel/KontrolCampurrata30 ‘’CampurRata 30 ‘’Microwells100 µLWorking conjugate reagen50 µLReagenAntibodiInkubasiSuhukamar60’Campur rata 30 ‘’InkubasiSuhukamar20’BuangCuci-bilas5 xHilangkansisa air dg absorbent paperBaca OD pada 450 nm dalam 15’100 µLSubstrate solution100 µLStop solution

30. PenghitunganhasilTUTOR IMUNOLOGI19AbsorbansDihitung rata-rata absorbansuntuktiap set standar, kontrol, sampelKonsentrasi (ng/mL)Konsentrasi T3 ditentukandenganmemasukkannilaiabsorbanstiapsampelkedalamkurvastandar.

31. TUTOR IMUNOLOGI20Range normal : 0,6-1,85 ng/mL.Kadar T3 total dalam serum parareldengan TBGPeningkatankadar T3 dapatterjadipadapenderitahipotiroid yang sedangmendapatkanterapiKonsentrasi minimal yang dapatterdeteksi :0,2 ng/mL.

32. Keterbatasanprosedur21Hasil yang benar&akuratdiperolehjikaprosedurpemeriksaandilakukansesuaiinstruksiProsedurpencuciansangatpenting. Pencucian yang tidakbenarakanmenghasilkanpresisi yang burukdanpembacaanabsorbans yang tinggipalsu.Sampel serum yang lipemik, hemolisisataukeruhtidakdapatdiperiksa.Hasil yang diperolehharusdigunakanbersamadenganprosedur diagnosis daninformasilainnyaTUTOR IMUNOLOGI

33. PEMERIKSAAN T4TUTOR IMUNOLOGIdisintesisdandisimpandalamkelenjartiroid>99% terikat, pada :Thyroxine binding globulin (TBG) 70%

34. Thyroxine binding pre albumin (TBPA) 20%

35. Albumin 10%0,03% dalamkeadaantidakterikat.ProteolisisThyroglobulinakanmelepaskan T4 kedalamalirandarah22T4 total : skrininggangguantiroidT4 ↑ : hipertiroidismeT4 ↓ : hipotiroidismeTextT4Text

36. Prinsippemeriksaan T4TUTOR IMUNOLOGI23EIA KompetitifAntibodi Anti T4T4 conjugateSampel

37. Prosedurpemeriksaan T4TUTOR IMUNOLOGI2425 µLStandar/Sampel/KontrolCampurRata 30 ‘’InkubasiSuhukamar60’Microwells100 µLWorking conjugate reagenCampur rata 30 ‘’BuangCuci-bilas5 x100 µLSubstrate solutionHilangkansisa air dg absorbent paperInkubasiSuhukamar20’100 µLStop solutionBaca OD 450 nm, 15’

38. 25Kadar T4 normal : 5,0 -13,0 ng/mLSebaiknyasetiaplaboratoriummenentukankadarnyasendiridisesuaikandengangeografisdanpopulasi yang adaKonsentrasi minimal yang dapatterdeteksiadalah 0,4 ng/mL.TUTOR IMUNOLOGI

39. PEMERIKSAAN TSHTUTOR IMUNOLOGIBACDE26disekresiolehlobus anterior kelenjarhipofisis(pituitary)mempengaruhiproduksidanpelepasan T3 dan T4 darikelenjartiroidsensitifuntukmendiagnosishipotiroidisme primer atausekunderTSHglikoprotein, BM ± 28.000 daltonterdiridari 2 subunit : alphadanbeta.

40. TUTOR IMUNOLOGI27TSH, LH, FSH, danhCG, memilikirantaialpha yang identik.Rantaibetaberbedanamunmengandungregiodenganurutanasam amino yang identik.Regio yang homolog inidapatmenyebabkanreaksisilang(cross reaction) denganbeberapaantisera TSH poliklonal. Kadar TSH sangatrendah, namunsangatpentinguntukmengaturfungsitiroid yang normal.Pelepasan TSH diaturolehTSH-releasing hormone (TRH) yang diproduksiolehhipotalamus.Kadar TSH dan TRH berbandingterbalikdengankadarhormontiroid.

41. Prinsippemeriksaan TSHTUTOR IMUNOLOGI28ELISA SANDWICHAntibodi Anti-TSH(murine)Antibodi Anti TSH (goat)Sampel

42. Prosedurpemeriksaan TSHTUTOR IMUNOLOGI29100 µLWorking conjugate reagenCampur rata30 ‘’InkubasiSuhukamar60’100 µLStandar/Sampel/KontrolMicrowellsInkubasiSuhukamar20’Campur rata 30 ‘’BuangCuci-bilas5 x100 µLTMB Substrate solutionHilangkansisa air dg absorbent paper100 µLStop solutionBaca OD 450 nm, 15’

43. TUTOR IMUNOLOGI30Kadar TSH normal : 0,4 -6,0 µIU/mLKadar TSH >10 µIU/mL : hipotiroidisme primerKadar TSH rendah/tidakterdeteksi/normal : indikatorhipotiroidismesekunder(kegagalansekresi TSH atau TRH)Kadar rendah : hipersekresi T3 dan T4 padaGrave’s diseaseatautiroiditisDD : memeriksakadar TSH dan fT4 dalam serum secarasimultanKonsentrasimin.yangterdeteksi : 0,2 µIU/mL.

44. PEMERIKSAAN FREE T4TUTOR IMUNOLOGI31T4 berikatandengan protein serumHanya 0,03% T4 yang bebas, disebutsebagaiFree T4 (fT4), merupakanmetabolikaktifHipertiroidisme primer -> produksi T4 >>-> kadar fT4 >>Hipotiroidisme primer -> produksi T4 < -> kadar fT4 <Kadar T4 total tergantungkadar TBG Kadar TBG dipengaruhioleh : obat, hormon steroid, kehamilan, danpenyakit non tiroid. Pemeriksaan fT4 : untukmengetahuikeseimbanganantara T4 bebasdan T4 yang terikat TBGMetodeinidapatmenggambarkan status tiroidsecaraumumdengansatumacampemeriksaan.

45. Prinsippemeriksaan fT4TUTOR IMUNOLOGI32EIA KompetitifAntibodiAnti-fT4fT4 conjugateSampel

46. Prosedurpemeriksaan fT4TUTOR IMUNOLOGI3350 µLStandar/Sampel/KontrolInkubasiSuhukamar60’Campur rata20-30 ‘’Microwells100 µLThyroxineenzime conjugate Campur rata 30 ‘’100 µLWorking Substrate solutionReagen A&B1:1BuangCuci-bilas5 xHilangkansisa air dg absorbent paper50 µLStop solutionInkubasiSuhukamar20’Baca OD 450 nm, 30’

47. TUTOR IMUNOLOGI1234fT4 dapatmemberikanpenilaian yang lebihakuratuntukpenilaian status tiroiddaripadaT4 totalPerubahan serum binding protein -> perubahan T4 total, namunkadar fT4 tetaptidakberubahfT4 ↑ : hipertiroidismefT4 ↓ :hipotiroidisme.Range fT4 normal :0,8 - 2,0 ng/dL34

48. Thank You !www.themegallery.com

49. NORMAL VALUETUTOR IMUNOLOGI

50. TUTOR IMUNOLOGI

51. Kurvastandar TSHTUTOR IMUNOLOGIabsorbansKonsentrasi TSH µIU/mL

52. Obat yang mempengaruhitiroidDopamine : mengurangisekresi TSHGlukokortikoid : mengurangisekresi TSHLithium : menurunkan fT4Yodida : menurunkan fT4Amiodaron : meningkatkanataumenekan fT4Estrogen : mempengaruhi TBGAndrogen : mempengaruhi TBGTUTOR IMUNOLOGI

53. PemantauanterapiTUTOR IMUNOLOGIPerubahan TSH serum lambat, butuhwaktubeberapabulanuntukkembalikerentang normalPengukuran T4 serum lebihbaikdaripada TSH sebagaiujitunggalfungsitiroidbilakondisi steady state belumtercapai, misalnyapadafaseawalpengobatantirotoksikosis

54. interferensiReaksisilangAntibodianalit endogenAntibodiheterofilikInteraksiobat Heparin merangsang lipoprotein lipase melepaskanasamlemakbebas yang menghambatikatan T4 pada protein serumFurosemide UremiaTUTOR IMUNOLOGI

55. TSH Anaklahir 4 hari 1.0-39.0 mIU/L2-20 minggu 1.7-9.121 minggu-20th 0.7-64.0 Dewasa 21-54th 0.4-4.2 55-87 tahun 0.5-8.9Kehamilan trimester 1 0.3-5.2TUTOR IMUNOLOGI

56. T4 Neonatus > 6.5 ug/dLDewasa 4.6-11.0T3 Dewasa 20-50 tahun 70-204 ng/dL 50-90 tahun 40-181T3 Dewasa 10-28 ng/dLFT4 Dewasa 0.8-2.0 ng/dLTUTOR IMUNOLOGI

57. ThyroxineTUTOR IMUNOLOGI= 3,5,3',5'-tetraiodothyronine (T4) : major thyroid hormones secreted by the follicular cells of the thyroid gland

58. synthesized via the iodination and covalent bonding of the phenyl portions of tyrosine residues found in an initial peptide, thyroglobulin, which is secreted into thyroid granules.

59. These iodinated diphenyl compounds are cleaved from their peptide backbone upon being stimulated by thyroid-stimulating hormone.T4 is transported in blood, with 99.95% being protein-bound, principally to thyroxine-binding globulin (TBG), and, to a lesser extent, to transthyretin and serum albumin.The half-life of thyroxine once released into the blood circulatory system is about 1 week.TUTOR IMUNOLOGI