KARYA TULIS ILMIAH

1. PENETAPAN KADAR ASPARTAM DALAM
SUPLEMENMAKANANSEDIAANSERBUKSECARA
KROMATOGRAFICAIRKINERJATINGGI
OLEH
HANIF MIFTA FINANTI
NPM P2.31.35.0.15.036
PROGRAMSTUDIDIPLOMAIIIANALISAFARMASIDANMAKANAN
POLITEKNIK KESEHATAN KEMENKES JAKARTA II
2018

2. PENETAPAN KADAR ASPARTAM DALAM
SUPLEMENMAKANANSEDIAANSERBUKSECARA
KROMATOGRAFICAIRKINERJATINGGI
Karya Tulis Ilmiah Ini Diajukan sebagai Syarat Untuk Memperoleh Gelar
Ahli Madya Analis Farmasi dan Makanan
OLEH
HANIF MIFTA FINANTI
NPM P2.31.35.0.15.036
PROGRAMSTUDIDIPLOMAIIIANALISAFARMASIDANMAKANAN
POLITEKNIK KESEHATAN KEMENKES JAKARTA II
2018

5. ABSTRAK
Hanif Mifta Finanti, “Penetapan Kadar Aspartam dalam Suplemen Makanan
Sediaan Serbuk secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi”, dibawah bimbingan
Ruth Elenora K.S., M.Farm., Apt dan Latirah, S.Si., M.Farm., 2018
Penggunaan pemanis buatan perlu diwaspadai karena dalam takaran yang berlebih
dapat menimbulkan efek samping yang merugikan kesehatan manusia. Telah
dilakukan penetapan kadar aspartam yang terdapat dalam sampel suplemen
makanan sediaan serbuk secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. Pengujian
dilakukan secara duplo disertai spiked sample dan baku. Berdasarkan pengujian
yang telah dilakukan dari tanggal 01 Maret sampai dengan 31 Maret 2018 di
Laboratorium Terapetik, Narkotika, Obat Tradisional, Kosmetik, dan Produk
Komplemen (Teranokoko) Balai Besar Pengawas Obat dan Makanan di Bandung,
didapat hasil rata-rata kadar sampel yaitu 262,380 mg/kg. Maka dapat
disimpulkan bahwa sampel tersebut memenuhi syarat Surat Edaran Nomor HK.
04.01.42.421.12.17.1666 tahun 2017 tentang Batas Maksimum Penggunaan
Pemanis Buatan yang Diizinkan dalam Produk Obat Tradisional dan Suplemen
Kesehatan yaitu 5500 (mg/Kg produk).
Kata kunci : Aspartam, suplemen makanan, kromatografi cair kinerja tinggi.

6. i
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur penulis panjatkan ke hadirat Allah SWT, yang telah
melimpahkan rahmat dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan
Karya Tulis Ilmiah (KTI) ini. Adapun judul KTI ini adalah “Penetapan Kadar
Aspartam dalam Suplemen Makanan Sediaan Serbuk secara Kromatografi Cair
Kinerja Tinggi”.
Karya Tulis Ilmiah ini dibuat untuk memenuhi salah satu syarat kelulusan
untuk memperoleh gelar Ahli Madya Analis Farmasi dan Makanan di Poltekkes
Kemenkes Jakarta II Program Studi D III Analisa Farmasi dan Makanan.
Pada kesempatan ini penulis menyampaikan terima kasih terutama kepada:
1. Orang tua yang telah memberikan doa, dukungan, perhatian dan semangat
sehingga penulis dapat menyelesaikan Karya Tulis Ilmiah ini.
2. Dra. Lisawati Tanzil, S.E.,M.Si.,Apt selaku Ketua Program Studi D III
Analisa Farmasi dan Makanan Politeknik Kesehatan Kemenkes Jakarta II.
3. Siti Mirawati,SST selaku pembimbing Praktek Kerja Lapangan di Balai
Besar Pengawas Obat dan Makanan di Bandung.
4. Ruth Elenora K.S., M.Farm., Apt dan Latirah, S.Si., M.Farm. selaku
pembimbing yang telah memberikan bimbingan dan pengarahan dalam
pembuatan Karya Tulis Ilmiah ini.
5. Seluruh dosen, staf dan karyawan Program Studi D III Analisa Farmasi
dan Makanan Politeknik Kesehatan Kemenkes Jakarta II.
6. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu yang telah banyak
membantu selama penyusunan Karya Tulis Ilmiah Ini.
Penulis menyadari bahwa dalam penulisan KTI ini masih banyak
kekurangan, untuk itu saran dan kritik yang membangun sangat penulis harapkan.
Akhir kata penulis berharap semoga pengujian ini dapat bermanfaat bagi penulis
maupun rekan-rekan lainnya.
Jakarta, Mei 2018
Penulis

7. ii
DAFTAR ISI
Halaman
LEMBAR PERSETUJUAN
LEMBAR PENGESAHAN
ABSTRAK
KATA PENGANTAR.........................................................................................i
DAFTAR ISI ......................................................................................................ii
DAFTAR TABEL .............................................................................................. v
DAFTAR GAMBAR......................................................................................... vi
DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................vii
BAB I
PENDAHULUAN .............................................................................................. 1
1.1 Latar Belakang............................................................................................ 1
1.2 Perumusan Masalah .................................................................................... 2
1.3 Pembatasan Masalah................................................................................... 2
1.4 Tujuan Pengujian........................................................................................ 3
1.4.1 Tujuan Umum.................................................................................... 3
1.4.2 Tujuan Khusus................................................................................... 3
1.5 Manfaat Pengujian ......................................................................................... 3
1.5.1 Bagi Mahasiswa................................................................................. 3
1.5.2 Bagi Masyarakat................................................................................ 3
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA..................................................................................... 4
2.1 Landasan Teori ........................................................................................... 4
2.1.1 Suplemen Makanan........................................................................... 4
2.1.2 Bahan Tambahan Pangan (BTP)........................................................ 5
2.1.3 Pemanis ........................................................................................... 6
2.1.4 Aspartam........................................................................................... 7
2.1.5 Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)........................................ 8
2.1.5.1 Prinsip Kerja Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)... 10
2.1.5.2 Instrumentasi Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) .. 10

8. iii
2.1.6 Uji Kesesuaian Sistem (UKS) .......................................................... 13
2.2 Penelitian yang Relevan............................................................................ 14
BAB III
METODE PENGUJIAN.................................................................................. 15
3.1 Waktu dan Lokasi Pengujian..................................................................... 15
3.1.1 Waktu Pengujian ........................................................................... 15
3.1.2 Lokasi Pengujian........................................................................... 15
3.2 Prosedur Pengujian ................................................................................... 15
3.2.1 Prinsip Pengujian............................................................................. 15
3.2.2 Metode Pengujian............................................................................ 15
3.2.3 Langkah Kerja ................................................................................. 17
3.2.3.1 Bobot Rata-Rata (BR) .......................................................... 17
3.2.3.2 Penandaan............................................................................ 18
3.2.3.3 Organoleptik ........................................................................ 18
3.2.3.4 Pengujian ............................................................................. 18
3.3 Alat dan Bahan ......................................................................................... 20
3.3.1 Alat ................................................................................................. 20
3.3.2 Bahan .............................................................................................. 20
3.3.2.1 Data Sampel ........................................................................ 20
3.3.2.2 Data Baku............................................................................ 21
3.3.2.3 Pelarut/Pereaksi................................................................... 21
3.4 Rumus Perhitungan................................................................................... 21
3.4.1 Bobot Rata-Rata (BR)...................................................................... 21
3.4.2 Nilai UKS........................................................................................ 21
BAB IV
HASIL PENGUJIAN DAN PEMBAHASAN ................................................. 22
4.1 Hasil Pengujian......................................................................................... 22
4.1.1 Organoleptik.................................................................................... 22
4.1.2 Data Bobot Rata-Rata...................................................................... 22
4.1.3 Data Penetapan Kadar...................................................................... 23
4.1.3.1 Data Penimbangan Larutan Uji dan Larutan Baku................. 23
4.1.3.2 Data Penetapan Kadar Sampel “18”

9. iv
4.1.3.3 Data Kurva Kalibrasi dan Uji Kesesuaian Sistem (UKS) ....... 24
4.1.3.4 Data Perhitungan................................................................... 25
4.2 Pembahasan.............................................................................................. 28
BAB V
SIMPULAN DAN SARAN .............................................................................. 31
5.1 Simpulan .................................................................................................. 31
5.2 Saran ....................................................................................................... 31
DAFTAR PUSTAKA....................................................................................... 32

10. v
DAFTAR TABEL
No. Nama Tabel Halaman
1. Data Organoleptik..................................................................................... 22
2. Data Penimbangan Bobot Sampel ............................................................. 22
3. Data Penimbangan Larutan Uji ................................................................. 23
4. Data Penimbangan Baku Aspartam........................................................... 23
5. Data Penetapan Kadar Sampel “18” .......................................................... 23
6. Data Kurva Kalibrasi Baku Aspartam ....................................................... 24
7. Data Uji Kesesuaian Sistem...................................................................... 24
8. Data Perhitungan Uji Kesesuaian Sistem................................................... 25
9. Data Konsentrasi Baku Aspartam.............................................................. 26
10. Data Perhitungan Kurva Kalibrasi Baku Aspartam.................................... 26

11. vi
DAFTAR GAMBAR
No. Nama Gambar Halaman
1. Struktur Kimia Aspartam.................................................................................7
2. Diagram Blok System KCKT secara umum...................................................10
3. Kurva Kalibrasi Baku Aspartam....................................................................27

12. vii
DAFTAR LAMPIRAN
No. Nama Lampiran Halaman
1. Hasil Kurva Kalibrasi Baku Aspartam...........................................................33
2. Hasil Uji Kesesuaian Sistem..........................................................................35
3. Hasil Penetapan Kadar Sampel......................................................................36
4. Hasil Pengamatan Penandaan ........................................................................37
5. Sertifikat Baku Aspartam ..............................................................................38

13. 1
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Bangsa Indonesia telah lama mengenal dan menggunakan tanaman berkhasiat
obat sebagai salah satu upaya dalam menanggulangi masalah kesehatan.
Pengetahuan tentang tanaman berkhasiat obat didasarkan pada pengalaman dan
keterampilan yang telah diwariskan dari nenek moyang secara turun-temurun
sejak jaman dahulu dan digunakan oleh masyarakat Indonesia untuk
pemeliharaan kesehatan.
Pengertian suplemen makanan menurut Keputusan Kepala Badan Pengawas
Obat dan Makanan Republik Indonesia Nomor HK.00.05.23.3644 tahun 2004 ,
pada Bab 1 ketentuan umum pasal 1 adalah produk yang dimaksudkan untuk
melengkapi kebutuhan zat gizi makanan, mengandung satu atau lebih bahan
berupa vitamin, mineral, asam amino atau bahan lain (berasal dari tumbuhan atau
bukan tumbuhan) yang mempunyai nilai gizi dan atau efek fisiologis dalam
jumlah terkonsentrasi.
Suplemen makanan berkhasiat untuk membantu menjaga stamina pada saat
bekerja keras dan berolahraga. Komposisi suplemen makanan yang beredar
mengandung zat tambahan seperti pemanis buatan.
Mengonsumsi suplemen makanan sudah menjadi gaya hidup yang modern.
Suplemen digunakan untuk melengkapi atau menambah asupan makanan tetapi
bukan pengganti makanan sepenuhnya sehingga dalam penggunaannya pemberian
suplemen makanan tidak boleh sembarangan dan sesuai dengan takarannya.
Pengertian Bahan Tambahan Pangan menurut Peraturan Menteri Kesehatan
Republik Indonesia No. 033 tahun 2012, pada Bab 1 ketentuan umum pasal 1,
Bahan Tambahan Pangan yang selanjutnya disingkat BTP adalah bahan yang
ditambahkan ke dalam pangan untuk mempengaruhi sifat atau bentuk pangan.
Salah satu bahan tambahan pangan yang diizinkan dalam persyaratan mutu obat
tradisional yaitu Pemanis. Pemanis (sweetener) adalah bahan tambahan pangan
berupa pemanis alami dan pemanis buatan yang memberikan rasa manis pada

14. 2
produk pangan. Pemanis alami (natural sweetener) adalah pemanis yang dapat
ditemukan dalam bahan alam meskipun prosesnya secara sintetik ataupun
fermentasi seperti sorbitol dan manitol. Pemanis buatan (artificial sweetener)
adalah pemanis yang diproses secara kimiawi, dan senyawa tersebut tidak terdapat
di alam seperti acesulfam-k dan aspartam.
Seiring dengan pesatnya perkembangan teknologi produksi bahan kimia dan
teknologi pengolahan pangan atau produk farmasi dan kesehatan, bahan pemanis
alternative natural mulai banyak digunakan. Hal itu juga ditunjang oleh tren back
to nature dan adanya kesadaran konsumen untuk menggunakan produk yang
aman dan bergizi. Sedangkan untuk pemanis buatan juga terus dikembangkan
karena harganya yang murah dan mudah diproduksi sehingga berpotensi sebagai
bahan pemanis masa depan. Pemanis buatan dapat menyebabkan rasa manis pada
pangan, tetapi tidak memiliki nilai gizi. Penggunaan pemanis buatan perlu
diwaspadai karena dalam takaran yang berlebih dapat menimbulkan efek samping
yang merugikan kesehatan manusia. Bahan tambahan pemanis buatan yang
ditambahkan pada suplemen makanan salah satunya yaitu aspartam. Batas
maksimum kadar aspartam yang ditetapkan yaitu 5.500 mg/kg produk dan metode
penetapan kadar yang digunakan adalah Kromatografi Cair Kinerja Tinggi.
Berdasarkan alasan tersebut, pada kesempatan ini penulis tertarik
melakukan pengujian penetapan kadar aspartam dalam suplemen makanan
sediaan serbuk dengan menggunakan prosedur yang telah ditetapkan dalam
bentuk Instruksi Kerja Laboratorium Obat Tradisional (IKLOT) . Diharapkan
pengujian ini dapat memberikan informasi tentang tingkat kadar pemanis buatan
yang terdapat dalam suplemen makanan sediaan serbuk.
1.2 Perumusan Masalah
Apakah pemanis buatan yang terdapat dalam suplemen makanan memenuhi
persyaratan kadar yang telah ditetapkan.
1.3 Pembatasan Masalah
Pada kesempatan ini penulis membatasi pengujian sampel hanya pada
penetapan kadar aspartam dalam sediaan serbuk secara Kromatografi Cair Kinerja
Tinggi.

15. 3
1.4 Tujuan Pengujian
Tujuan penulis melakukan pengujian penetapan kadar aspartam sediaan
serbuk secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi terbagi menjadi tujuan umum dan
tujuan khusus yaitu sebagai berikut:
1.4.1 Tujuan Umum
Tujuan dari pengujian ini adalah untuk melakukan pemeriksaan mutu
(pemerian), penandaan, dan keamanan terhadap suplemen makanan sediaan
serbuk.
1.4.2 Tujuan Khusus
Tujuan dari pengujian ini adalah untuk menetapkan kadar aspartam dalam
suplemen makanan sediaan serbuk secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi.
1.5 Manfaat Pengujian
1.5.1 Bagi Mahasiswa
Pengujian ini bermanfaat untuk meningkatkan kompetensi mahasiswa dalam
melakukan pengujian.
1.5.2 Bagi Masyarakat
Hasil pengujian ini diharapkan dapat memberikan informasi tentang bahan
tambahan pemanis buatan yang telah ditambahkan pada suplemen makanan telah
memenuhi persyaratan kadar yang telah ditetapkan.

16. 4
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Landasan Teori
2.1.1 Suplemen Makanan
Berdasarkan Keputusan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan
Republik Indonesia Nomor HK.00.05.23.3644 tahun 2004, tentang Ketentuan
Pokok Pengawasan Suplemen Makanan, Suplemen makanan adalah produk
yang dimaksudkan untuk melengkapi kebutuhan zat gizi makanan, mengandung
satu atau lebih bahan berupa vitamin, mineral, asam amino atau bahan lain
(berasal dari tumbuhan atau bukan tumbuhan) yang mempunyai nilai gizi dan
atau efek fisiologis dalam jumlah terkonsentrasi. Suplemen makanan harus
memiliki kriteria sebagai berikut:
a. Menggunakan bahan yang memenuhi standar mutu dan persyaratan keamanan
serta standar dan persyaratan lain yang ditetapkan;
b. Kemanfaatan yang dinilai dari komposisi dan atau didukung oleh data
pembuktian;
c. Diproduksi dengan menerapkan Cara Pembuatan yang Baik;
d. Penandaan yang harus mencantumkan informasi yang lengkap, obyektif,
benar dan tidak menyesatkan;
e. Dalam bentuk sediaan pil, tablet, kapsul, serbuk, granul, setengah padat dan
cairan yang tidak dimaksud untuk pangan.
Suplemen makanan harus diproduksi dengan menggunakan bahan yang
memenuhi standar mutu sesuai dengan Farmakope Indonesia, Materia Medika
Indonesia atau standar lain yang diakui. Suplemen makanan wajib diproduksi
dengan menggunakan Cara Pembuatan yang Baik berdasarkan Keputusan
Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia Nomor
HK.00.05.23.3644 tahun 2004, tentang Ketentuan Pokok Pengawasan Suplemen
Makanan. Cara Pembuatan yang Baik sebagaimana dimaksud adalah:
a. Cara Pembuatan Obat yang Baik (CPOB) untuk industri farmasi;
b. Cara Pembuatan Pangan yang Baik (CPPB) untuk industri pangan;
c. Cara Pembuatan Obat Tradisional yang Baik (CPOTB) untuk industriobat tradisional.

17. 5
Persyaratan bahan yang berupa vitamin, mineral, asam amino dan bahan
lain yang diizinkan digunakan dalam suplemen makanan dengan pembatasan
sesuai dengan yang ditetapkan. Bahan tambahan berupa pemanis buatan yang
diizinkan digunakan dalam suplemen makanan.
Berdasarkan Keputusan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan
Republik Indonesia Nomor HK.00.05.23.3644 tahun 2004 , tentang Ketentuan
Pokok Pengawasan Suplemen makanan. Wadah dan pembungkus harus diberi
penandaan yang berisi informasi yang lengkap, objektif dan tidak menyesatkan.
Penandaan harus berisi informasi yang sesuai dengan penandaan yang telah
disetujui pada pendaftaran. Penandaan harus mencantumkan sekurang-
kurangnya :
a. Tulisan “Suplemen Makanan”;
b. Nama produk, dapat berupa nama generik atau nama dagang;
c. Nama dan alamat produsen atau importir;
d. Ukuran, isi, berat bersih;
e. Komposisi dalam kualitatif dan kuantitatif;
f. Kandungan alkohol, bila ada;
g. Kegunaan, cara penggunaan dan takaran penggunaan;
h. Kontra indikasi, efek samping dan peringatan, bila ada;
i. Nomor izin edar;
j. Nomor bets / kode produksi;
k. Batas kadaluwarsa;
l. Keterangan lain yang berkaitan dengan keamanan atau mutu atau asal bahan
tertentu sesuai dengan ketentuan yang berlaku.
Suplemen makanan dilarang mengandung bahan yang tergolong obat atau
narkotika atau psikotropika sesuai ketentuan yang berlaku, dilarang mengandung
bahan yang melebihi batas maksimum atau mengandung bahan yang ditetapkan,
dilarang menggunakan tumbuhan dan atau hewan yang dilindungi sesuai dengan
ketentuan yang berlaku, dan suplemen makanan dalam bentuk cairan per oral
dilarang mengandung etil alkohol dengan kadar lebih dari 5%.
2.1.2 Bahan Tambahan Pangan (BTP)
Pengertian Bahan Tambahan Pangan menurut Peraturan Menteri Kesehatan

18. 6
Republik Indonesia No. 033 tahun 2012, pada Bab 1 ketentuan umum pasal 1,
Bahan Tambahan Pangan yang selanjutnya disingkat BTP adalah bahan yang
ditambahkan ke dalam pangan untuk mempengaruhi sifat atau bentuk pangan.
Pengertian bahan tambahan pangan dalam peraturan menteri kesehatan RI
No. 772/Menkes/Per/IX/88 No.1168/Menkes/PER/X/1999 secara umum adalah
bahan yang biasanya tidak digunakan sebagai makanan dan biasanya bukan
merupakan komponen khas makanan, mempunyai atau tidak mempunyai nilai
gizi, yang dengan sengaja ditambahkan ke dalam makanan untuk maksud
teknologi pada pembuatan, pengolahan, penyiapan, perlakuan, pengepakan,
pengemasan, dan penyimpanan (Cahyadi, 2008:1).
Di Indonesia telah disusun peraturan tentang Bahan Tambahan Pangan
yang diizinkan ditambahkan dan yang dilarang (disebut Bahan Tambahan
Kimia) oleh Departemen Kesehatan diatur dengan Peraturan Menteri Kesehatan
Republik Indonesia Nomor 722/Menkes/Per/IX/88, terdiri dari golongan BTP
yang diizinkan di antaranya antioksidan, antikempal, pengatur keasaman,
pemanis buatan, pemutih dan pematang telur, pengemulsi, pemantap, dan
pengental, pengawet, pengeras, pewarna, penyedap rasa dan aroma, penguat
rasa, sekuestran (Cahyadi, 2008:3).
2.1.3 Pemanis
Pemanis merupakan senyawa kimia yang sering ditambahkan dan
digunakan untuk keperluan produk olahan pangan, industri, serta minuman dan
makanan kesehatan. Pemanis berfungsi untuk meningkatkan cita rasa dan aroma,
memperbaiki sifat-sifat fisik, sebagai pengawet, memperbaiki sifat-sifat kimia
sekaligus merupakan sumber kalori bagi tubuh, mengembangkan jenis minuman
dan makanan dengan jumlah kalori terkontrol (Cahyadi, 2008:76).
Zat pemanis sintetis merupakan zat yang dapat menimbulkan rasa manis
atau dapat membantu mempertajam penerimaan terhadap rasa manis tersebut,
sedangkan kalori yang dihasilkannya jauh lebih rendah daripada gula (Cahyadi,
2008:76)
Pemanis sintetis adalah pemanis yang dibuat atau disintesis secara kimiawi
dari senyawa organik yang dapat diperoleh secara alami atau tidak ditemukan di
alam. Pemanis sintetis baru terus dikembangkan, karena harganya yang murah

19. 7
dan mudah diproduksi sehingga berpotensi sebagai bahan pemanis masa depan
(Teti Estiasih dkk, 2015:117).
Pemanis sintetis adalah bahan tambahan yang dapat menyebabkan rasa
manis pada pangan, tetapi tidak memiliki nilai gizi. Tujuan penggunaan pemanis
salah satunya yaitu sebagai pangan bagi penderita diabetes mellitus karena tidak
menimbulkan kelebihan gula darah, sebagai penyalut obat, memenuhi kebutuhan
dan menghindari kerusakan gigi (Cahyadi, 2008:78-81).
Menurut Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia No. 033 tahun
2012 Pemanis (sweetener) adalah bahan tambahan pangan berupa pemanis alami
dan pemanis buatan yang memberikan rasa manis pada produk pangan. Pemanis
alami (natural sweetener) adalah pemanis yang dapat ditemukan dalam bahan
alam meskipun prosesnya secara sintetik ataupun fermentasi seperti sorbitol dan
manitol. Pemanis buatan (artificial sweetener) adalah pemanis yang diproses
secara kimiawi, dan senyawa tersebut tidak terdapat di alam seperti acesulfam-k
dan aspartam.
2.1.4 Aspartam
Gambar 1. Struktur Kimia Aspartam (Cahyadi,2008:86)
Aspartam adalah senyawa metil ester dipeptida, yaitu L-aspartil-L-alanin-
metilester dengan rumus C14H16N2O5 memiliki daya kemanisan 100-200 kali
sukrosa (Cahyadi, 2008:85).
Berdasarkan SNI 01-6993-2004 tentang Bahan tambahan pangan pemanis
buatan, Aspartam merupakan senyawa yang tidak berbau, berbentuk tepung
kristal berwarna putih, sedikit larut dalam air, dan berasa manis
Aspartam yang dikenal dengan nama dagang equal, merupakan salah satu

20. 8
bahan tambahan pangan yang telah melalui berbagai uji yang mendalam dan
menyeluruh aman bagi penderita diabetes mellitus. Pada penggunaan minuman
ringan, aspartam kurang menguntungkan karena penyimpanan dalam waktu
lama akan mengakibatkan turunnya rasa manis. Selain itu, aspartam tidak tahan
panas sehingga tidak baik digunakan dalam bahan pangan yang diolah melalui
pemanasan (Cahyadi, 2008:85).
Aspartam tersusun oleh asam amino sehingga di dalam tubuh akan
mengalami metabolisme seperti halnya asam amino pada umumnya. Bagi
penderita penyakit keturunan yang berhubungan dengan kelemahan mental
(phenil keton urea/PKU) dilarang untuk mengonsumsi aspartam karena adanya
fenilalanin yang tidak dapat dimetabolisme oleh penyakit tersebut. Kelebihan
fenilalanin dalam tubuh penderita PKU diduga dapat menyebabkan kerusakan
otak dan pada akhirnya akan mengakibatkan cacat mental (Cahyadi, 2008:86).
2.1.5 Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) merupakan teknik pemisahan
berdasarkan fasa diam berupa padatan dan fasa gerak berupa cairan (Kemenkes RI,
2014:1535).
Kegunaan umum KCKT adalah untuk pemisahan dan pemurnian
senyawa obat serta untuk analisis kuantitatif senyawa obat dalam sediaan
farmasetika. KCKT juga dapat digunakan untuk identifikasi kualitatif
senyawa obat dengan mendasarkan pada parameter waktu retensi senyawa
obat standard dan senyawa obat dalam sampel (Gandjar dan Rohman,
2012:417).
Kelebihan dari teknik KCKT diantaranya mempunyai resolusi yang tinggi,
kolom yang terbuat dari bahan gelas atau stainless steel dan berdiameter kecil
yang bisa memberikan hasil pemisahan sempurna, proses analisis berlangsung
cepat, tekanan yang diberikan oleh fase gerak relatif tinggi, laju alir dapat diatur
sesuai kebutuhan (Gupta, et al., 2012).
KCKT dikelompokkan menjadi KCKT fase normal (fase diam KCKT
lebih polar daripada fase gerak) dan KCKT fase terbalik (fase diam kurang polar
dibanding fase gerak). Klasifikasi berdasarkan pada sifat fase diam dan atau
berdasarkan mekanisme sorpsi solut memberikan suatu jenis KCKT yang lebih

21. 9
spesifik. Jenis-jenis KCKT berdasarkan hal ini diuraikan di bawah ini (Gandjar dan
Rohman, 2012:440-448):
1. Kromatografi Adsobrsi
Pemisahan kromatografi adsorbsi biasanya menggunakan fase normal dengan
menggunakan fase diam silika gel dan alumina. Jenis KCKT ini sesuai untuk
pemisahan-pemisahan campuran isomer struktur dan untuk pemisahan solut
dengan gugus fungsional yang berbeda.
2. Kromatografi Partisi
Kromatografi jenis ini disebut juga dengan kromatografi fase terikat.
Kebanyakan fase diam kromatografi ini adalah silika yang dimodifikasi
secara kimiawi atau fase terikat. Fase diam yang paling populer digunakan
adalah oktadesilsilan (ODS atau C18) dan kebanyakan pemisahannya adalah
fase terbalik. Sebagai fase gerak adalah campuran metanol atau asetonitril
dengan air atau dengan larutan bufer. Untuk solut yang bersifat asam lemah
atau basa lemah, peranan pH sangat krusial karena kalau pH fase gerak tidak
diatur maka solut akan mengalami ionisasi atau protonasi.
3. Kromatografi Penukar Ion
KCKT penukar ion menggunakan fase diam yang dapat menukar kation atau
anion dengan suatu fase gerak. Kebanyakan pemisahan kromatografi ion
dilakukan dengan menggunakan media air karena sifat ionisasinya. Dalam
beberapa hal digunakan pelarut campuran misalnya air-alkohol dan juga pelarut
organik.
4. Kromatografi Pasangan Ion
Kromatografi pasangan ion merupakan alternatif kromatografi penukaran
ion. Beberapa masalah dapat dipecahkan dengan kedua metode ini akan tetapi
penukaran ion tidak sebaik dengan kromatografi pasangan ion untuk
pemisahan campuran-campuran yang bersifat asam, basa dan yang bersifat
netral di bawah lingkungan tertentu.
5. Kromatografi Eksklusi Ukuran
Kromatografi ini disebut juga dengan kromatografi permiasi gel dan dapat
digunakan untuk memisahkan atau menganalisis senyawa dengan berat molekul

22. 10
>2000 dalton. Fase diam yang digunakan dapat berupa silika atau polimer yang
bersifat porus.
2.1.5.1 Prinsip Kerja Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)
Fase gerak didorong melalui kolom dengan tekanan yang dikehendaki
dengan laju yang sesuai yang diinginkan. Setelah sistem mencapai
kesetimbangan, cuplikan yang dilarutkan di dalam pelarut yang cocok
disuntikkan ke dalam sistem, biasanya melalui katup. Linarut terbawa ke dalam
kolom, dipisahkan dan keluar dalam eluen melalui detektor. Hasil detektor
dirajah pada kertas gaftar, dan grafik yang dihasilkan dapat dipakai untuk
memperoleh data analitik atau untuk mencari dibagian mana berbagai komponen
campuran itu terdapat dalam eluen (Gritter dkk, 1991:12).
2.1.5.2 Instrumentasi Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)
Komponen-komponen utama pada KCKT adalah sebagai berikut : (a) wadah
fase gerak, (b) pompa untuk mengalirkan fase gerak, (c) alat untuk memasukkan
sampel, (d) kolom, (e) detektor, (f) wadah penampung buangan fase gerak, , dan
(g) suatu computer atau integrator untuk mengolah data sinyal sehingga
diperoleh suatu kromatogram.
Gambar 2. Diagram blok system KCKT secara umum
(Gandjar dan Rohman, 2012:419)
Berikut akan diuraikan bagian-bagian pada KCKT serta penjelasan masing-
masing bagian ini.
1) Wadah fase gerak
Wadah fase gerak merupakan wadah untuk menampung fase gerak yang
digunakan selama proses pemisahan dengan KCKT. Wadah ini harus bersih dan

23. 11
lembam (inert) atau tidak bereaksi dengan komponen fase gerak (Gandjar dan
Rohman, 2012:419).
2) Fase gerak
Fase gerak atau eluen biasanya terdiri atas campuran pelarut yang dapat
bercampur yang secara keselurahan berperan dalam daya elusi dan resolusi.
Daya elusi dan resolusi ini ditentukan oleh polaritas keselurahan pelarut,
polaritas fase diam, dan sifat komponen-komponen sampel (Gandjar dan
Rohman, 2012:420).
Fase gerak sebelum digunakan harus disaring terlebih dahulu untuk
menghindari partikel-partikel seperti adanya pengotor dalam reagen dapat
menyebabkan gangguan pada system kromatografi dan adanya partikel kecil
yang dapat terkumpul dalam kolom atau dalam tabung yang sempit, sehingga
dapat mengakibatkan suatu kekosongan pada kolom atau tabung tersebut
(Gandjar dan Rohman, 2012:420).
Fase gerak sebelum digunakan harus dilakukan degassing (penghilangan
gas) yang ada pada fase gerak, sebab adanya gas akan berkumpul dengan
komponen lain terutama di pompa dan detektor, sehingga akan mengacaukan
analisis (Gandjar dan Rohman, 2012:419).
3) Pompa pada KCKT
Pompa yang cocok digunakan untuk KCKT adalah pompa yang mempunyai
syarat sebagaimana syarat wadah pelarut yakni: pompa harus inert terhadap fase
gerak. Bahan yang umum dipakai untuk pompa adalah gelas, baja tahan karat,
Teflon, dan batu nilam (Gandjar dan Rohman, 2012:427).
Tujuan penggunaan pompa atau system penghantaran fase gerak adalah
untuk menjamin proses penghantaran fase gerak berlangsung secara tepat,
reprodusibel, konstan, dan bebas dari gangguan (Gandjar dan Rohman,
2012:427).
4) Kolom KCKT
Kolom diisi dengan bahan pemisah yang mampu melakukan fraksinasi ukuran
molekuler yang rentangnya sesuai dengan fase gerak dapat mengalir dengan laju
yang tetap. Satu ujung kolom biasanya dilengkapi dengan alat yang sesuai untuk
memasukkan sampel, misalnya adaptor laju, syringe melalui septum atau katup

24. 12
injeksi dan juga dapat dihubungkan pada pompa yang sesuai untuk mengontrol
aliran fase gerak (Kemenkes RI, 2014:1536).
5) Detektor KCKT
Detektor pada KCKT dikelompokkan menjadi 2 golongan yaitu: detektor
universal (yang mampu mendeteksi zat secara umum, tidak bersifat spesifik, dan
tidak bersifat selektif) seperti detektor indeks bias dan detektor spektrometer
massa; dan golongan detektor yang spesifik yang hanya akan mendeteksi analit
secara spesifik dan selektif, seperti detektor UV-Vis, detektor fluoresensi, dan
elektrokimia (Gandjar dan Rohman, 2012:435).
Idealnya suatu detektor harus mempunyai karakteristik sebagai berikut:
(Gandjar dan Rohman, 2012:435).
a. Mempunyai respon terhadap solut yang cepat dan reprodusibel
b. Mempunyai sensitifitas yang tinggi, yakni mampu mendeteksi solut pada
kadar yang sangat kecil
c. Stabil dalam pengoperasiannya
d. Mempunyai sel volume yang kecil sehingga mampu meminimalkan
pelebaran pita
e. Signal yang dihasilkan berbanding lurus dengan konsentrasi solut pada
kisaran yang luas (kisaran dinamis linear).
f. Tidak peka terhadap perubahan suhu dan kecepatan alir fase gerak.
Detektor UV-Vis merupakan detektor yang paling banyak dipakai, akan
tetapi karena banyak analit yang diukur maka akan ada kecenderungan puncak-
puncak kromatogram yang tidak terdeteksi dan juga akan ada pergeseran
puncak-puncak kromatogram (Gandjar dan Rohman, 2012:437).
Detektor PDA merupakan detektor UV-Vis dengan berbagai keistimewaan.
Detektor ini mampu memberikan kumpulan kromatogram secara simultan pada
panjang gelombang yang berbeda dalam sekali proses (single run). Selama
proses berjalan, suatu kromatogram pada panjang gelombang yang diinginkan
(biasanya antara 190-400) dapat ditampilkan (Gandjar dan Rohman, 2012:437).
6) Komputer, Integrator, atau Rekorder
Alat pengumpul data seperti komputer, integrator, ataurekorder,dihubungkan

25. 13
dengan detektor. Integrator adalah alat yang berfungsi untuk menghitung luas
puncak. Rekorder digunakan untuk mengukur sinyal elektronik yang dihasilkan
oleh detektor lalu mem-plotkannya sebagai suatu kromatogram yang selanjutnya
dapat dievaluasi oleh seorang analis (Gandjar dan Rohman, 2012: 439).
2.1.6 Uji Kesesuaian Sistem (UKS)
Uji Kesesuaian Sistem (UKS) adalah bagian integral dari metode kromatografi
cair dan kromatografi gas. Uji ini digunakan untuk memastikan bahwa sistem
kromatografi memadai untuk analisis tersebut. UKS dilakukan dengan cara
mengumpulkan data dari penyuntikan berulang larutan baku atau larutan lainnya
yang telah ditetapkan dalam masing-masing monografi. UKS diperoleh dari
hasil penyuntikan 5-6 kali dari larutan baku. Persyaratan untuk data yang didapat
sebagai berikut (Kemenkes RI, 2014: 1539) :
a. Presisi
Parameter uji keberulangan dari area dan waktu retensi sebagai hasil dari
penyuntikan berulang kali (5-6 kali), dinyatakan sebagai Simpangan Baku
Relatif (%SBR), jika dinyatakan lain dalam masing-masing monografi, nilai
simpangan baku relatif dinyatakan memenuhi syarat jika < 2,0 %.
b. Resolusi
Suatu ukuran seberapa baik dua puncak terpisah sehingga dapat digunakan
untuk analisa kuantitatif secara akurat.
c. Efisiensi Kolom
Efisiensi kolom adalah jumlah lempeng teoritis (N) dan merupakan ukuran
ketajaman suatu puncak.
d. Faktor Ikutan
Faktor ikutan merupakan ukuran suatu kesimetrisan suatu puncak
kromatogram.
e. Faktor Kapasitas
Faktor kapasitas merupakan kemampuan suatu zat tertentu untuk berinteraksi
dengan sistem kromatografi.
f. Waktu Retensi
Waktu yang ditempuh antara proses injeksi sampel dan munculnya puncak
maksimum sebagai respons dari zona yang terelusi.

26. 14
2.2 Penelitian yang Relevan
Penelitian yang relevan dari penelitian yang dilakukan antara lain dari jurnal
As-Syifaa volume 05 nomor 02 yang dilakukan oleh Seniwati Dali, A.Trihadi
Kusuma, dan Afiat Wahyuni Anar, Jurusan Kimia Fakultas MIPA Universitas
Hasanuddin Fakultas Farmasi Universitas Muslim Indonesia, dengan judul
penelitiannya yaitu Analisis Kandungan Aspartam yang Terdapat pada Minuman
Jajanan Anak Sekolah yang Beredar di Makassar dengan Metode HPLC.
Berdasarkan hasil penelitian dan pembahasan yang telah dilakukan
menunjukkan bahwa dari ketujuh sampel yang mengandung Aspartam ada 6,
yaitu sampel A, B, C, D, F, dan G. Dan kadar yang terdapat dalam minuman
tersebut masih dalam range dan berada di bawah batas maksimum yang
ditetapkan, yaitu 600 mg/kg BB. Sedangkan sampel E tidak mengandung
Aspartam. Penelitian relevan dari jurnal yang kedua yaitu jurnal farmaka volume
4 nomor 3 yang dilakukan oleh Iis Karlida dan Febrina Amelia Saputri, Fakultas
Farmasi Universitas Padjadjaran dengan judul penelitiannya, yaitu Derivatisasi
Senyawa pada KCKT (Kromatografi Cair Kinerja Tinggi) dengan Detektor
Fluoresens. Berdasarkan hasil penelitian yaitu didapat analit idebenon, derivator
2-cyanoacetamide, matriks plasma darah dan jenis derivatisasi post kolom.

27. 15
BAB III
METODOLOGI PENGUJIAN
3.1 Waktu dan Lokasi Pengujian
3.1.1 Waktu Pengujian
Pengujian dilaksanakan pada tanggal 01 Maret – 31 Maret 2018
3.1.2 Lokasi Pengujian
Pengujian dilaksanakan di Laboratorium Terapetik, Narkotika, Obat
Tradisional, Kosmetik, dan Produk Komplemen (Teranokoko) Balai Besar
Pengawas Obat dan Makanan jalan Pasteur No.25 Bandung 40171.
3.2 Prosedur Pengujian
3.2.1 Prinsip pengujian
Aspartam dalam produk komplemen sediaan padat ditetapkan kadarnya
secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) menggunakan detektor
photodiode array (PDA) berdasarkan kelarutan dan polaritas.
3.2.2 Metode Pengujian
MA PPOM 16/PK/12
Penetapan kadar aspartam dalam produk komplemen secara KCKT
a. Baku pembanding
Aspartam BPFI
b. Pereaksi
1) Air bebas mineral
2) Metanol
3) Asetonitril
4) Larutan asam sulfat 10%
5) Natrium dihidrogen fosfat monohidrat (NaH2PO4.H2O) 10 mM pH 2,6 :
ditimbang 1,3799 gram NaH2PO4.H2O dimasukkan ke dalam labu
tentukur 1000 mL. Ditambahkan air sampai tanda, kemudian diatur
hingga 2,6 ± 0,05 dengan penambahan larutan asam sulfat 10%.
6) Pelarut KCKT (= Fase gerak) : Sejumlah 82,5 mL larutan dapar
NaH2PO4.H2O 10 mM pH 2,6 dicampur dengan 17,5 mL asetonitril.

28. 16
c. Peralatan
1) Seperangkat alat gelas.
2) Seperangkat peralatan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) dengan
detektor PDA, Kolom C18.
d. Prosedur
1) Larutan Uji
Sejumlah lebih kurang 1 gram sampel ditimbang saksama, dimasukkan ke
dalam labu tentukur 25 mL, ditambah 15 mL pelarut, disonikasi hingga
larut lalu diencerkan dengan pelarut sampai tanda. Kemudian dipipet 1
mL larutan tersebut, dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 mL lalu
diencerkan dengan pelarut sampai tanda. Larutan tersebut kemudian
disaring dengan penyaring membran 0,45 µm dan diawaudarakan (
larutan A).
2) Larutan Baku
Larutan Baku Induk
Sejumlah lebih kurang 10 mg Aspartam ditimbang saksama, dimasukkan ke
dalam labu tentukur 10 mL, ditambahkan 10 mL pelarut, disonikasi hingga
larut kemudian diencerkan dengan pelarut sampai tanda. Larutan tersebut
dipipet sejumlah 5 mL, dimasukkan ke dalam labu tentukur 20 mL dan
diencerkan dengan pelarut sampai tanda. Larutan disaring dengan penyaring
membran 0,45 µm ( larutan B).
Larutan Seri Baku
Larutan B dipipet masing-masing sejumlah 0,5;1;2;3;4 dan 5 mL,
dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 mL, diencerkan dengan pelarut
sampai tanda. Masing-masing larutan tersebut disaring dengan penyaring
membran 0,45 µm dan diawaudarakan (larutan C1-C6).
3) Larutan Spiked Sample
Dengan cara yang sama seperti pada penyiapan larutan uji, ditimbang
sejumlah 1 gram sampel yang ditambah sejumlah 5 mg aspartam yang
ditimbang saksama ( larutan D).
4) Cara Penetapan
Larutan A, B, C1-C6, dan D disuntikkan secara terpisah ke Kromatografi

29. 17
Cair Kinerja Tinggi dengan kondisi sebagai berikut :
Kolom : Oktadesilsilana (C18), 5 µm, 250 x 4,6 mm
Fase gerak : Asetonitril : Larutan Dapar NaH2PO4.H2
10 mM pH 2,6
Laju aliran : 1,0 mL per menit
Volume penyuntikan : 20 µl
Suhu kolom : 40o
c
Detektor : PDA, panjang gelombang 200-400 nm (spektrum
pada 210 nm)
e. Perhitungan
Kurva kalibrasi : Y=bx+a
Maka Xi =
Yi-a
b
Kadar Aspartam (mg/Kg) =
Xi . Fu. Br. 1000
Bu . V. BJ
Keterangan :
Xi = Luas area
Fu = Faktor pengencer larutan uji
Br = Bobot rata-rata
Bu = Bobot larutan uji
V = Volume saji
BJ = Bobot jenis
f. Persyaratan
Surat edaran Nomor HK. 04.01.42.421.12.17.1666 tahun 2017 tentang batas
maksimum penggunaan pemanis buatan yang diizinkan dalam produk obat
tradisional dan suplemen kesehatan yaitu 5.500 (mg/Kg produk).
g. Rekaman
IKLOT
3.2.3 Langkah Kerja
3.2.3.1 Bobot Rata-Rata (BR)
a. Ditimbang 10 bungkus sampel sekaligus.
b. Ditimbang tiap bungkus sampel satu per satu.
c. Dikeluarkan isi bungkus sampel dan dibersihkan dengan tissue.

30. 18
d. Ditimbang bungkus sampel satu per satu.
e. Dihitung bobot rata-rata isi 10 bungkus sampel.
3.2.3.2 Penandaan
a. Dilakukan pengamatan terhadap tulisan, nama produk, komposisi,
kegunaan, cara penggunaan dan takaran penggunaan, nomor izin edar,
dan batas kadaluwarsa yang tertera pada kemasan.
b. Bila penandaan pada kemasan tidak sama dengan persyaratan yang ada
pada Keputusan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik
Indonesia Nomor HK.00.05.23.3644 tahun 2004, tentang Ketentuan
Pokok Pengawasan Suplemen makanan, maka untuk penandaan
tersebut tidak memenuhi persyaratan.
3.2.3.3 Organoleptik
Dilakukan pengamatan terhadap bentuk, bau, warna, dan rasa terhadap
sampel tersebut.
3.2.3.4 Pengujian
a. Pembuatan larutan natrium dihidrogen fosfat monohidrat
(NaH2PO4.H2O) :
1) Ditimbang dapar natrium dihidrogen fosfat monohidrat ke labu ukur.
2) Kemudian diatur pH larutan dengan menggunakan alat pH meter
sampai 2,6 ±0,05 dengan penambahan beberapa tetes larutan asam
sulfat 10% .
b. Pembuatan pelarut KCKT dan fase gerak :
1) Diukur masing-masing larutan asetonitril : larutan dapar natrium
dihidrogen fosfat monohidrat 10 mM. Kemudian dicampurkan masing-
masing larutan ke dalam erlenmeyer, dan dihomogenkan.
2) Lalu disaring larutan dengan menggunakan penyaring vakum kemudian
didegas larutan selama 15 menit.
c. Dibuat larutan uji duplo dengan cara :
1) Ditimbang sampel saksama kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur
25 mL dan ditambahkan 15 mL pelarut.
2) Dilakukan sonikasi hingga larut kemudian ditambahkan pelarut sampai
tanda batas.

31. 19
3) Dipipet 1,0 mL larutan tersebut lalu dimasukkan ke dalam labu tentukur
10 mL dan ditambahkan dengan pelarut sampai tanda.
4) Disaring larutan tersebut dengan penyaring membran dan dimasukkan
ke dalam vial ( larutan A).
d. Dibuat larutan baku induk dengan cara :
1) Ditimbang saksama baku aspartam ke dalam labu ukur 10 mL.
2) Kemudian ditambahkan beberapa mL pelarut. Larutan ditambahkan
pelarut sampai tanda batas.
3) Dipipet 5,0 mL ke dalam labu ukur 20,0 mL lalu ditambahkan pelarut
sampai tanda batas.
4) Disaring larutan dengan penyaring membran ke dalam vial (larutan
B).
e. Dibuat larutan baku seri dengan cara :
1) Dipipet masing-masing Sejumlah 0,50;1,0;2,0;3,0;4,0 dan 5,0 mL dari
larutan B lalu dimasukkan ke dalam labu ukur 10 mL dan diencerkan
labu dengan pelarut sampai tanda.
2) Disaring larutan tersebut dengan penyaring membran dan dimasukkan
ke dalam vial (larutan C1-C6).
f. Dibuat larutan spiked sample dengan cara :
1) Ditimbang sampel saksama kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur
25 mL.
2) Ditimbang saksama baku aspartam kemudian dimasukkan ke dalam
labu ukur yang sudah berisi serbuk sampel.
3) Dilakukan sonikasi hingga larut kemudian ditambahkan pelarut sampai
tanda batas.
4) Dipipet 1,0 mL larutan tersebut. Dimasukkan ke dalam labu tentukur 10
mL lalu ditambahkan dengan pelarut sampai tanda.
5) Disaring larutan tersebut dengan penyaring membran dan dimasukkan
ke dalam vial (larutan D).
g. Dilakukan pengujian secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi dengan
cara :

32. 20
1) Diukur larutan A, larutan B, dan larutan C dengan menggunakan alat
kromatografi cair kinerja tinggi dengan menggunakan kolom
Oktadesilsiliana (C18), fase gerak Asetonitril : Larutan Dapar
NaH2PO4.H2O 10 mM pH 2,6 , laju alir 1,0 mL per menit, dan detektor
PDA.
2) Disuntikkan larutan baku 20 µL, sebanyak 6 kali untuk uji UKS.
Kemudian diinjekkan larutan A dan larutan D masing-masing sebanyak
satu kali.
3) Dilakukan analisis dengan membandingkan waktu retensi larutan baku,
larutan spiked sample, dan larutan uji.
3.3 Alat dan Bahan
3.3.1 Alat
Alat-alat gelas, timbangan analitik, penyaring vakum, spuid, alat pH
meter, alat kromatografi cair kinerja tinggi, penyaring membran 0,2 µm,
vial.
3.3.2 Bahan
3.3.2.1 Data Sampel
Nama : Suplemen Makanan “18”
Produksi : PT “TS”
No.registrasi : POM SD 012 202 971
Exp.date : Januari 2020
Komposisi :
Taurine 1000 mg
I,3,7 Trimethylxanthine 50 mg
Ginseng extract 25 mg
Setara dengan serbuk akar ginseng 250 mg
Vitamin B3 (Nicotinamide) 20 mg
Vitamin B5 (Pantothenic acid) 5 mg
Vitamin B6 (Pyridoxine HCl) 5 mg
Vitamin B8 (Inositol) 10 mg
Vitamin B12 (Cyanocobalamine) 5 mcg
Madu 100 mg

33. 21
Tartrazine, Mixedfruit Flavor, Aspartam, Acesulfame
Khasiat : Suplemen untuk membantu menjaga stamina pada saat
bekerja keras dan berolahraga
Aturan Pakai : Untuk satu kali pemakaian larutkan 1 sachet dengan 200
mL air. Untuk dewasa 3x1 sachet sehari
3.3.2.2 Data Baku
Nama Baku : Aspartam
No.Kontrol : 210366
SP : 2.04
Kadar : 101,99%
3.3.2.3 Pelarut/Pereaksi
a. Pelarut Fase Gerak KCKT dan Pelarut Sampel
Asetonitril : Dapar natrium dihidrogen fosfat monohidrat 10 mM
(17,5:82,5).
b. Pereaksi
Air bebas mineral, metanol, larutan asam sulfat 10%.
3.4 Rumus Perhitungan
3.4.1 Bobot Rata-Rata (BR)
BR =
Bobot 10 bungkus
10
3.4.2 Nilai UKS
SD = √
Σ (|X-X̅|)2
n-1
RSD =
SD
x̅
x 100%
Keterangan : SD = Standar Deviasi
RSD = Standar Deviasi Relatif
x̅ = Rata-rata nilai n
n = Banyaknya penyuntikan

34. 22
BAB IV
HASIL PENGUJIAN DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Pengujian
4.1.1 Organoleptik
Pemerian dilakukan terhadap bentuk, bau, warna, dan rasa untuk mengetahui
karakter fisik dari sampel yang akan diujikan. Hasil organoleptik dapat dilihat pada
Tabel 1
Tabel 1. Data Organoleptik
Keterangan Sampel 18
Bentuk Serbuk
Bau Aromatik
Warna Kuning
Rasa Asam
4.1.2 Data Bobot Rata-Rata
a. Data penimbangan bobot sampel dapat dilihat pada Tabel 2
Tabel 2. Data Penimbangan Bobot Sampel
Bungkus
ke-
Bobot wadah
+ isi (g)
Bobot wadah +
sisa (g)
Bobot isi
(g)
1 5,5799 1,3509 4,2290
2 5,5885 1,3392 4,2493
3 5,6031 1,3514 4,2517
4 5,5041 1,3460 4,1581
5 5,5283 1,3471 4,1812
6 5,5334 1,3605 4,1729
7 5,5806 1,3387 4,2419
8 5,5152 1,3221 4,1931
9 5,6380 1,3807 4,2573
10 5,5672 1,3532 4,2140

35. 23
b. Data Perhitungan Bobot Rata-Rata (BR)
BR =
Bobot isi 10 Bungkus
10
BR =
42,1485 g
10
BR = 4,21485 g
4.1.3 Data Penetapan Kadar
4.1.3.1 Data Penimbangan Larutan Uji dan Larutan Baku
Data penimbangan larutan uji dan larutan baku dapat dilihat pada Tabel 3
dan Tabel 4
Tabel 3. Data Penimbangan Larutan Uji
Keterangan Sampel 18 ( A) Sampel 18 (B)
Bobot wadah + sampel 1,0684 g 1,0639 g
Bobot wadah + sisa 0,0475 g 0,0467 g
Bobot sampel 1,0209 g 1,0172 g
Tabel 4. Data Penimbangan Baku Aspartam
Keterangan Baku Aspartam
Bobot wadah + sampel 17,6 mg
Bobot wadah + sisa 6,2 mg
Bobot sampel 11,4 mg
4.1.3.2 Data Penetapan Kadar Sampel “18”
Data penetapan kadar sampel “18”dapat dilihat pada Tabel 5
Tabel 5. Data Penetapan Kadar Sampel “18”
Sample Name Ret.Time Area
18 A 9,039 1678820
18 B 9,052 1665920

36. 24
4.1.3.3 Data Kurva Kalibrasi dan Uji Kesesuaian Sistem (UKS)
Data kurva kalibrasi dan uji kesesuaian sistem (UKS) dapat dilihat pada
Tabel 6 dan Tabel 7
Tabel 6. Data Kurva Kalibrasi Baku Aspartam
Keterangan Ret.Time Area Rata-Rata Luas Area
Baku C1 A 9,074 428772 429825
Baku C1 B 9,079 430878
Baku C2 A 9,068 873945 875299
Baku C2 B 9,071 876652
Baku C3 A 9,048 1774494 1775644
Baku C3 B 9,045 1776794
Baku C4 A 9,024 2624169 2624852
Baku C4 B 9,032 2625535
Baku C5 A 9,001 3501307 3503905
Baku C5 B 8,996 3506502
Baku C6 A 8,971 4345452 4351850
Baku C6 B 8,972 4358247
Tabel 7. Data Uji Kesesuaian Sistem
Title Ret.time Area
Tailing
Factor
Theoretical
Plate
Baku 01 9,043 1775697 1,466 9704,562
Baku 02 9,047 1772732 1,463 9728,610
Baku 03 9,046 1774392 1,465 9729,470
Baku 04 9,043 1773789 1,466 9727,592
Baku 05 9,038 1774894 1,464 9732,873
Baku 06 9,043 1777020 1,467 9736,248
Average 9,043 1774754 1,465 9726,559

37. 25
4.1.3.4 Data Perhitungan
a. Perhitungan Uji Kesesuaian Sistem
Tabel 8. Data Perhitungan Uji Kesesuaian Sistem
Title Area (x) (|x-𝑥̅|) (|x-𝑥̅|)²
Baku 01 1775697 943 889249
Baku 02 1772732 2022 4088484
Baku 03 1774392 362 131044
Baku 04 1773789 965 931225
Baku 05 1774894 140 19600
Baku 06 1777020 2266 5134756
Σ 10648524 6698 11194358
𝑥̅ 1774754 1116.333333 1865726
1) Standar Deviasi
SD = √
Σ (|X-X̅|)²
n-1
SD = √
11194358
6-1
SD = √2238871.6
SD = 1496
2) Simpangan Baku Relatif (RSD)
RSD =
SD
x̅
x 100%
RSD =
1496
1774754
x 100%
RSD = 0,084 %
b. Perhitungan Kurva Kalibrasi
Faktor Koreksi Baku
Faktor Koreksi Baku = Bb x (
100-SP
100
) x
Kadar
100

38. 26
Faktor Koreksi Baku = 11,4 x (
100-2,04
100
) x
101,99
100
Faktor Koreksi Baku = 11,39 mg
Tabel 9. Data Konsentrasi Baku Aspartam
Baku
BB
(mg)
Pengenceran
(ml)
Konsentrasi (x)
(mg/ml)
C1 11,39 800 0,014
C2 11,39 400 0,028
C3 11,39 200 0,057
C4 11,39 133 0,085
C5 11,39 100 0,114
C6 11,39 80 0,142
Tabel 10. Data Perhitungan Kurva Kalibrasi Baku Aspartam
BK
Konsentrasi
(x)
Luas area
(y)
XY X² Y²
C1 0,014 429825 6017,55 0,000196 184749530625
C2 0,028 875299 24508,372 0,000784 766148339401
C3 0,057 1775644 101211,708 0,003249 3152911614736
C4 0,085 2624852 223112,42 0,007225 6889848021904
C5 0,114 3503905 399445,17 0,012996 12277350249025
C6 0,142 4351850 617962,7 0,020164 18938598422500
Σ 0,440 13561375 1372257,92 0,044614 42209606178191
𝑥̅ 0,073 2260229 228709,653 0,00743567 7034934363032
b =
Σxy-[
Σx.Σy
n
]
Σx²-[
(Σx)2
n
]
b=
1372257,92-[
0,440 x 13561375
6
]
0,044614- [
(0,440)2
6
]
b =
1372257,92-994500,8333
0,044614-0,032267

39. 27
b = 30595050,35
a = y̅-(bx̅)
a = 2260229 − (30595050,35x 0,07)
a = 118575,5
r =
[(n Σxy)-(Σx)(Σy)]
√[nΣx²-(Σx)2][nΣy2-(Σy)2]
r =
[(6 )(1372257,92)-(0,440)(13561375)]
√[6 (0,044614)-(0,440)2][6 (42209606178191)-(13561375)2]
r = 0,9999
Gambar 3. Kurva Kalibrasi Baku Aspartam
c. Perhitungan Kadar Sampel “18”
1) Sampel 18 (A)
Xi =
Yi-a
b
Xi =
1678820-118575,5
30595050,35
Xi = 0,0509
Kadar Aspartam (mg/Kg) =
Xi . Fu. Br. 1000
Bu . V. BJ
y = 30595050.35x + 118575.5
R² = 0.9999
0
500000
1000000
1500000
2000000
2500000
3000000
3500000
4000000
4500000
5000000
0.000 0.050 0.100 0.150
LuasArea
Konsentrasi
Kurva Kalibrasi Baku Aspartam
Series1
Linear (Series1)

40. 28
Kadar Aspartam (mg/Kg) =
0,0509 x
25
1
x 10 x 4214,85 x 1000
1020,9 x 200 x 1
Kadar Aspartam (mg/Kg) = 262,68 mg/kg
2) Sampel 18 (B)
Xi =
Yi-a
b
Xi =
1665920-118575,5
30595050,35
Xi = 0,0506
Kadar Aspartam (mg/Kg) =
Xi . Fu. Br. 1000
Bu . V. BJ
Kadar Aspartam (mg/Kg) =
0,0506 x
25
1
x 10 x 4214,85 x 1000
1017,2 x 200 x 1
Kadar Aspartam (mg/Kg) = 262,08 mg/kg
d. Perhitungan Kadar Rata-Rata Sampel “18”
Kadar rata-rata =
n1+n2
n
Kadar rata-rata =
262,68+ 262,08
2
Kadar rata-rata = 262,380 mg/kg
4.2 Pembahasan
Pengujian penetapan kadar aspartam dalam suplemen makanan ini
menggunakan prosedur MA PPOM 16/PK/12. Pengujian penetapan kadar
aspartam dalam suplemen makanan ini menggunakan metode Kromatografi Cair
Kinerja Tinggi (KCKT) yang tertera pada MA PPOM 16/PK/12. Alasan
dilakukan penetapan kadar aspartam dalam suplemen makanan sediaan serbuk
menggunakan metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi karena Kromatografi
Cair Kinerja Tinggi memberikan sensitifitas dan spesifisitas yang tinggi.

41. 29
Pada tahapan pengujian dilakukan sebanyak duplo dan masing-masing
ditimbang sesuai dengan prosedur yang digunakan. Selanjutnya sampel
ditambah sejumlah pelarut yang berisi campuran larutan dapar NaH2PO4.H2O
10 mM pH 2,6 : asetonitril yang berfungsi untuk menarik zat aktif yang ingin
diuji yaitu aspartam. Kelarutan aspartam yaitu sedikit larut dalam air yang
berarti jumlah pelarut yang diperlukan untuk melarutkan satu bagian zat
aspartam adalah 30 sampai 100 mL air. Kemudian dilakukan sonikasi yang
bertujuan untuk melarutkan sampel. Setelah disonikasi, sampel ditambahkan
pelarut sampai tanda batas lalu sampel dilakukan pengenceran sesuai dengan
prosedur yang digunakan. Setelah itu sampel disaring dengan penyaring
membran yang berfungsi untuk memisahkan filtrat dan endapan agar
mempermudah analisis sehingga tidak ada pengotor yang dapat menyumbat
kolom. Larutan ini digunakan sebagai larutan uji (A).
Dibuat larutan baku induk (B) dan seri baku (C1-C6) sesuai dengan
prosedur yang digunakan. Larutan seri baku (C1-C6) dibuat dengan cara dipipet
masing-masing dari larutan baku induk (B). Tujuan penggunaan larutan seri baku
yaitu untuk mengetahui kadar senyawa yang tidak diketahui kadarnya dalam suatu
sampel.
Pada saat pemilihan fase gerak, digunakan campuran larutan dapar
NaH2PO4.H2O 10 mM pH 2,6 : asetonitril. Pemilihan fase gerak bergantung
pada kepolaran analit yang akan dipisahkan. Untuk solut yang bersifat asam
lemah atau basa lemah, peranan pH sangat krusial karena kalau pH fase gerak
tidak diatur maka solut akan mengalami ionisasi atau protonasi. Terbentuknya
spesies yang terionisasi ini menyebabkan ikatannya dengan fase diam menjadi
lebih lemah dibanding jika solut dalam bentuk spesies yang tidak terionisasi
karena spesies yang mengalami ionisasi akan terelusi lebih cepat (Gandjar dan
Rohman, 2012:440). Pada pembuatan fase gerak dilakukan degassing untuk
menghilangkan gas yang dapat mengganggu analisis.
Jenis kolom yang digunakan adalah oktadesil silana (C18) karena mampu
memisahkan senyawa-senyawa dengan kepolaran yang rendah, sedang maupun
tinggi. Kolom ini juga digunakan untuk pemisahan fase terbalik (fase diam
kurang polar dibanding fase gerak). Kepolaran aspartam yaitu semi polar

42. 30
dengan fase diam yang kurang polar dibanding fase gerak sehingga
kemampuan elusi menurun dengan meningkatnya polaritas pelarut. Untuk jenis
detektor yang digunakan yaitu detektor photodiode-array (PDA) dan panjang
gelombang maksimum senyawa yang akan dianalisis yaitu pada panjang
gelombang 210 nm. Detektor ini mampu memberikan kumpulan kromatogram
secara simultan pada panjang gelombang yang berbeda dalam sekali proses
(single run). Selama proses berjalan, suatu kromatogram pada panjang
gelombang yang diinginkan (biasanya antara 190-400) dapat ditampilkan
(Gandjar, Ibnu Gholib dan Abdul Rohman,2007;390).
Pada saat pengukuran, dilakukan uji kesesuaian sistem terlebih dahulu
sebelum dilakukan analisis secara KCKT. Hal ini bertujuan agar memastikan
bahwa alat tersebut sudah stabil dan siap untuk digunakan sehingga hasil yang
diperoleh dapat dipercaya. Pada hasil uji kesesuaian sistem didapat simpangan
baku relativ yaitu kurang dari 2%, sehingga dapat disimpulkan bahwa alat
tersebut sudah stabil dan siap untuk digunakan.
Berdasarkan hasil pengujian didapatkan waktu retensi antara baku dan
sampel hampir sama dan sampel menunjukkan puncak yang identik dengan
puncak baku hal ini menunjukkan bahwa sampel tersebut benar mengandung
aspartam. Penetapan kadar aspartam didapat hasil rata-rata kadar aspartam dari
dua penimbangan yaitu 262,380 mg/kg. Kadar yang diperoleh kurang dari 5.500
mg/kg produk sehingga memenuhi persyaratan yang sesuai dengan Surat Edaran
Nomor HK. 04.01.42.421.12.17.1666 tahun 2017 tentang batas maksimum
penggunaan pemanis buatan yang diizinkan dalam produk obat tradisional dan
suplemen kesehatan.

43. 31
BAB V
SIMPULAN DAN SARAN
5.1 Simpulan
Pada pemeriksaan penandaan didapatkan hasil yang sesuai dengan
persyaratan menurut Keputusan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan
Republik Indonesia Nomor HK.00.05.23.3644 tahun 2004, tentang Ketentuan
Pokok Pengawasan Suplemen makanan, bagian kedua pasal 13, 14, dan 15.
Berdasarkan hasil percobaan penetapan kadar aspartam dalam suplemen
makanan sediaan serbuk didapat kadar rata-rata aspartam dari dua penimbangan
yaitu 262,380 mg/kg. Kadar yang diperoleh memenuhi syarat sesuai dengan surat
edaran Nomor HK. 04.01.42.421.12.17.1666 tahun 2017 tentang batas maksimum
penggunaan pemanis buatan yang diizinkan dalam produk obat tradisional dan
suplemen kesehatan yaitu 5.500 (mg/Kg produk).
Dari pengujian yang telah dilakukan yaitu penandaan dan penetapan kadar
aspartam maka dapat disimpulkan bahwa sampel suplemen makanan yang diuji
memenuhi syarat (MS).
5.2 Saran
Dalam melakukan pengujian secara kuantitatif, perlu dilakukan
penambahan penimbangan 10 bungkus sampel sehingga bisa dilakukan pengujian
keseragaman bobot dan dapat juga dilakukan pengujian mutu lainnya seperti
kadar air, cemaran mikroba, aflatoksin total (aflatoksin B1, B2, G1 dan G2) dan
cemaran logam berat.

44. 32
DAFTAR PUSTAKA
Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia. 2004. Keputusan
Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia. Nomor:
HK.00.05.23.3644 tentang Ketentuan Pokok Pengawasan Suplemen
Makanan. Jakarta: Badan Pengawas Obat Republik Indonesia.
Badan Standarisasi Nasional. 2004. Bahan Tambahan Pangan Pemanis Buatan -
Persyaratan Penggunaan Dalam. SNI 01-6993-2004. Jakarta: Badan
Standarisasi Nasional.
Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia. 2017. Surat Edaran
Nomor HK.04.01.42.421.12.17.1666. tentang Batas Maksimum
Penggunaan Pemanis Buatan yang Diizinkan dalam Produk Obat
Tradisional dan Suplemen Kesehatan. Jakarta: Badan Pengawas Obat dan
Makanan Republik Indonesia.
Cahyadi, Wisnu. 2008. Bahan Tambahan Pangan Edisi Kedua. Jakarta: PT.Bumi
Aksara.
Estiasih, Teti, dkk. 2015. Komponen Minor dan Bahan Tambahan Pangan.
Jakarta: PT.Bumi Aksara
Gandjar, Ibnu Gholib dan Abdul Rohman. 2012. Analsis Obat secara
Spektrofotometri dan Kromatografi. Yogyakarta: Pustaka Pelajar.
Gandjar, Ibnu Gholib dan Abdul Rohman. 2009. Kimia Farmasi Analisis.
Yogyakarta: Pustaka Pelajar.
Gritter dkk. 1991. Pengantar Kromatografi. Terjemahan Kosasih Padmawinata
Bandung: Penerbit ITB
Gupta, et al., 2012. Development and validation of HPLC method: a review. Int.
Res. J. pharm.
Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. 2014. Farmakope Indonesia Edisi V.
Jakarta: Ditjen Binfar.
Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. 2012. Peraturan Menteri Kesehatan
Republik Indonesia Nomor 003 Tahun 2012 tentang Bahan Tambahan
Pangan. Jakarta: Menteri Kesehatan Republik Indonesia.

45. 33
Lampiran 1. Hasil Kurva Kalibrasi Baku Aspartam

46. 34

47. 35
Lampiran 2. Hasil Uji Kesesuaian Sistem

48. 36
Lampiran 3. Hasil Penetapan Kadar Sampel 18

49. 37
Lampiran 4. Hasil Pengamatan Penandaan

50. 38
Lampiran 5. Sertifikat Baku Aspartam