Buku Panduan Praktikum Olimpiade Biologi Sumber : Perpustakaan SMAN 9 Kerinci Jambi

1. ti
1.,:rirt1,l,!iti':"..,r,
'i, i' it i."i
ril'''- .,
tt': t: a ::l:
,: .::. --.t ,.: ;:,
:i: /r t-:i ri :r-i
)')
L^L
"Kromatografi pigmen mata mutan Drosophilla melanogoster"
eskipun beberapa pigmen
mata, termasuk yang
terdapat pada mata
majemuk lalat buah, tidak
dapat dilihat secara langsung oleh
mata kita, tetapi senyawa tersebut
dapat divisualisasikan di bawah
sinar UV. Contoh noda (spot)
pigmen mata yang dihasilkan
dengan kromatografi dapat dilihat
pada gambar di bagian akhir modul
ini. Sebagai catatan, contoh tidak
hanya berasal dari pigmen mata
lalat buah WT (tipe liafl dan w (mata
putih) tetapijuga dari lalat buah
dengan tipe warna mata se (sepia),
bw (coklat), dan cn (cinnabar)
Ada dua jalur produksi pigmen mata pada lalat buah, yaitu jalur ommochrome dan
jalur pteridin. Warna mata merah pada lalat tipe liar dihasilkan jika semua pigmen
yang dihasilkan dari kedua jalur secara normal ditransfer ke mata majemuk. Mata
putih munculjika pigmen pteridin absen. Dari semua pigmen-pigmen tersebut dan
senyawa intermediet yang terlibat pada kedua jalur, hanya yang berasal darijalur
pteridin yang bisa dipisahkan dengan kromatografi pada percobaan kali ini.
Karakteristik migrasitiap pigmen selama kromatografiditentukan oleh sifat kimia
dari senyawa pigmen tersebut. Jarak migrasi ditentukan oleh berapa lama waktu
kromatografi., tapi nilai Rf akan selalu konstan untuk tiap pigmen. Nilai Rf diukur
dengan persamaan di bawah ini
Rf=
Jarak dari titik awal migrasi ke titik tengah noda (spot)
Jarak dari titik awal migrasi ke batas depan pelarut

2. Genetika Kromatografi pigmen mata
Pada praktikum kali ini, anda akan mencoba melakukan kromatografi pigmen
mata beberapa jenis mutan Drosophila melanogaster. Adapun alat dan bahan yang
digunakan dapat dilihat di bawah ini:
Alat dan bahan
1. lalat buah Drosophilla melanogasfer, lalat mata merah dan lalat mata putih
masing-masing 10 ekor
2. tabung 1,5 mL dengan kode (1) dan (2) yang mengandung larutan ekstraksi
pigmen mata (eye-pigments extraction solution)
Catatan: Contoh larutan yang direkomendasikan untuk ekstraksi pigmen
mata lalat buah adalah larutan metanol: asam asetat: air = 4:5: 1 . larutan
lainnya adalah 30% etil alkoholyang diasamkan dengan HCI hingga pH 2
(etil alkohol asam). Untuk lebih jelas bisa dicari di literatur ataupun sumber
yang direkomendasikan di bab pustaka
3. Micropestles (dalam tabung 15 mL) @ 2
4. Sentrifuga @ 1
5. Mikropipet (P20)@ 1
6.Tips mikropipet ( untuk P200 dan P20)@ 1 pack
7. Tabung 1,5 mL kosong (tidak diberi label pada bagian tutupnya) @ 2
8. TLC (Thin Layer Chromatography), menggunakan lembar plastik dengan
permukaan absorban selulosa. Praktikan juga bisa mencoba
menggunakankertas kromatografi (selulosa) pada praktikum ini
9. Solvent/pelarut, fase bergerak dari kromatografi. Praktikan
direkomendasikan menggunakan pelarut yang terdiri dari campuran n-
propyl alcohol dan28o/o ammonium hydroxide dalam volume yang sama
10. Mikropipet (P2) @ 1
1 1. Tips mikropipet (P2) @ 1 pack
12. Tabung 50 mL mengandung pelarut @ 1
13. Rak tabung untuk tabung 50 mL @ 1
Sumber
http://www.membrane-
so I ut i on s.co m/c h ro m oto g ro p hy_p a pe r_s u pp Ii e s.htm
Sumber

3. Genetika Kromatog rafi pig men mata
lsolasi dan kromatografi pigmen mata
(1) Pilih 5lalat mata merah dan 5lalat
mata putih (baik jantan ataupun
betina) dan pisahkan kepala dari
tubuhnya dengan menggunakan
pinset. Pastikan anda tidak merusak
bagian mata dan abdomen dari lalat.
(2) Dengan menggunakan pinset
pindahkan kepala dari lalat mata
merah ke tabung (1) dan kepala lalat
mata putih ke tabung (2)
(3) Masukkan micropestle ke dalam
masing-masing tabung (1) dan (2)
dan gerus kepala lalat secara
berulang-ulang dengan menekan
dan memutar micropestles pada
tabung. Gunakan micropestle yang
berbeda untuk sampel yang berbeda
pula.
(4) Sentrifuga tabung (1) dan (2) pada
14000 rpm selama 3 menit
(5) Transfer 5 prl supernatan daritabung
(1) dan (2) ke dalam tabung baru
(6) Perhatikan kertas kromatografi /
lembarTLC. Sisiyang lebih pendek
(lebar) dari kertas kromatografi/
lembarTLC adalah sisi atas dan
bawah, dan bagian permukaan yang
kasar adalah permukaan selulosa
yang digunakan pada eksperimen
ini.Tulis kode nama anda dengan
pensil pada bagian atas dari
permukaan selulosa
(7) Pertama, teteskan 1 prl ekstrak
kepala lalat mata merah pada posisi
1/3 dari sisi kiri kertas kromatografi
dan sekitar 2 cm dari sisi bawahnya.
Jangan membuat garis
menggunakan pensil atau pulpen
marker, karena dapat merusak
lembarTLC
(8) Selanjutnya, teteskan 1 pL ekstrak
kepala lalat mata putih pada posisi
1/ 3 dari sisi kanan kertas
kromatografi/selu losa dan sekitar 2
cm darisisi bawahnya.
(9) Ketika noda (spot) mengering,
masukkan kertas kromatografi ke
dalam tabung 50 mL sehingga
bagian bawah dari kertas
menyentu h pela rut, selanj utnya
tutuplah tabung dengan rapat.
Pastikan bahwa noda tidak langsung
menyentuh pelarut. Buka dan tutup
tabung dengan cepat agar tidak
terlalu banyak pelarut yang
menguap.
(10) Jagalah tabung tetap berdiri pada
rak tabung selama proses
kromatografi oleh pelarut
berlangsung
(11) Setelah migrasi pelarut pada kertas
kromatografi mencapaitanda 30 mL
pada tabung, keluarkanlah kertas
dari dalam tabung, dan biarkan
kering. Untuk lembarTLC anda bisa
mengeringkannya di atas selembar
tissue
(12) Amati hasil kromatografi praktikan
di bawah sinar UV.
Ga mbar/dokumentasikan dengan
foto dan berilah keterangan
Analisis hasil krcmatografi
Anda diberikan data kromatografi pigmen
mata lalat tipe liar dan mutan. Lakukan
analisis terhadap data tersebut, dan
jawablah pertanyaan yang terdapat pada
lembar pengamatan dan pertanyaan

4. Genetika Kromatog rafi pig men mata
Lembar hasil kromatografi
Satrrrntf:unt
tp*t t {yetlo*}
Spot2 {bluc}
SF$t S {bl**}
sp*t*{pllow}
$pot S {gm*n *f**}
*pot 6 {r**lrt tln*}
til*t? {{}Iangr}
B*** tilr*
WT rry ss *H *rr
Gambar di atas merupakan hasil kromatografi pigmen mata dari lalat tipe liar
(WT) dan mutan (w, se, bw, cn)
Hitunglah RF pigmen mata pada masing-masing jenis mutan di atas!
*
ft
s
LJ
II
?
*
ftl*tI
^.;v*4
'E
#
*
lJ

5. Kromatog rafi pigmen mata
Hasil/foto kromatografi yang anda lakukan
PUSTAKA
IBO 20th Tsukuba Japan July 201 0, Practical Test Part 3: Genetics, Task 3: Separation
of eye pig ments, a nd Task 4: Read i n g ch romatog ra phy
Tabel pigmen mata D. melanogasfer