Dokumen tersebut merupakan modul praktikum mikrobiologi dan imunologi penyakit infeksi yang membahas dua praktikum yaitu tes presipitasi lateral flow untuk mendeteksi antibodi IgM Salmonella Typhi dan tes aglutinasi MLPA untuk mendeteksi antibodi IgM Mycobacterium leprae. Dua praktikum tersebut menggunakan prinsip reaksi antara antigen spesifik dengan antibodi untuk diagnosis penyakit.

1. PENUNTUN DAN LAPORAN
PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
IMMUNOLOGI PENYAKIT INFEKSI
Prof. dr. Mochammad Hatta, Ph.D.,Sp.MK. (K)
BAGIAN MIKROBIOLOGI
FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS HASANUDDIN
UNIVERSITAS HALU OLEO

2. 1
UNTUK PENGGUNAAN KALANGAN SENDIRI
KARTU KONTROL
SISTIM IMUNOLOGI
Nama : Foto
NIM :
Kelompok :
R e g u :
Praktikum I Tanggal
Praktikum II Tanggal

3. 2
UNTUK PENGGUNAAN KALANGAN SENDIRI
PERATURAN PRAKTIKUM
1. Selama berjalannya praktikum secara daring, mahasiswa wajib tetap
menyalakan kamera video dan mematikan mikropon, mikropon nanti
dinyalakan ketika interaktif
2. Disediakan oleh mahasiswa :
a. Baju praktikum yang harus dipakai selama praktikum secara
daring
b. Modul penuntun dan laporan yang dicetak secara mandiri
3. Selesai Praktikum secara daring :
a. Tanyakan hal yang belum jelas tentang materi praktikum
b. Isi halaman identitas (hal.1) pada modul
c. Jawab pertanyaan pada modul (hal.9 & hal.13) dengan tulisan
tangan.
d. Pindai atau foto halaman yang diisi tadi (Hal.1,9,&13) lalu
kirimkan ke admin lab (alamat email menyusul)
e. Modul hasil pindai atau foto dikirim selambat-lambatnya 1 hari
sebelum ujian praktikum sebagai syarat untuk mengikuti ujian
praktikum
SELAMAT MENGIKUTI PRAKTIKUM

4. 3
UNTUK PENGGUNAAN KALANGAN SENDIRI
PRAKTIKUM I
TES PRESIPITASI LATERAL FLOW
TUJUAN :
Mendeteksi adanya presipitasi yang terjadi akibat reaksi antigen spesifik
dari Salmonella enteritica serovar typhi (Lypopolysacharida /LPS)
dengan antibodi IgM penderita dari serum penderita demam tifoid
dengan menggunakan lateral flow .
PRINSIP KERJA :
Typhoid lateral flow adalah test imunokromatografi dengan satu langkah.
Antigen yang digunakan adalah Lipopolisacharida (LPS) dari bakteri
Salmonella enteritica serovar typhi hasil isolasi dari penderita demam
tifoid di Makassar.
LPS dari hasil kultur dilewatkan pada garis didalam porus dari kertas
nitroselulosa pada daerah strip untuk test serum. Pemeriksaan ini
menggunakan reagen detetion yang telah dikeringkan didalam alat test
tersebut. Reagen sebagai alat deteksi terdiri dari anti-human antibodi
yang dilabel dengan partikel “red colloidal gold”. Test Salmonella IgM
lateral flow menggunakan anti-human IgM antibodi dan LPS Salmonella
enteritica serovar Typhi IgM dengan antihuman IgM antibodi. Untuk
melakukan test ini digunakan sampel spesimen berupa serum yang
diletakkan dalam tempat lubang sampel. Cairan “running solution”
ditambahkan untuk mencairkan reagen deteksi dan membawa molekul

5. 4
UNTUK PENGGUNAAN KALANGAN SENDIRI
serum. Selanjutnya reagen deteksi akan melalui porus membran pada
daerah test.
Antibodi dalam serum yang spesifik untuk Salmonella serovar typhi akan
melekat dengan antigen LPS dan antibodi ini akan diwarnai dengan
adanya reagen deteksi. Adanya antibodi IgM yang spesifik terhadap LPS
Salmonella enteritica serovar Typhi akan terlihat garis berwarna merah di
daerah test pada test Salmonella Lateral flow. Hasil akhir akan
menunjukkan garis berupa pita merah akan terlihat didaerah test pada
test Salmonella lateral flow. Bila sampel serum tidak mengandung
antibodi IgM Salmonella serovar Typhi yang spesifik maka sampel akan
melewati daerah test dan tidak akan memperlihatkan warna merah pada
daerah test. Semua sampel akan memperlihat warna merah pada daerah
kontrol. Hal ini menunjukkan bahwa reagen deteksi masih aktif dan hasil
akan akurat.
BAHAN :
Reagen yang digunakan dalam tes lateral flow ini adalah ;
1. Paket Lateral flow
2. Cairan Running buffer
3. Pipet untuk running buffer (130 ul per sampel)
4. Lateral flow terdiri dari : Strip putih yaitu pita antigen (lower band),
internal kontrol (upper band).

6. 5
UNTUK PENGGUNAAN KALANGAN SENDIRI
CARA KERJA :
- Buka bungkus test typhoid lateral flow dan letakkan mendatar
dengan permukaan pada bagian atas lubang untuk memasukkan
sampel.
- Siapkan kapas alkohol, autoklik dan pipet kapiler
- Disinfeksi ujung jari dengan kapas alkohol
- Tusuk jari dengan posisi vertical menggunakan autoklik
- Darah yang keluar diisap dengan menggunakan pipet kapiler (±5 µl)
- Masukkan darah kedalam lubang dengan menempelkan ujung pipet
- Tambahkan 130 ul atau 5 tetes cairan “running buffer”
- Biarkan 10 - 15 menit dan lihat perubahan pada daerah test dan
daerah kontrol
- Bila muncul pita berwarna merah pada daerah kontrol dan/atau
daerah test, terang warna yang terjadi semakin menuju kearah nilai
positip tinggi.

7. 6
UNTUK PENGGUNAAN KALANGAN SENDIRI
Pemeriksaan ini menggambarkan 5 : 130 larutan serum dalam running
buffer deteksi dan reagen deteksi pada kertas nitroselulose. Pewarnaan pita
antigen menggambarkan IgM antibodi spesifik S. typhi dalam serum sampel.
Pita horisontal kontrol untuk mencek integritas dari reagen deteksi.
Prinsip tes adalah terjadinya ikatan antara antibodi IgM spesifik
dengan LPS dari Salmonella enteritica serovar Typhi sebagai antigen
spesifik tifoid. Ikatan antibodi IgM spesifik pada reaksi non enzymatik dengan
antibodi IgM manusia yang bersifat stabil. Pada tes ini dilakukan
pencampuran 5 µl serum dengan 130 µl running buffer dengan melewatkan
pada kertas nitroselulose dan ditunggu selama 10 – 15 menit.
Reaksi positif akan terlihat warna merah pada pita antigen (pita
bawah) intensitas warna dapat memberikan nilai semi kuantitatif, tidak
berwarna berarti negative (-) dan merah kabur (1+), merah sedang (2+ / 3+),
merah jelas (4+) (lihat gambar 1).

8. 7
UNTUK PENGGUNAAN KALANGAN SENDIRI
Gambar 1. Prinsip pemeriksaan Typhoid Lateral Flow
Gambar 2. Hasil pemeriksaan Typhoid Lateral Flow
C
T
+4 +3 +2 +1 - Invalid

9. 8
UNTUK PENGGUNAAN KALANGAN SENDIRI
1. Jelaskan bagaimana proses terjadinya reaksi pada Typhoid Lateral flow
2. Sebutkan manfaat dari tes Typhoid Lateral flow
3. Jelaskan perbedaan antara tes Typhoid Lateral flow dengan MLPA tes

10. 9
UNTUK PENGGUNAAN KALANGAN SENDIRI
PRAKTIKUM II
TES AGLUTINASI MLPA (MYCOBACTERIUM LEPRAE
PARTICLE AGGLUTINATION) KUALITATIF
TUJUAN :
Menentukan adanya aglutinasi/pengumpalan yang terjadi akibat reaksi
antara antigen yang spesifik Mycobacterium leprae (Phenolic Glycolipid-
1/PGL-1) dengan imunoglobulin M (IgM) dari serum penderita yang
menderita kusta / lepra.
BAHAN DAN ALAT :
a. Microplate yang setiap pelatnya berisi 96 buah sumur kecil berbentuk U
dan yang dipakai 3 buah sumur untuk setiap pemeriksaan qualitatif.
b. Micropipet serta multipipet dengan tips berbagai ukuran
c. Reading mirror
d. Kit MLPA lengkap yang terdiri atas :
1. Dropper yang setiap tetesnya setara dengan 25 ul
2. Reconstituting solution
3. Serum diluent
4. Sensitized particles yang berisi NT-P-BSA (Antigen semisintetik)
5. Unsensitized particles / kontrol negatif
6. Positive control

11. 10
UNTUK PENGGUNAAN KALANGAN SENDIRI
Tes kualitatif dilakukan berturut sebagai berikut :
Sebelum tes dilakukan terlebih dahulu dibuat resgeansia dari KIT MLPA
yang telah tersedia, dengan membuat larutan homogen untuk tiap vial yang
berisi sensitized particle, control particle dan positif control dengan
reconstituting solution. Reagensia didiamkam selama 30 menit sebelum
digunakan.
1. Teteskan 75 ul (tiga tetes) zat pelarut serum (serum diluent) pada sumur
pertama dan masing-masing 25 ul (satu tetes) pada sumur kedua dan
ketiga.
2. Tambahkan 25 ul serum penderita pada sumur pertama dan dicampur
sampai larutan merata sehingga sumur pertama mengalami pengenceran
menjadi 1 : 4
3. Kemudian ambillah 25 ul larutan dari sumur pertama dan campurkan ke
sumur kedua sampai merata, selanjutnya ambil lagi 25 ul dari larutan
sumur kedua lalu tambahkan ke sumur ketiga dan campurlah sampai
merata. Pengenceran ini menghasilkan larutan serum di sumur kedua
menjadi 1 : 8 dan disumur ketiga menjadi 1 : 16.
4. Kemudian ke dalam sumur kedua ditambahkan 25 ul partikel kontrol
(unsensitized particle control ) sedangkan ke dalam sumur ketiga
ditambahkan 25 ul sensitized particle yang menghasilkan larutan serum 1
: 16 di sumur kedua dan larutan serum 1 : 32 di sumur ketiga.
5. Setelah proses tersebut selesai, maka pelat didiamkan pada suhu kamar
atau dalam lemari inkubator selama 2 jam.
6. Setelah 2 jam hasil tes dibaca dan hasil yang positif pada sumur ketiga

12. 11
UNTUK PENGGUNAAN KALANGAN SENDIRI
1 2 3
A
C
B
D
Prosedur kerja
Well No. 1 2 3
Serum Diluent (ul) 75 25 25
Serum specimen (ul) 25 25 25
Serum dilution (Ratio) 1/4 1/8 1/16
Unsensitized particle (ul) - 25 -
Sensitized particle (ul) - - 25
Final dilution 1/16 1/32
HASIL PENGAMATAN
Buang
POSITIF
NEGATIF
INVALID
INVALID

13. 12
UNTUK PENGGUNAAN KALANGAN SENDIRI
Tugas
1. Jelaskan dasar dari pemeriksaan MLPA ini
2. Jelaskan antigen yang dipakai dalam pemeriksaan MLPA ini
3. Jelaskan perbedaan antara pemeriksaan dengan cara ELISA dan MLPA

14. 13
UNTUK PENGGUNAAN KALANGAN SENDIRI
Kepustakaan:
1. Mochammad Hatta, Marga D.A Goris, Evy Heerkens, George C
Gussenhoven, Jairo Goosken, Henk L Smits. Simple dipstick assay for
the detection of Salmonellla typhi-specific immunoglobulin M antibodies
and the evolution of the immune response in patients with typhoid fever
American J. Tropical Medicine and Hygiene. vol 66, no,4, hal 416-
421 (2002).
2. Mochammad Hatta, Mubin Halim, Theresia Abdoel, Henk L. Smits.
Antibody response in typhoid fever in endemic Indonesia and relevance
of serology and culture to diagnosis. Southeast Asian Journal of
Tropical Medicine and Public Health. vol 33 no, 4, hal 182-191 (2002)
3. Mochammad Hatta, Shinzo Izumi and Paul R Klatser. Evaluation of
the Mycobacterium leprae Particle Agglutination test as tool in the
epidemiology of leprosy in high prevalence village in South Sulawesi,
Indonesia. South-east Asia J. Tropical Medicine and Hygiene, vol
26, no.4 hal 631-635, Desember (1995).
4. Mochammad Hatta, Rob Pastoor, Theresia H. Abdoel, Henk L. Smits.
Simple, rapid and affordable point-of-care test for the serodiagnosis of
typhoid fever. J. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease.
Vol 61 (2) : 129-134, Feb (2008).