Kỹ thuật nuôi cấy sơ cấp tế bào động vật

1. Kỹ thuật nuôi cấy sơ cấp
tế bào động vật
Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên

2. Khái niệm
Nuôi cấy sơ cấp (primary culture) là quá trình nuôi tế bào trực tiếp từ mô trước lần cấy
chuyền đầu tiên (subculture). Sau đó, việc nuôi cấy được gọi là thứ cấp (secondary culture)

3. Hai kiểu nuôi cấy sơ cấp
KIỂU 1: NUÔI CẤY MẢNH
MÔ SƠ CẤP
Là việc nuôi cấy các mảnh
mô in vitro. Trong quá trình
nuôi cấy, các tế bào từ mảnh
mô sẽ phát triển lan ra từ
vùng mô trung tâm.
KIỂU 2: NUÔI CẤY SƠ
CẤP HUYỀN PHÙ TẾ BÀO
ĐƠN
Là việc nuôi cấy các tế bào
đơn được tách ra từ mảnh mô.
Trong quá trình nuôi, từng mỗi
tế bào sẽ phát triển tăng sinh
thành nhiều tế bào mới.

4. NUÔI CẤY MẢNH MÔ SƠ CẤP
(mảnh mô ung thư vú)

6. Thu nhận tế bào đơn nhân tủy xương chuột

7. NUÔI CẤY SƠ CẤP HUYỀN PHÙ
TẾ BÀO ĐƠN
(thu từ máu cuống rốn)

8. Nuôi cấy
Xử
lí
mẫu
Nuôi cấy tế bào đơn:
Tách mô thành tế bào đơn
Nuôi cấy mảnh mô:
Cố định mảnh mô
Thu nhận mẫu
Quy trình nuôi cấy sơ cấp

9. Thu nhận mẫu
• Các mẫu thu nhận có thể bao gồm bất kì mô
sống nào của cơ thể.
• Trước hết phải làm sạch mô tại vị trí lấy mẫu
bằng cồn, cho mô vào dung dịch PBS, nhanh
chóng chuyển về phòng thí nghiệm.
• Tùy loại mẫu mô cũng như thời gian cần thiết
vận chuyển về phòng thí nghiệm: có kế hoạch
vận chuyển chúng trong điều kiện thích hợp.

11. Xử lí mẫu đối với nuôi cấy huyền phù
tế bào đơn
Các tế bào động vật trong khối mô liên kết chặt chẽ với nhau
nhờ các cầu nối hình thành giữa các tế bào với nhau.
Biện pháp:
– (1) tác dụng một lực cơ học để bẻ gãy những cầu nối.
– (2) dùng enzym để phân hủy các cầu nối nói trên.

12. Cắt
nhuyễn
Ép
nhuyễn
Tách
bằng
màng lọc
Biện pháp
cơ học

13. Phương pháp cắt nhuyễn
Sử dụng lục sơ học bẻ gãy các cầu nối liên bào: dùng kéo,
dao cắt nhuyễn các mảnh mô.
Huyền phù vào dịch PBS, để lắng, thu dịch trong

14. Phương pháp ép nhuyễn
Ép nhuyễn mô: dùng 2 phiến lame
ép chặt mảnh mô để thu tế bào
đơn đối với những mô có liên kết
yếu.

15. Phương pháp tách bằng màng lọc
Tách bằng màng lọc tế bào (Cell
strainer): kích thước lỗ trên màng
từ 70–100 µm, chỉ cho những tế
bào đơn có kích thước tương ứng
qua màng.
Tải bản FULL (32 trang): https://bit.ly/3z5lEJx
Dự phòng: fb.com/TaiHo123doc.net

16. Tách mô thành tế bào đơn bằng enzym
• Quy trình trypsin ấm
• Quy trình trypsin lạnh
Tải bản FULL (32 trang): https://bit.ly/3z5lEJx
Dự phòng: fb.com/TaiHo123doc.net

17. Quy trình trypsin ấm
4030972