Praktikum ini melibatkan penghitungan mikroba secara tidak langsung dengan metode hitungan cawan dan secara langsung menggunakan alat haemocytometer. Pengenceran berseri dilakukan untuk memperoleh konsentrasi bakteri yang tepat dihitung. Hasil penghitungan menunjukkan jumlah koloni dan spora bakteri yang berbeda pada setiap kelompok dan season.

1. PENGENCERAN BERSERI DAN PERHITUNGAN MIKROBA SECARA
TIDAK LANGSUNG DENGAN METODE SEBAR (HITUNGAN CAWAN)
DAN SECARA LANGSUNG DENGAN ALAT HEMOSITOMETER
(HAEMOCYTOMETER)
(Laporan Praktikum Mikrobiologi Pertanian)
Oleh
Farida Lukmi
1514121052
JURUSAN AGROTEKNOLOGI
FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS LAMPUNG
2016

2. I. PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Pada metode perhitungan cawan dilakukan pengenceran yang bertingkat yang
mana ditujukan untuk membentuk konsentrasi dari suatu suspensi bakteri. Sampel
yang telah di encerkan ini di hitung ke dalam cawan baru kemudian di tuang ke
mediumnya (metode tuang). Kemudian setelah diinkubasi selama 24- 48 jam,
amati koloni yang tumbuh dan koloni yanng diamati hanyalah koloni yang
berjumlah 30- 300 koloni.
Tingkat pengenceran yang diperlukan didasarkan pada pendugaan populasi
bakteri yang ada dalam contoh. Hasil yang baik adalah jika pada pengenceran
yang lebih rendah contoh yang diduga lebih banyak menunjukkan hasil uji positif
(adanya pertumbuhan bakteri) dan pada pengenceran lebih tinggi contoh yang
diduga lebih sedikit menunjukkan hasil uji negatif (tidak ada pertumbuhan
bakteri). Oleh karena itu jumlah populasi bakteri yang ada dalam contoh diduga
tinggi maka contoh harus diencerkan sampai diperoleh tingkat pengenceran yang
lebih tinggi sehingga nilai maksimum dapat dihitung. Metoda pengenceran yang
paling mudah dengan melakukan pengenceran 10 kali lipat dengan menggunakan
3 atau 5 tabung pengenceran sekali gus. Beberapa cara penghitungan jumlah
mikrobia yaitu cara penghitungan pada lempeng pembiakan, cara menghitung
langsung (metode kaca objek), metode ukur kekeruhan, metode turbidimetri dan
nefelometri serta dengan jumlah perkiraan terdekat (JPT).
Jumlah mikrobia pada suatu bahan dapat ditentukan dengan bermacam-macam
cara, tergantung pada bahan dan jenis mikrobia yang ditentukan. Jenis populasi
mikroba dalam tanah, air, bahan makanan dan lain-lainnya berbeda-beda
tergantung pada susunan bahan tersebut. Ada dua cara perhitungan jumlah
mikrobia yaitu perhitungan secara langsung dan perhitungan secara tidak
langsung.
Ada beberapa cara perhitungan mikroba secara langsung yaitu
menggunakan colony counter, menggunakan cara pengecatan dan pengamatan di

3. bawah mikroskop, dan cara lainnya dengan menggunakan filter membran. Cara
menghitung mikroba secara tidak langsung dipakai untuk menentukan jumlah
mikroba secara keseluruhan, baik yang hidup maupun yang mati atau hanya untuk
menentukan jumlah mikroba yang hidup saja, tergantung cara yang digunakan.
Untuk menentukan jumlah mikroba yang hidup dapat dilakukan setelah suspensi
bahan atau biakan mikroba diencerkan beberapa kali dan ditumbuhkan dalam
medium dengan cara tertentu tergantung dari macamnya bahan dan sifat mikroba.
Berapa cara menetukan jumlah mikroba secara tidak langsung yaitu menghitung
jumlah mikroba menggunakan sentrifuge, berdasarkan kekeruhan, menggunakan
perhitungan elektronik (elektronik counter), berdasarkan analisis kimia,
bedasarkan berat kering, menggunakan cara pengenceran, menggunakan
cara Most Probable Number (MPN) danmenggunakan metode hitungan cawan.
1.2 Tujuan
Adapun tujuan dari dilakukannya praktikum ini adalah:
1. Mempelajari cara melakukan pengenceran berseri untuk menhitung jumlah
sel bakteri atau jumlah spora secara tidak langsung.
2. Mengamati pertumbuhan koloni bakteri atau koloni jamur dalam media PDA.
3. Mempelajari cara melakukan pengenceran berseri untuk menhitung jumlah
sel bakteri atau jumlah spora secara tidak langsung.
4. Mempelajari cara menggunakan alat Haemocytometer untuk menghitung
jumlah bakteri atau spora secara langsung.

4. II. METODOLOGI PRAKTIKUM
2.1 Alat dan Bahan
Adapun alat yang digunakan dalam praktikum kali ini adalah colony counter ,
tabung erlenmeyer, tabung reaksi, rak tabung reaksi, pipet tetes, gelas sebar,dan
pipet tetes. Sedangkan bahan yang digunakan adalah biakan bakteri atau jamur di
dalam cawan petri, aquades steril, dan media cawan.
2.2
Adapun prosedur percobaan kali ini adalah:
A. Pengenceran
1. Memasukkan 10 ml aquades ke dalam biakan jamur yang berada pada cawan.
2. Mengaduk hingga rata.
3. Memasukkan kedalam tabung reaksi dan menghomogenkannya.
4. Mengambil 1 ml suspensi jamur dengan menggunakan mikropipet lalu
memasukkannya ke dalam tabung reaksi yang berisi 9ml aquades dan
menghomogenkannya menggunakan rotamixer (pengenceran 10-1 ).
5. Mengambil 1ml suspensi jamur pada pengenceran 10-1 lalu memasukkannya ke
dalam tabung reaksi yang berisi aquades 9ml dan menghomogenkannya
menggunakan rotamixer.
6. Mengambil 1ml suspensi dari pengenceran 10-2 lalu memasukkannya ke dalam
tabung reaksi yang berisi 9ml aquades dan menghomogenkannya
menggunakan rotamixer (pengenceran 10-3 ).
B. Perhitungan Mikroba Secara Tidak Langsung
1. Menyiapkan media PDA rosebengal

5. 2. Mengambil suspensi di dalam tabung reaksi yang ke tiga menggunakan pipet
tetes dan meletakkannya di media PDA rosebengal dibawah LAF dan didekat
api.
3. Meratakan jamur menggunakan drygalski yang sudah steril sambil memutar-
mutar cawan petri di dekat api bunsen.
4. Rekatkan menggunakan plastik perekat.
C. Perhitungan Mikroba Secara Langsung
1. Melakukan pengenceran berseri seperti pada praktikum sebelumnya.
2. Memulai pada pengenceran paling rendah, meneteskan suspensi bakteri
keatas bidang hitung pada permukaan hemositometer.
3. Menutup permukaan hemositometer dengan kaca penutup.
4. Meletakkan hemositometer di atas meja pentas mikroskop majemuk dan
mengatur perbesaran fokusnya sampai diperoleh bayangan sel yang cukup
jelas dan garis-garis pada permukaan bidang hitung hemositometer.
5. Menghitung jumlah sel dalam setiap kotak sedang, mengulangi sebanyak 5
kotak dan menghitung rata-ratanya.
6. Menentukan atau menghitung kerapatannya (jumlah spora per ml suspensi
awal).

6. III. HASIL DAN PEMBAHASAN
3.1 Hasil Pengamatan
No. Foto Keterangan
1 Tampak jamur Trichoderma sp.
Tumbuh memenuhi media cawan,
marena media yang kita gunakan
dan proses yang kita lakukan dalam
kondisi steril.
3.2 Hasil Perhitungan
1. Perhitungan pada kelompok 1 season 1
Kotak 1 = 9
Kotak 2 = 9
Kotak 3 = 9
Jadi, x adalah 9 di dalam 0,004 mm3
 Jumlah spora/ml air
∑ = 9 x 2,5.105
= 22,5 . 105 spora/ml.
∑ = 22,5 . 105. 102

7. = 22,5 . 107 spora/ml.
2. Perhitungan pada kelompok 2 season 1
Kotak 7 = 29
Kotak 15 = 20
Kotak 19 = 32
Jadi, x adalah 27 di dalam 0,004 mm3
 Jumlah spora/ml air
∑ = 27 x 2,5.105
= 67,5 . 105 spora/ml.
∑ = 67,5 . 105 . 102
= 67,5 . 107 spora/ml.
3. Perhitungan pada kelompok 1 season 2
Kotak 6 = 18
Kotak 16 = 22
Kotak 1 = 17
Jadi, x adalah 19 di dalam 0,004 mm3
 Jumlah spora/ml air
∑ = 19 x 2,5.105
= 47,5 . 105 spora/ml.
∑ = 47,5 . 105 . 102
= 47,5 . 107 spora/ml.
4. Perhitungan pada kelompok 2 season 1

8. Kotak 2 = 14
Kotak 4 = 17
Kotak 6 = 19
Jadi, x adalah 18,3 di dalam 0,004 mm3
 Jumlah spora/ml air
∑ = 18,3 x 2,5.105
= 45,83 . 105 spora/ml.
∑ = 45,83 . 105 . 102
= 45,83 . 107 spora/ml.
3.3 Pembahasan
Metode cawan tuang merupakan teknik lain yang dapat digunakan untuk
mendapatkan koloni murni mikroorganisme. Kelemahan metode ini adalah
membutuhkan waktu dan bahan yang lama dan banyak, akan tetapi tidak
memerlukan keterampilan tinggi. Biakan campuran diencerkan dengan
menggunakan medium agar yang telah dicairkan dan didinginkan. Pengenceran
dilakukan dalam beberapa tahap hingga diperoleh koloni tunggal.
Metode lain yang digunakan adalah count plate . Metode ini merupakan metode
penaksiran jumlah kepadatan bakteri secara tidak langsung dan informasi yang
didapatkan hanya jumlah bakteri yang hidup saja, bakteri yang mati tidak ikut
dihitung. Metode ini pun didasarkan pada asumsi bahwa setiap sel
mikroorganisme hidup dalam suspensi akan tumbuh menjadi satu koloni setelah
ditumbuhkan dalam media pertumbuhan dan lingkungan yang sesuai. Setelah
diinkubasi, jumlah koloni yang tumbuh dihitung dan merupakan perkiraan atau
dugaan dari jumlah mikroorganisme dalam suspensi tersebut.
Koloni yang tumbuh tidak selalu berasal dari satu sel mikroorganisme karena

9. beberapa mikroorganisme tertentu cenderung membentuk kelompok atau berantai.
Berdasarkan hal tersebut digunakan istilah Coloni Forming Units (CFU’s) per ml.
koloni yang tumbuh berasal dari suspensi yang diperoleh menggunakan
pengenceran bertingkat dari sebuah sampel yang ingin diketahui jumlah
bakterinya.
Kelebihan dan kekurangan pengukuran menggunakan haemocytometer yaitu:
Kelebihan perhitungan sel dengan menggunakan hemositometer adalah dapat
menghitung jumlah sel yang hidup maupun yang mati, tergantung dari pewarna
yang digunakan.Misalnya, bila pewarna trypan blue dicampukan ke dalam larutan
sel maka sel yang hidup tidak akan berwarna dan sel yang mati akan berwarna
biru. Kelebihan lainnya adalah morfologi sel dapat diamati,
dapat mengevaluasi homogenitas dan datamendeteksi kontaminasi. Tetapi,
kekurangan dari jenis ini ialah lebih sensitif dalam pembersihan dan
perawatannya. Lapisan rhodium sangat mudah rusak atau terhapus pada saat
pembersihan sehingga untuk pembersihannya membutuhkan ketelitian ekstra.

10. IV. KESIMPULAN
Adapun kesimpulan yang ditarik dari praktikum ini adalah:
1. Penghitungan bakteri dengan metoda hitungan cawan dilakukan karena
mempunyai kelebihan yakni mudah dan efektif dalam proses penghitungan
mikroba dan juga bakteri yang dihitung adalah bakteri yang tumbuh saja.
2. Kekurangannya yakni bahan yang digunakan relatif lebih banyak.
3. Hasil pengenceran bakteri dapat dikatakan berhasil karena semakin besar
pengencerannya maka jumlah koloni bakteri yang tumbuh akan semakin kecil
terkait konsentrasi bakteri yang semakin kecil pula, namun jumlah bakteri
yang tumbuh semakin besar karena dikalikan dengan faktor pengencernya.

11. DAFTAR PUSTAKA
Anonim.2013.Kelebihan dan Kekurangan Pengukuran Menggunakan
Haemositometer. https://www.scribd.com/doc/186698477/Kelebihan-Dan-
Kekurangan-Haemositometer. Diakses pada tanggal 18 Mei 2016 pukul
19.00 WIB
Dwidjoseputro, D. 1994. Dasar dasar mikrobiologi.Djambatan.Jakarta.
Fardiaz, Srikandi. 1992. Mikrobiologi Pangan 1. Gramedia. Jakarta.
Pelczar, Michael, J. 1986. Dasar- Dasar Mikrobiologi. Universitas Indonesia.
Jakarta.
Sutedjo, M. 1991. Mikrobiologi Tanah. Renika Cipta. Jakarta.