Dokumen ini menjelaskan prosedur uji reaksi silang darah yang dibagi menjadi tiga fase: fase I (reaksi silang mayor dan minor), fase II (inkubasi dengan bovine albumin), dan fase III (uji antiglobulin). Uji reaksi silang ini digunakan untuk memastikan kompatibilitas darah donor dan pasien sebelum transfusi. Selain itu, metode gel juga dijelaskan, termasuk interpretasi hasil dan keuntungan serta kerugian dibandingkan metode tradisional.

1. UJI REAKSI SILANG(CROSS MATCH)Tutor HematologiImeFransiskaAdidharma, dr/ArifoelHajat, dr, SpPK

2. PENDAHULUANTRANFUSI DARAH

3. UJI REAKSI SILANG

4. UjiReaksiSilang…

5. PRINSIP TATALAKSANA MELAKUKAN UJI REAKSI SILANG12

6. Berdasarkan prinsip diatas, Uji reaksi silang dilakukan dalam tiga fase:FASEIFASEII

7. Antihuman Globulin (AHG) phase (Fase Antiglobulin)SSel-sel yang sudah diinkubasi, dicuci dan direaksikan dengan serum antihuman globulin (reagen coombs atau antiglobulin). SMerupakan Indirect Coombs Test .FASEIII

8. PERSIAPAN UJI REAKSI SILANG

9. PERSIAPAN UJI REAKSI SILANG

10. 10PROSEDUR UJI REAKSI SILANG DENGAN METODE TABUNG Reaksi Silang Fase I (Fase Suhu kamar dalamSalin)1 tts susp. Sel 5% donor1tetes susp. Sel 5% pasien1 tts susp. Sel 5a% donor1tetes susp. Sel 5% pasien2 tetes serum pasien2 tetes serum pasien2 tetes plasmadonor I II IIIFaseIISetiaptabung campur dg baikBaca hasil secara makroskopis/mikroskopisSentrifus 1000 rpm 1 mnt / 3400 rpm /15 dtkNegatif

11. Keterangan gambarPROSEDUR UJI REAKSI SILANG Fase ISiapkan 3 buah tabung.Tabung 1(reaksi silang mayor): 2 tetes serum pasien + 1 tetes suspensi sel darah merah donor 5%Tabung 2 (reaksi silang minor): 2 tetes plasma donor + 1 tetes suspensi sel darah merah pasien 5%Tabung 3 (autocontrol): 1 tetes sel darah merah pasien 5% +2 tetes serum pasien

12. Campur dan kocok hingga tercampur rata, kemudian pusingkan (centrifuge) 1000 rpm selama 1 menit atau 3400 rpm selama 15 detikLihat secara makroskopis dan mikroskopis apakah terjadi aglutinasi atau hemolisis. Jika terjadi aglutinasi atau hemolisis berarti hasil pemeriksaan reaksi silang positif, dan darah tidak dapat ditransfusikan. Jika hasil negatif, lanjutkan pemeriksaan ke fase selanjutnya (fase II).Keterangan gambarPROSEDUR UJI REAKSI SILANG Fase I

13. 13PROSEDUR UJI REAKSI SILANG Reaksi Silang Fase II (Fase Inkubasi 37oC)1 tts susp. Sel 5% donorTambah 2 tts bovin albumin 22%Fase III I II IIINegatifSetiaptabung campur dg baikBaca hasil secara makroskopis/mikroskopis Inkubasi 370C selama 20menit Sentrifus 1000 rpm 1 mnt / 3400 rpm /15 dtk

14. Ke dalam masing-masing tabung tambahkan 2 tetes bovine albumin 22%, campur dan inkubasi selama 20 menit pada suhu 37°CPusingkan (centrifuge) 1000 rpm selama 1 menit. Lihat secara makroskopis dan mikroskopis apakah ada aglutinasi atau hemolisis. Bila hasil negatif lanjutkan pemeriksaan ke fase berikutnya (fase III) Keterangan gambarPROSEDUR UJI REAKSI SILANG Fase II

15. PROSEDUR UJI REAKSI SILANG Reaksi Silang Fase III (Antihuman Globulin / AHG phase)Uji denganCoomb’s Control CellCuci sel darah merahdengan3-5 ml saline (3 kali)Aglutinasi ?Jika hasil negatif I II IIIBaca hasil secara makroskopis & mikroskopisBuang supernatan Sentrifus 1000 rpm 1 mnt / 3400 rpm /15 dtkCampur, kocok +2 ttsCoombs serum15

16. PROSEDUR UJI REAKSI SILANGReaksi silang valid1 tetes CCCHasil positifPusingkan 1000 rpm / 1 mnt atau 3400 rpm 15 dtkHasil negatif Uji Coomb test negatifReaksi silang invalidBila reaksi silang invalid, maka tes reaksi silang harus diulangi.16

17. Keterangan gambarPROSEDUR UJI REAKSI SILANG Fase IIITambahkan salin sebanyak 3-5mL ke dalam masing-masing tabung. Suspensikan dengan merata. Sel darah merah masing-masing tabung dicuci tiga kali dengan salin. Setiap kali pencucian ditambahkan 3-5 mL salin, suspensikan merata kemudian pusingkan 1000 rpm selama 1 menit. Supernatan dibuang (pencucian pertama)Lakukan no.1 diatas sebanyak 2xSetelah pencucian tiga kali, supernatan salin dibuang sebanyak-banyaknya untuk menghindari terjadinya pengenceran Coomb´s serum yang akan ditambahkan.

18. Interpretasi hasil uji reaksi silangw Uji reaksi silang kompatibel : apabila pada semua fase (reaksi silang mayor maupun reaksi silang minor )tidak ada reaksi (aglutinasi dan/atau hemolisis). darah donor boleh diberikan kepada pasien

19. Interpretasi hasil uji reaksi silangBila inkompatibel pada reaksi silang mayor: darah donor tidak boleh diberikan kepada pasien.

20. Bila inkompatibel pada reaksi silang minor : darah donor masih dapat ditolerir untuk diberikan berupa Packed Red Cell.UJI REAKSI SILANG DENGAN METODE GELalat dan bahanDG Gel CoombsTehnik :Indirect Coombs Test dan DirectCoombs Test. ICT termasuk screening danidentifikasi antibodi yang tak terduga, ujireaksi silang, autocontrol, danpenggolongan darah.Reagen :AHG : menggunakan bufer LISS dengan anti-human globulinpoli spesifik. Campuran dari anti Ig-G poliklonal kelinci dan anti C3d antibodi monoklonal, antibodi Ig M dari murine Penyimpanan : 2°C-25°C

21. DG GEL SOLUTIONLow Ionic Strength Solution (LISS) untuk persiapan pembuatan suspensi sel darah merah.Penyimpanan: 2°C - 8°CMIKROPIPETPemeriksaan dengan metode gel hanya membutuhkan jumlah sampel yang sedikit sehingga diperlukan mikropipet dalam mengambil sampel atau reagenUJI REAKSI SILANG DENGAN METODE GEL alat dan bahan

22. DG SPINDigital CentrifugeCapacity: 24 Gel CardsSpeed: 990 rpmTime: 9 minutesDG THERMDigital IncubatorCapacity: 24 Gel Cards & Testing tubesTemperature: 37oC + 1oCTime: 15 min (variable)

23. Penambahan Reaktan (Serum / Plasma & / Eritrosit) Ruang ReaksiKolom berisi Gel & ReagenPrinsipPemeriksaan23Gambar 1. mikrotube gel card

24. Prinsipmetodegel : sentrifugasi terkontrol eritrositmelalui gel dextran-acrylamide yang mengandung reagen yang sesuai dalam microtube

25. Partikel gel berpori berfungsi media reaksi & filter  menyaring aglutinat eritrositselama sentrifugasi berdasar ukuran aglutinat24 Pemeriksaan metode gel

26. Aplikasi Metode Gel pada Pemeriksaan Reaksi Silang (PMI Surabaya )Suspensi sel darah merah dibuat dalam pelarut LISS.

27. Gel dalam mikrotube berisi reagen AHG (Diamed R)

28. Pada satu gel card dilakukan reaksi silang mayor,minor, autokontrol dan auto pool.

29. Satu gel card dapat dipergunakan untuk reaksi silang dua darah donor.

30. Beri tanda berturut turut I mayor, I minor, II mayor, II minor, autokontrol dan aouto pool pada masing mikrotube.25

31. UJI REAKSI SILANG DENGAN METODE GELProsedur Kerja

32. UJI REAKSI SILANG DENGAN METODE GELProsedur Kerja

33. UJI REAKSI SILANG DENGAN METODE GELProsedur KerjaCara membuat suspensi 1% = 1000 µL diluent (DG Gel Sol) + 10 µL cell, atau 500 µL diluent (DG Gel Sol) + 5 µL cell