1. Kelompok 9
• Nihayatul Milah (4411411032)
• Sri Handayani (4411411047)
MICROPLATE READER
DENGAN METODE ELISA
Biology Non Education
Second Group
Semarang State University
2. Tujuan
Reagen Bahan SOP
Pengenalan
Microplate reader adalah alat yang digunakan untuk menilai
reaktivitas dari antibodi monoklonal untuk antigen rekombinan
digunakan sebagai immunogens dengan metode ELISA (An
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay).
Thermo Scientific, cat.# N600
Pengujian ELISA
adalah reaksi invitro
antara antigen dan
antibodi sehingga
terbentuk kompleks
antigen - antibodi
4. PURPOSE
- Karakterisasi antibodi monoklonal yang dimurnikan
- Membuat antibodiuntuk suatu antigen
Tujuan
Reagen Bahan SOP
Pengenalan
5. REAGENTS
1. Antigen yg sesuai dengan antibodi.
2. Antibodi monoklonal murni yang sesuai antigen
3. Goat anti-mouse - horseradish peroxidase (GAM-HRP)
antibodi berlabel
Tujuan
Reagen Bahan SOP
Pengenalan
6. Tujuan
Reagen Bahan SOP
Pengenalan
BAHAN
Carbonate Coating Buffer (pre-mixed powder)
Phosphate Buffered Saline (PBS), deionisasi dari 11.9 mM phosphate, 137mM NaCl,
2.7mM KCl, pH 7.4 dengan menambahkan air
PBS – 0.05% Tween (PBST) penambahan 500uL Tween 20 hingga menjadi 1 liter
PBS
PBS – 0.05% Tween, 0.1% BSA (PBST-BSA) penambahan 1 gram BSA hingga
menjadi 1 liter PBST (Sigma Cat. # A7030)
1-Step TMB Turbo Substrate, Pierce-Thermo catalog # 34022
0.18N Sulfuric acid; Thermo Scientific, cat.# N600.
Polypropylene Tubes
7. SOP ( Standart Operating Procedure)
1. Siapkan garis pelat seperti pada diagram di bawah ini.
8. 2. Siapkan pengenceran antigen ke dalam Buffer
Coating Carbonate untuk memberikan konsentrasi
akhir sekitar 10μg/ml (perlu 100μl/number sumur). 3. Aduk dengan Vortex
4. Tambahkan 100μl antigen dilusian
(10μg/ml saham) untuk setiap titrasi (total
10 sumur per antibodi).
5. Tambahkan 100μl Buffer
Coating Karbonat untuk
masing-masing sumur kontrol
seperti yang ditunjukkan dalam
diagram di atas (Baris AC).
6. Memanaskan piring selama 1 jam pada
suhu 37 ° C.
7. Lepaskan Solusi Coating
Carbonate dengan
menuangkannya dan menekan
pelan pada kertas
9. 8. Segera, tambahkan 225μl dari
PBST-BSA untuk semua sumur
sebagai agen memblokir untuk
mencegah non-spesifik mengikat.
9. Menetaskan selama 30 menit
pada suhu 37 ° C dengan
pengocokan ringan menggunakan
sebuah Jitterbug
10. Lepaskan PBST-BSA
dengan decanting dan
menekan lembut pada
handuk kertas.
11. Bilas dan cuci sumur 3 kali dengan 250
PBST l. Untuk melakukan hal ini,
mengeluarkan PBST ke sumur dan
kemudian dengan lembut dekantasikan /
tekan pelat pada handuk kertas. Ulangi 3x.
Atau bilas dan cuci piring menggunakan
mesin cuci piring.
11. • Tiwi : penjelasan grafik..? Dan fungsi
pengulangan dengan waktu yang berbeda
• Benina: 4 warna pada filter ...?kenapa
plate di panaskan
Muji: fungsi perbandingan anti gen...?
Nuraini: penembakan cahaya
penempatannya berbeda..
Ita: prinsip kerja apakah sama dengan alat
yang ada di leb?
12. • Rafita: mengapa hasilnya berbeda-beda?
• Tyas: kenapa ada 3 tangga pada alat,
fungsi masing2 tangga..? Cara kerja
alatnya...?
• Kamila: penjelasan tentang pengertian
microplate reader...? Aplikasinya....?
