Dokumen tersebut memberikan penjelasan tentang elektroforesis DNA menggunakan teknik elektroforesis gel agarosa. Teknik ini digunakan untuk memisahkan sampel DNA berdasarkan ukuran dan strukturnya dengan cara memasukkan sampel DNA ke dalam gel agarosa lalu diberi tegangan listrik sehingga fragmen DNA akan bergerak terpisah berdasarkan ukurannya. Proses pembuatan gel agarosa dan cara kerja elektroforesis dijelaskan secara rinci

1. KELOMPOK 3 BIOLOGI
ROMBEL 2
SOFIAN AZALIA HUSAIN 4411411036
ITA DWI RAFITA 4411411050
Biology Non Education
Second Group
Semarang State University

2. PENGERTIAN
ELEKTROFORESIS
TUJUAN
STANDAR PRODUSER
KERJA ALAT

3. ELEKTROFORESIS
• Elektroforesis adalah suatu
proses berpindahnya partikel
sol karena pengaruh medan
listrik. Pada elektroforesis,
terjadi partikel-partikel koloid
bermuatan sehingga jika dalam
sistem koloid dimasukkan dua
elektrode yang dihubungkan
dengan sumber arus listrik,
maka partikel koloid yang
bermuatan positif bergerak ke
katode (elektrode negatif) dan
partikel koloid negatif bergerak
ke anode (elektrode positif).

4. ELEKTROFORESIS GEL AGAROSA
Elektroforesis DNA merupakan teknik untuk memisahkan
sampel DNA berdasarkan atas ukuran (berat molekul) dan
struktur fisik molekulnya. Gel yang biasa digunakan antara
lain agarosa. Elektroforesis gel agarosa dapat dilakukan untuk
memisahkan sampel DNA dengan ukuran dari beberapa ratus
hingga 20.000 pasang basa (bp/base pairs).
Teknik ini digunakan untuk analisa :
- DNA
- RNA
- Protein

5. GAMBAR ELEKTROFORESIS

6. -
f
f
f
f
f
f
Electrode -
Electrode +
Gel agarose
buffer
tutup
Pandangan Samping Electroforesisi

7. Kawat electrode (+)
Marker DNA
Sumur gel untuk
sample DNA
Kawat electrode (-)
Pandangan Atas Gel

8. Sumur
Fragmen DNA
Arah electroforesis
Membrane
selulose
Setelah Fragmen DNA menempel di membran selulose,
berikutnya diresuspensi

9. TUJUAN
Melakukan elektroforesis DNA menggunakan
teknik elektroforesis gel agarosa

10. BAHAN DAN ALAT
•Horizontal Agarosa gel electrophoresis apparatus
•Larutan buffer TAE 50x di encerkan 1 kali.
•Akuades
•Gelas Ukur 1000 ml
•Labu Erlenmeyer 50 ml
•UV transiluminator / gel
•Microwave
•Power supply
•Sisir pembentuk sumur

11. •Tabung mikrosentrifuga
•Sarung tangan
•Seperangkat mikropipet beserta tipnya (Bio-Rad
dan Axygen Scientific)
•Kertas parafilm
•seperangkat alat elektroforesis
•Loading dye
•larutan Etidium Bromid (EtBr)

12. STANDAR PROSEDUR CARA KERJA
Pembuatan Gel Agarose Dan Proses
Elektroforesis

13. Tentukan konsentrasi gel
agarose yang diinginkan, misal
konsentrasi 0,8%
Timbang agarose sesuai
dengan kebutuhan, larutkan
dalam 1X buffer TAE (dalam
bekerglass atau tabung
erlenmeyer),.
Panaskan dalam
microwave kurang
lebih 1-2 menit, sampai
mendidih dan larutan
menjadi jernih.
Larutan agarose di dinginkan sampai
kira-kira 60°C dan tambahkan 5µl
EtBr, campur sampai rata. Larutan
dituang kedalam try dan pasang sisir
pembentuk sumur.
Biarkan sampai gel
mengeras kurang lebih
30 menit. Lepaskan
sisir pelan-pelan, gel
agarose siap
digunakan.
Pembuatan Gel
Agarose

14. • Letakkan Try yang berisi gel agarose
kedalam alat elektroforesis, tuangkan 1X
buffer TAE kedalam alat sampai gel
agarose terendam.
•Ambil sampel DNA
menggunakan mikropipet kira-
kira 4 µl, letakkan/ teteskan pada
parafilm dan tambahkan loading
day 1 µl, di aduk.
•Setelah semua sampel DNA masuk dalam
sumur, alat elektroforesis di tutup, hubungkan
dengan power supply tegangan listrik yang
digunakan biasanya 80-100 volt.
•Ambil larutan DNA dengan
mikropipet dan masukkan ke
dalam sumur gel agarose.
PROSES ELEKTROFORESIS

15. Proses elektroforesis siap dijalankan, lama
elektroforesis tergantung konsentrasi agarose dan
ukuran DNA.
Setelah proses selesai ,
matikan arus listrik dan
ambil try dengan
menggunakan sarung
tangan.
Taruh di atas UV
transiluminator untuk
diamati, bisa didokumentasi
dengan fotopolaroid.

16. KARAKTERISASI DNA DAN RNA : ELEKTROFORESIS
1. Untuk mencek apakah proses isolasi DNA atau RNA berhasil
2. Mengetahui ukuran dan bentuk suatu partikel baik DNA, RNA dan protein
3. Untuk Elektroforesis digunakan untuk mengamati hasil amplifikasi dari DNA.
(mencek produk PCR)
4. Mencek hasil restriksi DNA
Hasil elektroforesis yang terlihat adalah terbentuknya band yang merupakan
fragmen DNA hasil amplifikasi dan menunjukkan potongan-potongan
jumlah pasangan basanya

17. Secara prinsip, teknik ini mirip dengan kromatografi: memisahkan campuran
bahan-bahan berdasarkan perbedaan sifatnya.
Teknik elektroforesis mempergunakan medium yang terbuat dari gel
Perpindahan partikel pada medium gel tersebut dipengaruhi oleh faktor-faktor
seperti
- ukuran partikel,
- komposisi dan konsentrasi gel,
- densitas muatan,
- kuat medan listrik dan sebagainya.
Semakin kecil partikel tesebut, maka pergerakan atau migrasinya akan semakin
cepat, karena matriks gel mengandung jaringan kompleks berupa pori-pori
sehingga partikel-partikel tersebut dapat bergerak melalui matriks tersebut

19. • Tyas : hasil akhir pembuatan gel..apakah
setiap kita akan menggunakan gel,,apakah
sekali atau tidak??hasil membaca uji
elektroforesis??
• Ratna : 80-100 kenapa??di video 130??fungsi
EtBr??
• Indah: apa kelebihana fotopolaroid seperti
apa?
• Tiwi : fungsi plester??