2. High Performance Liquid
Chromatography
- High Performance Liquid Chromatography (HPLC) merupakan
suatu teknik kromatografi dengan fasa gerak cairan dan fasa
diam cairan atau padat.
- Ciri teknik ini adalah penggunaan tekanan tinggi untuk
mengirim fase gerak ke dalam kolom. Dengan memberikan
tekanan tinggi, laju dan efisiensi pemisahan dapat ditingkatkan
dengan besar metode kromatografi cair yang digunakan untuk
menganalisa zat-zat organik yang biasanya mempunyai sifat
sukar menguap dan tidak stabil terhadap panas (thermolabil)
3. High Performance Liquid
Chromatography
Prinsip kerja HPLC
Pemisahan suatu senyawa kimia dari suatu campuran atau
senyawa lainnya berdasarkan perbedaan sifat fisiknya.
Memisahkan setiap komponen dalam sample untuk selanjutnya
diidentifikasi (kualitatif) dan dihitung berapa konsentrasi dari
masing-masing komponen tersebut (kuantitatif).
4. High Performance Liquid
Chromatography
Kelebihan metode HPLC jika dibandingkan dengan metode
lainnya:
• Mampu memisahkan molekul-molekul dari suatu campuran
• Mudah dalam pengoperasian instrumentasinya
• Kecepatan analisis dan kepekaan yang tinggi
• Dapat dihindari terjadinya dekomposisi/kerusakan bahan yang
dianalisis
• Resolusi yang baik
• Dapat digunakan bermacam-macam detektor
• Kolom dapat digunakan kembali
• Mudah melakukan "sample recovery"
5. High Performance Liquid
Chromatography
Aplikasi HPLC
1) HPLC dengan prinsip kromatografi banyak digunakan pada industri
farmasi dan pestisida.
2) Zat- zat dengan kepolaran berbeda yaitu antara sedikit polar sampai
polar dapat dipisahkandengan HPLC berdasarkan partisi cair-cair.
3) Asam-asam nukleat dapat dipisahkan dengan kolom penukar
ion yang dikombinasikan dengan kolom butiran berlapis zat berpori.
4) Morfin, heroin dan semacamnya telah dapat dipisahkan dengan rezin
Zipax-SAX.
5) Dapat memisahkan vitamin-vitamin yang larut dalam air.
6) Digunakan untuk menentukan berat molekul polimer dan
masalah-masalah biokimia.
7. High Performance Liquid
Chromatography
Aplikasi HPLC
Aplikasi dari metode ini digunakan untuk uji anti-angiogenik
menggunakan HPLC untuk mengetahui tingkat kemurnian
dari isolasi dan identifikasi eurycomanone akar pasak bumi
(Eurycoma longifolia, Jack) oleh Salamah et al, (2009)
eurycomanone
8. High Performance Liquid
Chromatography
200 g serbuk akar pasak bumi
Dimaserasi dng metanol 500 mL, 24 jam, 5 kali
disaring
dievaporasi
Ekstrak metanol
VLC
F1
F2
F3
F4
F5
10. High Performance Liquid
Chromatography
Gambar Hasil elusi HPLC:I. Isolat A, tR= 7,067 II.Pembanding
eurycomanone, tR= 7,108 fase diam silika, fase gerak kloroform : metanol = 4:6
dan kecepatan alir 0,5 mL/menit.
