2. • تستخدم مثل هذه االختبارات في التمييز بين األنواع المختلفة من
البكتيريا، حيث يختلف النشاط الكيموحيوي للبكتيريا باختالف
اإلنزيمات التي تنتجها
1. البعض منها تنتج إعدادا كبيرة من هذه اإلنزيمات
2. في حين أنواع أخري ال تنتج إال عدد قليال منها.
3. أو قد ال تنتج أي منها.
األمر الذي يؤدي إلى اختالف في الخواص الكيموحيوية.
لالختبارات الكيموحيوية أهمية كبيرة في تصنيف األحياء الدقيقة •
إلى مجموعات
وكذلك في التعرف الدقيق علي األنواع المختلفة منها . •
3. وتشمل هذه االختبارات التالية:- •
اختبار االندول : Indole Test •
بعض أنواع من البكتيريا تقوم بتحلل حامض االميني تربتوفان •
tryptophanألنها تنتج إنزيم التربتوفانيز.tryptophanase
ويمكن إجراء هذا االختبار للكشف عن مادة االندول في النمو •
البكتيري
وتكون حلقة حمراء اللون بعد إضافة إحدى الكواشف ( كاشف •
كوفاك Kovacsأو ) Ehrlichs
وعدم تغير اللون أو ظهور لون أصفر تكون النتيجة سالبة. •
4. اختبار اإلندول حلقة حمراء على
سطح البيئة الموجبة (على اليمين) وحلقة صفراء السالبة(الوسط) مراقب على اليسار
5. اختبارات احمر الميثيل وفوكس بروسكاور Methyl Red
: )and Voges Proskauer Tests ) MR-VP
هناك أنواع من البكتيريا وخصوصا في عائلة المعوية تخمر •
MR-VPوينتج عن ذلك سكر الجلوكوز في بيئة النمو
تكون أحماض عضوية( حامض الالكتيك وحمض السكسنيك
وحمض الفورميك ) .
وجود تلك األحماض يؤدي النخفاض درجة األس الهيدروجيني •
إلى 5.4
وعند إضافة محلول احمر الميثيل يتحول اللون إلى لون أحمر •
مما يدل علي إنتاج هذه األحماض .
6. • في حين هناك أنواع أخري من البكتيريا تستخدم سكر
الجلوكوز في بيئة النمو MR-VPويتكون مركب متعادل
هو أسيتيل ميثيل كربينول acetyl methyl
. carbinol
• وللكشف عن هذا المركب يتم إضافة بعض الكواشف حيث
يظهر اللون األحمر بكامل األنبوبة خالل دقائق مما يدل علي
االيجابية
• وعدم تغير اللون تكون سالبة .
7. لون األحمر في األنبوبة على جهة اليمين( التفاعل موجب)
لون أصفر في األنبوبة على جهة اليسار( التفاعل سالب)
8. اختبار تحلل اليوريا •
( إنتاج أنزيم اليوريز : ) urease •
نزع مجموعة األمين من األحماض األمينية يؤدي •
إلى إنتاج غاز األمونيا
كما يحدث ذلك نتيجة لتحلل المواد البروتينية •
لبعض أنواع من البكتيريا التي تفرز أنزيم
اليوريز .
يؤدي غاز األمونيا إلى رفع درجة األس •
الهيدروجيني من المتعادلة إلى القلوي
( 1.8) pH
وبالتالي تغير دليل أحمر الفينول إلى اللون •
األحمر ( نتيجة موجبة )
أما في الحاالت السالبة ال يحدث تغير في اللون . •
ويستخدم لهذا الغرض بيئة النمو كريستينسين •
. Christensen’s
9. اختبار الكاتاليز : Catalase Test
قد تتكون أثناء عملية األكسدة الهوائية •
مادة الماء األكسجين hydrogen
peroxide
وبما أن هذه المادة ذات تأثير سام علي •
الخاليا فان البكتيريا الهوائية تقوم بإفراز
هذا اإلنزيم والذي يعمل عل اختزال الماء
األكسجين إلى ماء مع تصاعد غاز
األكسجين الحر.
بينما البكتيريا الالهوائية ال تنتج ذلك •
اإلنزيم مما يؤدي لتسممها وعدم نموها
عندما تتعرض للهواء الجوي .
االختبار يكون موجبا عند ظهور فقاقيع •
غاز األكسجين فور إضافة الماء
األكسجين علي مستعمرة بكتيرية ومزجها
بالمحلول المذكور مستخدما ساق زجاجية
10. • كما يمكن أجراء االختبار باألنابيب .
• هذا يجب المالحظة بعدم استخدام البكتيريا التي تنمو علي
أجار الدم , ألنها تعطي نتيجة كاذبة
• كما يجب عدم االعتداد بالنتائج التي ال يتصاعد فيها الغاز
فورا .
11. اختبار االكسيديز : Oxidase Test
هو اختبار يستخدم لمعرفة البكتيريا •
القادرة في إنتاج هذا اإلنزيم والذي
يسمح باستخدام األكسجين مباشرة
كمستقبل لإليدروجين .
تعطي العينات الموجبة لون •
أرجواني غامق خالل 01 ثواني
فقط الن هذا اإلنزيم يحتوي علي
أيونات الحديد والنحاس .
أما العينات السالبة قد تعطي لونا •
أحمر ورديا بنفسجيا .
12. اختبار التخثر ( كواجيوليز ) Coagulaseللعنقوديات : •
العنقودية الذهبية الممرضة تقوم بإفراز هذا اإلنزيم في حين أن •
العنقوديات غير الممرضة ال تستطيع إفرازه
لذلك يستخدم هذا االختبار للتمييز بينهم . •
ويجري بإحدى الطريقتين : •
باستخدام الشريحة الزجاجية وذلك بوضع قطرة من بالزما األرانب أو •
اإلنسان علي الشريحة
, مستخدما عروة بالتين يتم مزج مستعمرة بكتيرية جيدا مع قطرة •
البالزما .
في الحالة الموجبة يحدث تخثر خالل بضع ثواني . •
13. اختبار الستريت على اليمين سالب(أخضر اللون)
بينما على اليسار موجب(أزرق اللون)
14. باستخدام األنابيب وذلك بوضع 5.0مل من •
بالزما مخففة 5:1في محلول ملحي
فسيولوجي معقم بأنابيب كاهن Kahn
وإضافة بضع قطرات من بيئة النمو المرق •
المغذي تنمو فيه العنقودية الذهبية
تحضن األنابيب عند 73م .
ْ •
يحدث التخثر عادة خالل 03-06 دقيقة •
ولكن يجب حفظ األنابيب لفترة 6 ساعات •
قبل اعتبارها سالبة .
15.
16. اختبار قدرة البكتيريا علي استخدام السكريات : •
تختلف البكتيريا اختالفا كبيرا في تحليل المواد السكرية المختلفة •
فبعض البكتيريا تخمر أحد المواد السكرية منتجة حمضا وغازا •
بينما أنواع أخري تنتج حمضا فقط •
في حين بعض أنواع البكتيريا ال تستطيع تحليل أو تخمير ذلك •
السكر .
وتعتبر خاصية تخمر المواد السكرية هامة في التعرف علي •
األنواع المختلفة من البكتيريا
17. • تستخدم المادة السكرية المراد اختبارها بتركيز 5.0%
تضاف لبيئة النمو ماء الببتون المحتوي علي دليل لمالحظة
تغير درجة األس الهيدروجيني عند تخمر المادة السكرية
• وتوضع أنبوبة در هام Durham’s tubeالختبار
إمكانية إنتاج الغاز .
• ولمعرفة البكتيريا إذا ما كانت مخمرة أو مؤكسدة يتم إضافة
سكر الجلوكوز بتركيز 5.0% إلى بيئة النمو هيوج-
وليفسون . Hugh and Liefson
18. التغيرات في بيئة النمو لبن عباد الشمس
: Litmus Milk
يضاف عباد الشمس كدليل إلي هذا بيئة النمو الذي يحوي اللبن . –
اللبن مادة غنية تنمو عليها العديد من أنواع البكتيريا . –
وتختلف قدراتها علي إحداث التغيرات العديدة في بيئة النمو •
وهي :
تخمر سكر الالكتوز وإنتاج حمض يتغير لون الدليل إلى األحمر •
( بكتيريا مخمرة ) .
إنتاج قلوي ويتغير لون الدليل إلى األزرق الغامق . •
إحداث تخثر حمضي لترسب مركبات الكالسيوم وذلك بتغير لون •
الدليل إلى اللون األحمر.
19. • إنتاج تخثر مع غاز ويكون بوجود تخثر يتخلله فقاعات
غازية وتغير اللون الي األحمر .
• هضم كازين اللبن حيث يالحظ بان يصبح أعلي بيئة النمو
سائل صافي بني اللون وتخثر في قاع األنبوبة .
20. لتغيرات في بيئة النمو أجار الحديد الثالثي
السكر ( :Triple Sugar Iron Agar )TSI
وهو من بيئة النمو الهامة للتعرف علي البكتيريا التي •
بعائلة المعوية
ويحتوي علي ثالث مواد سكرية وهي الالكتوز •
والسكروز والدكستروز أو الجلوكوز .
تحضر بيئة النمو علي شكل مائل slantللجزء العلوي •
بأنابيب االختبار والجزء الغليظ من بيئة النمو بالقاع
ويسمي . butt
21. ومن أهم التغيرات التالية: •
مائل قلوي أحمر اللون والجزء الغليظ حمضي أصفر اللون •
يدل علي تخمر سكر الجلوكوز أو الدكستروز فقط .
مائل حمضي أصفر اللون وكذلك الجزء الغليظ بالبيئة •
حمضي أصفر اللون يدل علي تخمر الالكتوز أو السكروز أو
االثنين معا ويدل كذلك علي تخمر سكر الجلوكوز .
ظهور لون أسود بالبيئة يدل علي إنتاج غاز كبريتيد •
اإليدروجين وكذلك وجود الغاز يستدل عليه بوجود فقاعات
هوائية .
22. اختبار تحلل النشا : Starch hydrolysis
البكتيريا التي تستخدم النشا تفرز أنزيم األميليز amylase
• وتحول النشا إلي مالتوز وجلوكوز ودكسترين .
• لمعرفة ذلك يتم إضافة قطرات من يود غرام إلى
مستعمرات البكتيريا النامية في بيئة النمو أجار النشا
ينتج عنها ظهور هاالت صافية حول المستعمرة .
• يظهر جزء بيئة النمو الذي ليس به مستعمرات بكتيرية
وكذلك حول المستعمرات بلون ازرق لعدم قدرتها علي
إفراز ذلك اإلنزيم .
23. اختبار إنتاج كبريتيد اإليدروجين :
بعض أنواع البكتيريا تستخدم أحماض أمينية تحتوي علي •
كبريت مثل السستئين cystineوالسستين
Cysteinويتصاعد غاز كبريتيد اإليدروجين ذو الرائحة
الكريهة
والذي يمكن الكشف عنه بوجود الرصاص والحديد حيث •
يتفاعل معها مكونا كبريتيد الحديد أو الرصاص ذو اللون
األسود .
يستخدم لهذا الغرض بيئة النمو آجار كليغلر kliglers •
agarالذي يحتوي علي كبريتات الحديدوز .
24. اختبار إسالة وتحلل الجيالتين Liquefaction
: and hydrolysis of gelatin
الجيالتين مادة بروتينية يمكن لبعض البكتيريا تحليلها
• ويعتبر من االختبارات الهامة في تمييز أنواع البكتيريا
المختلفة وتصنيفها .
• تستخدم بيئة النمو المرق المغذي المضاف إليه 21%
جيالتين والبكتيريا القدرة علي إسالة تلك بيئة النمو تقوم
بإفراز إنزيم الجيالتينيز , gelatinaseوهذه اإلسالة ال
تتصلب بالتبريد .
25. اختبار تحلل الدهن :fat Hydrolysis
عند نمو بعض أنواع البكتيريا مثل كلوستريديوم علي •
بيئة النمو أجار صفار البيض , تتكون هاالت صافية حول
المستعمرات
نتيجة إلفراز أنزيم اللستينيز lecithinaseالتي تعمل •
علي مادة اللستين الدهنية في صفار البيض.
26. اختبارات قدرة البكتيريا علي تحلل البروتينات
واألحماض األمينية
: ويستدل عليها باآلتي : •
نمو بعض أنواع من البكتيريا في بيئة النمو اللحم المطبوخ •
cooked meatيظهر اللون األسود لقطع اللحم والرائحة
الكريهة نتيجة تحلل البروتين.
بعض أجناس من البكتيريا تسبب تخثرا وانفصال السائل عنه في •
بيئة النمو لبن عباد الشمس نتيجة هضم الكازين .
إسالة الجيالتين وتخثر البالزما . •
تحلل الحمض االميني تربتوفان إلى أندول . •
تصاعد غاز كبريتيد اإليدروجين نتيجة تحلل األحماض األمينية •
المحتوية علي كبريت .
27. 61. اختبار اختزال النترات Nitrate
: reduction test
بعض أنواع من البكتيريا تستخدم األكسجين الموجود في النترات •
كمستقبل لإليدروجين
وبالتالي تختزل النترات إلى نيترايت ويحدث ذلك في وجود أنزيم •
نترتيز أو ريداكتيز . nitratase or reductase
تعطي العينات الموجبة لونا أحمر , •
أما العينات السالبة وللتأكد منها يضاف القليل من مسحوق الزنك , •
فادا تحول اللون إلى األحمر يدل علي وجود النترات )سالبة (
وإذ لم يتغير اللون فهذا يدل علي عدم وجود النترات وبالتالي تم •
اختزالها إلى أمونيا أو نيتروجين أو أمين الهيدروكسيد .
28. بعض الطرق الحديثة المستخدمة في أجراء االختبارات •
الكيموحيوية للتعرف علي أنواع البكتيريا :
– يمكن دراسة تأثير نوع معين من البكتيريا علي عدد من المواد
السكرية وكذلك أجراء بعض االختبارات الكيموحيوية للتعرف
علي ذلك النوع في آن واحد باستخدام طرق حديثة مثل
-Enterotube Roche- api20A-api20E •
. apiStrepتعتبر هذه الطرق اقتصادية وسريعة وذات
نتائج جيده وأفضل من استخدام الطرق القديمة في
تحضير بيئة النموات والمواد التي تدخل في أجراء
االختبارات الكيموحيوية .
