Downloaded 228 times
Uploaded byFransiska Puteri
Laporan Biokimia ITP UNS SMT3 ISOLASI AMILUM DARI UBI KAYU DAN HIDROLISISNYA
Dokumen ini menjelaskan praktikum isolasi amilum dari ubi kayu dan hidrolisisnya, termasuk tujuan, metodologi, dan berbagai uji kualitatif yang dilakukan untuk menganalisis pati. Ubi kayu sebagai sumber pati mengandung 34,70% amilum dan dapat diolah menjadi dekstrin melalui hidrolisis dengan enzim amilase. Berbagai uji seperti uji iod, uji fehling, dan uji molisch digunakan untuk mengidentifikasi dan menganalisis keberadaan karbohidrat dan gula pereduksi.
More Related Content
Similar to Laporan Biokimia ITP UNS SMT3 ISOLASI AMILUM DARI UBI KAYU DAN HIDROLISISNYA
![Analisis Karbohidrat [Autosaved]-converted.pdf](https://cdn.slidesharecdn.com/ss_thumbnails/analisiskarbohidratautosaved-converted-240319013248-0bdc2bf9-thumbnail.jpg?width=640&height=640&fit=bounds)
Laporan Biokimia ITP UNS SMT3 ISOLASI AMILUM DARI UBI KAYU DAN HIDROLISISNYA
- 1. ACARA II ISOLASI AMILUMDARI UBI KAYU DAN HIDROLISISNYA A. TUJUAN PRAKTIKUM Tujuan dari praktikum Isolasi amilum dari Ubi Kayu dan Hidrolisisnya adalah : 1. Melakukan isolasi pati dari ubi kayu. 2. Mengamati terjadinya hidrolisis pati. 3. Melakukan uji kualitatif terhadap hidrolisis pati dengan cara uji Molish, uji Pikrat, uji Seliwanoff, uji fehling dan reaksi peragian pada larutan suspensi ragi roti dan larutan sukrosa dengan uji Benedict dan uji Iod. B. TINJAUAN PUSTAKA Ubi kayu merupakan bahan baku tepung tapioka, yang diperoleh dengan cara mengekstrak sebagian umbi dan memisahkan patinya. Pati merupakan komponen terbesar dalam ubi kayu, terusun dari unsur karbon, hidrogen dan oksigen dengan rumus kimia (C6H10O5) (Gaffar, 1991). Singkong merupakan tanaman multiguna yang dapat digunakan untuk memenuhi kebutuhan hidup sehari-hari, makanan ternak dan sebagai bahan baku berbagai macam industri. Dalam sistematika (taksonomi) tumbuhan, tanaman singkong diklasifikasikan sebagai, Kingdom: Plantae (tumbuhtumbuhan), Divisio: Angiospermae, Kelas: Spermatophyta Dicotyledonae (tumbuhan (biji berbiji), berkeping Subdivisio: dua), Ordo: Euphorbiales, Famili: Euphorbiaceae, Genus: Manihot, Species: Manihot esculenta Crantz sin. Manihot utilisima Phohl (Marseno, 2005). Ubi kayu memiliki kandungan pati mencapai 34,70% dalam 100 gram bahan sehingga tanaman ini cocok digunakan sebagai sumber pati dalam pembuatan dekstrin. Pemanfaatan ubi kayu sebagai sumber pati (dekstrin) dapat untuk memenuhi kebutuhan dekstrin di bidang industri dan meningkatkan nilai ekonomi ubi kayu. Proses pembuatan dekstrin dari Pati ubi kayu akan lebih cepat melalui reaksi hidrolisis parsial dengan adanya bantuan
- 2. enzim amilase. Dekstrindari hasil reaksi hidrolisis parsial dapat diuji secara kualitatif dengan uji iodin yang akan menghasilkan warna merah kecoklatan, sedangkan pati dengan uji iodin menghasilkan warna biru (Zusfahair, 2012). Hidrolisat pati dapat dihasilkan dari proses hidrolisis pati dengan kimiawi maupun enzimatis. Nilai gula pereduksi (DE) Hidrolisat pati bervariasi. Hidrolisat pati dibuat dengan menggunakan enzim yang bersifat termostabil dalam kondisi yang tertentu. Hidrolisat pati yang mempunyai nilai DE yang tinggi memiliki kelarutannya yang tinggi di dalam air yang akan membentuk sediaan mikroemulsi yang jernih dan stabil (Jufri, 2006). Untuk menguji pati dapat dilakukan uji Molish dan uji iod. Uji Molish dilakukan dengan cara larutan pati ditambahkan pereaksi Molish dan dikocok merata serta ditambahkan H2SO4 pekat, sehingga akan dihasilkan dua lapisan cairan dalam tabung reaksi dimana larutan sampel akan berada di lapisan atas. Uji molish positif terhadap karbohidrat dengan adanya Cincin berwarna merah ungu pada batas kedua cairan. Sedangkan untuk uji iod dilakukan dengan cara sampel pati dimasukkan kedalam papan uji, ditambahkan satu tetes lautan iod encer dan dicampur secara merata. Uji iod positif terhadap pati dengan munculnya warna biru (Widianingsih, 2012). Pati yang berikatan dengan iodin (I2) akan menghasilkan warna biru, sifat ini dapat digunakan untuk menganalisis adanya pati. Hal ini disebabkan oleh struktur molekul pati yang berbentuk spiral, sehingga akan mengikat molekul iodin dan terbentuklah warna biru. Bila pati dipanaskan spiral merenggang, molekul-molekul iodin terlepas sehingga warna biru hilang. Dari percobaan-percobaan didapat bahwa pati akan merefleksikan warna biru bila berupa polimer glukosa yang lebih besar dari dua puluh, misalnya molekulmolekul amilosa. Bila polimernya kurang dari dua puluh seperti amilopektin, maka akan dapat dihasilkan warna merah (Winarno, 1991). Tes urine menggunakan uji benedict digunakan untuk mengetahui kandungan glukosa. Cara kerja dari uji benedict menambahkan reagen Benedict dengan Urin. Kemudian dilakukan pemanasan. Jika urine tidak
- 3. berubah warna menjadihijau, merah, orange atau merah bata dan endapan merah bata berarti Urine tidak mengandung glukosa (Gayatri, 2012) Karbohidrat merupakan senyawa organik yang hanya terdiri dari karbon, hidrogen dan oksigen atau disebut sakarida yang dibagi menjadi empat kelompok kimia: Monosakarida, disakarida, oligosakarida dan Polisakarida. Monosakarida adalah karbohidrat sederhana terdiri dari Aldehida atau keton dengan dua atau lebih kelompok hidroksil dengan rumus kimia CnH2nOn. Disakarida adalah Monosasakarida yang bergabung contohnya Sukrosa dan laktosa dengan rumus kimia C12H22O11. Untuk karbohidrat dapat dilakukan beberapa uji misalnya Uji yodium, uji Barfoed, uji Salwinoff, uji Benedict, Cobaltous test chlorida, uji hidrazina fenil dll. Dengan uji iodium karbohidrat akan berwarna biru bila sampelnya positif (Shah, 2013). Monosakarida dan beberapa disakarida mempunyai sifat dapat mereduksi karena adanya gugus aldehida atau keton bebas, sifat ini digunakan untuk keperluan identifikasi karbohidrat maupun analisis kuantitatif. Pereaksi Fehling: dengan larutan glukosa 1%, pereaksi fehling menghasilkan endapan berwarna merah bata, sedangkan untuk larutan yang lebih encer misalnya larutan glukosa 0,1%, endapan berwarna hijau kekuningan. Pereaksi Benedict: pereaksi ini berupa larutan yang lebih peka daripada pereaksi fehling dengan kandungan kuprisulfat, natriumkarbonat dan natriumsitrat. Glukosa dapat mereduksi ion Cu++ dari kuprisulfat menjadi ion Cu+ yang kemudian mengendap sebagai Cu2O. Endapan yang terbentuk dapat berwarna hijau, kuning, atau merah bata tergantung konsentrasi karbohidrat. Pembentukan Furfural: dalam larutan asam yang encer, walaupun dipanaskan, monosakarida umumnya stabil. Tetapi apabila dipanaskan dengan asam kuat yang pekat, monosakarida menghasilkan furfural atau derivatnya. Reaksi pembentukan furfural ini adalah reaksi dehidrasi atau pelepasan molekul air dari suatu senyawa. Pereaksi molisch terdiri atas larutan a naftol dalam alkohol. Apabila pereaksi ini ditambahkan pada larutan glukosa misalnya,kemudian secara hatihati ditambahkan asam sulfat pekat akan terbentuk 2 lapisan cair. Pada batas
- 4. anatara kedua lapisanitu akan terjadi warna ungu karena terjadi reaksi kondensasi antara furfural dengan a naftol. Hasil negative merupakan suatu bukti bahwa tidak ada karbohidrat (Poedjiadi,1994). Pada karbohidrat ada berbagai jenis uji kualitatif yang dapat digunakan. Uji Molisch digunakan untuk mendeteksi karbohidrat, uji Fehlings dan Benedict untuk pengujian gula pereduksi, uji Barfoed untuk pengujian monosakarida, uji Bials orcinol dan uji Aniline untuk pengujian gula pentosa, uji Seliwanoff dan uji Tollens Phloroglucinol serta uji kobalt klorida untuk pengujian gula Heksosa. Sedangkan pada protein ada uji Biuret, uji Millions, Xanthoprotic, uji protein mengandung sulphur, serta uji Precipitation (Varghese, 2012). Monosakarida segera mereduksi senyawa-senyawa pengoksidasi seperti ferisianida, hydrogen peroksida, atau ion kupri (Cu2 +). Pada reaksi seperti ini, gula gula dioksidasi pada gugus karbonil, dan senyawa pegoksidasi menjadi tereduksi. Glukosa dan gula-gula yang mampu mereduksi senyawa pengoksidasi disebut gula perduksi. Sifat ini berguna dalam analisa gula. Dengan mengukur jumlah dari senyawa pengoksidasi yang tereduksi oleh suatu larutan gula tertentu, dapat dilakukan pendugaan konsentrasi gula (Lehninger,1982) Terdapat berbagai jenis uji untuk karbohidrat seperti uji molish, fehling, benedict, barfoed, bial orcinol, aniline asetat, phloroglucinol, seliwanoff, tollen phloroglucinol untuk galaktosa, dan kobalt-klorida. Sedangkan uji pada gum adalah uji fehling dan benedict. Pada protein terdapat uji Biuret, Millions, Xanthoprotic, protein mengandung sulphur, serta Precipitation. Masih terdapat banyak uji lainnya yang dapat dilakukan untuk mengetahui berbagi kandungan bahan pangan (Sajid, 2012). Katabolisme anerobik atau peragian karbohidrat atau molekul bahan bakar lain memberi cara yang paling sederhana dan rudimenter untuk menurunkan derajat molekul guna memperoleh energi. Apabila peragian merupakan cara utama untuk penyimpanan energi dalam sel anerobik, tetapi
- 5. peragian melakukan jugasuatu fungsi esensial dalam metabolism kebanyakan organisme anerobik. Kita kenal dua macam peragian glukosa yang dekat saling berhubungan: peragian homolaktat atau glikolisis dan peragian alkoholat (Page, 1989).
- 6. C. METODOLOGI 1. Alat a.Tabung reaksi dan rak tabung reaksi b. Penjepit c. Pipet ukur d. Gelas ukur e. Lempeng atau cawan porselen f. Corong Buchner g. Stopwatch h. Timbangan i. Penangas air/waterbath/inkubator j. pH meter k. Blender l. Alat parut m. Pisau n. Kain saring 2. Bahan a. Ubi kayu b. Alkohol 95% c. HCL pekat d. H2SO4 pekat e. Na2CO3 1M f. Aquades g. Pereaksi Fehling h. Pereaksi Benedict i. Pereaksi Seliwanoff j. Pereaksi Molisch k. Pereaksi Pikrat l. Larutan ragi roti 20% dan ragi roti 5% m. Larutan Iodine 0,01 M
- 7. n. Larutan NaOH8N o. Larutan glukosa 1% p. Larutan fruktosa 1% q. Larutan Sukrosa 10% r. Larutan Suspensi Ragi Roti 5% s. Larutan pati 1% t. Hidrolisat pati 3. Cara Kerja a. Isolasi Pati Umbi/Biji-bijian Ubi kayu 100 gram dikupas dan ditimbang Dicuci, diparut, dan dimasukkan dalam blender 200 ml aquades dimasukkan kemudian diblender selama 30 detik, proses tersebut dilakukan beberapa kali Residu disaring dengan kain saring dan larutan yang keruh ditampung dalam gelas ukur 500 ml 200 ml aquades ditambahkan, dikocok kemudian partikel yang tidak larut dibiarkan mengendap dan larutan jernih didekantasi Pada larutan yang keruh dan endapannya ditambahkan 100 ml alkohol 95% Disaring dengan kertas saring pati yang diperoleh dikeringkan dengan cara diratakan pada kertas saring pada suhu kamar Ditimbang hasil pati yang didapatkan
- 8. b. Hidrolisis Pati 25ml larutan pati (dibuat dari amilum tahap pertama) disediakan dalam gelas beker Ditambahkan 10 tetes HCl pekat dan didihkan Setelah 2 atau 5 menit, larutan diambil dan dilakukan uji Iod Larutan tersebut diambil 1 tetes, diteteskan pada lempeng porselin/test plate Ditambahkan 1 tetes larutan 0,01N Dilakukan juga pada menit ke 10 dan 15 Diambil 1 ml larutan pati dari tabung reaksi pada menit ke 5 Dilakukan juga pada menit ke 10 dan 15 Ditambahkan 5 ml pereaksi Fehling pada masing-masing tabung reaksi Diamati derajat reduksi yang terjadi dan dibandingkan dengan uji iod c. Uji Molisch Ditambahkan 2 tetes pereaksi Molisch kedalam tabung-tabung reaksi yang berisi 2 ml larutan glukosa 1%, fruktosa 1%, hidrolisat pati dan larutan pati 1% Ditambahkan asam sulfat pekat 5 ml secara perlahan melalui dinding tabung reaksi Diamati perubahan yang terjadi
- 9. d. Uji Pikrat Dicampurkan2 ml larutan glukosa 1%, fruktosa 1%, hidrolisat pati dan larutan pati 1% masing-masing dengan 1 ml asam pikrat jenuh dan 0,5 ml Na2CO3 1M Seluruh tabung reaksi dipanaskan bersamaan didalam penangas air yang mendidih sampai terjadi perubahan warna Diamati perubahan warna yang terjadi e. Uji Seliwanoff Seliwanoff sebanyak 3 ml dimasukkan dalam tabung reaksi 3 tetes dari masing-masing larutan glukosa 1%, fruktosa 1%, hidrolisat pati dan larutan pati 1% ditambahkan dalam tabung reaksi Seluruh tabung reaksi dipanaskan dalam penangas air yang mendidih bersamaan sampi terjadi perubahan warna Diamati perubahan warna yang terjadi f. Uji Benedict pada Reaksi Peragian 2 ml reagen Benedict dan 1 ml larutan suspensi ragi roti 5% dan larutan sukrosa 10% dimasukkan kedalam tabung reaksi Tabung reaksi dimasukkan dalam penangas air selama 5 menit Reaksi positif jika terjadi warna hijau, merah, orange atau merah bata dan endapan merah bata tergantung dari banyaknya Cu2O yang terbentuk.
- 10. D. HASIL DANPEMBAHASAN Tabel 2.1 Hidrolisis Pati kelompok Bahan Uji Waktu (min) 9,10,11 5 10 15 12,13,14 5 10 15 Iod 5 10 15 15,16 17,18 25 ml larutan pati 1% 9,10,11 12,13,14 Fehling 15,16 17,18 5 10 15 5 10 15 5 10 15 5 10 15 5 10 15 Perubahan Warna Awal Akhir Biru tua Bening Orange Bening Putih Bening Kekuningan Bening Biru kehitaman Bening Coklat Bening Kuning Biru Tua Bening Ungu Bening Merah Bening Kecoklatan Bening Ungu Tua Bening Ungu Muda Bening Coklat Bening Biru Muda Bening Biru Muda Bening Biru Muda Bening Biru Muda Bening Biru Muda Bening Biru Muda Bening Biru Muda Bening Biru Muda Bening Biru Muda Bening Biru Muda Bening Biru Muda Bening Biru Muda Ket Tidak ada endapan Tidak ada endapan Tidak ada endapan Tidak ada endapan Tidak ada endapan Tidak ada endapan Tidak ada endapan Tidak ada endapan Sumber: Laporan sementara Karbohidrat merupakan senyawa organik yang hanya terdiri dari karbon, hidrogen dan oksigen atau disebut sakarida. Karbohidart dapat menghasilkan energi 4 kkal per gram. Karbohidrat (sakarida) dibagi menjadi empat kelompok kimia: Monosakarida, disakarida, oligosakarida dan Polisakarida. Monosakarida adalah karbohidrat sederhana terdiri dari Aldehida atau keton dengan dua atau lebih kelompok hidroksil dengan rumus kimia CnH2nOn contohnya glukosa. Disakarida adalah Monosakarida yang saling berikatan glikosidik contohnya Sukrosa dan laktosa dengan rumus kimia C12H22O11 (Shah, 2013).
- 11. Hidrolisat pati dapatdihasilkan dari proses hidrolisis pati dengan kimiawi maupun enzimatis. Nilai gula pereduksi (DE) Hidrolisat pati bervariasi. Hidrolisat pati dibuat dengan menggunakan enzim yang bersifat termostabil dalam kondisi yang tertentu. Hidrolisat pati yang mempunyai nilai DE yang tinggi memiliki kelarutannya yang tinggi di dalam air yang akan membentuk sediaan mikroemulsi yang jernih dan stabil (Jufri, 2006). Pati yang didapat dari hasil hidrolisis ubi kayu, diuji dengan uji iod dan fehling. Dalam percobaan ini digunakan sampel yaitu larutan pati 1%. Kemudian pati ini dihidrolisis dengan dua macam uji yaitu uji iod dan uji fehling. Menurut Widianingsih (2012), Uji iod dilakukan dengan cara sampel pati dimasukkan kedalam papan uji, ditambahkan satu tetes lautan iod encer. Kemudian dicampur secara merata. Uji iod positif terhadap pati dengan munculnya warna biru setelah penambahan iod pada sampel. Pati yang berikatan dengan iodin akan menghasilkan warna biru dan sifat ini dapat digunakan untuk menganalisis adanya pati. Hal ini disebabkan oleh struktur molekul pati yang berbentuk spiral sehingga akan mengikat molekul iodin dan terbentuklah warna biru (Winarno, 2004). Menurut Edahwati, 2010, reaksi hidrolisa karbohidrat dapat dilakukan dengan katalisator asam encer (HCl). Fungsi penambahan HCl pekat disini adalah untuk menghidrolisis ikatan glikosidik karbohidrat sehingga menjadi monosakarida yang selanjutnya berdehidrasi membentuk furfural dan derivatnya. Karbohidrat dipanaskan dengan larutan asam pada suhu 80°C, maka pati akan terurai menjadi molekul-molekul yang lebih kecil secara berurutan dan hasil akhirnya adalah glukosa. Pada percobaan pertama, melarutkan pati ubi kayu dalam akuades sehingga terbentuk larutan pati 1%, lalu menambahkan dengan HCl pekat. Penambahan asam klorida pekat ini bertujuan untk menghidrolisis pati karena pati dapat dihidrolisis sempurna dengan menggunakan asam sehingga menghasilkan glukosa. Setelah itu larutan dipanaskan, pemanasan bertujuan untuk mempercepat hidrolisis dimana dengan meningkatnya suhu maka energi
- 12. kinetik partikel akansemakin besar sehingga gerak partikel akan semakin cepat maka kemungkinan terjadinya tumbukan efektif akan semakin mengingkat, dan reaksi hidrolisis akan berjalan lebih sempurna. Juga semakin lama pemanasa, maka semakin banyak pati yang terhidrolisis menjadi monosakarida, yakni glukosa. Pada hasil praktikum uji iod, terjadi perubahan warna larutan pati 1% dari bening menjadi semakin kuning kecoklatan seiring dengan lamanya pemanasan. Menurut Winarno (2004) Bila dekstrin dengan polimer 6,7, dan 8 membentuk warna coklat. Sehingga hasil dari percobaan, larutan pati 1% menunjukkan adanya pati yang polimernya 6 sampai 8. Uji Fehlings untuk pengujian gula pereduksi (Varghese, 2012). Tujuan dari uji Fehling adalah mengetahui adanya gula reduksi. Hasil yang didapat dari uji Fehling adalah larutan pati yang sebelumnya berwarna bening menjadi biru. Menurut Poedjiati dan Supriyanti (2005), hasil yang didapat dari uji fehling adalah adanya endapan berwarna merah bata yang merupakan ion Cu ++ yang direduksi menjadi ion Cu+ yang dalam suasana basa akan diendapkan sebagai Cu2O. 2 Cu+ + 2 OH - Cu2O + H2O Endapan Dari percobaan yang telah dilakukan, semua sampel yang diuji berubah warna dari bening menjadi biru muda, dan hal ini telah sesuai dengan teori yang ada, dan membuktikan bahwa semua sampel memiliki gula reduksi.
- 13. Tabel 2.2 UjiMolish Kelompok Sampel 9,10,11 Glukosa 1% 12,13,14 Fruktosa 1% 15,16 Larutan pati 1% 17,18 Hidrolisa pati Perubahan Warna Awal Akhir Ungu kehitaman Bening merah bata coklat bening Ungu kehitaman Bening bening Coklat kemerahan Bening coklat bening Bening Bening merah bata ungu kehitaman Keterangan Tidak ada endapan Tidak ada endapan Ada endapan Tidak ada endapan Sumber: Laporan sementara Uji Molish dilakukan dengan cara larutan pati ditambahkan pereaksi Molish dan dikocok merata serta ditambahkan H2SO4 pekat, sehingga akan dihasilkan dua lapisan cairan dalam tabung reaksi dimana larutan sampel akan berada di lapisan atas. Uji molish positif terhadap karbohidrat dengan adanya Cincin berwarna merah ungu pada batas kedua cairan (Widianingsih,2012). Uji Molisch digunakan untuk mendeteksi karbohidrat (Varghese,2012). Dasar uji ini adalah heksosa atau pentosa mengalami dehidrasi oleh pengaruh asam sulfat pekat menjadi hidroksimetilfurfural atau furfural dan kondensasi aldehida yang terbentuk ini dengan alpha-naftol membentuk senyawa yang berwarna khusus untuk polisakarida dan disakarida. Reaksi ini terdiri atas tiga tahapan, yaitu hidrolisis polisakarida dan disakarida menjadi heksosa atau pentose, dan diikuti oleh proses dehidrasi dan proses kondensasi (Sumardjo, 2006). Pada percobaan uji kualitatif menggunakan uji molisch ini, masingmasing sampel menunjukkan perubahan warna yang berbeda. Pada sampel glukosa menunjukkan adanya perubahan warna yang semula putih bening menjadi terbentuk cincin ungu pada larutan dan adanya cincin berwarna merah bata. Pada sampel kedua yakni fruktosa menujukkan adanya perubahan warna yang semula putih bening berubah menjadi adanya cincin
- 14. ungu pada larutan,dengan pembentukan cincin ungu paling banyak diantara sampel yang lain. Pada sampel ketiga, yaitu larutan pati 1% menunjukkan adanya perubahan warna yang semula putih menjadi terbentuk cincin berwarna coklat kemerahan dan sedikit keunguan didalamnya, namun cincin ungu nya paling sedikit dibandingkan dengan sampel yang lain. Sedangkan pada sampel yang keempat, yaitu hidrolisat pati menunjukkan adanya perubahan warna yan semula putih keruh menjadi terbentuk cincin ungu di dalamnya, cincin yang terbentuk banyak, namun tidak sebanyak sampel fruktosa. Hal ini disebabkan karena fruktosa yang mempunyai rantai pentose mengalami dehidrasi yang jauh lebih besar dibandingkan dengan sampel glukosa, larutan pati 1% dan hidrolisat pati, sehingga menghasilkan cincin ungu yang banyak. Tabel 2.3 Uji Pikrat Perubahan warna Awal Akhir Kelompok Sampel 9,10,11 Glukosa 1% Merah oranye Coklat muda 12,13,14 Fruktosa 1% Merah oranye Coklat muda 15,16 Larutan pati 1% Merah oranye Merah oranye 17,18 Hidrolisa pati Merah oranye Merah oranye Keterangan Tidak ada endapan Tidak ada endapan Tidak ada endapan Tidak ada endapan Sumber: Laporan sementara Karbohidrat pereduksi dapat ditunjukkan dengan beberapa cara, antara lain uji Fehling, uji Benedict, uji Asam pikrat, uji Tollens, dan uji Barfoed (Sumardjo, 2006). Dalam percobaan yang ke tiga ini dilakukan uji Asam pikrat terhadap empat sampel yang berbeda yaitu glukosa 1%, fruktosa 1% larutan pati 1%, dan hidrolisat pati guna mengetahui adanya kandungan karbohidrat pereduksi di dalamnya. Trinitrofenol atau asam pikrat jenuh dalam suasana basa dapat digunakan untuk menunjukkan adanya karbohidrat pereduksi. Pada sampel yang pertama yaitu glukosa yang ditambahakan dengan
- 15. larutan asam pikratmenunjukkan adanya perubahan warna dari merah orange menjadi coklat muda. Sedangkan pada sampel kedua fruktosa, terjadi perubahan warna dari putih menjadi orange tua kemerahan. Hal ini menunjukkan reaksi yang terjadi dalam uji Asam pikrat yaitu oksidasi karbohidrat pereduksi menjadi asam onat dan reduksi asam pikrat berwarna kuning menjadi asam pikramat yang berwarna merah (Sumardjo, 2006). Pada sampel yang ketiga yaitu larutan pati 1% tidak mengalami perubahan warna, yaitu tetap berwarna merah kekuningan, hal ini menunjukkan bahawa larutan pati 1% tidak menunjukkan adanya karbohidrat pereduksi di dalamnya, sehingga tidak mengalami perubahan warna. Pada sampel keempat yaitu hidrolisat pati yang ditambahkan dengan larutan asam pikrat tidak menunjukkan adanya perubahan warna yakni tetap kuning kemerahan, hal ini tidak sesuai dengan teori yang ada yang seharusnya pada hidrolisat pati terjadi perubahan warna hal ini dapat terjadi karena pipet yang digunakan sebelumnya tidak dicuci, dan pada pengambilan sampel menggunakan pipet yang sama. Dari hasil prktikum yang di dapat, maka sampel yang mengandung karbohidrat pereduksi yaitu ditunjukkan pada sampel glukosa dan fruktosa yang ditandai dengan perubahan warna menjadi orange tua kemerahan. Hal ini sesuai dengan teori, yang dikatakan oleh Sumardjo (2006) bahwa adanya karbohidrat pereduksi yang terkandung dalam sampel ditandai dengan adanya perubahan warna menjadi orange tua (merah). Tabel 2.4 Uji Seliwanoff Kelompok Sampel 9,10,11 Glukosa 1% 12,13,14 Fruktosa 1% 15,16 17,18 Larutan pati 1% Hidrolisa pati Perubahan warna Awal Akhir Jingga Kuning Kecoklatan Merah gelap Kuning pekat Coklat teh Kuning (bening) Kuning Oranye bening kecoklatan Keterangan Sedikit endapan Sedikit endapan Tidak ada endapan Sedikit endapan
- 16. keruh Sumber: Laporan Sementara UjiSeliwanoff digunakan untuk pengujian gula Heksosa (Varghese, 2012). Prinsipnya berdasarkan konversi fruktosa menjadi asam levulinat dan hidroksimetil furfural oleh asam hidroklorida panas dan terjadi kondensasi hidroksimetilfurfural dengan resorsinol yang menghasilkan senyawa berwarna merah, reaksi ini spesifik untuk ketosa. Sukrosa yang mudah dihidrolisis menjadi glukosa dan fruktosa akan memberikan reaksi positif dengan uji seliwanoff yang akan memberikan warna jingga pada larutan. Perubahan warna merah jingga dan endapan, menunjukkan reaksi positif ketosa. Bila endapan dilarutkan dalam alkohol menjadi merah. Berdasarkan tabel 2.4 dapat diketahui bahwa larutan glukosa 1%, fruktosa 1%, larutan pati 1% dan hidrolisat pati mengalami perubahan warna. Larutan glukosa 1% mengalami perubahan warna dari kuning bening menjadi jingga kecoklatan. Pada larutan fruktosa 1% mengalami perubahan warna dari kuning bening menjadi merah gelap pekat. Menurut Chawla (2003), perubahan warna menjadi merah cherry menunjukkan adanya fruktosa. Dapat diketahui bahwa sampel memberikan hasil yang positif pada uji Seliwanoff dengan adanya perubahan warna menjadi kemerahan menunjukkan adanya gugus ketoheksosa yaitu fruktosa. Larutan pati 1% mengalami perubahan warna dari kuing menjadi coklat bening. Perubahan warna pada larutan pati 1% tidak memberikan hasil yang positif untuk uji Seliwanoff karena warna yang terbentuk tidak menjadi merah. Ini menunjukkan bahwa larutan pati tidak mengandung fruktosa. Sedangkan hidrolisat pati mengalami perubahan warna dari kuning menjadi orange kecoklatan. Adanya perubahan warna ini menunjukkan bahwa hidrolisat pati mengandung fruktosa dalam jumlah yang relatif kecil. Menurut Jufri (2006), hidrolisat pati mengandung DE (gula pereduksi) seperti fruktosa hanya 38,19% dengan rendemen 88,36%. Sehingga hidrolisat pati tidak menunjukkan perubahan warna yang signifikan. Walaupun warna yang terbentuk orange pudar, tetapi sampel hidrolisat pati memberikan hasil positif untuk uji Seliwanoff. Dengan demikian dapat diketahui bahwa kandungan
- 17. fruktosa dalam larutanfruktosa 1% > hidrolisat pati. Tabel 2.5 Hasil uji Benedict pada Peragian Kelompok Perubahan Warna Awal Akhir 9,10,11 Biru Biru muda terang Biru keruh 12,13,14 Biru Biru muda terang Biru keruh 15,16 Biru Biru muda terang Biru keruh 17,18 Biru Biru muda terang Biru keruh Sumber : Laporan Sementara Keterangan Ada endapan putih Ada endapan putih Ada endapan putih Ada endapan putih Pembahasan Percobaan ini dilakukan untuk mengetahui adanya reaksi peragian pada sampel hidrolisat pati dan larutan pati 1%. Peragian atau fermentasi adalah proses dimana mikroorganisme memecah monosakarida dan asam amino untuk memperoleh energi untuk metabolisme mereka sendiri. Menurut Potter (1998), gula (glukosa) difermentasi oleh ragi, seperti Saccharomyces cerevisiae dan Saccharomyces ellipsoideus sehingga produk hasil reaksinya adalah etil alkohol dan karbon dioksida, sesuai dengan keseluruhan reaksi berikut: C6H12O6 2C2H5OH + 2CO2(g). yeast Pada umumnya kapang memanfaatkan glukosa dan pati sebagai sumber karbon dalam pembentukan etanol dan biomassa (Naiola, 2008). Menurut Weiner (2010), uji Benedict digunakan untuk menentukan apakah larutan mengandung gula bebas gugus aldehida atau keton. Gila ini disebut gula pereduksi yang dapat bereaksi dengan zat pengoksidasi ringan seperti Cu2+ dalam larutah Fehling, untuk mengasilkan Cu2O padat (endapan) berwarna merah- orange. Reaksinya sebagai berikut: Cu2+ + Gula pereduksi Cu2O(s) + gula teroksidasi Berdasarkan tabel 2.5 dapat diketahui bahwa hidrolisat pati tidak mengalami perubahan warna selama reaksi peragian, warna larutan putih
- 18. keruh. Namun yangterjadi adalah timbulnya gelembung gas CO2 yang ditunjukkan dengan adanya gelembung putih. Ini menunjukkan bahwa hidrolisat pati mengandung glukosa, sehingga dapat difermentasi oleh fermipan (yeast) yang menghasilkan produk alkohol dan gas CO 2. Menurut Jufri (2006), hidrolisat pati mempunyai DE (gula pereduksi seperti glukosa) rata-rata 38,19%. Selama reaksi peragian larutan pati 1% juga tidak mengalami perubahan warna, warna larutannya adalah putih keruh. Selain itu, larutan pati 1% juga mengalami reaksi peragian yang ditandai dengan terbentuknya gelembung gas CO2. Akan tetapi gelembung gas yang terbentuk lebih sedikit daripada gelembung gas yang dihasilkan oleh hidrolisat pati. Terbentuknya gelembung gas CO2 pada larutan pati 1% terjadi pada menit ke-37. Adanya gelembung gas CO2 yang terbentuk dapat menunjukkan bahwa larutan pati 1% mengandung glukosa yang digunakan untuk fermentasi. Dari percobaan dari semua kelompok didapatkan hasil yang sama, warna awal saat 2 ml reagen Benedict dan 1 ml larutan suspensi ragi roti 5% dan larutan sukrosa 10% dimasukkan dalam tabung reaksi adalah biru terang. Setelah Tabung reaksi tersebut dimasukkan dalam penangas air yang mendidih selama 5 menit terjadi perubahan warna menjadi lapisan Biru muda dan biru keruh dan terdapat endapan putih. Reaksi Benedict digunakan untuk mengetahui kandungan glukosa (monosakarida) positif jika terjadi warna hijau, merah, orange atau merah bata dan endapan merah bata tergantung dari banyaknya Cu2O yang terbentuk (Gayatri, 2012). Hal tersebut berarti suspensi ragi roti 5% negatif uji benedict karena warna sampel biru. Menurut Chawla (2003), sukrosa akan menghasilkan hasil negatif untuk tes Benedict. Ini disebabkan sukrosa bukan gula pereduksi, sehingga tidak dapat bereaksi dengan zat pengoksidasi ringan, (Cu2+) dalam reagen Benedict. Dengan demikian pada larutan sukrosa 10% tidak dihasilkan Cu2O padat (endapan) berwarna merah- orange. Untuk uji kualitatif karbohidrat lainnnya ada uji Barfoed untuk pengujian monosakarida, uji hidrazina fenil (Shah, 2013). Uji Bials orcinol dan uji Aniline untuk pengujian gula pentosa, uji Tollens Phloroglucinol serta
- 19. uji kobalt kloridauntuk pengujian gula Heksosa (Varghese, 2012). Aniline asetat, phloroglucinol, dan uji tollen phloroglucinol untuk mengetahui galaktosa (Sajid, 2012). Uji Bial bertujuan membuktikan adanya pentosa. Dasar teori dari uji bial adalah dehidrasi pentosa oleh HCl pekat menghasilkan furfural dan dengan penambahan orsinol (3,5-dihidroksi toluena) akan berkondensasi membentuk senyawa kompleks berwarna biru. Uji Osazon bertujuan membedakan bermacam-macam karbohidrat dari gambar kristalnya. Dasar teorinya adalah semua karbohidrat yang mempunyai gugus aldehida atau keton bebas akan membentuk hidrazon atau osazon bila dipanaskan bersama fenilhidrazin berlebih. Osazon yang terjadi mempunyai bentuk kristal dan titik lebur yang spesifik. Osazon dari disakarida larut dalam air mendidih dan terbentuk kembali bila didinginkan. Namun, sukrosa tidak membentuk osazon karena gugus aldehida atau keton yang terikat pada monomernya sudah tidak bebas. Sebaliknya, osazon dari monosakarida tidak larut dalam air mendidih. Uji asam musat bertujuan membedakan antara glukosa dan galaktosa. Dasar teorinya adalah oksidasi terhadap karbohidrat dengan asam nitrat pekat akan menghasilkan asam yang dapat larut. Namun, laktosa dan galaktosa menghasilkan asam musat yang tidak dapat larut. Gula reduksi adalah merupakan golongan gula (karbohidrat) yang mempunyai kemampuan untuk mereduksi senyawa-senyawa penerima electron, Hal ini dikarenakan adanya gugus aldehid atau keton bebas dalam molekul karbohidrat Sifat ini tampak pada reaksi reduksi ion-ion logam misalnya ion Cu++ dan ion Ag+ yang terdapat pada pereaksi- pereaksi tertentu. Gula reduksi merupakan senyawa penting dari karbohidrat yang mempunyai peran utama dalam penyediaan kalori bagi makhluk hidup dan merupakan senyawa utama yang dapat dijumpai pada tumbuh-tumbuhan. Kadar gula reduksi yang tinggi dalam suatu bahan pangan ditandai dengan rasanya yang manis (Rohmahningsih, 2008). Jadi semakin tinggi kadar gula reduksi dalam bahan pangan, maka tingkat kemanisan dalam bahan pangan
- 20. juga akan tinggi. E.KESIMPULAN Berdasarkan praktikum Acara II Isolasi Amilum dari Ubi Kayu dan Hidrolisisnya dapat disimpulkan bahwa: 1. Hidrolisis dengan uji Fehling ditandai dengan berubahnya sampel menjadi warna biru yang menunjukkan adanya karbohidrat pereduksi dalam sampel. Sehingga sampel 25 ml larutan pati 1% positif mengandung adanya karbohidrat pereduksi. 2. Hidrolisis dengan uji Iod ditandai dengan berubahnya sampel menjadi warna biru, atau merah, atau coklat yang menunjukkan adanya karbohidrat pereduksi dalam sampel. Pada sampel sampel 25 ml larutan pati 1% menunjukkan perubahan warna menjadi coklat sehingga sampel positif mengandung adanya karbohidrat pereduksi. 3. Uji Molisch dilakukan untuk mengetahui suatu sampel mengandung karbohidrat secara umum, hal ini ditandai dengan perubahan warna sampel menjadi terbentuk cincin ungu di dalamnya, yaitu sampel glukosa, fruktosa, larutan pati 1%, dan hidrolisa pati. 4. Uji Asam pikrat dilakukan untuk mengetahui adanya karbohidrat pereduksi dalam sampel yang ditandai dengan perubahan warna dari kuning menjadi orange tua kemerahan, yaitu sampel larutan pati 1% dan hidrolisa pati. 5. Faktor-faktor yang mempengaruhi hidrolisat Pati adalah suhu reaksi, waktu reaksi, pencampuran pereaksi, konsentrasi asam dan kadar suspensi pati. 6. Uji Seliwanoff digunakan untuk membedakan antara aldoheksosa dan ketoheksosa yang ditandai dengan terbentuknya warna merah untuk gugus ketoheksosa, seperti fruktosa, yang positif pada sampel fruktosa 1% dan hidrolisat pati. 7. Reaksi peragian adalah proses dimana mikroorganisme (yeast) memecah monosakarida (glukosa) menjadi alkohol dan gas CO2. 8. Uji Benedict digunakan untuk menentukan apakah larutan mengandung gula pereduksi gugus aldehida atau keton. 9. Hidrolisat pati dan larutan pati 1% menghasilkan gelembung gas CO2,
- 21. sehingga dapat dijadikanindikasi adanya glukosa dalam larutan sampel, dan mengandung gula pereduksi berupa glukosa yang ditunjukkan dengan terbentuknya warna cokelat muda dan endapan cokelat cerah, sehingga memberikan hasil positif untuk uji Benedict.
- 22. DAFTAR PUSTAKA Chawla, Ranjana.2003. Practical Clinical Biochemistry: Methods and Interpretations. Jaype Brothers Publishers. New Delhi. Gayathri, B., dkk. 2012. A Case of Alkaptonuria. International Journal of Biochemistry And Biotechnology. ISSN: 2169-3048. Vol. 1. No. 7. Lehninger, Albert. 1982. Dasar-dasar Biokimia Jilid 1. Erlangga. Jakarta. Jufri, Mahdi., Effionora Anwar, dan Putri Margaining Utami . 2006. Uji Stabilitas Sediaan Mikroemulsi Menggunakan Hidrolisat Pati (De 35–40) Sebagai Stabilizer. Majalah Ilmu Kefarmasian. Vol. 3. No.1. April 2006, 08 – 21. Page, David S. 1989. Prinsip-Prinsip Biokimia. Erlangga. Jakarta. Poedjiadi, Anna. 1994. Dasar-Dasar Biokimia. UI-Press. Salemba. Sajid, Shaikh., et al. 2012. Anti-inflammatory Activity of Sesbania sesban (L) Merr. Internasional Research Journal of Pharmacy. Vol. 3. No. 1. Shah, Jinehi T dan Ajit V Pandya. 2013. Estimation Of The Quantity Of Carbohydrate Content In Potato (Solanum Tuberosum). International Journal of Green and Herbal Chemistry. Vol. 2. No. 2. Hal: 285-288. Varghese,. K. Jiny, et al. 2010. Phytochemical Investigation of Seaweed Ulva Reticulata From The Coast of Bakel, Kasaragod of Kerala State In India. International Journal Of Pharma World Research. Vol. 2. Widyaningsih, Senny., Dwi Kartika, dan Yuni Tri Nurhayati. 2012. Pengaruh Penambahan Sorbitol Dan Kalsium Karbonat Terhadap Karakteristik dan Sifat Biodegradasi Film dari Pati Kulit Pisang. Molekul. Vol. 7. No. 1. Hal: 69 – 81. Winarno F. G. 1991. Kimia Pangan dan Gizi. PT Gramedia. Jakarta. Winarno F. G. 2004. Kimia Pangan dan Gizi. PT Gramedia. Jakarta. Zusfahair dan Dian Riana Ningsih. 2012. Pembuatan Dekstrin Dari Pati Ubi Kayu Menggunakan Katalis Amilase Hasil Fraksinasi Dari Azospirillum Sp. Molekul. Vol. 7. No. 1. Hal: 9 – 19.