1. Elektroforesis` `
Salah satu cara umum untuk memisahkan molekul makro biologis
- sebagai ion dalam larutan, memiliki molekul ionik
- bergerak dalam medan listrik.
- mobilitas elektroforesis
- Mol yg bermuatan negatif bergerak ke Katoda (-)
- Mol yg bermuatan positif bergerak ke Anoda (+)
2. • Jenis elektroforesis.
• SDS-PAGE. Salah satu cara yang paling umum menganalisis protein dengan
elektroforesis adalah dengan menggunakan Sodium Dodecyl Sulfat - Polyacrylamide
Gel Electrophoresis.
• SDS adalah deterjen yang denatures protein dengan mengikat daerah hidrofobik dan
pada dasarnya lapisan urutan protein linier dengan satu set molekul SDS. SDS
bermuatan negatif dan dengan demikian menjadi muatan yang dominan kompleks.
Jumlah SDS molekul yang mengikat hanya sebanding dengan ukuran protein.
Namun, protein tidak dijalankan melalui air. Sebaliknya mereka dijalankan melalui
polimer inert, poliakrilamida.
• Kepadatan dan pori ukuran polimer ini dapat divariasikan dengan hanya bagaimana
Anda membuatnya (konsentrasi monomer dan cross-linking agent). Dengan
demikian, ukuran molekul yang dapat melewati matriks dapat bervariasi. Hal ini
menentukan berat molekul apa yang berkisar gel akan memiliki kekuatan menyatu
tertinggi.
3. Jenis (Samb)
• Gel. Hal ini juga memungkinkan untuk menjalankan gel protein tanpa
SDS. Ini disebut gel asli di yang satu tidak sengaja denaturasi protein. Di
sini, course asli pada protein (dibagi dengan massa) menentukan
seberapa cepat protein akan melakukan perjalanan dan ke arah.
Electrofocusing Gel. Variasi lain dari gel elektroforesis adalah untuk
menuangkan gel yang sengaja memiliki gradien pH dari satu ujung ke
ujung. Sebagai protein perjalanan melalui pH gradien ini, berbagai
kelompok terionisasi dengan baik mengambil atau kehilangan proton.
Akhirnya, ia akan menemukan pH di mana course adalah nol dan akan
terjebak (fokus) pada saat itu.
4. Jenis (Samb)
• DNA Agarose Gel. Sebuah cara sederhana untuk memisahkan fragmen yang
cukup besar dari DNA satu sama lain dengan ukuran adalah dengan
menggunakan gel agarosa.
• DNA tidak perlu deterjen, karena sudah memiliki mol besar di bawah
kelompok fosfat negatif. Dengan demikian, seperti dengan SDS-PAGE, rasio
massa adalah konstan. Juga seperti SDS-PAGE, pemisahan hasil dari matriks
itu sendiri. Kisaran sensitivitas ukuran dapat bervariasi dengan mengubah
kepadatan agarosa tersebut.
5. • DNA denaturasi polyacrylamide gel (sering disebut sequencing gel).
Untuk melihat molekul DNA yang lebih kecil dengan resolusi lebih
tinggi, umumnya denaturasi DNA melalui panas dan menjalankannya
melalui poliakrilamida gel tipis yang juga disimpan dekat suhu
denaturasi. Gel ini biasanya mengandung senyawa denaturasi
tambahan seperti Urea.
6. Elektroforesis kapiler
• Elektroforesis kapiler. Hal ini telah menjadi populer untuk
memisahkan molekul elektroforesis dengan menjalankan sampel
melalui pipa kapiler. Ini cepat dan akurat, tetapi tidak memungkinkan
banyak sampel yang akan dimuat pada gel sekaligus.
