Affinity Chromatography

1. AAffffiinniittyy
CChhrroommaattooggrraapphhyy
AAuuddrreeyy CChheeuunngg
MMiicchhaaeell KKwwoonngg
MMaarrcc--AAnnddrree LLyynncchh
Image source: Bio-Rad Laboratories

2. FFuunnccttiioonn iinn pprroocceessss
RReemmoovvaall ooff ccoonnttaammiinnaanntt pprrootteeiinnss
UUttiilliizzeess aaffffiinniittyy ooff pprrootteeiinn--AA ffoorr tthhee MMaabb ttoo ppuurriiffyy tthhee
pprroodduucctt..
HHiigghh eeffffiicciieennccyy –– 9900%%
PPrrootteeiinn--AA eeffffeeccttiivvee ffoorr mmoonnoocclloonnaall aannttiibbooddyy ppuurriiffiiccaattiioonn..

3. HHooww iitt wwoorrkkss
11.. EEqquuiilliibbrraattee –– aadddd mmiixxttuurree ttoo bbaattcchh ttoo
bbiinndd ttaarrggeett mmoolleeccuullee ((MMaabb))
22.. WWaasshh oouutt mmiixxttuurree –– rriidd ooff iimmppuurriittiieess
33.. AAdddd wwaasshh bbuuffffeerr
44.. RReemmoovvee wwaasshh bbuuffffeerr
55.. AAdddd eelluuttiioonn bbuuffffeerr
66.. RReemmoovvee eelluuttiioonn bbuuffffeerr ccoonnttaaiinniinngg
ttaarrggeett mmoolleeccuullee
77.. RReeggeenneerraattiioonn ooff oorriiggiinnaall ccoonnddiittiioonnss
Image source:Wikipedia

4. AAlltteerrnnaattiivveess
• PPrrootteeiinn GG –– ccaann hhaavvee hhiigghheerr aaffffiinniittyy ffoorr cceerrttaaiinn mmoolleeccuulleess
hhoowweevveerr iitt iiss ggeenneerraallllyy mmoorree eexxppeennssiivvee..
• PPrrootteeiinn LL -- uusseedd ffoorr ppuurriiffyyiinngg mmoonnoocclloonnaall aannttiibbooddiieess ffrroomm
iimmppuurriittiieess.. CCaann bbee oorrddeerreedd aass rreeaaddyy--ttoo--uussee pprreeppaacckkeedd
ddeevviicceess ffoorr iissoollaattiioonn aanndd ppuurriiffiiccaattiioonn ooff iimmmmuunnoogglloobbuulliinn..
• MMeelloonn GGeell SSuuppppoorrtt -- bbiinnddss nnoonn--aannttiibbooddyy sseerruumm pprrootteeiinnss
((eexx.. aallbbuummiinn aanndd ttrraannssffeerrrriinn)) wwhhiillee aalllloowwiinngg tthhee aannttiibbooddyy
ttoo ffllooww tthhrroouugghh iinn aa mmiilldd bbuuffffeerr.. OOffffeerrss aa ggeennttllee wwaayy ttoo
ppuurriiffyy aannttiibbooddiieess ffrroomm sseerruumm..
Source: www.pierce.net

5. CCuurrrreenntt ddeessiiggnn
PPaarraammeetteerrss ooff iinntteerreesstt ffoorr ooppttiimmiizzaattiioonn:: VVoolluummee llooaadd,,
mmaassss llooaadd,, ffllooww rraattee,, rreessoolluuttiioonn,, rreeccoovveerryy,, bbeedd
ccoonnffiigguurraattiioonn,, ppuurriittyy aanndd ccoosstt..

6. PPaarraammeetteerr iinnvveessttiiggaattiioonn
 DDiiffffiiccuulltt ttoo vvaarryy tthhee yyiieelldd lliikkeellyy dduuee ttoo aann aallrreeaaddyy hhiigghh aaffffiinniittyy ffoorr MMaabb..
 IInnvveerrssee rreellaattiioonnsshhiipp bbeettwweeeenn bbaattcchh ttiimmee aanndd lliinneeaarr vveelloocciittyy..
 EEffffeecctt ooff lliinneeaarr vveelloocciittyy oonn MMaabb//aacceettiicc aacciidd rraattiioo ffoouunndd ttoo bbee nneegglliiggiibbllee..
 IInnccrreeaassee iinn ccoolluummnn hheeiigghhtt rreessuulltteedd iinn sslliigghhtt iinnccrreeaassee iinn bbaattcchh ttiimmee..
 IInnccrreeaassee iinn hheeiigghhtt ddeeccrreeaasseedd MMaabb//aacceettiicc aacciidd rraattiioo –– ccoonnssiisstteenntt wwiitthh
tthheeoorryy tthhaatt ccoolluummnnss tteenndd ttoo bbee sshhoorrtteerr aanndd wwiiddeerr iinn ssccaallee--uupp pprroocceessss..

7. PPaarraammeetteerr iinnvveessttiiggaattiioonn
 DDiiffffiiccuulltt ttoo vvaarryy tthhee yyiieelldd lliikkeellyy dduuee ttoo aann aallrreeaaddyy hhiigghh aaffffiinniittyy ffoorr MMaabb..
 IInnvveerrssee rreellaattiioonnsshhiipp bbeettwweeeenn bbaattcchh ttiimmee aanndd lliinneeaarr vveelloocciittyy..
 EEffffeecctt ooff lliinneeaarr vveelloocciittyy oonn MMaabb//aacceettiicc aacciidd rraattiioo ffoouunndd ttoo bbee nneegglliiggiibbllee..
 IInnccrreeaassee iinn ccoolluummnn hheeiigghhtt rreessuulltteedd iinn sslliigghhtt iinnccrreeaassee iinn bbaattcchh ttiimmee..
 IInnccrreeaassee iinn hheeiigghhtt ddeeccrreeaasseedd MMaabb//aacceettiicc aacciidd rraattiioo –– ccoonnssiisstteenntt wwiitthh
tthheeoorryy tthhaatt ccoolluummnnss tteenndd ttoo bbee sshhoorrtteerr aanndd wwiiddeerr iinn ssccaallee--uupp pprroocceessss..