1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 29275
(51) C12N 1/20 (2006.01)
A01N 63/00 (2006.01)
МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2013/1383.1
(22) 18.10.2013
(45) 15.12.2014, бюл. №12
(72) Тен Олег Андреевич; Балпанов Дархан
Серикович; Чарыкова Ирина Владимировна;
Некрасова Нина Ивановна
(73) Товарищество с ограниченной
ответственностью "Научно-аналитический центр
"Биомедпрепарат"
(56) RU 2103873 C1, кл. A01N 63/00, C12N 1/14,
1998
(54) ШТАММ МИКРОМИЦЕТА BEAUVERIA
BASSIANA (BALSAMO) VUILLEMIN Б-3 ДЛЯ
ПРОИЗВОДСТВА ЭНТОМОПАТОГЕННОГО
ПРЕПАРАТА
(57) Изобретение относится к микробиологической
промышленности, в частности к производству
средств защиты растений от вредных насекомых, и
касается нового штамма гриба для производства
энтопатогенного препарата. Сущность изобретения:
штамм Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin Б-3
был получен методом выделения из погибших
личинок азиатской перелетной саранчи. Штамм
Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin Б-3 обладает
инсектицидной активностью по отношению к
фитофагам и может быть использован для
производства грибного энтомопатогенного
препарата для защиты растений от вредителей.
Выделенный штамм депонирован в коллекции
непатогенных культур микроорганизмов ТОО
КАЗНИИППП под номером В-373. Обладает
повышенной продуктивностью по сравнению с
известным штаммом в условиях глубинного режима
ферментации - (3,4 - 5,4) × 108
спор/мл. При
выращивании на твердом субстрате (пшено) его
продуктивность составляет (1,12 ± 0,32) × 109
спор/г. Биологическая активность культуральной
жидкости штамма при полевых испытаниях в
отношении личинок вредных саранчовых
(белополосая кобылка, крестовая кобылка и
итальянский прус) составила 58,0 - 65,7%.
(19)KZ(13)A4(11)29275

2. 29275
2
Изобретение относится к микробиологической
промышленности, в частности к производству
средств защиты растений от вредных насекомых, и
касается нового штамма гриба для производства
энтопатогенного препарата.
Эффективная защита растений является
необходимым условием обеспечения
продовольственной и экологической безопасности
Республики Казахстан. Потенциальные потери
урожая от вредных организмов в настоящее время
достигают 28-35%. Особо опасные вредные
организмы способны причинить громадный ущерб
сельскому хозяйству.
Саранчовые, в особенности стадные, являются
одной из наиболее вредоносных групп многоядных
вредителей сельскохозяйственных культур. В
настоящее время в странах СНГ для борьбы с ними
используются только химические инсектициды.
Однако известно, что масштабное применение
пестицидов имеет ряд существенных недостатков,
важнейшими из которых являются возникновение
резистентных популяций вредителей и загрязнение
окружающей среды. В связи с этим возникает
необходимость поиска альтернативных
экологически безопасных методов защиты растений.
Одним из таких способов подавления вредных
фитофагов является микробиологический метод
защиты. Особую актуальность использование
биологических приемов снижения численности
саранчовых приобретает для водоохранных зон и
заповедных территорий, где использование
химических пестицидов законодательно полностью
запрещено [Лачининский А.В., Сергеев М.Г.,
Чильдебаев М.К., Черняховский М.Е. и др.
Саранчовые Казахстана, Средней Азии и
сопредельных территорий // Международная
ассоциация прикладной акридалогии и университет
Вайоминга, Ларами - 2002. с.403].
Среди всего разнообразия энтомопатогенных
микроорганизмов одной из наиболее перспективных
групп, с точки зрения снижения численности
саранчовых являются грибы из анаморфных родов -
Metarhizium и Beauveria. Известны различные
препараты на основе энтомопатогенного гриба
Beauveria bassiana, используемые для эффективной
защиты различных сельскохозяйственных культур
от вредителей [Король И.Т. Микробиологическая
защита растений / И.Т.Король. - Москва: Колос,
1993. с.77].
Известный штамм гриба вида Beauveria bassiana
(А.с. N 1688820) предназначен для поверхностного
культивирования, которое менее технологично, чем
глубинное культивирование [Патент RU 2103873,
МПК А01N 63/00, С 12N 1/14 // Бюл. №4. - 10.02.98].
Целью изобретения является получение штамма
энтомопатогенного гриба, обладающего
повышенной продуктивностью жизнеспособных
конидий и способного продуцировать при
глубинном режиме ферментации.
Штамм получен в результате направленной
изменчивости продуктивности наиболее активной
культуры природного штамма микромицета
Beauveria bassiana Б-3. Штамм выделен из
природных источников собранных в местах
массовой гибели азиатской перелетной саранчи
Locusta migratoria L. в Костанайской области,
Республика Казахстан.
Штамм Beauveria bassiana Б-3 депонирован в
коллекции культур микроорганизмов ТОО
«Казахский научно-исследовательский институт
перерабатывающей и пищевой промышленности» в
г. Алматы под номером В-373.
Штамм Beauveria bassiana Б-3 характеризуется
следующими культурально-морфологическими
признаками:
При выращивании на твердой агаровой среде
сусло (1:3) при температуре (27±1)°С в течение
10 суток образует колонии округлой формы,
непрозрачные, конидиальный слой меловой
консистенции белого цвета, пигмент не образует.
Морфологические признаки штамма:
При культивировании на жидкой питательной
среде гифы разветвлены, сегментированы,
высыпание конидий на 3-4 сутки при температуре
(27±1)°С (80-90)%, шаровидные или яйцевидные
конидии размером 2-3×1,7-2,5 мкм, и с
конидофорами, образующими плотные пучки. Гриб
растет при температуре в диапазоне (12-34)°С,
оптимальная температура роста (27±1)°С,
водородный показатель pH в диапазоне 5,0-7,0,
оптимальный pH для роста культуры 5,0-5,6.
Физиологические признаки:
Отношение к источникам углерода:
В качестве источника азота используют пептон,
казеин, мясной бульон, дрожжи и их гидролизаты,
нитриты, кукурузный экстракт.
Отношение к источникам углерода:
Усваивает сахарозу, глюкозу, лактозу, мальтозу,
фруктозу, крахмал. Крахмал гидролизует.
По отношению к кислороду - гриб аэроб.
Фаги не выявлены.
Продуктивность штамма на твердых субстратах
(пшено) до 1,2 × 109
конидий/г субстрата, на жидких
питательных средах до 7,8 × 108
конидий / мл.
Штамм хорошо хранится на сусло-агаре при
температуре плюс (4 - 6)°С или в колбах на пшене
при комнатной температуре в течение 1,5- 2 лет.
Суть предлагаемого изобретения
иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1.
В жидкую питательную среду ФВМ следующего
состава, %:
солодовый экстракт - 2,5;
соевая мука - 1,0;
калий йодистый - 0.03;
цинк сернокислый - 0.02;
вода водопроводная до 100%, pH 5,6 - 6,2
вносят не менее 1,0 % оживленного с пшена
посевного материала и ведут ферментацию при
перемешивании, постоянной подачи воздуха 0,4-0,8
л/л среды в минуту при температуре 26-28°С.
Оптимальная продолжительность культивирования
штамма Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin Б-3
на данной среде 58-65 часов до образования
конидий (начало лизиса мицелия).

3. 29275
3
Результаты культивирования штамма-
продуцента Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin
Б-3 на питательной среде ФВМ, средние значения
по 5 экспериментам - по 5 колбам, представлены в
таблице 1.
Таблица 1
Продуктивность штамма Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin Б-3 в динамике роста при глубинном
культивировании на питательной среде ФВМ
Время роста, ч Количество сырой биомассы, г/л Титр, конидий/мл ×10n
32 90,9 (3,2±0,16) × 106
40 103,7 (3,4±0,24) × 108
48 105,94 (4.7±0,26) × 108
58 111,4 (4.7±0,26) × 108
65 111,4 (4.74±0,3) × 108
Применение жидкой ферментационной
питательной среды ФВМ позволило получить в
глубинных условиях повышенное количество
конидиоспор и это объясняется тем, что на богатой
углеводной среде на начальных этапах
культивирования культура гриба Beauveria bassiana
(Balsamo) Vuillemin Б-3 интенсивно накапливает
мицелиальную массу, а затем переходит на
спорообразование. Продуктивность биомассы по
титру спор - (4.74±0,3)×108
. В процессе
культивирования шло стабильное накопление сырой
биомассы и к концу ферментации достигло 111,4 г
на литр культуральной жидкости (фиг.1).
Фиг.1 - Диаграмма выхода биомассы штамма
Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin Б-3 при
глубинном культивировании на питательной среде
ФВМ в динамике роста
Пример 2.
В жидкую питательную среду Д -2 следующего
состава, %
меласса - 2,0;
кукурузный экстракт - 0,2;
калий фосфорнокислый 2-ву замещенный - 0,2;
магний сернокислый - 0,1;
кальций хлористый - 0,05;
вода водопроводная до 100%,
pH 5,6-6,2
вносят не менее 1,0 - 2,0% оживленного с пшена
посевного материала и ведут ферментацию при
перемешивании, постоянной подачи воздуха 0,4-
0,8 л/л среды в минуту при температуре (27±1)°С, в
течение 60-68 часов до образования конидий и спор
(начало лизиса). Титр спор (2,85 ± 0,26) ×
108
спор/мл.
Пример 3.
В жидкую питательную среду Д-4 следующего
состава, %: дрожжевой экстракт - 0,2; пептон - 1,0;
глюкоза - 2,0;
вода водопроводная до 100%, pH 5,8-6,2
вносят не менее 1,0% оживленного с пшена
посевного материала и ведут ферментацию при
перемешивании, постоянной подачи воздуха 0,4- 0,8
л/л среды в минуту при температуре 26-28°С, в
течение 60-65 часов до образования конидий и спор
(начало лизиса). Титр спор (3,4 ± 0,16) ×
108
спор/мл.
Пример 4.
В жидкую питательную среду К ДПС
следующего состава, %:
дрожжи кормовые - 2,0;
крахмал картофельный - 1,0;
натрий хлористый - 0,2;
магний хлористый -0,01;
кальций хлористый - 0,05;
вода водопроводная до 100 %,
pH 5,6-6,2
вносят не менее 1,0 % оживленного с пшена
посевного материала и ведут ферментацию при
перемешивании, постоянной подачи воздуха 0,4-
0,8 л/л среды в минуту при температуре 26-28°С, в
течение 58-65 часов до образования конидий и спор
(начало лизиса). Титр спор (3,85 ± 0,18) ×
108
спор/мл.
Препарат на основе стабилизированной
культуральной жидкости штамма Beauveria bassiana
(Balsamo) Vuillemin Б-3 прошел полевые испытания
по оценке биологической и хозяйственной
эффективности на базе АО «Казахский
Агротехнический университет им. Сейфулина» на
сельскохозяйственном предприятии Баянбай, ТОО
«Есиль Агро», Бурабайского района, Акмолинской
области.
Испытания проводились против личинок
вредных саранчовых 1-3 возраста: белополосая
кобылка, крестовая кобылка и итальянский прус.
Результаты эксперимента представлены в таблице 2.
Таблица 2
Влияние обработки препаратами на численность личинок саранчовых, ТОО Есиль Агро, 2013г.
Численность личинок 2
саранчовых на 1 м2
Снижение численности (по
модифицированной формуле
Аббота)
На день
учета
На день учета
Варианты
До обработки
7 14 7 14
Культуральная жидкость Beauveria bassiana 7 2,5 2,4 55,8 57,1 60,0 58,0

4. 29275
4
Численность личинок 2
саранчовых на 1 м2
Снижение численности (по
модифицированной формуле
Аббота)
На день
учета
На день учета
Варианты
До обработки
7 14 7 14
(Balsamo) Vuillemin шт. Б-3 - 5,0 л/га 9 2,8 3,0 56,0 58,3
8 2,3 2,3 62,9 67,8Культуральная жидкость Beauveria bassiana
(Balsamo) Vuillemin шт. Б-3 - 10,0 л/га 11 2,8 2,9 67,0
65,0
63,6
65,7
9 3,1 2,8 61,4 59,8Химический препарат Имидор, 20% в.к. -
0,05 л/га 8 2,7 2,9 51,7
56,6
54,6
57,3
7 2,3 2,1 63,2 61,3Химический препарат Имидор, 20% в.к. -
0,10 л/га 9 2,2 2,3 65,0
64,1
68,0
64,5
9 8 8 - -Контроль без обработки
10 7 8 -
-
-
-
Установлено, что после обработки почвы
культуральной жидкостью Beauveria bassiana
(Balsamo) Vuillemin шт. Б-3 произошло снижение
численности личинок саранчовых, биологическая
эффективность препарата на 14 день, в дозе расхода
5-10л/га, после обработки составила (58,0 - 65,7)% и
находится на одном уровне с эталоном (химический
препарат «Имидор, 20%, в.к.», норма расхода
0,05%). Наибольшую эффективность обеспечили
варианты с расходом 10 л/га, что на 7,7 - 7,9% выше,
чем при норме расхода 5 л/га.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Штамм Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin Б-
3, депонирован в ТОО «Казахский научно-
исследовательский институт перерабатывающей и
пищевой промышленности» под номером В-373,
используемый для получения энтомопатогенных
препаратов.
Верстка Ж. Жомартбек
Корректор К. Нгметжанова