Skripsi ini membahas pengaruh ekstrak etanol 70% buah naga berdaging merah super terhadap proliferasi limfosit B pada mencit bertumor kelenjar susu secara in vitro. Penelitian dilakukan dengan mengisolasi limfosit dari limpa mencit bertumor, membuat suspensi limfosit dengan variasi konsentrasi ekstrak, dan menghitung jumlah limfosit setelah inkubasi selama 24, 48, dan 72 jam. Hasil menunjukkan tidak ada perbed

1. i
i
UJI EFEK IMUNOMODULATOR EKSTRAK ETANOL 70%
BUAH NAGA BERDAGING MERAH SUPER
(Hylocereus costaricensis Britton & Rose) TERHADAP PROLIFERASI
LIMFOSIT B PADA MENCIT BERTUMOR KELENJAR SUSU GALUR
C3H SECARA IN VITRO
Skripsi
Disusun untuk melengkapi syarat-syarat guna memperoleh gelar
Sarjana Farmasi
Oleh:
Febrianti Khairiah
0604015063
Program Studi Farmasi
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PROF. DR. HAMKA
JAKARTA
2011

2. ii
ii

3. iii
iii
ABSTRAK
FEBRIANTI KHAIRIAH : UJI EFEK IMUNOMODULATOR EKSTRAK
ETANOL 70% BUAH NAGA BERDAGING
MERAH SUPER (Hylocereus costaricensis
Britton & Rose) TERHADAP PROLIFERASI
LIMFOSIT B PADA MENCIT BERTUMOR
KELENJAR SUSU GALUR C3H SECARA IN
VITRO
Limfosit merupakan inti dalam proses sistem imun spesifik karena limfosit
dapat mengenal setiap jenis antigen baik antigen yang terdapat pada intraseluler
maupun ekstraseluler. Limfosit terdiri dari Limfosit T, limfosit B dan sel Natural
Killer (NK). Penelitian dilakukan untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak
etanol 70% buah naga berdaging merah super (Hylocereus costricensis Brtitton &
Rose) terhadap proliferasi Limfosit B pada mencit bertumor kelenjar susu secara
in vitro.
Percobaan ini dilakukan dengan mengisolasi limfosit dari limpa mencit
bertumor kelenjar susu galur C3H dan dibuat suspensi limfosit dengan 5
perlakuan. Perlakuan pertama kontrol negatif (suspensi sel tanpa pemberian
apapun). Perlakuan kedua kontrol positif (suspensi sel dengan penambahan PHA
20 µl) PHA digunakan untuk menstimulasi pertumbuhan dari limfosit. Perlakuan
lainnya diberikan larutan uji dengan 3 variasi konsentrasi pada suspensi sel
limfosit B yaitu 2 ppm, 20 ppm dan 200 ppm. Pengamatan dilakukan pada waktu
24, 48 dan 72 jam.
Hasil penelitian yang diperoleh dianalisa dengan menggunakan ANOVA
satu arah. Berdasarkan hasil analisa diperoleh nilai (p > 0,05) yang berarti tidak
ada perbedaan yang bermakna dari jumlah limfosit pada waktu inkubasi dengan
konsentrasi. Dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol 70% buah naga berdaging
merah super belum dapat meningkatan jumlah proliferasi limfosit B terhadap efek
imunomudolator sehingga efek yang diharapkan belum dapat tercapai.

4. iv
iv
KATA PENGANTAR
Bismillahirrahmanirrahim
Segala puji dan syukur hanya bagi Allah SWT yang telah memberikan
banyak nikmat dan rizkiNya sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan
penulisan skripsi dengan judul “UJI EFEK IMUNOMODULATOR
EKSTRAK ETANOL 70% BUAH NAGA BERDAGING MERAH SUPER
(Hylocereus costaricensis Brtitton & Rose) TERHADAP PROLIFERASI
LIMFOSIT B PADA MENCIT BERTUMOR KELENJAR SUSU GALUR
C3H SECARA IN VITRO” .
Penulisan skripsi ini ditujukan untuk memenuhi tugas akhir sebagai salah
satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana farmasi pada fakultas MIPA jurusan
Farmasi UHAMKA. Melalui skripsi ini penulis ingin mengucapkan terima kasih
kepada:
1. Bapak Drs. H. Endang Abutarya, M. Pd., selaku Dekan FMIPA UHAMKA.
2. Bapak Drs. Inding Gusmayadi, M. Si., Apt., selaku Wakil Dekan I FMIPA
UHAMKA.
3. Bapak Drs. Budi Arman, M. Kes., Apt., selaku Wakil Dekan II FMIPA
UHAMKA.
4. Bapak Drs. H. Priyanto, M. Biomed, Apt., selaku Wakil Dekan III FMIPA
UHAMKA.
5. Bapak Drs. H. Muhsin Lubis, M. Sc., selaku Kepala Penjamin Mutu FMIPA
UHAMKA.
6. Bapak Hadi Sunaryo, M. Si., Apt., selaku Ketua Program Studi Farmasi
FMIPA UHAMKA.
7. Bapak Drs. Kusmardi, M. S., sebagai pembimbing pertama atas bimbingan
dan pengarahan dalam penyusunan skripsi ini.
8. Ibu Almawati Situmorang, S. Si., Apt., sebagai pembimbing kedua yang telah
memberikan arahan dan bimbingan dalam penelitian ini serta selaku
Pembimbing Akademik.
9. Bapangku Drs. H. Mulyadi Usman, M. Pd dan Mamiku Hj. Rohistuti
tersayang serta kakak-kakakku woh tati dan kak adran, ngah nelly dan abang
irul, dang ari dan makdang, abang dan ayuk mai beserta keponakan-keponakan
bungsu, aditya, vikie, ica, zaky dan calon ponakan bungsu, yang selalu
memberikan doa, semangat dan dukungannya.
10. Ayah dan Ibu beserta keluarga di Ciputat. Keluarga besar Tuyuk Usman, disfa,
ela yang selalu memberikan semangat dalam penulisan skripsi ini.
11. Teman-teman seperjuangan, Ika, Septi, kak Ade, kak Catur dan kak Lucky
yang telah bersama-sama melakukan penelitian ini serta Della, Frida, Iin, kak
Ida, Laras, Rani Ika, Nelly M, Catur Dian, Junihardi dan Dedi Wahyudi yang
selalu memberikan semangat dan dukungannya.
12. Teman-teman kelas A angkatan 2006 yang selalu memberikan semangat dan
dukungannya serta teman-teman angkatan 2006 yang telah bersama-sama
dalam menimba ilmu di UHAMKA.
13. Teman-teman SMF Bengkulu yang telah memberikan dukungan selama ini.

5. v
v
14. Seluruh pihak yang tidak bisa disebutkan satu persatu yang turut membantu
dalam penyusunan skripsi.
Penulisan skripsi ini masih banyak kekurangan. Oleh karena itu penulis
meminta saran dan kritik demi melengkapi penyusunan skripsi ini. Semoga skripsi
ini memiliki manfaat.
Jakarta, April 2011
Penulis

6. vi
vi
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ...................................................................................... i
LEMBAR PENGESAHAN ........................................................................... ii
ABSTRAK ...................................................................................................... iii
KATA PENGANTAR ................................................................................... iv
DAFTAR ISI .................................................................................................. v
DAFTAR TABEL .......................................................................................... vii
DAFTAR GAMBAR ..................................................................................... viii
DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................. ix
BAB I PENDAHULUAN......................................................................... 1
A. Latar Belakang ........................................................................ 1
B. Identifikasi Masalah ................................................................ 4
C. Pembatasan Masalah ................................................................ 5
D. Perumusan Masalah ................................................................. 5
E. Tujuan Penelitian ..................................................................... 5
F. Manfaat Penelitian ................................................................... 5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA .............................................................. 6
A. Teori ........................................................................................ 6
1. Tanaman Buah naga .......................................................... 6
2. Sediaan Fitofarmaka …………………………………….. 11
3. Sistem Imunitas.................................................................. 13
4. Imunomodulator ................................................................ 17
5. Kanker ............................................................................... 18
6. Imunologi Kanker .............................................................. 19
7. Limfosit B ……………………………………………… . 21
8. Limpa ……………………………………………………. 22
9. Kultur Sel ……………………………………………… .. 23
10. Hewan Uji ……………………………………………….. 26
11. PHA ................................................................................... 26
B. Kerangka Berfikir .................................................................... 26
C. Hipotesis................................................................................... 27
BAB III METODOLOGI PENELITIAN ................................................. 29
A. Tempat dan Waktu Penelitian ................................................. 29
1. Tempat Penelitian............................................................... 29
2. Waktu Penelitian ............................................................... 29
B. Metode Penelitian..................................................................... 29
1. Alat Penelitian ................................................................... 29
2. Bahan Penelitian................................................................. 30
C. Tahap-tahap Penelitian ............................................................ 30
D. Prosedur Penelitian .................................................................. 31
E. Analisa Data ............................................................................ 41
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN …………………………………. 42
A. Hasil Penelitian ……………………………………………… 42

7. vii
vii
1. Ekstraksi Etanol 70% Buah Naga Berdaging Merah ……. 42
2. Hasil Uji Penapisan Fitokimia…………………………… 42
3. Hasil Uji Pemeriksaan Karakteristik…………………….. 43
4. Penentuan Proporsi Limfosit B………………………….. 44
B. Pembahasan…………………………………………………... 48
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ………………………………….. 53
A. Kesimpulan …………………………………………………… 53
B. Saran ………………………………………………………….. 53
DAFTAR PUSTAKA .................................................................................... . 54
LAMPIRAN .................................................................................................... 57

8. viii
viii
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel I. Kandungan Gizi Buah Naga Berdaging Merah Super ............ 10
Tabel II. Hasil Ekstraksi .. ...................................................................... 42
Tabel III. Hasil Uji Penapisan Fitokimia ........................... ..................... 43
Tabel IV. Karakteristik Organoleptik Ekstrak.......................................... 43
Tabel V. Hasil Susut Pengeringan dan Rendemen.................................. 43
Tabel VI. Jumlah Limfosit B.................................................................... 44

9. ix
ix
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. ADCC ......................... ................................................... 20
Gambar 2. Kamar hitung di bawah mikroskop ................................ 39
Gambar 3. Grafik jumlah rata-rata limfosit B pada inkubasi 24 jam. 45
Gambar 4. Grafik jumlah rata-rata limfosit B pada inkubasi 48 jam. 46
Gambar 5. Grafik jumlah rata-rata limfosit B pada inkubasi 72 jam. 48
Gambar 6. Buah naga berdaging merah super ................................. 70
Gambar 7. Ekstrak buah naga berdaging merah super .................... 70
Gambar 8. Mencit bertumor ............................................................ 71
Gambar 9. Mencit dibedah .............................................................. 71
Gambar 10. Haemocytometer ............................................................ 72
Gambar 11. Freeze dry ...................................................................... 72
Gambar 12. Rotary evaporator........................................................... 73
Gambar 13. Oven ……....................................................................... 73
Gambar 14. Laminar Air Flow (LAF) ............................................... 74
Gambar 15. Mikroskop digital ……………………………………… 74
Gambar 16. Limpa mencit ................................................................. 75
Gambar 17. Pembuatan suspensi sel .................................................. 75
Gambar 18. Limfosit B ...................................................................... 76
Gambar 19. Limfosit B ……………………………………………... 76

10. x
x
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Uji Statistik Jumlah Limfosit pada Inkubasi 24 jam ......... 57
Lampiran 2. Uji Statistik Jumlah Limfosit pada Inkubasi 48 jam ......... 60
Lampiran 3. Uji Statistik Jumlah Limfosit pada Inkubasi 72 jam ......... 63
Lampiran 4. Skema Ekstraksi ............................................................... 66
Lampiran 5. Skema Isolasi Limsosit dari Limpa ................................... 67
Lampiran 6. Skema Pengujian Proporsi Limfosit B ............................. 68
Lampiran 7. Hasil Determinasi ............................................................. 69
Lampiran 8. Gambar Bahan dan Alat ................................................... 70
Lampiran 9. Gambar Limpa Mencit, Pembuatan Suspensi Sel dan
Limfosit B ......................................................................... 75
Lampiran 10. Perhitungan Susut Pengeringan dan Rendemen Ekstrak .. 77

11. xi
xi
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Semua proses metabolisme tubuh, terutama reaksi dengan oksigen
terbentuk molekul-molekul dengan kehilangan elektron di kulit luarnya. Zat
tersebut dinamakan radikal bebas, bersifat sangat reaktif dan cenderung
menyerang molekul-molekul yang dapat menyerahkan elektron padanya (1)
. Bila
terjadi suatu sebab tubuh kekurangan antioksidan alamiah maka membran sel atau
inti sel dapat dirusak oleh radikal bebas. Akibatnya proses menua jaringan
dipercepat serta terjadi cacat DNA. Bila tidak dimusnahkan oleh sistem imun, sel
dapat memperbanyak diri menjadi sel-sel ganas seperti sel kanker(2)
. Karena
itulah, kanker dapat disebabkan pula oleh gagalnya sistem imun dalam
melindungi tubuh terhadap berbagai invasi baik mikroorganisme seperti virus,
radikal bebas, maupun sel tubuh sendiri yang mengalami transformasi sendiri
menjadi ganas.
Kanker adalah pembentukan jaringan baru yang abnormal dan bersifat
ganas (maligne)(3)
. Sel kanker mengganggu tuan rumah karena menyebabkan
desakan akibat pertumbuhan tumor, penghancuran jaringan tempat tumor
berkembang atau bermetastasis dan gangguan sistemik lain sebagai akibat
sekunder dari pertumbuhan sel kanker(4)
. Payudara adalah salah satu jenis lokasi
yang diserang kanker. Kanker payudara adalah jenis penyakit kanker yang banyak
ditemukan di Indonesia. Biasanya kanker ini ditemukan pada wanita usia 40-49
1

12. xii
xii
tahun. Hal yang paling mengkhawatirkan dari kanker payudara adalah
penyebarannya yang cepat(5)
.
Tubuh memiliki sistem imun yang memberikan respon dan melindungi
tubuh terhadap unsur-unsur patogen misalnya bakteri, virus, fungus, protozoa, dan
parasit. Respon imun sangat tergantung pada kemampuan sistem imun untuk
mengenali molekul asing (antigen) yang terdapat pada patogen potensial dan
kemudian membangkitkan reaksi yang tepat untuk menyingkirkan sumber antigen
bersangkutan(6)
. Respon imun dapat dibawa sejak lahir (alamiah, non-adaptif atau
non-spesifik) dan respon imun yang diperoleh dari luar atau adaptif (didapat atau
spesifik)(7)
. Proses pengenalan antigen dilakukan oleh unsur utama sistem imun
yaitu limfosit, yang kemudian diikuti oleh fase efektor yang melibatkan berbagai
jenis sel(6)
.
Limfosit adalah limfosit B dan T dan sejenis sel yang dikenal sel
pembunuh alami (natural killer,NK). Limfosit dihasilkan di dalam sumsum tulang
dan mencapai kematangan di struktur tersebut atau di jaringan limfoid(8)
. Imunitas
adalah resistensi terhadap penyakit terutama infeksi. Gabungan sel, molekul dan
jaringan yang berperan dalam resistensi terhadap infeksi disebut sistem imun. Sel
limfosit merupakan sel yang berperan utama dalam sistem imun spesifik, sel T
pada imunitas selular dan sel B pada imunitas humoral(9)
.
Imunitas humoral membentuk antibodi, antibodi tersebut ternyata dapat
menghancurkan sel tumor secara langsung atau dengan bantuan komplemen atau
melalui sel efektor ADCC (Antibodi Dependent Cell Mediated Cytotoxicity)
adalah fenomena antibodi yang melapisi sel sasaran dan di rusak sel killer
2

13. xiii
xiii
khusus. Sel yang berperan pada ADCC adalah sel NK, neutrofil, dan eosinofil. Sel
yang membunuh mengekspresikan reseptor untuk Fc dari antibodi yang menutupi
sel sasaran dengan jalan mencegah adhesi sel tumor(1)
.
Terapi kanker merupakan teknik pengobatan kanker dengan tujuan
mengontrol pertumbuhan atau mematikan sel kanker tanpa merusak atau
mengganggu kelangsungan hidup serta fungsi sel tubuh normal. Salah satu
metode terapi kanker yang berkembang sampai saat ini yaitu imunoterapi dengan
penggunaan imunomodulator. Imunomodulator juga disebut Biological Response
Modifiers adalah zat-zat yang mempengaruhi reaksi biologis tubuh terhadap zat-
zat asing(3)
. Sistem imun berfungsi dapat distimulasi (imunostimulator) maupun
disupresi (imunosupresiva). Imunostimulator secara tak langsung berkhasiat
mereaktivasi sistem imun yang rendah dengan meningkatkan respon imun tak
spesifik, antara lain perbanyakan limfo-T4, NK-cells, dan makrofag, juga
pelepasan interferon dan interleukin. Sebagai hasil akhir dari reaksi kompleks itu,
zat asing dapat dikenali dan dimusnahkan(3)
.
Buah naga tidak hanya unik, namun juga mengandung banyak zat gizi,
terutama vitamin dan mineral esensial. Beberapa jenis buah naga khususnya buah
naga berdaging merah super (Hylocereus costariencis Britton & Rose) juga
banyak mengandung betakaroten dan vitamin C yang baik untuk mencegah
penyakit kanker(10)
.
Peran buah naga dalam membantu penyembuhan kanker ini karena
kandungan vitamin C dan beta karoten yang berfungsi sebagai imunostimulator.
Selain itu, buah naga berdaging merah juga mengandung lycopene, suatu
3

14. xiv
xiv
antioksidan alami yang dapat melawan kanker, penyakit jantung, dan tekanan
darah tinggi. Buah naga berdaging merah juga kaya akan phytoalbumins yang
mempunyai daya antioksidan tinggi yang dapat mencegah pembentukan radikal
bebas penyebab kanker(11)
.
Berdasarkan potensi kandungan senyawa dan khasiat dari buah naga
berdaging merah super (Hylocereus costaricensis Britton & Rose) sebagai
antioksidan dan antikanker. Maka dalam penelitian ini akan dikaji pengaruh
pemberian ekstrak etanol 70% buah naga berdaging merah super (Hylocereus
costaricensis Britton & Rose) terhadap proliferasi limfosit B pada mencit
bertumor kelenjar susu galur C3H secara in vitro.
B. Identifikasi Masalah
Apakah pemberian ekstrak etanol 70% buah naga berdaging merah super
(Hylocereus costaricensis Britton & Rose) dapat berpengaruh terhadap proliferasi
limfosit B pada sel kanker ?
C. Pembatasan Masalah
Penelitian ini hanya dibatasi pada pengaruh ekstrak etanol 70% buah naga
berdaging merah super (Hylocereus costaricensis Britton & Rose) terhadap
proliferasi limfosit B pada hewan coba.
4

15. xv
xv
D. Perumusan Masalah
Apakah ekstrak etanol 70% buah naga berdaging merah super (Hylocereus
costaricensis Britton & Rose) dapat berpengaruh meningkatkan proliferasi
limfosit B yang diisolasi dari limpa mencit bertumor kelenjar susu galur C3H
secara in vitro ?
E. Tujuan Penelitian
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak
etanol 70% buah naga berdaging merah super (Hylocereus costaricensis Britton &
Rose) terhadap peningkatan proliferasi limfosit B yang diisolasi dari limfa mencit
bertumor susu galur C3H secara in vitro.
F. Manfaat Penelitian
Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi mengenai
buah naga berdaging merah super (Hylocereus costaricensis Britton & Rose) yang
dapat dipergunakan sebagai imunomodulator sehingga terbuka peluang untuk
menggunakannya sebagai bahan baku obat antikanker.
5

16. xvi
xvi
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Teori
1. Buah Naga Merah Super
a. Klasifikasi Tanaman(10)
Tanaman ini diklasifikasikan sebagai berikut:
Divisi : Spermatophyta
Subdivisi : Agiospermae
Kelas : Dicotyledonae
Ordo : Cactales
Famili : Cactaceae
Sub family : Hylocereanea
Genus : Hylocereus
Spesies : Hylocereus undatus (daging putih), Hylocereus
polyrhizus (daging merah), Hylocereus
costaricensis Britton & Rose (daging merah super)
kadang-kadang disebut Hylocereus polyrhizus(11)
Hylocereus megalanthus (kulit kuning tanpa sisik)
Nama umum : Buah naga merah super
6

17. xvii
xvii
b. Deskripsi Tanaman(10)
1. Habitus
Tanaman buah naga merupakan tanaman parenteral,
tumbuh cepat, merambat, dan tidak berdaun. Buah naga belum
banyak dikenal masyarakat Indonesia. Sekilas pandang, tanaman
ini lebih menyerupai kaktus raksasa, namun tanaman ini dapat
berbunga dan berbuah.
2. Akar
Tanaman buah naga termasuk tanaman semi epifit karena
memiliki dua jenis akar, yaitu akar tanah dan akar gantung (akar
udara). Fungsi akar yang berada di tanah adalah mencari unsur
hara dan air, sedangkan fungsi akar gantung sebagian besar untuk
membantu mencari hara serta air. Karena memiliki dua jenis akar
ini, tanaman buah naga dapat tumbuh produktif meskipun ditanam
dalam pot yang minim tanah atau di tanah berbatu.
3. Batang
Batang buah naga berwarna hijau tua dan bersegmen-
segmen. Batang buah naga kebanyakan triangular (bersudut tiga).
Namun terkadang ditemukan bersudut empat atau lima. Batang
buah naga tidak berkayu dan kebanyakan berduri. Tanaman ini
dapat tumbuh hingga mencapai 6 meter bahkan lebih jika
dibiarkan. Namun pada umumnya, tanaman buah naga mencapai
2-3 meter saja karena batang pokok dipangkas untuk pembentukan
7

18. xviii
xviii
cabang produksi. Pada batang dapat tumbuh akar yang disebut
akar udara (aerial root).
4. Bunga
Bunga tanaman buah naga merupakan bunga lengkap, di
mana bunga jantan dan betina berada dalam satu bunga. Bunga
terlihat sangat unik, berbentuk lonjong seperti bel, berwarna putih
kehijauan, berukuran besar, dan beraroma harum. Bunga
berukuran panjang 15-36 cm dan lebar 10-23 cm. Ciri khas bunga
ini adalah mekar sekali pada malam hari. Bunga mekar mulai
pukul 18.30-19.00, dan terbuka sempurna pada pukul 22.00.
Mekarnya bunga akan berakhir pada pukul 02.00 pagi. Bunga
tanaman buah naga akan segera layu setelah mekar, baik terjadi
penyerbukan maupun tidak.
5. Buah
Buah naga berbentuk lonjong agak mengerucut (oblong),
atau secara umum disebut bentuk berry. Namun karena memiliki
banyak lipatan-lipatan kulit buah, maka bentuk berry ini
tersamarkan. Buah tanaman ini memiliki banyak variasi warna,
mulai dari kuning, merah muda, sampai merah. Buah berwarna
merah paling popular. Selain warna kulit buah, warna daging buah
naga (pulp) juga bermacam-macam, ada yang berwarna putih,
kuning dan merah/merah muda. Sesuai dengan warna daging buah
tersebut, buah naga dibedakan menjadi buah naga putih (white
8

19. xix
xix
pitaya), buah naga kuning (yellow pitaya), dan buah naga merah
(red pitaya).
6. Biji
Biji berbentuk bulat berukuran kecil dan tipis tetapi sangat
keras. Biji dapat digunakan perbanyakan tanaman secara generatif,
tetapi cara ini jarang dilakukan karena memerlukan waktu yang
lama sampai berproduksi. Biasanya biji digunakan para peneliti
untuk memunculkan varietas baru. Setiap buah mengandung lebih
1000 biji.
c. Ekologi dan penyebaran(10)
Buah naga jenis Hylocerus costaricensis Britton & Rose
memiliki batang berwarna hijau dan bersegmen-segmen, triangular
dan berduri. Bunga species ini berukuran sangat panjang, yaitu sekitar
25-30 cm. Kelopak terluar berwarna kemerahan dengan bagian dalam
berwarna putih atau kekuningan. Buah berwarna merah cerah dengan
ukuran relatif kecil dibandingkan buah naga jenis lain. Panjang buah
hanya 10-12 cm dengan bobot buah 130-350 gram. Bentuk buah
lonjong (oblong) dengan gelambir kulit bervariasi. Daging buah
berwarna merah dengan tekstur yang lembut dan rasa yang enak. Buah
mengandung banyak biji berwarna hitam. Tanaman buah naga mampu
tahan pada berbagai jenis keasaman tanah dengan derajat keasaman
antara 4,5-7,5. Namun untuk tumbuh dan berkembang optimal,
diperlukan derajat keasaman tanah antara 5,5- 7,0.
9

20. xx
xx
d. Kandungan(10)
Beberapa kandungan buah naga yang penting bagi kesehatan
antara lain vitamin C, kalsium, fosfor, serta serat. Kandungan fosfor
dan serat yang paling tinggi terdapat pada Hylocerus costaricensis
Britton & Rose, atau lebih dikenal sebagai buah naga merah super.
Tabel I. Kandungan Gizi per 100 gram Buah Naga Berdaging Merah
(Hylocereus costaricensis Britton & Rose) (11)
Senyawa kandungan
Air 83,0g
Protein 0,229g
Lemak 0,61g
serat kasar 0,9g
Abu 0,68g
Kalsium 8,8mg
Fosfor 36,1mg
Niasin 0,430mg
Vitamin C 9,0mg
Riboflavin 0,045mg
Besi 0,65mg
Betakaroten 0,012g
e. Khasiat(10)
Buah naga tidak hanya unik, namun jugan mengandung
banyak zat gizi, terutama vitamin dan mineral. Dengan kandungan
zat-zat tersebut di atas, buah naga dapat digunakan untuk mengatasi
atau mencegah penyakit kanker usus besar, diabetes, hipertensi,
osteoporosis, ginjal, menurunkan kolesterol, dan sebagainya.
Mengonsumsi buah naga secara rutin dapat menghindarkan kita dari
serangan penyakit-penyakit tersebut.
10

21. xxi
xxi
2. Sediaan Fitofarmaka
a. Simplisia(12)
Simplisia adalah bahan alamiah yang dipergunakan sebagai
obat yang belum mengalami pengolahan apapun juga dan kecuali
dinyatakan lain, berupa bahan yang telah dikeringkan. Simplisia
dibedakan menjadi simplisia nabati, simplisia hewani dan simplisia
pelikan (mineral).
b. Ekstrak
Ekstrak adalah sediaan kering, kental, atau cair yang diperoleh
dengan mengekstraksi senyawa aktif dari simplisia nabati atau hewani
menggunakan pelarut sesuai, kemudian semua atau hampir semua
pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan
sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan(13)
.
Ekstraksi adalah kegiatan penarikan zat yang dapat larut dari
bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair. Secara umum cara
penyarian dapat dibedakan menjadi 4 cara, yaitu infundasi, maserasi,
perkolasi, dan penyarian berkesinambungan (sokletasi)(14)
.
a. Infundasi
Infus adalah sediaan cair yang dibuat dengan menyari
simplisia dengan air pada suhu 90o
C selama 15 menit. Infundasi
adalah proses penyarian yang umumnya digunakan untuk menyari
zat aktif yang larut dalam air dari bahan-bahan nabati.
Keuntungan penyarian ini ialah alat dan prosesnya lebih
11

22. xxii
xxii
sederhana, biasanya dipakai oleh perusahaan obat tradisional.
Sedangkan kerugian dari penyarian dengan cara ini ialah
menghasilkan sari yang tidak stabil dan mudah tercemar oleh
kuman dan kapang. Oleh sebab itu, sari yang diperoleh dengan
cara ini tidak boleh disimpan lebih dari 24 jam(14,15)
.
b. Maserasi
Maserasi merupakan penyarian yang sederhana. Maserasi
digunakan untuk mengekstraksi simplisia yang mengandung zat
aktif yang mudah larut dalam cairan penyari. Proses
pengekstrasian simplisia dengan menggunakan pelarut dengan
beberapa kali pengadukan pada temperatur ruangan. Maserasi
dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan
penyari. Cairan penyari akan menembus dinding sel dan masuk ke
dalam rongga sel yang mengandung zat aktif. Zat aktif akan larut
dan karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif
di dalam sel dengan yang di luar sel, maka larutan yang terpekat
didesak keluar. Peristiwa tersebut terus berulang, sehingga terjadi
keseimbangan konsentrasi antara larutan di luar sel dengan di
dalam sel(14,15)
.
c. Perkolasi
Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru
sampai sempurna (exhaustive extraction) yang umumnya
dilakukan pada temperatur ruangan. Proses ini terdiri dari tahapan
12

23. xxiii
xxiii
pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap perkolasi
sebenarnya (penetesan/penampungan ekstrak), terus menerus
sampai diperoleh ekstrak (perkolat yang jumlahnya 1-5 kali
bahan. Perkolasi dibagi menjadi 3 tahap, yaitu: Perkolasi biasa,
perkolasi bertingkat (reperkolasi) contoh yang masih terdapat
dalam Farmakope Indonesia edisi III adalah Thymi extractum,
perkolasi dengan tekanan(14)
.
d. Penyarian Berkesinambungan (sokletasi)
Sokletasi ialah penyarian dengan menggunakan pelarut
yang selalu baru yang umumnya dilakukan dengan alat khusus,
sehingga terjadi ekstraksi kontinu dengan jumlah pelarut relatif
konstan dengan adanya pendingin balik(14).
3. Sistem Imunitas
Imunitas adalah resistensi terhadap penyakit terutama penyakit
infeksi. Gabungan sel, molekul, dan jaringan yang berperan dalam
resistensi terhadap infeksi disebut sistem imun. Reaksi yang dikoordinasi
sel-sel, molekul-molekul terhadap mikroba dan bahan lainnya disebut
respon imun. Sistem imun diperlukan tubuh untuk mempertahankan
keutuhannya terhadap bahaya yang dapat ditimbulkan sebagai bahan
dalam lingkungan hidup. Pertahanan imun terdiri dari sistem imun alamiah
atau non-spesifik (natural/innate) dan didapat atau spesifik
(adaptive/acqueried)(9)
.
13

24. xxiv
xxiv
Mekanisme fisiologi imunitas non-spesifik berupa komponen
normal tubuh yang tidak memerlukan induksi oleh pajanan mikroba dari
luar meskipun jumlahnya dapat meningkat akibat infeksi (misalnya jumlah
sel darah putih meningkat selama fase akut pada banyak penyakit).
Berbeda dengan dengan sistem imun non-spesifik, sistem imun spesifik
mempunyai kemampuan untuk mengenal benda yang dianggap asing bagi
dirinya. Benda asing yang pertama kali muncul dalam badan segera
dikenal oleh sistem imun spesifik sehingga terjadi sensitasi sel-sel sistem
imun tersebut(16)
.
a. Sistem imun non-spesifik
Imunitas non spesifik fisiologik berupa komponen normal
tubuh, selalu ditemukan pada individu sehat dan siap mencegah
mikroba masuk tubuh dan dengan cepat menyingkirkannya.
Jumlahnya dapat ditingkatkan oleh infeksi, misalnya jumlah sel darah
putih meningkat selama fase akut pada banyak penyakit. Disebut non-
spesifik karena tidak ditunjukan terhadap mikroba tertentu, telah ada
dan siap berfungsi sejak lahir. Mekanismenya tidak menunjukkan
spesifisitas terhadap bahan asing dan mampu melindungi tubuh
terhadap banyak patogen potensial. Sistem tersebut merupakan
pertahanan terdepan dalam menghadapi serangan berbagai mikroba
dan dapat memberikan respon langsung(16)
.
Komponen utama sistem imun non-spesifik adalah pertahanan
fisik dan kimiawi seperti epitel dan substansi antimikroba yang
14

25. xxv
xxv
diproduksi pada permukaan epitel, berbagai jenis protein dalam darah
termasuk diantaranya komponen-komponen sistem komplemen,
mediator inflamasi lainnya dan berbagai sitokin, sel-sel fagosit yaitu
sel-sel polimorfonuklear dan makrofag serta sel natural killer (NK).(6)
Komponen-komponen dari sistem imun non spesifik yaitu :
1) Pertahanan fisik/ mekanik : kulit, selaput lendir, silia saluran
napas, batuk dan bersin, merupakan garis pertahanan terdepan
infeksi. Kulit yang rusak akibat luka bakar dan selaput lendir
saluran nafas yang rusak oleh asap rokok akan meningkatkan
resiko infeksi.(1)
2) Pertahanan biokimia : lisozim dalam keringat, ludah, air mata
dan air susu ibu, melindungi tubuh terhadap berbagai kuman
gram-positif oleh karena dapat menghancurkan lapisan
peptidoglikan dinding bakteri.(1)
3) Pertahanan humoral : berbagai bahan dalam sirkulasi berperan
dalam pertahanan humoral, antara lain berupa antibodi,
kompelen, interferon, dan CRP.(16)
4) Pertahanan selular : fagosit, makrofag, sel NK berperan dalam
sistem imun non spesifik seluler.(16)
b. Sistem imun spesifik(1)
Berbeda dengan sistem imun non-spesifik, sistem imun
spesifik mempunyai kemampuan untuk mengenal benda yang
dianggap asing bagi dirirnya. Benda asing yang pertama kali terpajan
15

26. xxvi
xxvi
dengan tubuh segera dikenal oleh sistem imun spesifik. Pajanan
tersebut menimbulkan sensitasi, sehingga antigen yang sama dan
masuk tubuh untuk kedua kali akan dikenal lebih cepat dan kemudian
dihancurkan. Oleh karena itu, sistem imun tersebut disebut spesifik.
Untuk menghancurkan benda asing yang berbahaya bagi tubuh, sistem
imun spesifik dapat bekerja tanpa bantuan sistem imun non-spesifik.
Namun pada umumnya terjalin kerjasama yang baik antara sistem
imun non-spesifik dan spesifik seperti antara komplemen-fagosit-
antibodi dan antara makrofag-sel T. Sistem imun spesifik terdiri atas
sistem humoral dan sistem selular.
1) Sistem imun spesifik humoral : pemeran utama dalam sistem
imun spesifik humoral adalah limfosit B atau sel B. Sel B yang
dirangsang oleh benda asing berproliferasi, berdiferensiasi dan
berkembang menjadi sel plasma yang memproduksi antibodi.
Antibodi yang dilepas dapat ditemukan dalam serum.
2) Sistem imun spesifik selular : limfosit T atau sel T berperan
pada sistem imun spesifik selular. Sel tersebut juga berasal dari
sel asal yang sama seperti sel B. Faktor timus yang disebut
timosin dapat ditemukan dalam peredaran darah sebagai hormon
asli dan dapat mempengaruhi diferensiasi sel T di perifer.
Berbeda dengan sel B, sel T terdiri atas beberapa subset sel
dengan fungsi yang berlainan yaitu sel CD4+
(Th1, Th2), CD8+
atau CTL atau Tc dan Ts atau sel Tr atau Th3. Fungsi utama
16

27. xxvii
xxvii
sistem imun spesifik selular ialah pertahanan terhadap bakteri
yang hidup intraselular, virus, jamur, parasit, dan keganasan.
4. Imunomodulator
Imunomodulator berasal dari kata “imuno” yang berarti
kekebalan dan “modulator” yang berarti pembawa. Imunomodulator
adalah suatu agen atau zat yang dapat mempengaruhi atau menjaga sistem
pertahanan tubuh dengan melakukan suatu tindakan dengan cara
memberikan bahan-bahan yang dapat mengembalikan fungsi respon imun
yang terganggu dari berbagai komponen sistem imun(9)
.
Imunomodulator bekerja untuk mengoptimalkan pertahanan
tubuh, maka secara tidak langsung telah mengatasi atau mengurangi
berbagai keadaan patologis atau gangguan kesehatan lainnya akibat tidak
optimalnya sistem pertahanan tubuh, diantaranya infeksi, alergi,
neoplasma jinak atau ganas (kanker)(16)
.
Pengobatan dalam imunologi dapat dibagi menjadi beberapa
kelompok utama sebagai berikut(9)
:
a. Imunorestorasi
Imunorestorasi ialah suatu cara untuk mengembalikan fungsi
sistem imun yang terganggu dengan memberikan berbagai
komponen sitem imun.
17

28. xxviii
xxviii
b. Imunostimulasi
Imunostimulasi adalah cara memperbaiki fungsi sistem imun
dengan menggunakan bahan yang merangsang sistem tersebut.
c. Imunosupresi
Imunosupresi merupakan suatu tindakan untuk menekan
respon imun.
5. Kanker
Kanker atau karsinoma adalah pembentukan jaringan baru yang
abnormal dan bersifat ganas (maligne). Suatu kelompok sel dengan
mendadak menjadi liar dan memperbanyak diri secara pesat dan terus-
menerus (proliferasi). Akibatnya adalah pembengkakan atau benjolan
yang disebut tumor atau neoplasma(3)
. Sel kanker akan tumbuh menyusup
ke jaringan sekitarnya (invasif), lalu membuat anak sebar (metastasis) ke
tempat yang lebih jauh melalui pembuluh darah dan pembuluh getah
bening. Selanjutnya akan tumbuh kanker baru di tempat lain sampai
akhirnya menyebabkan kematian penderitanya(17)
.
Dalam keadaan normal, sel hanya akan membelah diri bila tubuh
membutuhkannya seperti mengganti sel-sel yang rusak atau mati.
Sebaliknya, sel kanker akan membelah diri meskipun tidak dibutuhkan
sehingga terjadi kelebihan sel-sel baru. Kanker dapat tumbuh di semua
jaringan tubuh, seperti sel kulit, sel hati, sel darah, sel otak, sel lambung,
sel usus, sel paru, sel saluran kencing, dan berbagai macam sel tubuh
18

29. xxix
xxix
lainnya. Oleh karena itu, dikenal bermacam-macam jenis kanker menurut
sel atau jaringan asalnya. Keadaan ini yang menyebabkan adanya
perbedaan kecepatan pertumbuhannya maupun reaksi terhadap
pengobatan(17)
.
6. Imunologi Kanker
Tumor tidak sepenuhnya bersifat “self” dan berpotensi untuk
dikenali oleh sistem imun (disebut surveilans imun). Konsep ini
didukung oleh pengamatan bahwa sejumlah unsur kekebalan berkumpul
di dalam dan di sekitar tumor, bahwa beberapa keganasan tertentu
memperlihatkan peningkatan insidennya pada hospes yang memiliki
tanggap imun lemah, dan bahwa kanker kerap kali memicu produksi
antibodi serta sel T spesifik-tumor(18)
.
Imunitas tumor ialah proteksi sistem imun terhadap timbulnya
tumor. Meskipun adanya respon alamiah terhadap tumor dapat
dibuktikan, namun imunitas sejati hanya terjadi pada subset tumor yang
mengekspresikan antigen imunogenik, misalnya tumor yang diinduksi
virus onkogenik yang mengekspresikan antigen virus. Berbagai jenis
virus yang dilaporkan menunjukkan hubungan dengan tumor. Respon
imun terhadap tumor dibagi menjadi dua yaitu(1)
:
a) Imunitas humoral(1)
Meskipun imunitas selular pada tumor lebih banyak berperan
dibandingkan imunitas humoral, tetapi tubuh membentuk juga
19

30. xxx
xxx
antibodi terhadap antigen tumor. Antibodi tersebut ternyata dapat
menghancurkan sel tumor secara langsung atau dengan bantuan
komplemen atau melalui sel efektor ADCC (Antibodi Dependent
Cell Mediated Cytotoxicity) adalah fenomena antibodi yang melapisi
sel sasaran dan di rusak sel killer khusus. Sel yang berperan pada
ADCC adalah sel NK, neutrofil, dan eosinofil. Sel yang membunuh
mengekspresikan reseptor untuk Fc dari antibodi yang menutupi sel
sasaran dengan jalan mencegah adhesi sel tumor.
Gambar 1 : Sitoksisitas diperantarai sel yang bergantung antibodi
(ADCC). Sel target yang dibungkus IgG dibunuh oleh sel
yang membawa reseptor FC untuk IgG (misalnya sel
NK).
b) Imunitas selular(1)
Pada pemeriksaan patologi anatomi tumor, sering ditemukan
infiltrat sel-sel yang terdiri atas sel fagosit mononuklear, limfosit,
sedikit sel plasma dan sel mast. Pada imunitas selular mekanismenya
20

31. xxxi
xxxi
melibatkan sel CTL/Tc, sel NK, dan magrofag. Respons imun speifik
dan nonspesifik berperan dalam respon imun terhadap tumor.
Magrofag dapat mencegah pertumbuhan tumor atau menimbulkan
sitotoksisitas mungkin melalui pelepasan TNF-α. Aktivasi
komplemen juga dapat menimbulkan lisis sel tumor. Sel CTL/CD8+
dapat menimbulkan lisis sel tumor in vitro. Banyak tumor dapat
melawan sitotoksisitas dengan mengurangi ekspresi MHC-1. Hal ini
akan memajankannya dengan sel NK. Sel T mengaktifkan sel Tc,
makrofag dan sel NK, juga memproduksi TNF-β yang mencegah
pertumbuhan tumor.
7. Limfosit B
Sel B atau limfosit B merupakan 5-25% dari limfosit dalam
darah yang berjumlah sekitar 1000-2000 sel/mm3
. Terbanyak
merupakan limfosit asal sumsum tulang (hampir 50%) sisanya sekitar
satu pertiganya berasal dari kelenjar getah bening, limfe dan kurang dari
1% di timus. Pada unggas sel B berkembang dalam bursa fabricius yang
terbentuk dari epitel kloaka. Pada manusia didapatkan hal yang analog
dengan bursa tersebut dan pematangan terjadi di sumsum tulang atau di
tempat yang belum diketahui. Setelah matang, sel B bergerak ke organ-
organ seperti limpa, kelenjar getah bening dan tonsil(1)
.
Pada membran sel B terdapat reseptor khas yang mengikat
antigen, yakni molekul antibodi. Ketika suatu antigen masuk ke dalam
21

32. xxxii
xxxii
aliran darah, sel B dapat mengenali dan berhubungan dengannya.
Sebagai akibat, terjadilah pembelahan sel yang cepat, disusul dengan
maturasi menjadi sel plasma atau memori sel B di bawah pengaruh
makrofag. Sel B memiliki antibodi yang terikat pada membran,
sehingga ketika suatu antigen masuk ke dalam aliran darah, sel B akan
cepat mensintesa dan melepaskan antigennya yang dikenal dengan
antibodi atau immunoglobulin(1)
. Setelah terstimulasi, sel B membentuk
sel plasma yang mensekresi immunoglobulin, yang selanjutnya menjadi
mediator imunitas humoral. Terdapat lima tipe immunoglobulin dasar
dalam sirkulasi antibodi yaitu IgG, IgM, IgA, IgE, dan IgD yang
masing-masingnya memiliki kemampuan dan peranan yang khusus(19)
.
8. Limpa(9)
Limpa merupakan tempat respon imun utama terhadap antigen asal
darah. Seperti halnya dengan kelenjar getah bening, limpa terdiri atas
zona sel T (senter germinal) dan zona B (zona folikol). Arteriol berakhir
dalam sinusoid vascular yang mengandung sejumlah eritrosit, magrofag,
sel dendritik, limfosit dan sel plasma. Antigen yang dibawa APC masuk
ke dalam limpa melalui sinosid vaskular.
Limpa juga merupakan jaringan untuk darah. Mikroba dalam darah
dibersihkan makrofag dalam limpa. Limpa merupakan tempat utama
fagosit memakan mikroba yang dilapisi antibodi (opsonisasi). Individu
tanpa limpa akan menjadi rentan terhadap infeksi bakteri berkapsul seperti
22

33. xxxiii
xxxiii
pneumokok dan meningokok, oleh karena mikroba tersebut biasanya
hanya disingkirkan melalui opsonisasi dan fungsi fagositosis akan
terganggu bila limpa tidak ada.
9. Kultur Sel(20)
Kultur sel merupakan teknik yang biasa dipergunakan untuk
mengembangbiakkan sel di luar tubuh (in vitro). Sel-sel yang berasal dari
jaringan dan organisme tertentu sekarang dapat dikembangbiakan dalam
laboratorium. Tujuan utama dari kutur sel adalah untuk mempelajari sel
itu sendiri, bagaimana dapat berkembang, apa yang mereka butuhkan
untuk pertumbuhan, bagaimana dan kapan mereka berhenti untuk tumbuh.
Sebagai contoh aplikasi dari kultur sel adalah penelitian mengenai siklus
sel dan kontrol perkembangan sel tumor.
Kekurangan dari sel yaitu hilangnya spesifitas sel, karena pada
awalnya (in vivo) sel bekerja secara terintegritas dalam satu jaringan
sedangkan dalam kultur sel terpisah-pisah. Sehingga untuk
mempertahankannya, kondisi kultur harus dibuat semirip mungkin dengan
keadaan ligkungan awal di dalam tubuh.
a. Media Pertumbuhan
Sel memerlukan media pertumbuhan yang dapat membuat sel
tersebut bertahan hidup, berkembang, dan berdiferensiasi. Pemilihan
media harus didasarkan pada kebutuhan sel yang ditumbuhkan dan
disesuaikan dengan tujuan studi menggunakan sel tersebut. Secara
23

34. xxxiv
xxxiv
umum, media untuk kultur sel terdiri dari asam amino, vitamin,
garam, glukosa, berbagai suplemen organik seperti protein, peptida,
nukleotida dan lipid, serta hormon dan faktor pertumbuhan. Selain itu
perlu juga ditambah serum hewan yang umum digunakan untuk
suplementasi sangat kaya akan faktor pertumbuhan dan mengandung
sedikit γ-globulin. Yang biasa digunakan adalah serum janin sapi
(Fetal Calf Serum/FCS atau Fetal Bovine Serum/FBS). FBS telah
digunakan sebagai suplemen standar.
Penambahan serum berkisar antara 5-20%. Fungsi
penambahan serum ini adalah faktor hormonal untuk menstimulasi
pertumbuhan/aktivitas sel, faktor yang membantu terjadinya pelekatan
sel dan penyebaran sel pada substrat, agen pelindung sel, protein
pembawa hormon, mineral, lemak, dan lainnya. Fungsi utama media
kultur sel adalah untuk mempertahankan pH dan osmolalitas essensial
untuk viabilitas sel serta untuk menyediakan nutrisi dan energi yang
dibutuhkan untuk multiplikasi dan pertumbuhan sel. Media RPMI
1640 adalah media terbaik untuk menumbuhkan limfosit tikus dan
mencit, dan limfosit manusia untuk jangka pendek.
b. Sistem Buffer
Kondisi kultur harus disesuaikan dengan kondisi tubuh untuk
menunjang pertumbuhan sel yang optimal. Selama pemeliharaan
pertumbuhan sel memerlukan pH 7,4. Bila pada proses pembuahan
sel, pH media lebih rendah dari 7 maka pertumbuhan sel akan
24

35. xxxv
xxxv
terhambat. Pengaturan pH dapat dilakukan dengan penambahan
natrium bikarbonat. Bikarbonat membentuk sistem buffer dengan
karbondioksida terlarut yang diproduksi oleh sel hidup.
Untuk kultur sel dalam konsentrasi sel yang rendah, maka
dibutuhkan lebih banyak karbon dioksida untuk mempertahankan pH
optimal, sehingga kultur sel dilakukan dalam atmosfer 5-10% karbon
dioksida. Media yang mengandung buffer bikarbonat membutuhkan
fase gas mengandung karbon dioksida untuk mempertahankan kondisi
pH fisiologis.
c. Makanan Tambahan
1) L-glutamin
Merupakan asam amino yang mutlak diperlukan dalam
kultur sel, digunakan dalam konsentrasi 2 M. Glutamin tidak
stabil dalam larutan, dengan waktu paruh yang relatif singkat
khususnya pada suhu 370
C. Setelah 3 atau 4 hari dalam inkubator,
20% dari glutamin murni akan rusak. Medium yang telah
mengandung glutamin harus disimpan pada suhu 40
C, maka 80%
akan tetap ada setelah penyimpanan dua minggu.
2) Serum
Serum harus diinaktivasi dengan air panas sebelum
digunakan, untuk menghancurkan molekul komplemen dan
kemungkinan reaktivitas silang dengan immunoglobulin yang
25

36. xxxvi
xxxvi
terkandung di dalamnya, inaktivitas dapat dilakukan dengan
menginkubasi serum pada 560
C selama 30 menit di penangas air.
d. Antibiotik
Faktor utama untuk memilih jenis antibiotik untuk kultur sel
adalah tidak bersifat toksik, memiliki spektrum antimikroba yang luas,
ekonomis dan kecendrungan meminum untuk menginduksi mikroba
yang kebal. Agen antibakteri yang terbanyak digunakan adalah
campuran penicillin (100 IU/ml) dan streptomicin (50 µg/ml).
Gentamicin 50 µg/ml sering digunakan untuk mencegah kontaminasi
mikroba yang daya tahannya lebih besar.
10. Hewan uji
Hewan uji yang digunakan adalah mencit galur C3H yang sudah
bertumor kelenjar susu. Mencit galur C3H tidak memiliki ketergantungan
terhadap pengaruh hormon dalam membentuk tumor kelenjar susu.
11. PHA (Phytohaemagglutinin)
PHA (phytohaemagglutinin), berasal dari kacang merah
(Phaseolus vulgaris) merupakan sejenis kacang-kacangan mengandung
protein, masuk dalam golongan lektin. Phytohaemagglutinin adalah
polyclonal mitogens yang menstimulasi pertumbuhan dari limfosit(23)
.
26

37. xxxvii
xxxvii
B. Kerangka Berfikir
Buah naga dapat dijadikan alternatif dalam berbagai pengobatan salah
satunya adalah untuk pengobatan tumor/kanker. Dalam beberapa penelitian buah
naga berdaging merah (Hylocereus costaricensis Britton & Rose) mengandung
berbagai macam gizi yang bermanfaat bagi tubuh antara lain, vitamin C, fosfor,
serat dan betakaroten yang berfungsi sebagai imunostimulator. Selain itu, buah
naga berdaging merah juga mengandung lycopene, suatu antioksidan alami yang
dapat melawan kanker, penyakit jantung, dan tekanan darah tinggi. Buah naga
berdaging merah juga kaya akan phytoalbumins yang mempunyai daya
antioksidan tinggi yang dapat mencegah pembentukan radikal bebas penyebab
kanker(10,11)
.
Dari kandungan dalam buah naga berdaging merah (Hylocereus
costaricensis) ini dapat berfungsi sebagai antioksidan. Senyawa antioksidan
mampu menetralisir zat-zat radikal bebas dalam tubuh yang dapat menjadi sumber
pemicu terjadinya berbagai penyakit degeneratif seperti kanker/tumor. Di dalam
tubuh antioksidan mampu menangkal dan memutus radikal bebas senyawa
karsinogen penyebab kanker.
Dalam sebuah hasil uji in vitro yang dilakukan Li-chen Wu, peneliti
Department of Applied Chemistry National Chi-Nan University menunjukkan
bahwa ekstrak kulit buah naga berdaging merah berpotensi menghambat
pertumbuhan sel tumor B16F10 pada dosis 25 µg(21)
.
27

38. xxxviii
xxxviii
C. Hipotesis
Pemberian ekstrak etanol 70% buah naga berdaging merah (Hylocereus
costaricensis Britton & Rose) dapat meningkatkan proliferasi limfosit B mencit
yang diisolasi dari limpa mencit yang bertumor kelenjar susu galur C3H secara in
vitro.
28

39. xxxix
xxxix
BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
A. Tempat dan Waktu Penelitian
1. Tempat penelitian
Penelitian dilakukan di Laboratorium Fitokimia FMIPA Jurusan
Farmasi Prof. Dr. Hamka, dan Laboratorium Kultur Sel Departemen
Kimia Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.
2. Waktu penelitian
Penelitian ini dimulai pada bulan Agustus 2010 sampai dengan
April 2011.
B. Metode Penelitian
1. Alat penelitian
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah: tabung
reaksi (Falcon tube), kapas, waterbath, mikropipet, gunting bedah, pinset
bedah, jarum, alat suntik polietilen, cawan petri 22 mm, nylon net, vortex,
sentrifuge, inkubator karbon dioksida, magnetic stirrer, pH meter,
mikroskop fase kontras, autoklaf, laminar air flow, oven, kamar hitung
(haemocytometer), Tray culture 96 well, filter membran 0,2 μm, Counter,
dan peralatan gelas steril yang lazim digunakan di laboratorium.
29

40. xl
xl
2. Bahan penelitian
a. Bahan uji
Ekstrak buah naga berdaging merah super (Hylocereus
costaricensis Britton & Rose) yang diperoleh dengan cara
mengektraksi buah naga dengan etanol 70% secara maserasi.
b. Hewan uji
Digunakan mencit galur C3H berumur 3-4 bulan yang sudah
bertumor kelenjar susu. . Mencit yang sudah bertumor kelenjar susu
didapat di Laboratorium Patologi Eksperimental Bagian Patologi
Anatomik Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.
c. Bahan lain yang diujikan
Medium RPMI 1640 (GIBCO), Foetal Bovine Serum (FBS)
(Sigma), Gentamisin, PHA (Phytohaemagglutinin), L-Glutamin,
Fungizone, Phosphate buffered saline (PBS), Trypan blue (pewarna
untuk sel agar membedakan antara sel yang hidup dan mati), Etanol
70%.
C. Tahap-tahap Penelitian
Tahap pertama dilakukan pengumpulan dan penyediaan simplisia, setelah
diperoleh simplisia dilanjutkan dengan pemeriksaan simplisia dengan cara
determinasi yang dilakukan di LIPI Bogor. Kemudian dilakukan pembuatan
ekstrak etanol 70% buah naga berdaging merah super (Hylocereus costarisensis
Britton & Rose), setelah didapatkan ekstrak kental dilakukan penapisan fitokimia
30

41. xli
xli
tujuannya untuk mengetahui kandungan senyawa yang terdapat dalam buah naga
berdaging merah super, lalu di lanjutkan dengan pemeriksaan karakteristik ekstrak
yang meliputi pemeriksaan organoleptik dan susut pengeringan.
Tahap kedua membuat larutan uji ekstrak etanol 70% buah naga berdaging
merah super (Hylocereus costarisensis Britton & Rose) dengan menggunakan
lima konsentrasi yaitu : konsentrasi pertama kontrol negatif, konsentrasi kedua
kontrol positif dengan menggunakan PHA (Phytohaemagglutinin), konsentrasi
ketiga menggunakan larutan uji 2 ppm, konsentrasi keempat menggunakan larutan
uji 20 ppm, dan konsentrasi yang kelima menggunakan larutan uji 200 ppm.
Tahap keempat melakukan pemeliharaan limfosit secara in vitro, dimulai
dari sterilisasi ruangan, alat dan pelarut yang akan digunakan. Setelah itu di
lanjutkan dengan isolasi limfosit dari limpa mencit yang sudah bertumor kelenjar
susu. Kemudian limfosit yang diperoleh dibuat suspensi sel dan dilakukan
pemeliharaan sel secara in vitro.
Tahap kelima dilakukan perhitungan limfosit B dengan menggunakan
haemocytometer. Penghitungan dilakukan pada perbesaran mikroskop 100 kali.
D. Prosedur Penelitian
1. Pengumpulan dan penyediaan simplisia
Bahan utama yang digunakan adalah buah naga berdaging merah
super (Hylocereus costaricensis Britton & Rose) yang diperoleh dari
kebun buah naga “SANI FARM” Jl. Jembatan 4 Pulau Barelang, Batam,
yang sudah dideterminasi terlebih dahulu di Herbarium Bogoriensis, LIPI
31

42. xlii
xlii
Bogor. Buah segar dikumpulkan dan dibersihkan dari kotoran yang
melekat kemudian dicuci dengan air, lalu ditiriskan agar terbebas dari
sisa air cucian. Buah di potong-potong dan dihaluskan dengan blender
untuk selanjutnya dikeringkan dengan metode freeze drying. Setelah
proses pengeringan, lalu serbuk ditimbang.
2. Pemeriksaan simplisia (Determinasi)
Determinasi simplisia dilakukan untuk memastikan kebenaran
simplisia yang akan dipakai. Determinasi dilakukan di Herbarium
bogoriensis, LIPI Bogor.
3. Penapisan fitokimia
Serbuk diperiksa secara organoleptis dan dilakukan uji penapisan
fitokimia. Uji penapisan fitokimia dilakukan untuk mengetahui ada
tidaknya kandungan alkaloid, saponin, tanin, flavonoid, triterpen-steroid.
Prosedur masing-masing pengujian adalah sebagai berikut:
a. Alkaloid
Diambil ekstrak kental, dimasukkan dalam tabung reaksi,
kemudian ditambahkan 1 ml HCl 2 N dan 9 ml aquadest, dipanaskan
di atas penangas air pada suhu 100o
C selama 2 menit, lalu didinginkan
dan disaring dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan 1 tetes
pereaksi Bauchardat, jika terbentuk endapan coklat-hitam, maka
positif terdapat alkaloid.
b. Saponin
32

43. xliii
xliii
Diambil ekstrak kental, dimasukkan dalam tabung reaksi,
kemudian ditambahkan 10 ml air panas, didinginkan lalu kocok kuat-
kuat. Jika terdapat buih lalu diamkan 2 menit, kemudian teteskan 1
tetes HCl 2 N, kocok lagi hingga terbentuk buih yang mantap.
c. Tanin
Diambil ekstrak kental, dimasukkan ke dalam tabung reaksi.
ditambahkan 10 ml air panas, dipanaskan di atas penangas air pada
suhu 100°C selama 1 jam, kemudian didinginkan dan disaring. Filtrat
ditetesi dengan larutan besi (III) klorida 1%. Jika berwarna biru sampai
hijau atau hitam berarti ada tanin.
d. Flavonoid
Diambil ekstrak kental, dimasukkan ke dalam tabung reaksi.
dididihkan dalam ± 20 ml air panas selama 5 menit, kemudian
ditambahkan serbuk magnesium dan 1 ml HCl pekat lalu kocok kuat.
Hasil positif adanya flavonoid ditunjukkan dengan terbentuknya
warna merah. Hasil positif adanya flavonoid juga ditunjukkan pada
ekstrak kental yang ditambahkan H2SO4 pekat akan memberikan
warna kuning atau pada ekstrak kental jika ditambahkan FeCl3 akan
memberikan warna hijau coklat.
e. Triterpenoid dan Sterol
Diambil ekstrak kental, dimasukkan ke dalam tabung reaksi
lalu ditambahkan 5 ml kloroform, dipanaskan sebentar di atas
penangas air sambil dikocok-kocok, lalu didinginkan. Setelah dingin,
33

44. xliv
xliv
diambil 1 ml lapisan kloroform dan dimasukkan ke dalam tabung
reaksi lain, lalu diteteskan pereaksi Liebermann Bouchard yang terdiri
dari asam asetat anhidrat 20 tetes dan H2SO4 pekat 1 tetes. Hasil positif
adanya terpenoid ditunjukkan dengan terbentuknya warna hijau
kebiru-biruan.
4. Pemeriksaan karakteristik ekstrak
a. Pemeriksaan organoleptik
Pemeriksaan organoleptik meliputi pemeriksaan bentuk, warna,
bau, dan rasa simplisia, dan ekstrak dari buah naga berdaging merah
super.
b. Susut pengeringan
Uji susut pengeringan dilakukan untuk penetapan jumlah semua
jenis bahan yang mudah menguap dan hilang pada kondisi tertentu.
Prosedurnya adalah dengan mengeringkan botol timbang didalam oven
pada suhu 100o
C–105o
C selama ± 15 menit. Kemudian botol timbang
diletakkan didalam eksikator dan dibiarkan ± 10 menit, setelah dingin
kemudian ditimbang. Botol timbang diisi dengan 2 g ekstrak. Botol
timbang yang berisi ekstrak ditimbang beratnya (berat awal). Lalu
dimasukkan ke dalam oven pada suhu 105o
C selama 5 jam. Kemudian
didinginkan dalam eksikator selama 15 menit, kemudian ditimbang
(berat akhir). Lakukan secara berulang hingga diperoleh berat yang
konstan(22)
.
Berat awal – berat akhir
Berat awal
x 100%............(1)% Susut pengeringan =
34

45. xlv
xlv
5. Pembuatan ekstrak etanol 70% buah naga berdaging merah super
(Hylocereus costaricensis Britton & Rose).
Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi yaitu dengan
memasukkan serbuk simplisia kering ke dalam toples kemudian
ditambahkan etanol 70% ke dalam toples sampai seluruh simplisia
terendam dan cairan penyari dilebihkan setinggi ± 2 cm di atas
permukaan sampel. Toples ditutup rapat dan dibiarkan selama 3 hari.
Selama proses perendaman dilakukan pengadukan beberapa kali agar
zat aktif yang terdapat pada simplisia terlarut.
Kemudian disaring dengan kertas saring, ampas yang diperoleh
direndam kembali dengan pelarut yang sama sampai filtratnya hampir
tidak berwarna (lebih kurang tiga kali perlakuan). Filtrat yang didapat
dikumpulkan dan dipekatkan menggunakan rotary evaporator pada
suhu 40o
C hingga kental tetapi masih dapat dituang, lalu diuapkan di
dalam oven pada suhu 40-50o
C hingga didapat ekstrak kental.
Pembuatan larutan uji ekstrak etanol 70% buah naga
Ekstrak dibuat dengan berbagai konsentrasi yaitu 10, 100, dan
1.000 ppm
a. Disiapkan vial kosong steril yang akan digunakan untuk pengujian,
tiap konsentrasi di lakukan 3 kali pengulangan (triplo). Tiap ekstrak
ditimbang 50 mg dan dilarutkan dengan 5 ml aquadest steril, sehingga
35

46. xlvi
xlvi
didapat larutan induk dengan konsentrasi 10.000 ppm. Untuk
mempermudah kelarutan ekstrak uji dalam aquadest.
b. Dibuat larutan uji dengan konsentrasi 1.000 ppm, pipet 0,5 ml dari
larutan induk pertama (10.000 ppm) dan dilarutkan dalam 5 ml
aquadest steril.
c. Dibuat larutan uji dengan konsentrasi 100 ppm. Pipet 0,5 ml dari
larutan uji dengan konsentrasi 1000 ppm dan dilarutkan dalam 5 ml
aquadest steril.
d. Dibuat larutan uji dengan konsentrasi 10 ppm. Pipet 0,5 ml dari
larutan uji dengan konsentrasi 100 ppm dan dilarutkan dalam 5 ml
aquadest steril.
6. Pemeliharaan Limfosit secara in vitro.
a. Sterilisasi alat dan pelarut
Peralatan gelas yang lazim digunakan di laboratorium, dicuci
bersih dan dikeringkan. Kemudian dibungkus dengan alumunium foil
dan dimasukkan ke dalam autoklaf pada suhu 1210
C selama 15 menit.
Untuk sterilisasi bahan yang berupa larutan, digunakan membran filter
0,2 µm dengan menggunakan spuit sehingga larutan yang masuk
dalam membran filter dapat steril. Ruangan yang digunakan harus
steril. Lampu UV pada laminar air flow dinyalakan + 2 jam sebelum
digunakan.
b. Pembuatan medium RPMI 1640
36

47. xlvii
xlvii
Sebanyak 6,24 gram serbuk RPMI 1640 dilarutkan dalam 100
ml Deionizied Destilled Water (DDW) kemudian di homogenkan
dengan magnetic stirrer. Ditambahkan 1,2 gram Natrium bikarbonat
(NaHCO3), homogenkan dengan magnetic stirrer. Tambahkan DDW
hingga 600 ml pH larutan dibuat menjadi 7,2 dengan menambahkan
NaOH bila asam dan HCl bila basa. Untuk medium RPMI komplit
ditambahkan FBS 5% sebanyak 5 ml, Fungizone 1 ml dan 3 tetes
gentamisin ke dalam 100 ml medium RPMI.
c. Isolasi limfosit dari limpa (Lampiran : 5 Hal. 67)
Limpa mencit yang diperoleh diletakkan pada cawan 22 mm
steril yang berisi 1-2 ml medium RPMI 1640. Kemudian pindahkan
kembali dalam wadah yang sama dan berisi medium RPMI 1640 agar
tidak terjadi kontaminasi. Limpa dipegang pada salah satu ujungnya
dengan pinset steril, kemudian dilakukan penekanan sepanjang limpa.
Suspensi sel yang diperoleh dipipet sedikit demi sedikit dan
dilewatkan pada nylon net steril untuk memisahkan limfosit B dan
limfosit T, limfosit T akan lolos sedangkan limfosit B akan menempel
pada nylon net steril, untuk melepaskannya dengan meningkatkan pH
menjadi 7,6 kemudian dibilas dengan aquadest steril sehingga limfosit
B terlepas. Limfosit B yang diperoleh dimasukkan ke dalam tabung
steril. Kemudian ditambah dengan medium RPMI 1640 sebanyak 2
/3
volume tabung. Suspensi sel tersebut disentrifugasi selama 10 menit
dengan kecepatan 2000-3000 rpm. Filtrat dibuang, endapan ditambah
37

48. xlviii
xlviii
kembali dengan medium RPMI 1640 dan disentrifugasi. Kemudian
endapan dicuci kembali dengan medium RPMI 1640 sebanyak 2 kali
pencucian. Setelah dicuci, endapan ditambah dengan NH4Cl (1:1)
kemudian diinkubasi selama 30 menit, ditambahkan medium RPMI
1640 sebanyak 2
/3 volume, disentrifuge selama 10 menit dengan
kecepatan 2000-3000 rpm. Filtrat dibuang, endapan ditambahkan
medium RPMI komplit yang mengandung 5% FBS, gentamisin 40
mg/ml, dan fungizone 1%.
d. Pemeliharaan limfosit secara in vitro.
Suspensi sel dihitung dengan menggunakan haemocytometer.
Suspensi sel dicampur dengan PBS 9 tetes dengan perbandingan 1:9
campuran ditempatkan pada haemocytometer. Penghitungan dilakukan
pada perbesaran mikroskop 100 kali. Jumlah sel yang dapat hidup
dihitung dalam 4 bidang pandang. Untuk dapat digunakan sebagai
kultur jumlah sel limfosit hidup ditepatkan menjadi 1 x 106 sel
/ml
suspensi. Limfosit dengan konsentrasi 1 x 106
dipelihara pada medium
RPMI 1640 mengandung 5% FBS, gentamisin, penisillin, streptomicin
dan fungizone 1%.
Rumus perhitungan sel limfosit dengan menggunakan
hemositometer :
N = A x FP x 104 sel
/ml …………………………….(1)
N = jumlah sel per millimeter
A = rata-rata jumlah sel terhitung dari empat bidang
pandang
FP = faktor pengenceran
38

49. xlix
xlix
104
= jumlah sel per luas bidang pandang (1,0 mm x 1,0 mm
x 0,1 mm).
Ket : Jumlah sel yang dapat hidup dihitung dalam 4 bidang
pandang.
Gambar 2 : Kamar hitung di bawah mikroskop dalam 4 bidang
pandang.
7. Perlakuan terhadap sel
Pengujian larutan uji dikelompokkan menjadi lima kelompok
dengan tiga pengulangan.
a. Kelompok 0 : (kontrol negatif) cairan suspensi limfosit B 1 x 106
sel/ml sebanyak 100 µl pada medium RPMI.
b. Kelompok 1 : (kontrol positif) cairan suspensi limfosit B 1 x 106
sel/ml sebanyak 80 µl pada medium RPMI di
tambah larutan phytohaemagglutinin (PHA) 20 µl.
c. Kelompok 2 : (larutan uji dengan konsentrasi 2 ppm) cairan
suspensi limfosit B 1 x 106
sel/ml sebanyak 80 µl
pada medium RPMI dan ekstrak uji 10 ppm
sebanyak 20 μl.
39

50. l
l
d. Kelompok 3 : (larutan uji dengan konsentrasi 20 ppm) cairan
suspensi limfosit B 1 x 106
sel/ml sebanyak 80 µl
pada medium RPMI dan ekstrak uji 100 ppm
sebanyak 20 µl.
e. Kelompok 4 : (larutan uji dengan konsentrasi 200 ppm) cairan
suspensi limfosit B 1 x 106
sel/ml sebanyak 80 µl
pada medium RPMI dan ekstrak uji 1000 ppm
sebanyak 20 μl.
Masing-masing kelompok dimasukkan ke dalam sumur (well) dan
inkubasi dalam inkubator karbondioksida 5% pada suhu 37o
C.
pengamatan dilakukan selama 3 hari yaitu 24, 48, 72 jam setelah
perlakuan.
8. Analisa proporsi limfosit B
Proporsi limfosit ditentukan dengan menghitung limfosit B 24, 48
dan 72 jam setelah perlakuan. Sebanyak 0,1 ml suspensi sel diambil
dengan mikropipet dan diletakkan pada kamar hitung (hemocytometer).
Jumlah limfosit B dihitung dengan menggunakan mikroskop.
E. Anaslisa Data
Untuk mengetahui pengaruh ekstrak etanol 70% buah naga berdaging
merah super (Hylocerus costaricensis Britton & Rose) terhadap proliferasi
limfosit B diuji dengan metode analisa varian (ANOVA) satu arah. Analisa varian
ini digunakan untuk menguji variasi konsentrasi dan jumlah limfosit B pada
40

51. li
li
pengamatan 24, 48 dan 72 jam ekstrak etanol 70% buah naga berdaging merah
super.
41

52. lii
lii
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil Penelitian
1. Ekstraksi Etanol 70% Buah Naga Berdaging Merah Super
Pada penelitian ini diawali dengan ekstraksi etanol 70% buah
naga berdaging merah super (Hyloserus costaricensis Britton & Rose).
Dari ekstrak etanol 70% buah naga berdaging merah super diperoleh
hasil pada tabel II.
Tabel II. Hasil ekstraksi ekstrak buah naga berdaging merah super
(Hylocereus costaricensis Britton & Rose)
2. Hasil Uji Penapisan Fitokimia
Pada serbuk dan ekstrak buah naga berdaging merah super
dilakukan penapisan fitokimia, yang meliputi alkaloid, flavonoid,
saponin, tanin, terpen dan steroid. Hasil penapisan fitokimia dapat dilihat
pada tabel III.
No. Keterangan jumlah
1 Buah segar setelah di kupas dan dibersihkan 6,35 kg
2 Buah yang telah freeze dry 1 kg
3 Ekstrak kering 102,85 g
42

53. liii
liii
Tabel III. Hasil uji penapisan fitokimia ekstrak etanol 70% buah naga
berdaging merah super (Hyloserus costaricensis Britton & Rose)
Keterangan : (+) = ada
(-) = tidak ada
3. Hasil pemeriksaan karakteristik
a. Pemeriksaan organoleptik
Tabel IV. Pemeriksaan organoleptik ekstrak etanol 70% buah naga
berdaging merah super (Hyloserus costaricensis Britton & Rose)
b. Susut pengeringan dan rendemen
Tabel V. Hasil susut pengeringan dan rendemen ekstrak etanol 70%
buah naga merah super (Hyloserus costaricensis Britton & Rose)
4. Penentuan Jumlah Limfosit B pada Inkubasi 24, 48 dan 72 jam
a. Hasil jumlah limfosit B pada inkubasi 24 jam
Hasil pengamatan jumlah limfosit B pada inkubasi 24 jam
dapat dilihat pada Gambar 2. Pada Gambar 2 dapat dilihat terjadi
peningkatan jumlah limfosit B pada kontrol positif, larutan uji 2
No. Golongan senyawa Reagen Ekstrak
1 Alkaloid HCl dan bauchardat +
2 Saponin HCl +
3 Tannin FeCO3 +
4 Flavonoid
Serbuk magnesium dan
HCl
+
5 Triterpenoid
Kloroform dan Liebermen
bauchardat
-
No. Keterangan Hasil
1 Bentuk Cairan kental
2 Warna Coklat
3 Bau Khas
No. Keterangan Hasil (%)
1 Susut pengeringan ekstrak 9,88
2 Rendemen ekstrak 10,285
43

54. liv
liv
ppm dan 200 ppm jika di bandingkan dengan kontrol negatif. Dari
ke tiga larutan uji yang mengalami peningkatan tertinggi adalah
larutan uji 200 ppm, sedangkan pada larutan uji 20 ppm mengalami
penurunan jumlah limfosit B yang di bandingkan dengan kontrol
negatif, kontrol positif dan larutan uji 2 ppm dan 200 ppm.
Tabel VI. Jumlah limfosit B pada inkubasi 24 jam
Kelompok
Proporsi Limfosit B (105 sel
/ml)
Rata-rata+SDUlangan
1 2 3
F0 159 165 173 165,67+7,02
F1 192 247 220 219,67+27,50
F2 188 163 179 176,67+12,66
F3 123 170 116 136,33+29,36
F4 114 287 169 190+88,39
Keterangan :
F0 : Kontrol negatif (suspensi limfosit B + Medium RPMI 1640)
F1 : Kontrol positif ( suspensi limfosit B + phytohaemagglutinin (PHA))
F2 : larutan uji ekstrak etanol 70% buah naga merah super konsentrasi 2 ppm
F3 : larutan uji ekstrak etanol 70% buah naga merah super konsentrasi 20
ppm
F4 : larutan uji ekstrak etanol 70% buah naga merah super konsentrasi 200
ppm
Gambar 2. Grafik jumlah rata-rata limfosit B pada inkubasi 24 jam
165,67
219,67
176,67
136,33
190
0
50
100
150
200
250
F0 F1 F2 F3 F4
jumlahrata-ratalimfositB
konsentrasi
44

55. lv
lv
b. Hasil jumlah limfosit B pada inkubasi 48 jam
Hasil pengamatan jumlah limfosit B pada inkubasi 48 jam
dapat dilihat pada Gambar 3. Pada Gambar 3 dapat dilihat terjadi
peningkatan jumlah limfosit B pada kontrol positif, larutan uji 2
ppm, 20 ppm dan 200 ppm yang dibandingkan dengan kontrol
negatif. Dari ke tiga larutan uji yang mengalami peningkatan
tertinggi adalah larutan uji 200 ppm, sedangkan pada larutan uji 2
ppm mengalami penurunan jumlah limfosit B jika di bandingkan
dengan kontrol positif dan larutan uji 20 ppm dan 200 ppm.
Tabel VII. Jumlah limfosit B pada inkubasi 48 jam
Kelompok
Proporsi Limfosit B (105 sel
/ml)
Rata-rata+SDUlangan
1 2 3
F0 112 173 138 141+30,63
F1 192 229 230 217+21,66
F2 135 133 171 146,33+21,38
F3 210 117 240 189+64,13
F4 145 248 190 194,33+51,64
Keterangan :
F0 : Kontrol negatif (suspensi limfosit B + Medium RPMI 1640)
F1 : Kontrol positif ( suspensi limfosit B + phytohaemagglutinin (PHA))
F2 : larutan uji ekstrak etanol 70% buah naga merah super konsentrasi 2 ppm
F3 : larutan uji ekstrak etanol 70% buah naga merah super konsentrasi 20
ppm
F4 : larutan uji ekstrak etanol 70% buah naga merah super konsentrasi 200
ppm
45

56. lvi
lvi
Gambar 3. Grafik jumlah rata-rata limfosit B pada inkubasi 48 jam
c. Hasil jumlah limfosit B pada inkubasi 72 jam
Hasil pengamatan jumlah limfosit B pada inkubasi 72 jam
dapat dilihat pada Gambar 4. Pada Gambar 4 dapat dilihat terjadi
peningkatan jumlah limfosit B pada kontrol negatif yang
dibandingkan dengan kontrol positif dan ke tiga larutan uji. Pada
larutan uji 20 ppm terjadi peningkatan yang tertinggi jika
dibandingkan dengan larutan uji 2 ppm dan 200 ppm. Sedangkan
pada kontrol positif, larutan uji 2 ppm 20 ppm dan 200 ppm
mengalami penurunan jumlah limfosit B jika di bandingkan dengan
kontrol negatif.
Tabel VIII. Jumlah limfosit B pada inkubasi 72 jam
Kelompok
Proporsi Limfosit B (105 sel
/ml)
Rata-rata+SDUlangan
1 2 3
F0 176 193 247 205+37,07
F1 170 218 221 203+28,62
F2 229 154 180 187,67+38,08
F3 185 199 210 198+12,53
F4 159 173 183 171,67+12,06
141
217
146,33
189 194,33
0
50
100
150
200
250
F0 F1 F2 F3 F4
jumlahrata-ratalimfositB
konsentrasi
46

57. lvii
lvii
Keterangan :
F0 : Kontrol negatif (suspensi limfosit B + Medium RPMI 1640)
F1 : Kontrol positif ( suspensi limfosit B + phytohaemagglutinin (PHA))
F2 : larutan uji ekstrak etanol 70% buah naga merah super konsentrasi 2 ppm
F3 : larutan uji ekstrak etanol 70% buah naga merah super konsentrasi 20
ppm
F4 : larutan uji ekstrak etanol 70% buah naga merah super konsentrasi 200
ppm
Gambar 4. Grafik jumlah rata-rata limfosit B pada inkubasi 72 jam
B. Pembahasan
Buah naga merah super (Hylocereus costaricensis Britton & Rose) yang
digunakan dalam penelitian ini telah dideterminasi di Herbarium Bogorisense,
LIPI Bogor, Jawa Barat. Tanaman ini diperiksa secara organoleptik dan
mikroskopik guna mengetahui kebenarannya. Hasil determinasi yang diperoleh
menyatakan bahwa tanaman ini adalah benar buah naga merah super (Hylocereus
costaricensis Britton & Rose) dengan famili Cactaceae. Hasil determinasi dapat
dilihat pada lampiran 7.
Buah naga merah super (Hylocereus costaricensis Britton & Rose)
mempunyai peran dalam membantu penyembuhan kanker karena kandungan
vitamin C dan beta karoten yang berfungsi sebagai imunostimulator. Selain itu,
205 203
187,67
198
171,67
150
160
170
180
190
200
210
F0 F1 F2 F3 F4
jumlahrata-ratalimfositB
konsentrasi
47

58. lviii
lviii
buah naga berdaging merah juga mengandung lycopene, suatu antioksidan alami
yang dapat melawan kanker, penyakit jantung, dan tekanan darah tinggi. Buah
naga berdaging merah juga kaya akan phytoalbumins yang mempunyai daya
antioksidan tinggi yang dapat mencegah pembentukan radikal bebas penyebab
kanker.
Buah naga merah berdaging merah di ekstraksi dengan menggunakan
pelarut etanol 70%. Sebelum di ekstraksi buah segar dikupas dan dibersihkan
kemudian ditimbang beratnya, didapatkan 6,35 kg. Kemudian dilanjutkan dengan
mengeringkan buah segar dengan metode freez dry karena buah naga berdaging
merah super memiliki kandungan air yang tinggi, metode freez dry dipilih karena
cara pengeringan ini tidak merusak kandungan senyawa yang terdapat pada buah
naga berdaging merah super, dari hasil freez dry diperoleh berat 1 kg.
Proses ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi karena merupakan cara
yang paling mudah dan sederhana serta cocok untuk simplisia yang tidak tahan
pemanasan atau belum diketahui apakah tahan pemanasan atau tidak. Maserasi
dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari. Etanol
merupakan cairan penyari yang umum digunakan untuk menarik zat aktif tanaman
dan dapat berfungsi juga sebagai pengawet yang dapat berguna untuk mencegah
pertumbuhan bakteri, jamur dan lain-lain. Dari hasil maserasi diperoleh
maseratnya lalu diuapkan menggunakan rotary evaporator pada suhu 50o
C,
kemudian diperoleh ekstrak kental sebanyak 102,85 g.
Senyawa-senyawa yang dapat meningkatkan aktivitas sistem imun
biasanya dari golongan flavonoid, kurkumin, limonoid, vitamin C, vitamin E, dan
48

59. lix
lix
katektin. Hasil tes secara in vitro dari flavonoid golongan flavones dan flavonols
telah menunjukkan adanya respon imun. Dari hasil penapisan fitokimia buah naga
berdaging merah super dapat dilihat pada tabel III, diketahui bahwa mengandung
alkaloid, flavonoid, tanin dan saponin.
Pada penelitian ini dilakukan kultur sel secara in vitro, limfosit B
diperoleh dari limfa mencit yang telah bertumor kelenjar susu. Kultur sel secara in
vitro memerlukan kondisi lingkungan yang sama dengan keadaan lingkungan
dalam tubuh sehingga proses biologis yang terjadi dalam kultur sel dapat
berlangsung mendekati keadaan sebenarnya dalam tubuh. Pendekatan terhadap
kondisi lingkungan tubuh diperoleh dengan aplikasi media pertumbuhan, pH,
serta fase gas yang sesuai untuk pertumbuhan sel. Penentuan waktu inkubasi
didasarkan pada fase siklus sel, yaitu panjang siklus sel untuk sebagian besar
kultur sel hewan adalah 15-24 jam, dengan jumlah imfosit hidup sebanyak 1x106
sel/ml, diharapkan sel limfosit akan mampu bertahan hidup melewati siklus
hidupnya dalam waktu inkubasi 72 jam.
Penggunaan variasi konsentrasi dan waktu pada percobaan ini,
dimaksudkan untuk mengetahui apakah terdapat hubungan antara peningkatan
konsentrasi ekstrak uji dengan jumlah limfosit B, serta pada waktu keberapa
jumlah yang ideal untuk pertumbuhan limfosit B. Adanya kelompok ekstrak uji
pada penelitian ini dilakukan untuk melihat adanya perbedaan antara kelompok uji
ekstrak dengan kelompok kontrol positif dan negatif sehingga efektifitas ekstrak
uji dapat diketahui.
49

60. lx
lx
Dari pengamatan jumlah limfosit B yang dibandingkan dengan waktu
inkubasi, pada inkubasi 24 jam dapat dilihat terjadi peningkatan jumlah limfosit B
pada kelompok uji 2 ppm dan 200 ppm bila dibandingkan dengan kontrol negatif,
sedangkan pada kelompok uji 20 ppm tidak terjadi peningkatan jumlah limfosit
hal ini disebabkan mungkin pada kelompok uji 20 ppm sel belum berkembang
biak dan masih beradaptasi terhadap lingkungan yang baru untuk dapat
mempertahankan hidup. Pada pengamatan limfosit B inkubasi 48 jam terjadi
peningkatan jumlah limfosit B pada kelompok uji 2 ppm, 20 ppm dan 200 ppm
bila dibandingkan dengan kontrol negatif. Sedangkan pengamatan limfosit B
pada inkubasi 72 jam terjadi penurunan jumlah limfosit B jika dibandingkan
dengan kontrol negatif hal ini disebabkan mungkin sel semakin kekurangan zat
makanan dan menyebabkan sel hidup semakin menurun karena jumlah sel yang
mulai mati.
Jumlah limfosit B dilihat dari kelompok uji yang dibandingkan dengan
waktu inkubasi dapat dilihat pada kontrol negatif pada inkubasi 72 jam terjadi
peningkatan jumlah sel jika dibandingkan dengan kontrol positif dan kelompok uji
hal ini disebabkan mungkin selama inkubasi 24 jam dan 48 jam sel belum dapat
berkembang biak dengan baik, walaupun pada inkubasi 48 jam jumlah sel
mengalami penurunan tetapi pada inkubasi 72 jam sel dapat berkembang biak
kembali. Pada ketiga kelompok uji terjadi peningkatan dan penurunan jumlah
limfosit B, pada kelompok uji 2 ppm pada inkubasi 24 dan 72 jam mengalami
peningkatan, sedangkan pada inkubasi 48 jam mengalami penurunan hal ini
disebabkan mungkin pada inkubasi 48 jam sel mengalami kekurangan makanan
50

61. lxi
lxi
yang menyebabkan jumlah sel berkurang. Pada kelompok uji 20 ppm pada
inkubasi 24, 48 dan 72 jam mengalami peningkatan jumlah limfosit B. Sedangkan
pada kelompok uji 200 ppm pada inkubasi 24 jam dan 48 jam mengalami
peningkatan jumlah limfosit B dan pada inkubasi 72 jam mengalami penurunan
jumlah sel hal ini disebabkan mungkin sel semakin kekurangan zat makanan dan
menyebabkan sel hidup semakin menurun karena jumlah sel yang mulai mati.
51

62. lxii
lxii
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
Dari hasil penelitian ini menunjukkan bahwa dari pemberian ekstrak
etanol 70% buah naga berdaging merah super (Hylocereus costaricensis Britton &
Rose) terhadap proliferasi limfosit B yang diisolasi dari limpa mencit yang
bertumor kelenjar susu pada galur C3H secara in vitro, terjadi peningkatan jumlah
limfosit B. Sedangkan hasil dari analisa ANOVA satu arah menunjukkan tidak
terdapat perbedaan yang bermakna (p > 0,05) dari jumlah limfosit pada waktu
inkubasi dengan konsentrasi, sehingga disimpulkan bahwa ekstrak etanol 70%
buah naga berdaging merah super belum dapat meningkatan jumlah proliferasi
limfosit B terhadap efek imunomudolator yang diharapkan belum dapat tercapai.
B. Saran
1. Dapat dilakukan penelitian lebih lanjut ekstrak etanol 70% buah naga
berdaging merah super (Hylocereus costaricensis Britton & Rose)
terhadap identifikasi kandungan senyawa yang terdapat pada buah naga
berdaging merah super (Hylocereus costaricensis Britton & Rose) yang
bermanfaat sebagai imunomodulator.
2. Penelitian lebih lanjut dapat dilakukan dengan meningkatkan konsentrasi
yang digunakan, sehingga dapat memiliki aktivitas sebagai
imunomodulator.
52

63. lxiii
lxiii
DAFTAR PUSTAKA
1. Baratawidjaja, K.G dan I. Rengganis. 2009. Imunologi Dasar. Edisi VIII.
Penerbit Kedokteran EGC. Jakarta. Halaman 29, 43, 528, 32, 39-40,
455-462, 98.
2. Anonim. 2006/2007. MIMS Indonesia Petunjuk Konsultasi. Halaman A62.
3. Tjay, T. dan Kirana, R. 2002, Obat-Obat Penting, Khasiat, Penggunaan
dan Efek-Efek Sampingnya. Edisi VI. Dirjen POM. Depkes RI,
Jakarta. Halaman197-198, 206-208, 212-216, 232-233.
4. Anonim. 2007. Farmakologi dan Terapi. Edisi IV. Departemen
Farmakologi dan Terapetik Fakultas Kedokteran Universitas
Indonesia. Jakarta. Halaman 686.
5. Suryaningsih, K.E. 2009. Menenal dan Mencegah Penyakit Jantung,
Kanker, dan Stroke. Kirana Publisher. Yogyakarta. Halaman 11, 33.
6. Kresno, S.B. 2001. Imunologi : Diagnosa dan Prosedur Laboratorium.
Edisi IV. Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Jakarta.
Halaman 4, 7.
7. Brooks, F.G. 2005. Mikrobiologi Kedokteran. Buku 1. Salemba Medika.
Jakarta. Halaman 167.
8. Corwin, J. Elizabeth. 2009. Buku Saku Patofisiologi. Buku Kedokteran EGC.
Halaman 140.
9. Baratawidjaja, K.G. 2006. Immunologi Dasar. Edisi VII. Fakultas
Kedokteran Universitas Indonesia. Jakarta. Halaman 50, 6, 412-418,
26.
10. Warisno dan Kres Dahana. 2010. Buku Pintar Bertanam Buah Naga di
Kebun, Pekarangan, dan Dalam Pot. PT. Gramedia Pustaka Utama.
Jakarta. Halaman 1-3, 9-13, 21.
11. Zainoldin, K.H. dan A.S.Baba. The Effect of Hylocereus polyrhizus and
Hylocereus undatus on Physicochemical, Proteolysis, and
Antioxidant Activity in Yogurt.
53

64. lxiv
lxiv
Http//www.waset.org/journals/waset/v60/v60-60.pdf. Diakses 10
Agustus 2010.
12. Anonim. 1995. Materia Medika Indonesia. Departemen Kesehatan Republik
Indonesia. Jilid VI.
13. Anonim. 1979. Farmakope Indonesia. Edisi III. Departemen Kesehatan
Republik Indonesia. Halaman 9.
14. Anonim. 2001. Sediaan Galenik. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan
Makanan. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta.
Halaman 13-14.
15. Anonim. 2001. Teknologi Ekstrak. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan
Makanan. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta.
Halaman 8, 10, 16.
16. Baratawidjaja, K.G. 2002. Immunologi Dasar. Edisi V. Fakultas Kedokteran
Universitas Indonesia. Jakarta. Halaman 4, 8, 13, 16.
17. Dalimartha, S. 2004. Deteksi Dini Kanker dan Simplisia Antikanker.
Penerbar Swadaya. Jakarta. Halaman 1, 14-15.
18. Robbins dan Cotron. 2008. Buku Saku Dasar Patologi Penyakit. EGC
Penerbit Buku Kedokteran. Jakarta. Halaman 201-202.
19. Anonim. Buku Ajar Patologi.2009. Edisi 7. Volume 1. EGC Penerbit Buku
Kedokteran. Jakarta. Halaman 117.
20. Morgan, S.J. dan Darling, D.C. 1993. Animal Cell Culture. United Kingdom.
Bios Scintific Publisher Limited. Halaman 1-2, 27-36.
21. Wu, Li-chen, dkk. 2006. Antioxidant and Antiproliferative Activities of
Red Pitaya. Food Chemistry Volume 95. Hal 319-327.
22. Anonim. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak. Direktorat Jenderal
Pengawasan Obat dan Makanan. Departemen Kesehatan Republik
Indonesia, Jakarta. Hal. 11,13.
23. Murex Purified Phytohaemagglutinin. http://lepo.it.da.ut.ee/~horak/2009-
Sarv-Horak-JAB.pdf. Diakses 19 Februari 2011.
54

65. lxv
lxv
Lampiran 1. Uji Statistik Jumlah Limfosit pada inkubasi 24 jam
1. Uji Distribusi Normal “kolmogorov-Smirnov”
One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test
jumlah limfosit B
(10^5sel/ml)
N 15
Normal Parameters
a,,b
Mean 177.67
Std. Deviation 46.745
Most Extreme Differences Absolute .180
Positive .180
Negative -.145
Kolmogorov-Smirnov Z .695
Asymp. Sig. (2-tailed) .719
a. Test distribution is Normal.
b. Calculated from data.
Kesimpulan : Hasil data signifikan (p = 0,719) lebih besar dari (p =
0,05), hasil ini menunjukkan distribusi normal.
2. Uji Homogenitas
Test of Homogeneity of Variances
jumlah limfosit B (10^5sel/ml)
Levene Statistic df1 df2 Sig.
4.390 4 10 .062
Kesimpulan : Hasil data signifikan (p = 0,062) lebih besar dari (p =
0,05), hasil ini menunjukkan bahwa varian data homogen.
55

66. lxvi
lxvi
Lampiran 1. (lanjutan)
3. Uji Deskriptif
Descriptives
jumlah limfosit B (10^5sel/ml)
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence Interval for
Mean
Minimum MaximumLower Bound Upper Bound
kontrol negatif 3 165.67 7.024 4.055 148.22 183.11 159 173
kontrol positif (PHA
20 mikroliter)
3 219.67 27.502 15.878 151.35 287.98 192 247
kelompok uji 2 ppm 3 176.67 12.662 7.311 145.21 208.12 163 188
kelompok uji 20 ppm 3 136.33 29.366 16.954 63.39 209.28 116 170
kelompok uji 200 ppm 3 190.00 88.391 51.033 -29.58 409.58 114 287
Total 15 177.67 46.745 12.070 151.78 203.55 114 287
4. Uji Anova Satu Arah
ANOVA
jumlah limfosit B (10^5sel/ml)
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 11308.667 4 2827.167 1.466 .283
Within Groups 19282.667 10 1928.267
Total 30591.333 14
Kesimpulan : Hasil data tidak signifikan (p = 0,283) lebih besar dari (p=
0,05), hasil ini menunjukkan bahwa tidak terdapat
perbedaan yang bermakna dari masing-masing kelompok.
56

67. lxvii
lxvii
Lampiran 1. (lanjutan)
5. Diagram batang jumlah limfosit B
57

68. lxviii
lxviii
Lampiran 2. Uji Statistik Jumlah Limfosit pada inkubasi 48 jam
1. Uji Distribusi Normal “kolmogorov-Smirnov”
One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test
jumlah limfosit B
(10^5sel/ml)
N 15
Normal Parameters
a,,b
Mean 177.53
Std. Deviation 46.386
Most Extreme Differences Absolute .158
Positive .158
Negative -.133
Kolmogorov-Smirnov Z .614
Asymp. Sig. (2-tailed) .846
a. Test distribution is Normal.
b. Calculated from data.
Kesimpulan : Hasil data signifikan (p = 0,846) lebih besar dari (p =
0,05), hasil ini menunjukkan distribusi normal.
2. Uji Homogenitas
Test of Homogeneity of Variances
jumlah limfosit B (10^5sel/ml)
Levene Statistic df1 df2 Sig.
1.631 4 10 .241
Kesimpulan : Hasil data signifikan (p = 0,241) lebih besar dari (p =
0,05), hasil ini menunjukkan bahwa varian data homogen.
58

69. lxix
lxix
Lampiran 2. (lanjutan)
3. Uji Deskriptif
Descriptives
jumlah limfosit B (10^5sel/ml)
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence Interval for
Mean
Minimum MaximumLower Bound Upper Bound
kontrol negatif 3 141.00 30.610 17.673 64.96 217.04 112 173
kontrol positif (PHA 20
mikroliter)
3 217.00 21.656 12.503 163.20 270.80 192 230
kelompok uji 2 ppm 3 146.33 21.385 12.347 93.21 199.46 133 171
kelompok uji 20 ppm 3 189.00 64.133 37.027 29.69 348.31 117 240
kelompok uji 200 ppm 3 194.33 51.637 29.812 66.06 322.61 145 248
Total 15 177.53 46.386 11.977 151.85 203.22 112 248
4. Uji Anova Satu Arah
ANOVA
jumlah limfosit B (10^5sel/ml)
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 12838.400 4 3209.600 1.857 .195
Within Groups 17285.333 10 1728.533
Total 30123.733 14
Kesimpulan : Hasil data tidak signifikan (p = 0,195) lebih besar dari (p=
0,05), hasil ini menunjukkan bahwa tidak terdapat
perbedaan yang bermakna dari masing-masing kelompok.
59

70. lxx
lxx
Lampiran 2. (lanjutan)
5. Diagram batang jumlah limfosit B
60

71. lxxi
lxxi
Lampiran 3. Uji Statistik Jumlah Limfosit pada inkubasi 72 jam
1. Uji Distribusi Normal “kolmogorov-Smirnov”
One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test
jumlah limfosit B
(10^5sel/ml)
N 15
Normal Parameters
a,,b
Mean 193.13
Std. Deviation 26.957
Most Extreme Differences Absolute .152
Positive .152
Negative -.089
Kolmogorov-Smirnov Z .588
Asymp. Sig. (2-tailed) .879
a. Test distribution is Normal.
b. Calculated from data.
Kesimpulan : Hasil data signifikan (p = 0,879) lebih besar dari (p =
0,05), hasil ini menunjukkan distribusi normal.
2. Uji Homogenitas
Test of Homogeneity of Variances
jumlah limfosit B (10^5sel/ml)
Levene Statistic df1 df2 Sig.
2.010 4 10 .169
Kesimpulan : Hasil data signifikan (p = 0,169) lebih besar dari (p =
0,05), hasil ini menunjukkan bahwa varian data homogen.
61

72. lxxii
lxxii
Lampiran 3. (lanjutan)
3. Uji Deskriptif
Descriptives
jumlah limfosit B (10^5sel/ml)
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence Interval for
Mean
Minimum MaximumLower Bound Upper Bound
kontrol negatif 3 205.33 37.072 21.404 113.24 297.43 176 247
kontrol positif (PHA 20
mikroliter)
3 203.00 28.618 16.523 131.91 274.09 170 221
kelompok uji 2 ppm 3 187.67 38.083 21.987 93.06 282.27 154 229
kelompok uji 20 ppm 3 198.00 12.530 7.234 166.87 229.13 185 210
kelompok uji 200 ppm 3 171.67 12.055 6.960 141.72 201.61 159 183
Total 15 193.13 26.957 6.960 178.20 208.06 154 247
4. Uji Anova Satu Arah
ANOVA
jumlah limfosit B (10^5sel/ml)
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 2281.733 4 570.433 .723 .596
Within Groups 7892.000 10 789.200
Total 10173.733 14
Kesimpulan : Hasil data tidak signifikan (p = 0,596) lebih besar dari (p=
0,05), hasil ini menunjukkan bahwa tidak terdapat
perbedaan yang bermakna dari masing-masing kelompok.
62

73. lxxiii
lxxiii
Lampiran 3. (lanjutan)
5. Diagram batang jumlah limfosit B
63

74. lxxiv
lxxiv
Lampiran 4. Skema ekstraksi etanol 70% buah naga berdaging merah super
(Hylocereus costaricensis Britton & Rose)
Buah naga berdaging
merah super segar
Dimasukkan ke dalam toples
Tambahkan etanol 70% hingga
simplisia terendam semuanya
Simpan kurang lebih
selama 24 jam
Larutan yang diperoleh dikentalkan
dengan rotary evaporator
Saring dengan kertas saring
Masukan ke dalam botol
Masukan ke dalam oven
Timbang botol
Timbang botol dan ekstrak
Timbang hingga bobot konstan
Aduk setiap 15 menit sekali
selama 6 jam
Potong, haluskan dengan blender
dan keringkan dengan freeze
drying
64

75. lxxv
lxxv
Lampiran 5. Skema isolasi limfosit dari Limpa
Mencit dibedah diambil Limpa
Diletakkan pada cawan steril berisi 5 ml medium RPMI 1640
Limpa dipegang menggunakan pinset steril
Penekanan sepanjang limpa
Suspensi sel
Dipipet sedikit demi sedikit
Dilewatkan pada nylon net steril
Memisahkan Limfosit
B dan Limfosit T
Limfosit T akan lolos
dan limfosit B
menempel di nylon net
steril
Limfosit B terlepas dari nylon net steril
dengan penambahan pH jadi 7,6 lalu
dibilas dengan aquadest steril
Limfosit B dimasukkan dalam tabung steril, tambahkan medium
RPMI 1640 sampai 2/3 volume tabung
Sentrifuge 10 menit 2000-3000rpm
Filtrat (dibuang) Endapan
Tambahkan medium RPMI 1640
sampai 2/3 volume tabung
Sentrifuge 10 menit 2000-3000rpm
Endapan Filtrat (dibuang)
Tambahkan NH4Cl (1:1) Inkubasi 30 menit
Tambahkan medium RPMI 1640 sampai 2/3 volume tabungSentrifuge 10 menit
Filtrat (dibuang) Endapan
Tambahkan medium RPMI lengkap
65

76. lxxvi
lxxvi
Lampiran 6. Skema pengujian proporsi Limfosit B
Suspensi sel dihitung dengan
Hemasitometer dijadikan 1x106
sel/ml
Dimasukkan ke dalam well 96
sebanyak 100µl tiap well
Perlakuan
Ekstrak
buah naga
200 ppm
Ekstrak
buah naga
20 ppm
Ekstrak
buah naga 2
ppm
Kontrol (+)
PHA
Kontrol (-)
100µl
suspensi sel
80µl
suspensi sel
dan PHA
20µl
80µl suspensi
sel dan
ekstrak 20µl
80µl
suspensi sel
dan ekstrak
20µl
80µl
suspensi sel
dan ekstrak
20µl
Inkubasi 24 jam, 48 jam, 72 jam
Suspensi sel dihitung dengan Hemositometer
Analisa data
66

77. lxxvii
lxxvii
Lampiran 7. Hasil Determinasi Buah Naga Merah Super (Hylocereus
costaricensis Britton & Rose)
67

78. lxxviii
lxxviii
Lampiran 8. Gambar Bahan dan Alat
Gambar 5. Buah naga berdaging merah super
(Hylocereus costaricencis Britton & Rose)
Gambar 6. Ekstrak naga berdaging merah super
(Hylocereus costaricencis Britton & Rose)
68

79. lxxix
lxxix
Lampiran 8. (lanjutan)
Gambar 7. Mencit bertumor kelenjar susu
Gambar 8. Mencit Dibedah
69

80. lxxx
lxxx
Lampiran 8. (lanjutan)
Gambar 9. Haemocytometer
Gambar 10. Freeze dry
70

81. lxxxi
lxxxi
Lampiran 8. (lanjutan)
Gambar 11. Rotary evaporator
Gambar 12. Oven
71

82. lxxxii
lxxxii
Lampiran 8. (lanjutan)
Gambar 13. Laminar Air Flow (LAF)
Lampiran 14. Mikroskop digital
72

83. lxxxiii
lxxxiii
Lampiran 9. Gambar Limpa Mencit, Pembuatan Suspensi Sel dan Limfosit B
Gambar 15. Limpa Mencit
Gambar 16. Pembuatan Suspensi Sel
73

84. lxxxiv
lxxxiv
Lampiran 9. (lanjutan)
Gambar 17. Limfosit B
Gambar 18. Limfosit B
74

85. lxxxv
lxxxv
Lampiran 10. Perhitungan Susut Pengeringan dan Rendemen Ekstrak
a. Susut pengeringan
Berat botol timbang kosong : 20,9660 g
Berat botol timbang + ekstrak : 22,9738 g (berat awal)
Berat botol timbang + ekstrak konstan : 22,7754 g (berat akhir)
(22,9738 - 20,9660) – (22,7754 - 20,9660)
(22,9738 - 20,9660)
2,0078 – 1,8094
2,0078
b. Rendemen
Serbuk simplisia : 1 kg = 1000 g
Ekstrak kering : 102,85 g
102,85 g
1000 g
Berat awal-berat akhir
Berat awal
x 100%% Susut pengeringan =
Berat ekstrak kering
Berat serbuk kering
% Rendemen x 100%
x 100% = 10,285%=
x 100%
x 100%
=
= = 9,8814%
=
75