Spektrofotometriya

1. Спектрофотометрія
доц. Сидоренко Людмила Василівна
доц. Сич Ірина Анатоліївна
КАФЕДРА ФАРМАЦЕВТИЧНОЇ ХІМІЇ
http://pharmchem.nuph.edu.ua
КАФЕДРА МЕДИЧНОЇ ХІМІЇ
http://medchem.nuph.edu.ua

2. Інформаційні джерела:
1. Фармацевтична хімія : підруч. для студентів
вищ. фармац. навч. закл. і фармац. ф-тів III-IV
рівнів акредитації / за заг. ред. проф. П. О.
Безуглого. – 2017. – 456 с.
2. Фармацевтичний аналіз : навч. посіб. для
студентів вищ. фармац. навч. закл. / за заг. ред.
В. А. Георгіянц. –2013. – 552 с.
3. Державна Фармакопея України. – 2-е вид. –2015.
– Т. 1. – 1128 с.
4. Державна Фармакопея України. – 2-е вид. – 2014.
– Т. 2. – 724 с.
5. Державна Фармакопея України. – 2-е вид. – 2014.
– Т. 3. – 732 с.
6. Збірник тестів з фармацевтичної хімії : навч.
посіб. для студентів вищ. навч. закл. / Безуглий
П. О., Гриценко І. С., Георгіянц В. А. та ін. –
2015. – 304 с.

3. План лекції
1. Використання метода спектрофотометрії у
фармацевтичному аналізі.

4. 44
Спектрофотометрія
метод, який ґрунтується на вибірковому
поглинанні електромагнітного
випромінювання сполукою, що
аналізується (або її розчином), і служить
для дослідження будови, проведення
ідентифікації, встановлення чистоти та
кількісного визначення лікарських
речовин.

5. 5
Ідентифікація.
Зробіть висновок про відповідність вимогам ДФУ за пунктом В розділу
«Ідентифікація» субстанції дифенгідраміну гідрохлориду, використовуючи
УФ-спектр поглинання.
(ДФУ) B. 50мг субстанції розчиняють у 96% спирті Р і доводять об'єм розчину тим самим
розчинником до 100.0мл. Ультрафіолетовий спектр поглинання (2.2.25) одержаного розчину в
області від 230нм до 350нм повинен мати три максимуми: за довжин хвиль 253нм, 258нм і 264нм.
Відношення оптичної густини в максимумі за довжини хвилі 258нм до оптичної густини в
максимумі за довжини хвилі 253нм має бути від 1.1 до 1.3. Відношення оптичної густини в
максимумі за довжини хвилі 258нм до оптичної густини в максимумі за довжини хвилі 264нм має
бути від 1.2 до 1.4.
610,0А253 =
720,0А258 =
560,0А264 =
)3,11,1(180,1
610,0
720,0
А
А
253
258
−== )4,12,1(286,1
560,0
720,0
А
А
264
258
−==

6. 6
Зробіть висновок про відповідність субстанції піридоксину гідрохлориду вимогам
монографії ДФУ, використовуючи УФ-спектр поглинання в 0,1М розчині
кислоти хлористоводневої.
(ДФУ) А. 1.0мл розчину S, приготованого, як зазначено в розділі "Випробування на
чистоту", доводять 0.1М розчином кислоти хлористоводневої до об'єму 50.0мл (розчин
(а)). 1.0мл розчину (а) доводять 0.1М розчином кислоти хлористоводневої до об'єму
100.0мл. Ультрафіолетовий спектр поглинання (2.2.25) одержаного розчину в області від
250нм до 350нм повинен мати максимум за довжини хвилі від 288нм до 296нм. Питомий
показник поглинання в максимумі має бути від 425 до 445. Розчин S. 2.50г субстанції
розчиняють у воді, вільній від вуглецю діоксиду, Р і доводять об'єм розчину тим самим
розчинником до 50.0мл.
2,5 г → 50,0 мл → 1,0мл → 50,0мл →1,0мл → 100,0мл
bС
А
А1
см1
⋅
=
%
%
430,0290 =А
%.
.
VVV
VVm
С% 0010
1005050
1001152100
531
42
=
⋅⋅
⋅⋅⋅
=
⋅⋅
⋅⋅⋅
= 430
10010
4300
bС
А
А1
см1 =
⋅
=
⋅
=
,
,
%
%

7. 7
Випробування на чистоту
Адреналіну тартрат (ДФУ 1.1, С.283). Випробування на
чистоту (визначення домішки адреналону) – 50,0 мг субстанції
розчиняють у 0,01 М розчині кислоти хлористоводневої і
доводять об’єм розчину тією самою кислотою до 25,0 мл.
Оптична густина одержаного розчину, виміряна за довжини
хвилі 310 нм, не має перевищувати 0,10.
OH
OH
N
H
CH3
OHH
OH
OH
N
H
CH3
O
адреналін адреналон

8. 8
Цефотаксим натрію (ДФУ 1.2, С.580).
Випробування на чистоту.
Визначення питомого показника поглинання –
від 360 до 390.
Визначення проводять у максимумі за довжини
хвилі 235 нм. 20 мг субстанції розчиняють у
воді Р і доводять тим самим розчинником до
100,0 мл. 10,0 мл одержаного розчину доводять
водою Р до 100,0 мл
УФ-спектр поглинання 0,002%
водного розчину натрію цефотаксиму
bС
А
А1
см1
⋅
=
%
%
760,0235 =А
%.
VV
Vm
С% 0020
100100
1001002,0100
31
2
=
⋅
⋅⋅
=
⋅
⋅⋅
= 380
1002,0
760,0
%
%1
1 =
⋅
=
⋅
=
bС
А
Асм
20мг = 0,02г → 100,0 мл → 10,0мл → 100,0мл

9. 9
Рибофлавін (ДФУ 1.1, С. 445).
Випробування на чистоту.
Визначення оптичної густини – розчин,
приготований для випробування “Кількісне
визначення”, розбавляють рівним об’ємом води.
Ультрафіолетовий спектр поглинання одержа-
ного розчину повинен має чотири максимуми
поглинання за довжини хвиль 223 нм, 267 нм,
373 нм і 444 нм.
Відношення оптичної густини в максимумі за
довжини хвилі 373 нм до оптичної густини в
максимумі за довжини хвилі 267 нм має бути від
0,31 до 0,33, відношення оптичної густини в
максимумі за довжини хвилі 444 нм до оптичної
густини в максимумі за довжини хвилі 267 нм
має бути від 0,36 до 0,39.
УФ-спектр поглинання
водного розчину рибофлавіну
378,0223 =А
695,0267 =А
222,0373 =А
266,0444 =А
)33,031,0(32,0
695,0
222,0
267
373
−==
А
А
)39,036,0(38,0
695,0
266,0
267
444
−==
А
А

10. 10
С
А
А см =%1
1
стст С
С
A
A
=
ст
ст
А
СА
С
⋅
=
де А і Аст
– оптичні густини досліджуваного та стандартного розчинів
відповідно;
Сст
– концентрація стандартного розчину.
100А
BСА
С
ст
ст
⋅
⋅⋅
=
де В – вміст речовини, що аналізується, у даному зразку ФСЗ у відсотках.
.

11. 11
Кількісне визначення
0,1048 г субстанції гідрокортизону ацетату розчинили у
96% спирті Р і довели об’єм розчину до 100,0 мл. 2 мл
одержаного розчину вмістили у мірну колбу ємністю 100,0 мл
і довели 96% спиртом Р до позначки. Оптична густина
одержаного розчину, виміряна при 241,5 нм становила 0,819.
Розрахуйте вміст гідрокортизону ацетату у субстанції, якщо
питомий показник поглинання становить 395.
%92,98
21048,0395
100100819,0
% %1
1
21
=
⋅⋅
⋅⋅
=
⋅⋅
⋅⋅
=
пнсм
мкмк
VmA
VVА
Х
%1
1смA
А
C =

12. 12
Розрахуйте оптичну густину розчину при визначенні рибофлавіну в субстанції
методом спектрофотометрії згідно монографії ДФУ, якщо вміст рибофлавіну в
субстанції – 99,2%, втрата в масі при висушувані – 1,0%.
(ДФУ) 65.0мг субстанції поміщають у мірну колбу коричневого скла місткістю 500мл і
суспендують у 5мл води Р. Коли субстанція цілком змочена, додають 5мл розчину
натрію гідроксиду розведеного Р і перемішують до повного розчинення. Потім додають
100мл води Р, 2.5мл кислоти оцтової льодяної Р і доводять об'єм розчину водою Р до
500.0мл. 20.0мл одержаного розчину поміщають у мірну колбу коричневого скла
місткістю 200мл, додають 3.5мл розчину 14г/л натрію ацетату Р і доводять об'єм
розчину водою Р до 200.0мл.
Оптичну густину (2.2.25) одержаного розчину вимірюють за довжини хвилі 444нм.
Вміст рибофлавіну обчислюють, використовуючи питомий показник поглинання, що
дорівнює 328.
)%()%(
% %
.
%
вологи
1
см1
розв
вологип
1
см1
2мк1мк
100mA
100КА
100VmA
100VVА
Х
−⋅⋅
⋅⋅
=
−⋅⋅⋅
⋅⋅⋅
=
4190
10002000500
110002006500328299
100VV
100VmAХ
А
2мк1мк
вологип
1
см1
,
,,
)(,,,)%(% %
=
⋅⋅
−⋅⋅⋅⋅
=
⋅⋅
−⋅⋅⋅⋅
=
К розв. = 5000

13. 13
Розрахуйте кількісний вміст нітрофуралу (фурациліну) при визначенні методом
спектрофотометрії згідно методики ДФУ, якщо оптична густина досліджуваного
розчину субстанції – 0,365, оптична густина стандартного розчину – 0,352, маса
наважки субстанції – 0,0612г, втрата в масі при висушуванні – 0,5%.
(ДФУ) 60.0 мг субстанції розчиняють у 20мл диметилформаміду і доводять об'єм
розчину водою до 500.0мл. 5.0мл одержаного розчину доводять водою до об'єму
100.0мл.
Аналогічно готують розчин порівняння із використанням 60.0 мг ФСЗ
нітрофуралу.
ст
ст
А С
С
А
×
=
%2,102
)5,0100(0,1000,5000,50612,0352,0
1001000,50600,00,1000,500365,0
)%100(
100100
%
21
21
=
−⋅⋅⋅⋅⋅
⋅⋅⋅⋅⋅⋅
=
−⋅⋅⋅⋅⋅
⋅⋅⋅⋅⋅⋅
=
вологиФСЗмкФСЗмкп
ФСЗпФСЗмкмк
VVVmA
VmVVА
Х
%2,102
)5,0100(0612,0352,0
1001000600,0365,0
)%100(
100100
% =
−⋅⋅
⋅⋅⋅
=
−⋅⋅
⋅⋅⋅
=
вологи
ФСЗ
mA
mА
Х
після скорочення

14. 14
Аналіз лікарських форм.
Розрахуйте вміст преднізолону в таблетках при визначення методом
спектрофотометрії, якщо наважка препарату – 0,0680г, оптична густина
розчину – 0,556, середня маса таблетки – 0,2510г, питомий показник
поглинання – 415, коефіцієнт розведення – 1.
(ДФ Х) 0,06-0,07 г (точна наважка) порошку розтертих таблеток поміщають в
невеликий стакан, додають 10мл метанолу і розчиняють при легкому нагріванні на
водяній бані і помішуванні скляною паличкою протягом 10 хв. Охолоджують і
декантують розчин через скляний фільтр № 3 в мірну колбу місткістю 100,0 мл з
притертою пробкою. Об’єм розчину доводять метанолом до мітки і ретельно
перемішують. Вимірюють оптичну густину отриманого розчину за довжини хвилі 242
нм в кюветі з товщиною шару 1см. Контрольний розчин – метанол.
г00494,0
1000680,0415
2510,00,100556,0
100mA
mVА
Хг
.нав
%1
см1
.табл.сер1мк
=
⋅⋅
⋅⋅
=
⋅⋅
⋅⋅
=
г00494,0
0680,0415
2510,01556,0
mA
mКА
100mA
mVА
Хг
.нав
%1
см1
.табл.сер.розв
.нав
%1
см1
.табл.сер1мк
=
⋅
⋅⋅
=
⋅
⋅⋅
=
⋅⋅
⋅⋅
=
Після скорочення

15. 15
Розрахуйте кількісний вміст кислоти ацетилсаліцилової в таблетках при
визначенні спектрофотометричним методом згідно монографії ДФУ, якщо
середня маса таблетки – 0,467г, оптична густина досліджуваного розчину –
0,528, оптична густина розчину порівняння – 0,530, маса наважки порошку
таблеток – 0,1437г, вміст кислоти ацетилсаліцилової у ФСЗ 99,70%.
(ДФУ) Абсорбційна спектрофотометрія (2.2.25, метод стандарту).
Випробуваний розчин. До точної наважки порошку таблеток, еквівалентної 0,1г кислоти
ацетилсаліцилової, додають 20мл 96% спирту. Збовтують протягом 5хв, доводять об’єм розчину
96% спиртом до 50.0мл, перемішують і фільтрують. До 2.0мл одержаного розчину додають 1мл
0.1М розчину кислоти хлористоводневої і доводять 96% спиртом до об’єму 50.0мл.
Розчин порівняння. 0.100г ФСЗ кислоти ацетилсаліцилової розчиняють у 96% спирті, доводять
об’єм розчину 96% спиртом до 50.0мл. До 2.0мл одержаного розчину додають 1мл 0.1М розчину
кислоти хлористоводневої і доводять 96% спиртом до об’єму 50.0мл. Компенсаційний розчин. 96%
спирт. Оптичну густину випробовуваного розчину і розчину порівняння вимірюють за довжини
хвилі 275нм відносно компенсаційного розчину.
Розраховують вміст кислоти ацетилсаліцилової в одній таблетці, у міліграмах, у перерахунку на
середню масу таблетки, виходячи із заявленого вмісту ФСЗ кислоти ацетилсаліцилової.
г
mA
mmА
VVVmA
mVmVVА
Хг
ФСЗтаблсерФСЗ
ФСЗмкФСЗмкпФСЗ
ФСЗтаблсерФСЗпФСЗмкмкдосл
3228,0
1001437,0530,0
70,99467,01000,0528,0
100
%
100
% ..
21
..21.
=
⋅⋅
⋅⋅⋅
=
=
⋅⋅
⋅⋅⋅
=
⋅⋅⋅⋅⋅
⋅⋅⋅⋅⋅⋅
=

16. Висновки
1.На конкретних прикладах розглянуто
застосування методу спектрофотометрії у
фармацевтичному аналізі.