Studi ini meneliti dampak stres akut dan kronis terhadap fosforilasi reseptor glukokortikoid dan aktivitas transkripsinya di otak tikus. Stres isolasi kronis selama 21 hari mengubah lokalisasi dan fosforilasi GR serta ekspresi gen CRF dan BDNF di hipokampus dan korteks prefrontal tikus. Stres gabungan lebih lanjut menunjukkan dampak stres kronis yang tidak dapat dipulihkan.

1. Acute or chronic stress induce cell compartment-
specific phosphorylation of glucocorticoid receptor
and alter its transcriptional activity in Wistar rat
brain
stres akut atau kronis menginduksi fosforilasi sel kompartemen
khusus dari reseptor glukokortikoid dan mengubah aktivitas
transkripsi dalam otak tikus Wistar
Miroslav Adzic , Jelena Djordjevic , Ana Djordjevic , Ana Niciforovic , Constantinos Demonacos , 1
Marija
Radojcic , danMarija Krstic-Demonacos 2
Penulis informasi ► catatan Pasal ► Hak Cipta dan Lisensiinformasi ►
Artikel ini telah dikutip oleh artikel lainnya di PMC.
Abstrak
Pergi ke:
pengantar
Menanggapi neuroendokrin stres dimulai dengan aktivasi hipotalamus-hipofisis-adrenal (HPA)
yang mengarah ke peningkatan hormon stres glukokortikoid (GCS). Hormon-hormon ini
memediasi adaptasi terhadap stres dan juga mengatur penghentian respon stres melalui aksi
umpan balik negatif intrinsik dan ekstrinsik pada tingkat sumbu HPA ( De Kloet & reul
1987 , Magarinos et al . 1987 , Diorio et al . 1993 ).Respon umpan balik dalam ekstrinsik HPA
struktur axis hippocampus (Hippo) dan prefrontal cortex (PFC) diatur oleh GC reseptor (GR),
yang, dengan tidak adanya hormon, berada di kompartemen sitoplasma sebagai heterocomplex
dengan heat shock protein ( Sanchez et al . 1990 ). Setelah ligan mengikat, GR memisahkan dari
heterocomplex itu, translocates dengan inti, dan mengatur ekspresi gen sasaran saraf, termasuk
downregulation dari GR sendiri. Namun, di bawah stres kronis tanggapan ini kadang-kadang
menjadi deregulasi yang mengarah ke berbagai sindrom maladaptif seperti kecemasan dan
berbagai bentuk gangguan depresi ( Sapolsky et al . 2000 ). Selain mengatur ekspresi gen sendiri,
GR juga mengontrol ekspresi gen otak lainnya, seperti hormon corticotrophin-releasing (CRH),
yang diturunkan dari otak faktor neurotropik (BDNF), dan sitokin ( Goujon et al .
1997 , Schulkin et al . 1998 , Morsink et al . 2006 ,Schulte-Herbruggen et al . 2006 ). GR
aktivitas transkripsi tergantung pada jenis sel, urutan elemen respon GC, kehadiran coactivators
atau ko-represor, dan modifikasi pasca-translasi, seperti fosforilasi ( Weigel & Moore 2007 ).
Tikus GR terfosforilasi di treonin 171 (T171), serine 224 (S224), serine 232 (S232), atau serin
246 (S246), yang semuanya terletak di domain N-terminal ( Krstic et al . 1997 ). Beberapa

2. protein kinase memfosforilasi GR di situs tertentu, termasuk c-Juni N-terminal kinase (JNK) dan
cyclin-dependent kinase (CDKs; Krstic et al . 1997 , Ismaili & Garabedian 2004 , Kino et
al 2007. ). Telah dilaporkan bahwa dalam sistem heterolog, seperti strain ragi yang membawa
homolog CDK cacat, GR pameran penurunan aktivitas transkripsi menunjukkan bahwa kinase
ini mengerahkan efek stimulasi pada GR. GR juga ditargetkan oleh glikogen sintase kinase-3
yang memfosforilasi GR di Thr171 dan fosforilasi ini terbukti menghambat transkripsi GR-
dimediasi, sedangkan MAPK (MAPK) anggota keluarga JNK dilaporkan memfosforilasi GR di
S246 dan juga memiliki efek penekanan pada fungsi GR ( Rogatsky et al . 1998 , Ismaili &
Garabedian 2004 ). GR fosforilasi selanjutnya dilaporkan terlibat tidak hanya dalam regulasi
aktivitas transkripsi, tetapi juga dalam regulasi lokalisasi dan protein stabilitas subselular yang
( Krstic et al . 1997 , Webster et al . 1997 , Rogatskyet al . 1998 , Ismaili & Garabedian
2004 , Davies et al . 2008 ).
Peran kinase disebutkan, terutama dari MAPKs, di otak terkait dengan regulasi neurotransmisi,
plastisitas sinaptik, serta konsolidasi memori ( Ortiz et al . 1995 , Banjir et al . 1998 , Grewal et
al . 1999 , Sweatt 2001). Misalnya, JNK jalur dilaporkan memainkan peran penting di berbagai
daerah otak sebagai sinyal mediator dari berbagai jenis stres fisik dan psikologis ( Meller et al .
2003 , Shen et al . 2004 ). Kemampuan JNKs untuk memfosforilasi GR tersirat peran regulasi
dalam respon stres sistem saraf pusat (CNS). Selain itu, laporan terbaru mendokumentasikan
peran salah satu anggota keluarga Cdk, Cdk5, dalam regulasi fungsi sistem saraf melalui
mekanisme GR-dependent ( Kino et al . 2007 , Cruz & Tsai 2004 ).
Sesuai dengan laporan yang disebutkan di atas dalam studi saat ini, kita dieksploitasi stres isolasi
21 hari kronis pada tikus jantan Wistar sebagai model mungkin stres maladaptif. Dalam model
ini, kami menganalisis GR lokalisasi subselular, GR fosforilasi pada serin 232 (GRS232) dan
pada serin 246 (GRS246), dan perubahan di GR, CRF, dan BDNF mRNA di atas CNS struktur
peraturan HIPPO dan PFC, yang terkait dengan peraturan umpan balik negatif GR-dimediasi
aktivitas aksis HPA. Secara paralel, perubahan ekspresi protein dari Cdk5 dan aktivator yang
P35 dan p25, serta ekspresi protein dan fosforilasi JNK1 dan JNK2 / 3, tercatat. Parameter ini
juga ditentukan pada laki-laki Wistar mengalami akut 30 menit imobilisasi diambil sebagai
'normal' respon adaptif terhadap stres. Akhirnya, perubahan dalam respon stres normal setelah
mengalami stres kronis diselidiki oleh kombinasi dari dua perlakuan yang disebutkan di atas (
'gabungan stres'). Model stres gabungan digunakan untuk menguji apakah stres kronis yang
disebabkan perubahan ireversibel, yang dapat berpotensi mengindikasikan bahwa bentuk stres
adalah maladaptif.
Pergi ke:
Bahan dan metode
perawatan hewan dan pengobatan
Semua percobaan dilakukan pada orang dewasa (berusia 3 bulan) tikus jantan Wistar (body mass
330-400 g) bertempat empat per ukuran standar kandang dengan akses ke makanan (pelet tikus
komersial) dan air ad libitum . Cahaya terus, antara 0700 dan 1900 h, dan suhu kamar (RT)
disimpan pada 20 ± 2 ° C. Semua prosedur hewan telah disetujui oleh Komite Etik untuk
Penggunaan Laboratorium Hewan dari Vinca Lembaga Ilmu Pengetahuan Nuklir, sesuai dengan
pedoman dari Uni Eropa yang terdaftar Serbia Laboratorium Asosiasi Ilmu Hewan

3. (SLASA). Untuk analisis efek stres, hewan dibagi menjadi empat kelompok: kelompok I terdiri
dari hewan tanpa tekanan (kelompok kontrol); Kelompok II hewan yang terkena imobilisasi akut
selama 30 menit; Kelompok III hewan mengalami stres isolasi kronis, dengan perumahan
mereka secara individu selama 21 hari; Kelompok IV terkena isolasi kronis selama 21 hari
diikuti oleh 30 menit imobilisasi. Semua hewan dibunuh segera setelah penghentian prosedur
stres.
assay kortikosteron
Darah dari setiap hewan dikumpulkan pada saat pembunuhan. Kortikosteron serum (CORT)
tingkat ditentukan dengan menggunakan kit OCTEIA CORT EIA sesuai dengan instruksi pabrik
(Immunodiagnostic Systems Ltd, Bolton, UK). Absorbansi pada 450 nm (referensi 650 nm)
ditentukan dengan lempeng pembaca (Wallac, VICTOR 2 1420, PerkinElmer). Konsentrasi
CORT (ng / ml) ditentukan dengan menggunakan kurva standar.
Persiapan ekstrak sitoplasma dan nuklir
Jaringan beku ditimbang dan homogen (1: 2 = jaringan mass: vol) di dingin 20 mM Tris-HCl
(pH 7 · 2) buffer yang mengandung 10% gliserol, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 2
mM dithiothreitol, dan protease inhibitor (20 mM Na 2 MoO 4 , 0 · 15 mM spermin, 0 · 15 mM
spermidin, 0 · 1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride, 5 mg / ml antipain, 5 mg / ml leupeptin, 5
mg / ml aprotinin , 10 mg / ml tripsin inhibitor, dan 3 mM Benzamidine) dan fosfatase inhibitor
(20 mM β-glycerophosphate, 5 mM Na 4 P2 O 7 × 10H 2 O, 2 mM Na 3 VO 4 , dan 25 mM NaF)
dengan 20 stroke dari Potter-Elvehjem teflon-kaca homogenizer. Sampel disentrifugasi 10 menit
pada 2000 g pada 4 ° C, supernatan disentrifugasi selama 1 jam pada 105 000 g , dan supernatan
akhir digunakan sebagai fraksi sitoplasma. Pelet dicuci di 0 · 5 ml homogenisasi penyangga, dan
disentrifugasi selama 10 menit pada 2000 g pada 4 ° C. Pelet akhir ditimbang, diresuspensi (1: 1
= massa: vol) di buffer yang sama disertakan dengan 0 · 5 M KCl, diinkubasi selama 1 jam di
kamar mandi es (dengan sering vortexing), dan disentrifugasi selama 10 menit pada 8000 g pada
4 ° C.Supernatan digunakan sebagai ekstrak nuklir ( Spencer et al . 2000 ).
deteksi barat-blot dari GR, Cdk5, dan JNK protein
Konsentrasi protein dalam fraksi sitoplasma dan nuklir ditentukan dengan metode Lowry
( Lowry et al . 1951 ). Sampel dicampur dengan denaturasi penyangga, menurut Laemmli
(1970) , rebus selama 5 menit pada 100 ° C, dan 60 mg protein menjadi sasaran elektroforesis
pada 7 · 5% SDS-PAGE. Selanjutnya, protein dipindahkan ke membran PVDF (membran
Immobilon-P, Millipore, Watford, UK) menggunakan sistem blot (Transblot, Bio-
Rad). Membran diinkubasi di antibodi primer dan sekunder yang tepat dan sinyal dikembangkan
menggunakan ditingkatkan chemiluminescence reagen (Pierce) dan terkena X-ray film (Fuji
Photofilm, Bedfordshire, UK). GR M-20 antibodi (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA,
USA) digunakan untuk mendeteksi jumlah GR (TGR) dan phospho-GR antibodi (Ser211) (Sel
Signaling, New England Biolabs, Hertfordshire, UK) digunakan untuk mendeteksi GR
terfosforilasi di S211. Anti-S246-P antibodi dibesarkan terhadap tikus terfosforilasi GR peptida
LLIDENLLpSPLAGEDDP (residu asam amino 238-254) dan kebiasaan yang dilakukan oleh
Sigma ( Davies et al . 2008 ). Anti-manusia Cdk5 dan P35 poliklonal antibodi (Santa Cruz
Biotechnology) digunakan untuk mendeteksi Cdk5 dan penggerak nya masing-masing. JNK1

4. anti-manusia / JNK2 antibodi monoklonal (BD, Biosciences, Oxford, UK) dan anti-phospho-
SAPK / JNK (Thr183 / Tyr185) antibodi poliklonal (Sel Signaling) digunakan untuk mendeteksi
JNK jumlah atau terfosforilasi masing-masing. Kelinci poliklonal anti-β-aktin (Abcam,
Cambridge, UK) digunakan untuk mendeteksi β-aktin sebagai kontrol pemuatan. Bercak
dikembangkan dengan kambing anti-mouse atau kambing anti-kelinci HRP-terkonjugasi antibodi
sekunder (Pierce). Anti-α-tubulin (Sigma) dan anti-NBS1 (GeneTex, Irvine, CA, USA) antibodi
yang digunakan untuk menganalisis kemurnian fraksi sitoplasma dan nuklir masing-
masing. Densitometri pita protein pada film X-ray dilakukan oleh Image J perangkat lunak
analisis PC. Jumlah isoform terfosforilasi relatif dari semua protein dianalisis dinormalisasi
terhadap total tingkat ekspresi mereka dan beta-aktin.
RT-PCR
RNA total diekstraksi menggunakan Trizol Reagen (Invitrogen) sesuai dengan instruksi
pabrik. Secara singkat, jaringan ditimbang dan homogen dalam 1 ml Trizol Reagen per 100 mg
jaringan menggunakan Potter-Elvehjem teflon-kaca homogenizer. Homogenat kemudian
diinkubasi pada 30 ° C selama 5 menit untuk benar-benar memisahkan kompleks
nukleoprotein. Selanjutnya, 0 · 2 ml kloroform ditambahkan dan homogenat itu dikocok dengan
kuat selama 15 s dan diinkubasi selama 3 menit pada 30 ° C. Sampel disentrifugasi pada 12
000 g selama 15 menit pada 4 ° C. Fasa air, yang mengandung RNA, dicampur dengan 0 · 5 ml
isopropanol, diinkubasi pada 30 ° C selama 10 menit, dan disentrifugasi pada 12 000 gselama 10
menit pada 4 ° C. Dihasilkan RNA pelet diresuspensi dalam 75% ethanol, disentrifugasi
(7500 g , 5 menit, 4 ° C), udara kering dan dilarutkan dalam 100 ml 0 · 1% air DEPC, dan
disimpan pada -80 ° C sampai analisis. Konsentrasi RNA ditentukan dengan mengukur
absorbansi pada 260 nm (A260) di spektrofotometer. Rasio antara nilai-nilai absorbansi pada 260
dan 280 nm digunakan untuk memperkirakan kemurnian RNA dan semua sampel memiliki A260
rasio / A280 dari 1 · 9 untuk 2. Integritas RNA dimurnikan ditentukan dengan visualisasi band
28S dan 18S rRNA setelah elektroforesis dari 2 ug RNA dari masing-masing sampel pada gel
agarosa 1 · 5%.
Untuk sintesis cDNA, High-Kapasitas cDNA reverse transkripsi Kit (Applied Biosystems)
digunakan sesuai dengan instruksi produsen. Yakni, 2 mg total RNA adalah ditranskripsi
sebaliknya menggunakan MultiScribe reverse transcriptase (50 U / ml) dengan adanya 2 Primer
ml Random, 0 · 8 ml 100 mM dNTP Mix, 1 ml RNase Inhibitor, dan 10 × RT Buffer di volume
akhir 20 ml. CDNA disimpan pada -20 ° C.
Untuk PCR, primer spesifik ( Tabel 1 ) dirancang untuk selektif memperkuat GR, CRH, BDNF,
dan β-aktin sebagai gen rumah tangga. Untuk setiap set primer, percobaan kontrol, yang terlibat
memvariasikan jumlah siklus, dilakukan untuk menentukan rentang linear untuk PCR
amplifikasi. Sebagai kontrol tambahan, PCR kurang hanya template yang dijalankan untuk setiap
set reaksi. Pengenceran yang tepat dari sampel cDNA dicampur dengan penyangga PCR yang
mengandung 0 · 2 mM dNTP, 2 mM MgCl 2 , 0 · 25 pM primer untuk GR, CRF, BDNF, dan β-
aktin, dan 2 U Taq polymerase dalam volume total 25 ml. cDNA yang diperkuat di Eppendorf
Mastercycler selama 28 siklus menggunakan ketentuan sebagai berikut: denaturasi 94 ° C / 45
s; anil 59 ° C / 1 menit (GR), 70 ° C / 1 menit (CRH), 60 ° C / 1 menit (BDNF), atau 57 ° C / 1
menit (β-aktin); ekstensi 72 ° C / 1 menit; ekstensi akhir 72 ° C / 8 menit. Produk PCR
dielektroforesis pada 2% gel agarose bersama-sama dengan Ladder MassRuler Rendah Rentang

5. DNA, 50-1500 bp (Fermentas, York, UK), dan divisualisasikan di bawah sinar uv menggunakan
ethidium bromide. Intensitas produk PCR diukur dengan gambar sistem analisis GelDoc 1000
(Bio-Rad) dan normalisasi menggunakan amplifikasi β-aktin sebagai kontrol.
Tabel 1
urutan primer spesifik digunakan untuk deteksi reseptor glukokortikoid (GR), corticotrophin-
releasing hormone (CRH), dan diturunkan dari otak faktor neurotropik (BDNF) ekspresi gen
Analisis statistik
Data disajikan sebagai mean ± SEM . dari tiga pengukuran independen sampel yang diperoleh
dari tiga kelompok yang terpisah dari lima hewan (jumlah total hewan 15 per kelompok
eksperimen). Untuk membangun perbedaan yang signifikan dalam satu jaringan di bawah stres
yang berbeda, data yang dianalisis oleh ANOVA satu arah diikuti oleh Tukey post hoc tes. Nilai
dianggap signifikan secara statistik jika P value adalah <0 · 05.
Pergi ke:
hasil
stres kronis menurunkan tingkat CORT tanpa merusak tanggap terhadap stres
akut berikutnya
Konsentrasi CORT dideteksi menggunakan CORT kit komersial ( Tabel 2 ). Pada kelompok
kontrol tikus Wistar, tingkat CORT adalah 137 ng / ml, dan berada di kisaran yang sama seperti
yang dilaporkan oleh penulis lain ( Merino et al . 2000 , Wren et al . 2002 ). Seperti yang
diharapkan, akut (30 menit) paparan intensitas tinggi stres fisik-emosional-psikologis, misalnya
imobilisasi, menghasilkan peningkatan yang signifikan pada tingkat CORT serum untuk 627 ng /
ml. Sebaliknya, isolasi kronis selama 21 hari (intensitas rendah tapi jangka panjang psikososial
stres) menyebabkan penurunan yang signifikan pada tingkat serum CORT ke 65 ng / ml sesuai
dengan laporan sebelumnya ( Sanchez et al . 1998 , Malkesman et al . 2006 ).Ketika hewan
menekankan kronis kemudian menjalani imobilisasi akut (stress yaitu gabungan), serum CORT
meningkat ke tingkat yang sama seperti yang diamati setelah stres akut ( Tabel 2 ).

6. tabel 2
Konsentrasi kortikosteron serum dalam kontrol dan menekankan hewan
stres kronis tidak mengubah GR lokalisasi subselular di HIPPO
Pengaruh stres akut dan gabungan (yang mengakibatkan tingkat CORT tinggi - lihat Tabel 2 )
pada hipokampus tingkat TGR tercermin dalam penurunan yang signifikan dalam sitoplasma dan
peningkatan nuklir TGR ( Gambar 1. D). Sebaliknya, baik tingkat protein HIPPO TGR
sitoplasma dan nuklir tidak berubah setelah stres kronis. Meskipun kita dapat mendeteksi GR di
kedua kompartemen, hasil di Gambar. 1menunjukkan bahwa tekanan akut dan dikombinasikan
diinduksi translokasi nuklir dari reseptor, sedangkan stres kronis tidak menyebabkan GR
translokasi ( Gbr. 1 ).
Gambar 1
Western-blot (WB) percobaan menunjukkan efek imobilisasi akut (A), isolasi kronis (C), atau
gabungan stres (CA) pada tingkat reseptor glukokortikoid (GR) dan phosphoisoforms dalam
sitoplasma dan inti dari hippocampus: ( A dan ...
GR fosforilasi pada S232 adalah dominan atas S246 fosforilasi independen dari
jenis stres atau kompartemen seluler
Untuk menganalisis efek stres pada fungsi GR di HIPPO, kami menganalisis statusnya fosforilasi
nya.Cyclin-dependent protein kinase (CDKs) memfosforilasi S224 dan S232 dari GR tikus,
sedangkan JNK jalur telah terbukti memfosforilasi asam amino S246. Ia telah mengemukakan
bahwa fosforilasi residu ini sangat penting dalam regulasi aktivitas transkripsi GR dan
spesifisitas gen sasaran ( Blind & Garabedian 2008 ,Davies et al . 2008 ). Pada seri berikutnya
eksperimen, kami mengamati tingkat peningkatan GRS232 fosforilasi di kedua ekstrak HIPPO
sitoplasma dan nuklir berikut tekanan akut dan kronis ( Gambar. 1 A, B panel kedua, dan
D). Pada hewan mengalami stres gabungan, GRS232 mirip dengan tingkat kontrol di kedua
kompartemen ( Gambar. 1 D). Di sisi lain, baik di tingkat GRS246 fosforilasi sitoplasma dan
nuklir lebih rendah dari kontrol di sebagian besar sampel ( Gambar. 1 A, B panel pertama, dan
D). The pGR232 / 246 rasio bertekad untuk kuantitatif membandingkan tingkat GR fosforilasi
pada S232 atau S246 ( Gambar. 1 D). Nilai rasio di atas 100% menunjukkan dominasi GRS232
fosforilasi, sementara dibawah 100% disarankan prevalensi GRS246 fosforilasi. Pendekatan ini
menunjukkan bahwa GR fosforilasi pada S232 dominan dibandingkan dengan pada S246,
independen dari jenis stres atau kompartemen seluler dianalisis. Satu-satunya pengecualian
adalah bahwa dari GR sitoplasma dalam stres gabungan, yang sama-sama terfosforilasi pada
kedua S232 dan S246 ( Gambar. 1 D). Tertinggi pGR232 / 246 rasio ditemukan pada kelompok
hewan menekankan kronis di kedua kompartemen.
Perubahan ekspresi dari Cdk5, P35, dan p25 protein dalam HIPPO

7. Tingkat ekspresi Cdk5 tidak diubah oleh salah satu dari tiga tekanan di salah satu kompartemen
sel ( Gambar. 2 ). Tingkat protein P35, penggerak Cdk5, itu nyata meningkat oleh stres kronis
dalam sitoplasma, sementara tingkat nuklirnya meningkat dengan tekanan akut dan
kronis. Selain itu, p25 protein, yang merupakan bentuk yang lebih aktif dari Cdk5 aktivator, agak
meningkat hanya di bawah stres kronis di kedua kompartemen sel ( Gambar. 2 ).
Gambar 2
Western-blot (WB) percobaan menunjukkan efek imobilisasi akut (A), isolasi kronis (C), atau
gabungan stres (CA) di tingkat Cdk5, P35 aktivator dan p25 dalam sitoplasma dan inti dari
hippocampus: (A dan B) Cdk5, P35, dan ...
JNK2 / 3 aktivitas diregulasi oleh akut dan menurunkan regulasi oleh tekanan
kronis dan dikombinasikan, sedangkan JNK1 dihambat dalam semua kondisi
stres di HIPPO
Di set berikutnya percobaan, kami menganalisis tingkat dan aktivitas JNK1 terdeteksi sebagai 46
kDa protein (tJNK1) dan JNK 2 dan 3 terdeteksi sebagai 54 protein kDa (tJNK2 dan 3, Gambar.
3 C). Percobaan ini menunjukkan bahwa tingkat ketiga protein JNK di kedua kompartemen
selular terutama tidak berubah ( Gambar. 3 C). Tingkat pJNK1 isoform dalam sitoplasma Hippo
secara signifikan dikurangi dengan ketiga tekanan dibandingkan dengan kontrol ( Gambar. 3 A
dan C), sedangkan tingkat nuklir pJNK1 isoform di HIPPO tetap tidak berubah oleh salah satu
tekanan ( Gbr. 3 B dan C). Tingkat pJNK2 / 3 secara signifikan meningkat pada sitoplasma
Hippo oleh stres akut ( Gambar. 3 A-C), sementara itu secara signifikan dikurangi dengan baik
stres kronis atau gabungan. Tingkat nuklir pJNK2 / 3 isoform berkurang oleh stres kronis ( Gbr.
3 B dan C). Rasio pJNK1 ke tJNK1 (pJNK1 / tJNK1) menunjukkan bahwa aktivitas JNK1
sitoplasma rendah di semua jenis stres ( Gambar. 3 C). Sebaliknya, rasio pJNK2 sitoplasma / 3 /
tJNK2 / 3 adalah nyata tinggi di stres akut, sementara itu rendah dalam dua tipe lain dari stres
dan dalam inti rasio ini menurun di bawah stres kronis ( Gbr. 3 C).
Gambar 3
Western-blot (WB) percobaan menunjukkan efek imobilisasi akut (A), isolasi kronis (C), atau
gabungan stres (CA) di tingkat JNKs dan phosphoisoforms mereka dalam sitoplasma dan inti
dari hippocampus: (A dan B) protein JNK (tJNK1 ...

8. Perubahan ekspresi GR itu, CRH dan BDNF gen di HIPPO
Peran terfosforilasi GR dalam regulasi ekspresi gen diuji pada gen GR-diatur yaitu, GR
( Hermann & Spencer 1998 ), CRH ( Lu & Cidlowski 2006 ), dan BDNF ( Tapia-Arancibia et
al . 2004 ) . Gen yang dipilih yang diketahui terlibat dalam regulasi dari beberapa kegiatan CNS
yang berhubungan dengan stres.GR mengatur aktivitas aksis HPA, sementara CRH dan BDNF
yang terlibat dalam modulasi pembelajaran, pengolahan memori, dan plastisitas sinaptik dari
Hippo dan PFC ( Givalois et al . 2000 , Marmigere et al . 2003 ). Seperti ditunjukkan
dalam Gambar. 4 (jalur 1), ekspresi gen GR secara signifikan menurun ketiga jenis stres dengan
perubahan dominan di bawah stres kronis. Ekspresi gen BDNF secara signifikan dihambat
bawah stres kronis, sementara gabungan dan akut tekanan tidak mempengaruhi ekspresi
sehubungan dengan kontrol. Sebaliknya, ekspresi CRH meningkat secara signifikan oleh ketiga
jenis stres.
Gambar 4
Pengaruh stres akut, kronis, dan gabungan di GR, CRH, dan BDNF ekspresi gen dalam
hippocampus tikus diukur dengan RT-PCR (A).Evaluasi semi-kuantitatif ekspresi gen dari enam
percobaan independen ditunjukkan pada (B). Data yang disajikan ...
stres kronis mempengaruhi GR lokalisasi subselular di PFC dengan cara yang
berlawanan dari tekanan akut dan dikombinasikan
Low sitoplasma dan bersamaan nuklir tingkat tinggi TGR diamati pada PFC di stres akut (yaitu
CORT tinggi) ( Gambar. 5 A, B panel ketiga, dan C). Di bawah stres kronis, tingkat protein TGR
meningkat di kedua kompartemen, sedangkan stres gabungan peningkatan ini hanya terdeteksi
dalam inti ( Gambar. 5 A-C). Analisis antarkelompok statistik menunjukkan perbedaan yang
signifikan kompartemen di tingkat protein TGR, antara stres akut atau gabungan di satu sisi dan
stres kronis di sisi lain ( Gambar. 5 C).
Gambar 5
Western-blot (WB) percobaan menunjukkan efek imobilisasi akut (A), isolasi kronis (C), atau
gabungan stres (CA) pada tingkat reseptor glukokortikoid (GR) dan phosphoisoforms dalam
sitoplasma dan inti dari prefrontal cortex: ...
PFC GR fosforilasi pada S232 adalah dominan di bawah stres kronis
Tingkat GRS232 fosforilasi sitoplasma meningkat pada tekanan kronis dan dikombinasikan
( Gambar. 5 A).Tingkat GRS232 fosforilasi nuklir meningkat pada hewan menekankan kronis
dan secara signifikan menurun pada stres gabungan ( Gambar. 5 B). GR fosforilasi pada S246
nyata meningkat dalam sitoplasma di bawah stres kronis dan sebagian besar tidak berubah

9. dengan perawatan lainnya ( Gambar. 5 A, B panel pertama, dan C). pGR232 / 246 rasio diangkat
dalam sitoplasma di tekanan akut dan gabungan, sementara dalam inti, rasio ini meningkat di
bawah stres kronis dan berkurang dalam stres gabungan.
Perubahan ekspresi Cdk5, P35, dan protein p25 di PFC
Tingkat sitoplasma dari Cdk5 dan protein P35 secara signifikan meningkat hanya dengan stres
kronis, sedangkan tingkat nuklir mereka hanya meningkat oleh stres gabungan ( Gbr. 6 ). Tingkat
sitoplasma dari p25 meningkat oleh tekanan kronis dan dikombinasikan, sementara tingkat
nuklirnya hanya meningkat sebesar stres kronis ( Gbr. 6 ). Hasil kami menunjukkan bahwa
aktivitas Cdk5 mungkin meningkat di kedua kompartemen sel di bawah tekanan kronis dan
dikombinasikan.
Gambar 6
Western-blot (WB) percobaan menunjukkan efek imobilisasi akut (A), isolasi kronis (C), atau
gabungan stres (CA) di tingkat Cdk5, P35 aktivator dan p25 dalam sitoplasma dan inti dari
prefrontal cortex: ( A dan B) Cdk5, P35, ...
Fosforilasi JNK1 dan JNK2 / 3 di kompartemen sitoplasma dan nuklir dari PFC
berkurang di bawah stres kronis
Total JNK1 dan tingkat protein JNK2 / 3 kebanyakan tidak berubah oleh jenis stres di kedua
kompartemen ( Gbr. 7 C). Kedua sitoplasma dan nuklir pJNK1 dan tingkat pJNK2 / 3 yang
menurunkan regulasi stres kronis dan tidak berubah di bawah tekanan gabungan ( Gbr.
7 C). Jelas ditingkatkan tingkat pJNK2 / 3 protein sitoplasma diamati hanya dalam kasus stres
akut ( Gbr. 7 A dan C). Rasio pJNK / tJNK menunjukkan bahwa aktivitas kedua JNK1 dan JNK2
/ 3 berkurang di bawah stres kronis di kedua kompartemen ( Gbr. 7 C), sedangkan stres akut
pada peningkatan sitoplasma pJNK2 / 3 / tJNK2 / 3 rasio diamati, menunjukkan bahwa JNK2 / 3
tapi tidak JNK1 diaktifkan dalam stres akut.
Gambar 7
Western-blot (WB) percobaan menunjukkan efek imobilisasi akut, isolasi kronis, atau stres
gabungan pada tingkat JNKs dan phosphoisoforms mereka dalam sitoplasma dan inti prefrontal
cortex (PFC). (A dan B) protein JNK (tJNK1 ...
Perubahan ekspresi GR, CRH, dan gen BDNF di PFC

10. Ekspresi gen GR di PFC itu menurunkan regulasi di bawah stres kronis. Sebaliknya, CRH dan
BDNF gen berdua diregulasi dalam kondisi stres yang sama ( Gambar. 8 A dan B jalur 2 dan
3). Menanggapi tekanan akut dan gabungan, ekspresi dari ketiga gen tidak berubah secara
signifikan, dengan pengecualian BDNF yang menurunkan regulasi dalam stres gabungan.
Angka 8
Efek akut, kronis, dan dikombinasikan menekankan pada GR, CRH, dan BDNF ekspresi gen di
korteks prefrontal tikus diukur dengan semi-kuantitatif PCR (A). Evaluasi semi-kuantitatif
ekspresi gen dari enam percobaan independen ditunjukkan pada ...
Pergi ke:
Diskusi
Telah mendalilkan bahwa respon maladaptif dari CNS ke neuroendokrin stres mungkin muncul
dari penghentian dikompromikan, yang setidaknya sebagian didasarkan pada gangguan GR
umpan balik negatif di bagian atas dari SSP. Perubahan seperti yang diamati dalam kondisi stres
kronis ( Chrousos & Kino 2007). Di masa sekarang in vivo studi, kita dieksploitasi model tikus
Wistar untuk menyelidiki stres tergantung perubahan GR kronis di HIPPO dan PFC, dua struktur
CNS dikenal untuk berpartisipasi dalam HPA axis regulasi homeostatis. Kami menganalisis stres
tergantung redistribusi GR dan aktivitas transkripsi nya setelah 21 hari isolasi sosial kronis yang
diwakili stres berpotensi maladaptif. Pada hewan mengalami stres jenis ini, kami menemukan
tingkat penurunan CORT dalam serum darah dibandingkan dengan hewan kontrol.Temuan ini
sesuai dengan data penulis lain menunjukkan HPA hypoactivity axis di Wistar tikus di bawah
kondisi yang sama ( Sanchez et al . 1998 , Malkesman et al . 2006 ). Pada kelompok hewan
terkena akut 30 menit imobilisasi ( Garcia et al . 2000 ), diterapkan baik semata-mata atau
setelah stres kronis, kami menemukan tingkat meningkat secara signifikan dari CORT
serum. Peningkatan menonjol dalam CORT setelah imobilisasi akut diharapkan, karena stres
jenis ini adalah intensitas tinggi ( Garcia et al . 2000 ).Dengan demikian, hewan dengan
pengalaman stres kronis sebelumnya tidak menunjukkan dikompromikan tanggap axis HPA
terhadap stres akut berikutnya sebagai menyimpulkan dari kadar hormon yang diamati.
Analisis tingkat protein TGR di HIPPO menunjukkan bahwa sesuai dengan 'dogma' terkenal dari
mekanisme molekuler tindakan GR ( Nishi & Kawata 2006 ), protein ini translokasi dari
sitoplasma ke kompartemen nuklir ketika tingkat CORT yang ditinggikan, yaitu di bawah stres
akut atau gabungan. Dalam kesepakatan dengan itu, di bawah stres kronis, ketika tingkat CORT
rendah, tingkat TGR dalam sitoplasma dan inti dari Hippo tetap bisa dibedakan dari
kontrol. Dengan demikian, hasil kami menunjukkan bahwa stres kronis tidak kompromi
kemampuan GR untuk menjalani translokasi nuklir pada stres akut berikutnya, yaitu ketika kadar
hormon meningkat.
Namun, di bawah stres kronis, meskipun tingkat tidak berubah dari nuklir TGR, protein ini
menunjukkan aktivitas transkripsi yang signifikan mengenai ekspresi gen sendiri, serta ekspresi
CRF dan BDNF gen, yang merupakan dua target GR terkenal lainnya ( Tapia-Arancibia et al .
2004 , Lu & Cidlowski 2006 ). Ini aktivitas TGR nuklir di bawah stres kronis adalah sebanding
dengan yang diamati di bawah stres akut, yaitu ketika tingkat CORT yang tinggi dan

11. peningkatan kadar GR ditemukan di inti. Yakni, di bawah kedua tekanan akut dan kronis,
downregulation serupa gen GR dan peningkatan regulasi gen CRH terdeteksi.Selain itu,
sementara BDNF adalah tidak berubah oleh stres akut, itu menurunkan regulasi di bawah stres
kronis. Temuan ini menyarankan bahwa aktivitas transkripsional GR tampaknya tidak diatur
sendiri oleh kadar hormon. Dalam rangka untuk menyelidiki lebih lanjut proses ini, kami
mengikuti GR Status fosforilasi yang satu tingkat penting dari kontrol dari aktivitas transkripsi
GR ( Krstic et al . 1997 , Rogatsky et al . 1998, Ismaili & Garabedian 2004 , Davies et al . 2008 )
. Secara khusus, kami dipantau GR fosforilasi pada dua asam amino GR S232 dan S246, yang
dikenal untuk dimodifikasi oleh CDK dan JNK kinase masing-masing ( Orti et al .
1992 , Krstic et al . 1997 , Webster et al . 1997 , Rogatsky et al . 1998 , Ismaili & Garabedian
2004 , Davies et al . 2008 ). Kita hipotesis bahwa pola GR fosforilasi, terutama yang dari GR
nuklir, mungkin terkait dengan gr aktivitas transkripsi pada tiga gen target belajar.
Di bawah stres kronis, kami mengamati peningkatan GR fosforilasi pada S232 di kedua
kompartemen sitoplasma dan nuklir dari Hippo, yang berhubungan baik dengan peningkatan
kadar Cdk5 protein aktivator P35 dan p25. Menimbang bahwa asosiasi Cdk5 dengan P35 serta
hubungannya dengan p25 sangat penting untuk aktivasi kinase ( Tsai et al . 1994 ), hasil kami
menunjukkan bahwa aktivitas Cdk5 dapat ditingkatkan di kedua kompartemen sel di bawah stres
kronis. Analisis lebih lanjut menunjukkan bahwa pada saat yang sama stres kronis menurun GR
fosforilasi pada S246 di kedua kompartemen sel. Penurunan tingkat GRS246 phosphoisoform
nuklir berhubungan baik dengan downregulation dari JNK2 / 3 kegiatan di bawah stres
kronis. Secara bersama-sama, hasil ini menunjukkan bahwa peningkatan GRS232 fosforilasi
mungkin setidaknya sebagian karena fosforilasi berkurang dari GR di S246, kegiatan yaitu lebih
tinggi dari Cdk5 relatif terhadap JNKs pada tingkat GR. Hal ini sesuai dengan data Ismaili &
Garabedian (2004) bahwa penurunan GRS246 fosforilasi dapat merangsang bahwa pada
GRS232. Sebagai tindakan tambahan dari status fosforilasi GR, kami bertekad GRS232 /
GRS246 rasio dan mengamati prevalensi jelas isoform GRS232 nuklir di bawah stres
kronis. Phosphoisoform GR ini mungkin penting bagi BDNF dan GR represi gen dan aktivasi
gen CRH di stres kronis di mana kadar hormon rendah. Dengan demikian, peningkatan
fosforilasi hippocampal GR di S232 dan fosforilasi yang menurun pada S246 mungkin terkait
dengan gr aktivitas transkripsi, HPA axis hypoactivity, dan dikompromikan regulasi umpan balik
negatif ( Herman & Spencer 1998 ). Hal ini penting untuk menyebutkan bahwa pola
hippocampal GR fosforilasi bawah stres kronis terbalik oleh stres akut berikutnya.
Berbeda dengan tingkat tidak berubah dari TGR di HIPPO bawah stres kronis, stres ini
disebabkan peningkatan kadar protein GR di kedua kompartemen dari PFC dan akumulasi dalam
sitoplasma. Perbedaan tersebut di respon PFC stres kronis dibandingkan dengan orang-orang dari
Hippo bisa karena jalur alternatif sinyal yang beroperasi di substruktur CNS ini ( Mizoguchi et
al . 2003 ) atau tingkat diubah / kegiatan TGR-berinteraksi protein (pendamping, kinase,
komponen proteasome, dan kofaktor lainnya). Namun demikian, di bawah stres akut atau
gabungan, distribusi kompartemen dari TGR di PFC adalah mirip dengan Hippo, yaitu GR
dipamerkan translokasi ke nukleus pada CORT peningkatan. Dengan demikian, juga di HIPPO,
GR translokasi ke nukleus dari PFC tidak terganggu oleh paparan stres kronis sebelumnya.
Demikian pula dengan temuan kami di HIPPO hewan menekankan kronis, yang TGR dalam
kompartemen nuklir PFC juga menunjukkan aktivitas transkripsi, karena ekspresi gen GR
kortikal yang dilemahkan, sedangkan ekspresi CRF dan gen BDNF adalah diregulasi. Besarnya
perubahan ini dalam ekspresi gen di PFC agak lebih kecil dibandingkan dengan yang diamati

12. pada HIPPO, yang dapat dijelaskan oleh tingkat awal yang relatif lebih rendah dari TGR di PFC
( Cerqueira et al . 2005 ). Analisis GR Status fosforilasi di PFC hewan menekankan kronis
mengungkapkan, lagi, kehadiran peningkatan kadar bentuk GRS232 terutama dalam
inti. Keberadaannya di inti berhubungan baik dengan peningkatan kadar Cdk5, serta dari P35
protein aktivator dan p25. The GRS232 nuklir menang atas phosphoisoform S246 nuklir, yang
lagi-lagi mungkin karena penurunan aktivitas JNKs. Berbeda dengan Hippo, pola kortikal GR
fosforilasi bawah stres kronis tidak terbalik oleh stres akut berikutnya, menunjukkan prevalensi
S246 fosforilasi yang berkorelasi dengan BDNF represi gen.
Singkatnya, data kami menunjukkan bahwa regulasi ekspresi gen GR, CRH, dan BDNF di
HIPPO dan PFC di bawah stres kronis tampaknya tidak secara eksklusif tergantung pada posisi
nuklir dominan protein GR ditentukan oleh tingkat CORT serum yang tinggi. Temuan ini
menunjukkan bahwa sel sinyal melalui GR fosforilasi mungkin penting khusus di bawah tingkat
GC rendah ini, yaitu rendah GR hunian dengan GCS baru-baru ini juga dilaporkan oleh Chen et
al . (2008) . Berdasarkan pengamatan ini, upaya masa depan harus diarahkan analisis rinci dari
aktivitas transkripsi dari phosphoisoforms GR individu. Secara khusus, itu akan menjadi penting
untuk memberikan lebih banyak bukti mengenai peran S232 phosphoisoform dari GR di
hypocorticism stres akibat kronis dan hypoactivity axis HPA. Dalam pandangan sinyal molekul
yang muncul dari reseptor membran sel atau yang dihasilkan secara internal misalnya dari
mitokondria harus dipertimbangkan sebagai regulator potensi aktivitas GR. Pemahaman
mekanisme yang akan membantu besar untuk pemilihan agen farmasi bertujuan untuk
memulihkan homeostasis stres terganggu kronis HPA axis.
Pergi ke:
Deklarasi bunga
Tidak ada konflik kepentingan.
Pergi ke:
pendanaan
Karya ini didukung oleh Wellcome Trust (Research Fellowship 069.024) dan Departemen Ilmu
Serbia (Grant ON143042B).
Pergi ke:
Ucapan Terima Kasih
Kami mengucapkan terima kasih atas Wellcome Trust (Research Fellowship 069.024) dan
Departemen Ilmu Serbia (Grant ON143042B) untuk dukungan keuangan dari penelitian.
Pergi ke:
Referensi

13.  Baigent SM, Lowry PJ. Ekspresi mRNA profil untuk corticotrophin releasing factor (CRF),
urocortin, reseptor CRF dan protein CRF mengikat pada jaringan tikus perifer. Journal of
Molecular Endocrinology.2000; 25 : 43-52. [ PubMed ]
 Blind RD, Garabedian MJ. Rekrutmen diferensial dari glukokortikoid reseptor phospho-
isoform gen glukokortikoid-indued. Jurnal Biologi Steroid Biokimia Molekuler. 2008; 109 :
150-157.[ PMC gratis artikel ] [ PubMed ]
 Cerqueira JJ, Pego JM, Taipa R, Bessa JM, Almeida OF, Sousa N. morfologi berkorelasi
perubahan kortikosteroid-diinduksi di prefrontal cortex perilaku tergantung. Journal of
Neuroscience. 2005; 25 : 7792-7800. [ PubMed ]
 Chen W, Dang T, Blind RD, Wang Z, Cavasotto CN, Hittelman AB, Rogatsky saya, Logan
SK, Garabedian MJ. Glukokortikoid fosforilasi reseptor berbeda-beda mempengaruhi
ekspresi gen sasaran. Molekul Endokrinologi. 2008; 22 : 1754-1766. [ PMC gratis
artikel ] [ PubMed ]
 Chrousos GP, Kino T. glukokortikoid jaringan aksi dan gangguan kejiwaan dan / atau
somatik kompleks.Menekankan. 2007; 10 : 213-219. [ PubMed ]
 Cruz JC, Tsai LH. Sebuah Jekyll dan Hyde kinase: peran untuk Cdk5 dalam perkembangan
otak dan penyakit. Opini saat di Neurobiologi. 2004; 14 : 390-394. [ PubMed ]
 Davies L, Karthikeyan N, Lynch JT, Sial EA, Gkourtsa A, Demonacos C, Krstic-Demonacos
M. Lintas bicara dari sinyal jalur dalam regulasi fungsi reseptor glukokortikoid. Molekul
Endokrinologi. 2008; 22 : 1331-1344. [ PubMed ]
 Diorio D, Viau V, Meaney MJ. Peran korteks prefrontal medial (cingulate gyrus) dalam
regulasi respon hipotalamus-hipofisis-adrenal terhadap stres. Journal of
Neuroscience. 1993; 13 : 3839-3847. [ PubMed ]
 Banjir DG, Finn JP, Walton KM, Dionne CA, Contreras PC, Miller MS, Bhat
RV. Immunolocalization dari mitogen-diaktifkan protein kinase p42MAPK dan JNK1, dan
kinase peraturan mereka MEK1 dan MEK4, pada tikus dewasa sistem saraf pusat. Journal of
Comparative Neurology. 1998; 398 : 373-392.[ PubMed ]
 Garcia A, Marti O, Valles A, Dal-Zotto S, Armario A. Pemulihan respon hipotalamus-
hipofisis-adrenal terhadap stres. Pengaruh intensitas tegangan, durasi stres dan paparan stres
sebelumnya.Neuroendocrinology. 2000; 72 : 114-125. [ PubMed ]
 Givalois L, Arancibia S, perubahan Tapia-Arancibia L. bersamaan di tingkat CRH mRNA di
hippocampus tikus dan hipotalamus berikut stres imobilisasi. Molekul Brain
Research. 2000; 75 : 166-171. [ PubMed ]
 Goujon E, Laye S, Parnet P, Dantzer R. Peraturan ekspresi gen sitokin dalam sistem saraf
pusat oleh glukokortikoid: mekanisme dan konsekuensi
fungsional. Psychoneuroendocrinology. 1997; 22 : S75-S80. [ PubMed ]
 Grewal SS, York RD, Stork PJ. Ekstraseluler-sinyal-diatur kinase sinyal pada neuron. Opini
saat di Neurobiologi. 1999; 9 : 544-553. [ PubMed ]
 Hatami H, Oryan S, Semnanian S, Kazemi B, Bandepour M, Ahmadiani A. Perubahan dari
BDNF dan NT-3 gen ekspresi dalam inti paragigantocellularis selama morfin ketergantungan
dan penarikan.Neuropeptida. 2007; 41 : 321-328. [ PubMed ]
 Herman JP, Spencer R. Peraturan hippocampal glukokortikoid transkripsi gen reseptor dan
protein ekspresi in vivo . Journal of Neuroscience. 1998; 18 : 7462-7473. [ PubMed ]
 Ismaili N, Garabedian MJ. Modulasi fungsi reseptor glukokortikoid melalui
fosforilasi. Annals of the New York Academy of Sciences. 2004; 1024 : 86-101. [ PubMed ]

14.  Kino T, Ichijo T, Amin ND, Kesavapany S, Wang Y, Kim N, Rao S, Pemain A, Zheng YL,
Garabedian MJ, et al. Cyclin-dependent kinase 5 differentially mengatur aktivitas transkripsi
dari reseptor glukokortikoid melalui fosforilasi: implikasi klinis untuk respon sistem saraf
untuk glukokortikoid dan stres. Molekul Endokrinologi. 2007; 21 : 1552-1568. [ PubMed ]
 De Kloet ER, reul JM. Tindakan umpan balik dan pengaruh tonik dari kortikosteroid pada
fungsi otak: konsep yang timbul dari heterogenitas sistem reseptor
otak. Psychoneuroendocrinology. 1987; 12 : 83-105. [ PubMed ]
 Krstic MD, Rogatsky saya, Yamamoto KR, Garabedian MJ. Mitogen-diaktifkan dan cyclin-
dependent protein kinase selektif dan berbeda-beda memodulasi peningkatan transkripsi oleh
reseptor glukokortikoid. Molekuler dan Seluler Biologi. 1997; 17 : 3947-3954. [ PMC gratis
artikel ] [ PubMed ]
 Laemmli UK. Pembelahan protein struktural saat perakitan kepala T4
bakteriofag. Alam. 1970; 227 : 680-685. [ PubMed ]
 Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ. Pengukuran protein dengan Folin fenol
reagen. Journal of Biological Chemistry. 1951; 193 : 265-267. [ PubMed ]
 Lu NZ, Cidlowski JA. Isoform reseptor glukokortikoid menghasilkan transkripsi
spesifisitas. Tren Biologi Sel. 2006; 16 : 301-307. [ PubMed ]
 Magarinos AM, Somoza G, De Nicola AF. Umpan balik dan glukokortikoid negatif reseptor
glukokortikoid setelah hippocampectomy pada tikus. Hormon dan metabolik
Penelitian. 1987; 19 : 105-109. [ PubMed ]
 Malkesman O, Maayan R, Weizman A, Weller A. Perilaku agresif dan HPA hormon axis
setelah isolasi sosial pada tikus dewasa dari dua model hewan genetik yang berbeda untuk
depresi. Perilaku Brain Research. 2006; 175 : 408-414. [ PubMed ]
 Marlier LNJL, Patacchioli FR, Przio O, Bottone A, Di Grezia R, Borboni P, Lauro R,
regulasi Angelucci L. Differential reseptor corticoid adrenal dalam hippocampus dan
sumsum tulang belakang dari tikus adrenalectomized. Journal of Neuroscience
Research. 1996; 43 : 526-534. [ PubMed ]
 Marmigere F, Givalois L, Kemarahan F, Arancibia S, Tapia-Arancibia L. Cepat induksi
BDNF ekspresi dalam hippocampus selama imobilisasi tantangan stres pada tikus
dewasa. Hippocampus. 2003; 13 : 646-655. [ PubMed ]
 Meller E, Shen C, Nikolao TA, Jensen C, Tsimberg Y, Chen J, Gruen RJ. Efek khusus
kawasan stres menahan diri akut dan diulang pada fosforilasi mitogen-diaktifkan protein
kinase. Brain Research. 2003;25 : 57-64. [ PubMed ]
 Merino JJ, Cordero MI, Sandi C. Peraturan molekul adhesi sel hippocampal NCAM dan L1
oleh pendingin ketakutan kontekstual tergantung pada waktu dan intensitas
stressor. European Journal of Neuroscience.2000; 12 : 3283-3290. [ PubMed ]
 Mizoguchi K, Ishige A, Aburada M, stres kronis Tabira T. melemahkan glukokortikoid
umpan balik negatif: keterlibatan korteks prefrontal dan
hippocampus. Neuroscience. 2003; 119 : 887-897. [ PubMed ]
 Morsink MC, Steenbergen PJ, Vos JB, Karst H, Joel M, De Kloet ER, Datson NA. Aktivasi
akut hippocampal glukokortikoid reseptor menghasilkan gelombang yang berbeda dari
ekspresi gen di seluruh waktu. Jurnal Neuroendocrinology. 2006; 18 : 239-252. [ PubMed ]
 Nishi M, Kawata M. Otak reseptor kortikosteroid dinamika dan perdagangan: implikasi dari
pencitraan sel hidup. Neuroscientist. 2006; 12 : 119-133. [ PubMed ]
 Orti E, Bodwell JE, Munck A. Fosforilasi reseptor hormon steroid. Ulasan
endokrin. 1992; 13 : 105-128.[ PubMed ]

15.  Ortiz J, Harris HW, Guitart X, Terwilliger RZ, Haycock JW, Nestler EJ. Ekstraseluler sinyal-
diatur protein kinase (ERKs) dan ERK kinase (MEK) di otak: distribusi regional dan regulasi
oleh morfin kronis.Journal of Neuroscience. 1995; 15 : 1285-1297. [ PubMed ]
 Rogatsky saya, Waase CL, Garabedian MJ. Fosforilasi dan penghambatan tikus
glukokortikoid reseptor aktivasi transkripsi oleh glikogen sintase kinase-3 (GSK-
3). Perbedaan spesies-spesifik antara manusia dan glukokortikoid tikus signaling reseptor
seperti diungkapkan melalui GSK-3 fosforilasi. Journal of Biological Chemistry. 1998; 273 :
14315-14321. [ PubMed ]
 Sanchez ER, Hirst M, Scherrer LC, Tang HY, Welsh MJ, Harmon JM, Simons SS, Ringold
GM, Pratt WB.Tikus reseptor glukokortikoid bebas hormon diekspresikan dalam sel ovarium
hamster Cina lokal dengan inti dan berhubungan dengan kedua hsp70 dan Hsp90. Journal of
Biological Chemistry. 1990; 265 : 20123-20130. [ PubMed ]
 Sanchez MM, Aguado F, Sanchez-Toscano F, Saphier D. neuroendokrin dan demonstrasi
immunocytochemical dari penurunan tanggapan sumbu hipotalamus-hipofisis-adrenal untuk
menahan diri stres setelah jangka panjang sosial isolasi. Endokrinologi. 1998; 139 : 579-
587. [ PubMed ]
 Sapolsky RM, Romero LM, Munck A. Bagaimana tanggapan glukokortikoid pengaruh
stres?Mengintegrasikan permisif, penekanan, stimulasi dan tindakan preparatif. Ulasan
endokrin. 2000; 21 : 55-89. [ PubMed ]
 Schulkin J, Gold PW, McEwen BS. Induksi kortikoliberin ekspresi gen oleh glukokortikoid:
implikasi untuk memahami negara dari rasa takut dan kecemasan dan beban
allostatic. Psychoneuroendocrinology. 1998;23 : 219-243. [ PubMed ]
 Schulte-Herbruggen O, Chourbaji S, Ridder S, Brandwein C, Gass P, Hortnagl H, Hellweg
R. tikus Stres tahan mengekspresikan reseptor glukokortikoid menampilkan ditingkatkan
BDNF dalam amigdala dan hippocampus dengan NGF tidak berubah dan fungsi
serotonergik. Psychoneuroendocrinology. 2006; 31 : 1266-1277. [ PubMed ]
 Shen CP, Tsimberg Y, Salvadore C, Meller E. Aktivasi Erk dan JNK MAPK jalur oleh stres
berenang akut di daerah otak tikus. BMC Neuroscience. 2004; 20 : 1-13. [ PMC gratis
artikel ] [ PubMed ]
 Spencer RL, Kalman BA, Cotter CS, Deak T. Diskriminasi antara perubahan ekspresi
reseptor glukokortikoid dan aktivasi di otak tikus menggunakan analisis western blot. Brain
Research. 2000; 868 : 275-286. [ PubMed ]
 Sweatt JD. The neuronal MAP kinase cascade: a biokimia sistem integrasi sinyal subserving
plastisitas sinaptik dan memori. Journal of neurokimia. 2001; 76 : 1-10. [ PubMed ]
 Tapia-Arancibia L, Kemarahan F, Givalois L, Arancibia S. Fisiologi BDNF: fokus pada
fungsi hipotalamus.Frontiers di Neuroendocrinology. 2004; 25 : 77-107. [ PubMed ]
 Tsai LH, Delalle saya, Caviness VS, Jr, Chae T, Harlow E. P35 adalah subunit peraturan
saraf-spesifik cyclin-dependent kinase 5. Nature. 1994; 371 : 419-423. [ PubMed ]
 Webster JC, Jewell CM, Bodwell JE, Munck A, Sar M, Cidlowski JA. Mouse Status
glukokortikoid reseptor fosforilasi mempengaruhi beberapa fungsi dari protein
reseptor. Journal of Biological Chemistry. 1997;272 : 9287-9293. [ PubMed ]
 Weigel NL, Moore NL. Steroid reseptor fosforilasi: modulator kunci dari beberapa fungsi
reseptor. Molekul Endokrinologi. 2007; 21 : 2311-2319. [ PubMed ]
 Wren AM, CJ Kecil, Abbott CR, Jethwa PH, Kennedy AR, Murphy KG, Stanley SA, Zollner
AN, Ghatei MA, Bloom SR. Tindakan hipotalamus dari neuromedin
U. Endokrinologi. 2002; 143 : 4227-4234.[ PubMed ]

16.  Zeng N, Athmann C, Kang T, Walsh JH, Sachs G. Peran neuropeptida-sensitif L-jenis
Ca 2+ saluran dalam pelepasan histamin di sel enterochromaffin seperti lambung. American
Journal of Physiology.Gastrointestinal dan hati Fisiologi. 1999; 277 : 1268-1280. [ PubMed ]