DNA sekensing dan hibridisasi
•Download as PPTX, PDF•
0 likes•245 views
Teknik southern blot, northern blot, dan western blot memungkinkan deteksi DNA, RNA, dan protein secara spesifik. Southern blot melibatkan pemotongan DNA, elektroforesis, transfer ke membran, hibridisasi dengan probe DNA, dan deteksi. Northern blot melibatkan isolasi RNA, elektroforesis, transfer ke membran nilon, hibridisasi dengan probe RNA, dan deteksi. Western blot melibatkan transfer protein dari gel ke membran untuk deteksi ekspresi protein menggunakan antibodi.
More Related Content
What's hot
What's hot (20)
Similar to DNA sekensing dan hibridisasi
Similar to DNA sekensing dan hibridisasi (20)
Recently uploaded
Recently uploaded (20)
DNA sekensing dan hibridisasi
- 1. DNA SEKENSING DAN HIBRIDISASI REKAYASA GENETIKA
- 2. PENDAHULUAN Blot/Blotting Teknik memindahkan atau mentransfer DNA, RNA, atau Protein ke lembaran tipis atau matriks membran. 1. Southern blot 2.Nothern blot 3.Western blot
- 3. PENGERTIAN DAN SEJARAH SOUTHERN BLOT Southern blot Sebuah metode yang sering digunakan dalam bidang biologi molekular untuk menguji keberadaan dari suatu sekuen DNA dalam suatu sampel DNA.
- 4. KOMPONEN-KOMPONEN DALAM SOUTHERN BLOT Membran nitroselulosa Tempat hasil jiplakan fragmen DNA DNA Probe
- 5. Larutan Buffer Membawa DNA dari gel dan mengimobilisasi DNA pada membran DNA Materi atau molekul yang akan diidentifikasi pada teknik southern blot Enzim restriksi Memotong DNA menjadi fragmen tertentu
- 7. Isolasi dan pemotongan DNA Fragmentasi DNA dengan elektroforesis Transfer DNA ke membran Hibridisasi DNA Deteksi DNA
- 8. Isolasi dan pemotongan DNA Tahap untuk memperoleh DNA yang dideteksi. Pemotongan DNA yang diinginkan menggunakan enzim restriksi
- 9. Fragmentasi DNA dengan elektroforesis Fragmen-fragmen dari DNA akan terpisah berdasarkan ukuran molekulnya.
- 10. Denaturasi DNA Perendaman gel Rusaknya ikatan hidrogen DNA single strand
- 11. Transfer DNA ke membran Mentransfer DNA yang diperoleh ke membran nitroselulosa.
- 12. Gel agarosa dijiplak pada membran nitroselulosa Berdasarkan prinsip kapilaritas Fragmen DNA yang telah terjiplak pada membran nitroselulosa dipanaskan pada suhu 600C dan diberikan radiasi UV.
- 13. Hibridisasi DNA Pembentukan molekul double helix Membran nitroselulosa direndam dalam larutan yang berisi probe DNA Ss
- 14. Deteksi DNA Tahap lanjutan hibridisasi DNA menggunakan probe Probe biasanya adalah DNA murni Pada tahap deteksi DNA digunakan autoradiogram
- 15. PENGERTIAN DAN SEJARAH NORTHERN BLOT Northern blot Secara umum teknik ini mirip dengan southern blot Pemisahan RNA berdasarkan ukuran dan terdeteksi pada membran menggunakan probe hibridisasi dengan urutan basa komplementer untuk semua, atau sebagian, dari urutan mRNA target
- 16. KOMPONEN-KOMPONEN DALAM NORTHERN BLOT Membran Tempat hasil jiplakan fragmen RNA dari gel agarosa formaldehid Membran nilon Probe Fragmen yang digunakan untuk hibridisasi asam nukleat Dilengkapi semua, sebagian, urutan basa komplementer dari urutan mRNA target.
- 18. TAHAP-TAHAP NORTHERN BLOT Isolasi RNA Elektroforesis Transfer ke membran dan imobilisasi Prehibridisasi dan hibridisasi dengan probe Pencucian Deteksi
- 19. Isolasi RNA Lisis dilakukan menggunakan deterjen Pemisahan pengotor dengan cara sentrifugasi Molekul nukleotida dipisahkan dari protein Penggunaan enzim DNAse Dihasilkan RNA Penggunaan larutan PCI Purifikasi RNA
- 20. Elektroforesis RNA dielektroforesis menggunakan gel agarosa formaldehida
- 21. Transfer ke membran dan imobilisasi RNA ditransfer ke membran nilon Membran nilon bermuatan positif Transfer buffer mengandung formamida Setelah RNA ditransfer ke membran, maka membran harus segera disiapkan untuk crosslink RNA dengan sinar UV.
- 22. Prehibridisasi dan hibridisasi dengan probe Memblok bagian nonspecific untuk mencegah probe yang single strand dari mengikat sembarang bagian dari membran Hibridisasi asam nukleat mensyaratkan bahwa probe ini melengkapi semua atau sebagian, dari urutan mRNA target Probe harus diberi label baik dengan isotop radioaktif (32P) atau dengan chemiluminance dimana alkali fosfatase atau horseradish peroksidase memecah chemiluminancent substrat menghasilkan emisi terdeteksi cahaya
- 24. Pencucian Untuk memastikan bahwa probe yelah terikat secara khusus dan untuk mencegah sinyal balik yang timbul Menghilangkan unhibridisasi probe, dengan larutan buffer misalnya sodium citrate
- 25. Deteksi Jika probe radiolabeled selesai digunakan, blot disimpan dalam bungkus plastik, kemudian membran di autoradiografi Radioaktivitas Non-radioaktif
- 27. DEFINISI WASTERN BLOT • Proses pemindahan protein dari gel hasil elektroforesis ke membran • Membran ini dapat diperlakukan lebih fleksibel daripada gel sehingga protein yang terblot pada membran dapat dideteksi dengan cara visual maupun fluoresensi • Deteksi ekspresi protein pada organisme dilakukan dengan prinsip imunologi menggunakan antibodi primer dan antibodi sekunder