1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 29273
(51) C12N 1/20 (2006.01)
A61K 35/16 (2006.01)
A61K 39/40 (2006.01)
МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2014/0161.1
(22) 11.02.2014
(45) 15.12.2014, бюл. №12
(72) Султанов Ахметжан Акиевич; Барамова
Шолпан Аузаровна; Оспанов Ержан
Калиолдинович; Мырзалиев Ахан Жакангерович
(KZ); Т)сіп+ан,лы Орал+ан; Мəтіхан Н,рəли
(73) Товарищество с ограниченной
ответственностью "Казахский научно-
исследовательский ветеринарный институт"
(56) Воробьев A.JI. Получение антигенов из SR, R и
L форм бруцелл и иммунных к ним сывороток для
идентификации возбудителя бруцеллеза.
Рекомендации-Алматы: КазНИВИ, 1987, с.7
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУННОЙ R-
СЫВОРОТКИ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ
ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА
БАРАНОВ
(57) Изобретение относится к области ветеринарии,
в частности к получению иммунных
диагностических сывороток и может найти широкое
применение в ветеринарной практике для
диагностики инфекционного эпидидимита баранов.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в повышении активности
и специфичности R-сыворотки при диагностике
инфекционного эпидидимита баранов.
Способ получения иммунной R-сыворотки для
диагностики инфекционного эпидидимита баранов,
включающий парентеральную иммунизацию
баранов антигеном, с последующим забором у них
крови и отделением сыворотки, донору-барану
вводят внутривенно в качестве иммунизирующего
агента инактивированный корпускулярный антиген
из производственного штамма бактерий Brucella
ovis В-0225 в дозе 100 млрд микробных клеток в
1,0 см3
и подкожно в левые и правые подлоктевые и
одновременно в паховые области в дозе по 100 млрд
микробных клеток в 1,0 см3
, после чего на 25 сут
иммунизацию повторяют в дозе по 50 млрд
микробных клеток в 1,0 см3
подкожно в левые и
правые подлоктевые, затем паховые области, и в
случае титра сыворотки в РДСК ниже 1:20
производят очередное парентеральное введение
антигена на 3 сут после крововзятия и при
получении титра сыворотки в РДСК выше 1:20
проводят полное крововзятие на 10 сут после
последней инъекции антигена и получают целевой
продукт.
(19)KZ(13)A4(11)29273

2. 29273
2
Изобретение относится к области ветеринарии, в
частности к получению иммунных диагностических
сывороток и может найти широкое применение в
ветеринарной практике для диагностики
инфекционного эпидидимита баранов.
Известен способ получения иммунной R-
сыворотки для диагностики инфекционного
эпидидимита баранов, включающий
парентеральную иммунизацию баранов антигеном, с
последующим забором у них крови и отделением
сыворотки [Воробьев А.Л. Получение антигенов из
SR, R и L форм бруцелл и имммунных к ним
сывороток для идентификации возбудителя
бруцеллеза: Рекомендации - Алматы: КазНИВИ,
1987. с.7].
Недостатком известного способа является в
необходимости изолированного содержания
иммунизированных животных от здоровых, а также
в возможной трансформации антигенной структуры
микроба в иммунном организме.
Задачей изобретения является создание способа
получения активной и специфичной иммунной R-
сыворотки для диагностики инфекционного
эпидидимита баранов.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в повышении активности
и специфичности R-сыворотки при диагностике
инфекционного эпидидимита баранов.
Способ получения иммунной R-сыворотки для
диагностики инфекционного эпидидимита баранов,
включающий парентеральную иммунизацию
баранов антигеном, с последующим забором у них
крови и отделением сыворотки, донору-барану
вводят внутривенно в качестве иммунизирующего
агента инактивированный корпускулярный антиген
из производственного штамма бактерий Brucella
ovis В-0225 в дозе 100 млрд микробных клеток в
1,0 см3
и подкожно в левые и правые подлоктевые и
одновременно в паховые области в дозе по 100 млрд
микробных клеток в 1,0 см3
, после чего на 25 сут
иммунизацию повторяют в дозе по 50 млрд
микробных клеток в 1,0 см3
подкожно в левые и
правые подлоктевые, затем паховые области, и в
случае титра сыворотки в РДСК ниже 1:20
производят очередное парентеральное введение
антигена на 3 сут после крововзятия и при
получении титра сыворотки в РДСК выше 1:20
проводят полное крововзятие на 10 сут после
последней инъекции антигена и получают целевой
продукт.
Для получения иммунной R - сыворотки для
диагностики инфекционного эпидидимита баранов
используют штамм Brucella ovis В-0225, который
хранится в коллекции Лаборатории генофонда
микроорганизмов ТОО «Казахский научно-
исследовательский ветеринарный институт»
(КазНИВИ).
Штамм характеризуется следующими
признаками:
Происхождение штамма бактерий. Штамм
бактерий получен из крови барана производителя в
2012 году, Республика Казахстан и выделен из
организма на питательной среде - мясо-пептонный
агар, мясо-пептонный бульон, эритрит агар.
Идентифицирован по определителю бактерий
Bergey,s Manual of Systematic
Bacterology/Departament of Microbiology and
Molecular Genetics Michigan State University: USA,
2005, Part C, p.370-386.
Назначение штамма бактерий. Штамм
эпизоотический для приготовления диагностических
препаратов.
Состав среды и условия культивирования.
Панкреатический гидролизат кильки, натрия
хлорид, тиамин-бромид, глюкоза, глицерин,
эритрит, агар-агар, дрожжевой экстракт, L-цистин.
Т°+37-38°С.
Морфолого-культуральные свойства.
Вегетативные клетки растут на эритрит агаре с
добавками, Т°+36-37,5°С, в течение 48 часов в
термостате с содержанием 10% СО2.
Овоиды, длиной 0,7 - 1,2 мкм, шириной
0,5 - 0,7 мкм, неподвижные, очертания концов
округлые, по Граму не окрашиваются,
окрашиваются по методу Козловского, не
кислотоустойчивы, тип размножения деление,
специализированные клетки не образуют.
Размер колоний 0,2-3,0 мм, круглые, менее
выпуклые, часть колонии не правильно
контурированные, R-форма, колоний плотные,
гладкие.
Рост в жидкой среде - вызывает помутнение
МПБ в течение суток, в дальнейшем хлопчатый
осадок и зона просветления над осадком.
Физиолого-биохимические свойства.
Принадлежность к трофической группе:
хемоорганотроф. Типы катабализма: аэроб.
Симбиотрофные отношения: внутриклеточный
паразитизм, фагом Тб не лизируется. Источники
углерода: глюкоза, глицерин. Источники азота:
гидролизат животных белков. Источники серы:
цистин.
Другие характерные физиологические
особенности обмена: дифференцирующие и
диагностические ферменты каталаза, не образует
сероводород и индол, не разжижает желатин, не
свертывает молоко, не разлагает сахарозу, лактозу,
глюкозу, манит, дульцит, сорбит, мочевину, не
редуцирует нитраты и нитрит, не лизирует
эритроциты, не образует ацетилметилкарбинол.
Маркерные признаки штамма. Растет на средах с
пенициллином, находится в стабильной R-форме,
обладает каталазной активностью.
Способ, условия и состав сред для хранения.
Эпизоотический штамм Brucella ovis В-0225 хранят
в сухом виде в запаянных под вакуумом ампулах
при температуре от 4 до 6°С. Пересев нативных
культур проводят один раз в 3-4 месяца.
Предлагаемый способ осуществляется
следующим образом.
Способ получения иммунной R- сыворотки к
инактивированному овисному антигену
осуществляется следующим образом.
Пример 1. Предварительно получают антиген для
иммунизации, который представляет собой

3. 29273
3
стерильную, серо-белого цвета инактивированную
взвесь Brucella ovis В-0225 в физиологическом
растворе хлористого натрия.
При этом штамм бактерий Brucella ovis В-0225
по своим свойствам должен отвечать паспортным
данным.
После 3-4-сут роста на соответствующей
питательной среде бактериальную массу смывают
стерильным физиологическим раствором (рН=7,0-
7,2) из расчета 25,0-30,0 см3
на одну колбу
Тартаковского и доводят концентрацию бруцелл до
100 млрд микробных тел в 1,0 см3
по бруцеллезному
стандарту мутности. Затем сливают через двойной
марлевый фильтр и прогревают на водяной бане при
температуре 70°С в течение 60 минут или 30 минут
при температуре 80°С. Антиген проверяют на
чистоту, стерильность микроскопически и путем
высева на питательные среды.
Для чего стерильной стеклянной пипеткой
проводят посев по 0,2 - 0,3 см3
на мясо-пептонный
бульон, мясо-пептонный агар, эритрит агар,
печеночный глюкозо-глицериновый агар, мясо-
пептонный печеночный бульон под вазелиновым
маслом и агар Сабуро в пробирках.
Посевы выдерживают в термостате в течение
10 сут при температуре 37°С и на агаре Сабуро при
24°С. Посевы должны оставаться стерильными в
течение в течение всего срока наблюдения.
При отсутствии посторонней микрофлоры
приготовленный антиген считается пригодным для
иммунизации животных. Хранится антиген в
холодильнике при температуре 4°С.
Пример 2. В качестве продуцентов отбирают
здоровых, имеющих среднюю упитанность баранов,
в возрасте от 1 до 5 лет, а в качестве
иммунизирующего агента используют
инактивированный корпускулярный антиген из
производственного штамма бактерий Brucella ovis
В-0225, который вводят внутривенно в дозе
100 млрд микробных клеток в 1,0 см3
и подкожно в
левые и правые подлоктевые и одновременно в
паховые области в дозе по 100 млрд микробных
клеток в 1,0 см3
, после чего на 25 сут иммунизацию
повторяют в дозе по 50 млрд микробных клеток в
1,0 см3
подкожно в левые и правые подлоктевые,
затем паховые области, и в случае титра сыворотки
в РДСК ниже 1:20 производят очередное
парентеральное введение антигена на 3 сут после
крововзятия, при получении титра сыворотки в
РДСК выше 1:20, полное крововзятие проводят на
10 сут после последней инъекции антигена и
получают целевой продукт.
По предлагаему способу введения антигена
активность полученной R-сыворотки в РДСК
составляет 1 : 320.
После внутривенной однократной иммунизации
животных обеспечивается ускорение процесса
получения и снижение себестоимости препарата за
счет активизации процесса генерации
специфических антител благодаря быстрому
распространению иммунизирующего агента током
крови и доставке его к органам, ответственным за
выработку антител и снижения расхода культуры и
питательных сред на процесс иммунизации.
Подкожное введение антигена в левые и правые
подлоктевые, паховые области организма
способствует вовлечению большего числа
лимфоидных органов в иммунологический процесс.
Для быстрого нарастания титра антител и
создания вторичного иммунного ответа вводим
бустердозу этого антигена. Поэтому с целью
стимулирования клеток памяти через определенный
промежуток времени (25 сут) вводим антиген в дозе
50 млрд микробных клеток в 1,0 см3
.
Использование убитого нагреванием антигена
позволяет сохранить биологические свойства, а
также приготовить его впрок.
Предложенный способ получения иммунной R-
сыворотки позволяет изготовить активный и
специфичный препарат, который может быть
использован для контроля серологических реакций
при исследовании сывороток на инфекционный
эпидидимит баранов.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ получения иммунной R-сыворотки для
диагностики инфекционного эпидидимита баранов,
включающий парентеральную иммунизацию
баранов антигеном, с последующим забором у них
крови и отделением сыворотки, отличающийся
тем, что донору-барану вводят внутривенно в
качестве иммунизирующего агента
инактивированный корпускулярный антиген из
производственного штамма бактерий Brucella ovis
В-0225 в дозе 100 млрд микробных клеток в 1,0 см3
и подкожно в левые и правые подлоктевые и
одновременно в паховые области в дозе по 100 млрд
микробных клеток в 1,0 см3
, после чего на 25 сут
иммунизацию повторяют в дозе по 50 млрд
микробных клеток в 1,0 см3
подкожно в левые и
правые подлоктевые, затем паховые области, и в
случае титра сыворотки в РДСК ниже 1:20
производят очередное парентеральное введение
антигена на 3 сут после крововзятия и при
получении титра сыворотки в РДСК выше 1:20
проводят полное крововзятие на 10 сут после
последней инъекции антигена и получают целевой
продукт.
Верстка Ж. Жомартбек
Корректор К. Нгметжанова