Download to read offline
28903ip
- 1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН (19) KZ(13) A4 (11) 28903 (51) A61K 39/12 (2006.01) C12N 7/00 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ (21) 2013/1283.1 (22) 30.09.2013 (45) 15.09.2014, бюл. №9 (72) Сансызбай Абылай Рысбайулы; Баракбаев Кайнар Базаркулович; Абдураимов Ергали Орынбасарович; Булатов Ербол Акенович; Кондибаева Жанат Буркитбаевна; Таранов Дмитрий Сергеевич; Ершебулов Закир Джапарович; Аманова Жанат Темирбаевна; Саметова Жанна Жумабековна (73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения "Научно- исследовательский институт проблем биологической безопасности" Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан (56) RU 2406535 C1, кл. А61K 39/295, А61Р 31/12, 2010 (54) СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ АССОЦИИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ЧУМЫ МЕЛКИХ ЖВАЧНЫХ ЖИВОТНЫХ И ОСПЫ ОВЕЦ (57) Изобретение относится к области ветеринарии и биотехнологии, в частности к применению вакцинных препаратов для одновременной специфической профилактики чумы мелких жвачных животных (ЧМЖЖ) и оспы овец в угрожаемых и неблагополучных зонах. Предлагаемый способ предусматривает культивирование вирусов ЧМЖЖ и оспы овец в одной системе, определение продолжительности культивирования, подбор оптимальной стабилизирующей среды, изучена иммунизирующая доза, а также продолжительность иммунитета у животных. (19)KZ(13)A4(11)28903
- 2. 28903 2 Изобретение относится кобласти ветеринарии и биотехнологии, в частности к приготовлению вакцинных препаратов для одновременной специфической профилактики чумы мелких жвачных животных (ЧМЖЖ) и оспы овец. Известен патент на изобретение (RU 2406535C1, кл A61K 39/295, A61P 31/12, 2010, Балышева В.М., Калантаенко Ю.Ф., Горшкова Т.Ф., Парилова С.В. г. Покров, ГНУ ВНИИВВиМ - 2009) по теме «Ассоциированная вакцина против оспы овец и чумы мелких жвачных животных» в которой описывается изготовление ассоциированной вакцины против оспы овец и чумы мелких жвачных животных. В работе использовали культуральные вакцинные штаммы Б/5-96 вируса оспы овец и 45G37/35-K вируса чумы мелких жвачных животных с активностью не менее 4,5 lg ТЦЦ50/см3 . Указанные штаммы выращивают в первичных культурах клеток почки ягненка (ПЯ) и перевиваемых культурах клеток почки овцы (ПО) и гонады козы (ГК). В качестве стабилизатора используют (лактоза - 4,0%, пептон - 20,0%) и (сахароза - 10,0%, желатин - 2,0%). Вакцина обладает высокой иммуногенностью и ареактогенностью, безвредна и стабильна при хранении. Вирусвакцины против оспы овец и чумы мелких жвачных безвредны для овец и коз, создают напряженный иммунитет на 7 и 21 сутки соответственно, продолжительностью не менее 12 месяцев. Прививная доза каждого штамма составляет не менее 1000 ТЦД50. Недостатками Российской вакцины является раздельное культивирование вирусов, что увеличивает срок наработки вируссодержащей суспензии, а также большой процент содержания стабилизирующих компонентов при составлении вакцины. Данное изобретение включает в себя разработку параметров совместного культивирования вируса ЧМЖЖ и оспы овец в культуре клеток, а также составление ассоциированной вакцины пригодной для профилактических целей в ветеринарии. Результаты, полученные в ходе выполненной работы, будут внедрены в ветеринарную практику для одновременной профилактики против двух инфекций. Отличительной особенностью от российской вакцины заключается в использовании вакцинных штаммов «НИСХИ» вируса оспы овец и штамма «G-45MK» вируса ЧМЖЖ. Указанные штаммы культивируют совместно с одномоментным заражением культуры клеток тестикулы ягнят (ТЯ), срок культивирования составляет 7 сут. Использование пептоно-лактозового стабилизатора в низкой конечной концентрации 3,0-2,0% соответственно. Прививная доза составляет 500- 1000 ТЦД50. Разработка вакцины связана с внедрением отечественных препаратов против ЧМЖЖ и оспы овец для иммунизации овец и коз в Республике Казахстан. Внедрение данной вакцины в Республике Казахстан является актуальной задачей, решение которой позволит ввести в ветеринарную практику новое средство профилактики против данных инфекций, а также для одновременной профилактики чумы мелких жвачных животных и оспы овец. Способ выполняется следующим образом: Для изготовления ассоциированной вакцины использовали штамм «G-45MK» вируса ЧМЖЖ и штамм «НИСХИ» вируса оспы овец с инфекционной активностью не менее 5,66 lg ТЦД50/см 3 . Культивирование вирусов проводили в культуре клеток тестикулы ягнят (ТЯ), выращенные в матрасах стационарным методом. Монослой вышеуказанной культуры клеток инфицировали с одномоментным внесением вируса ЧМЖЖ и оспы овец в дозе 0,01 ТЦД50/кл и выдерживали при температуре 37°С в течение 1 часа, для контакта монослоя с вирусом. После контакта монослоя с вирусом в матрасы (сосуды) с культурой клеток вносили поддерживающую среду ПСП с содержанием 2% инактивированной сыворотки КРС и культивировали в течение 7 сут. Ежедневно проводили визуальный контроль под световым микроскопом для обнаружения характерных деструктивных изменений в монослое клеток. По достижению цитопатического действия в монослое культуры клеток 75-90% матрасы замораживали в низкотемпературном холодильнике при минус 20°С в течении 18-20 час. Оттаивание проводили при комнатной температуре. Полученную вируссодержащую суспензию использовали для определения биологической активности, стерильности и приготовления ассоциированной вакцины. Биологическую активность вирусов ЧМЖЖ и оспы овец в полученных пробах определяли титрованием в культуре клеток ТЯ, по общепринятой методике с использованием специфических сывороток к данным вирусам. Титром вируса, считали наибольшее его разведение, вызывающее ЦПД в культурах клеток, который вычисляли по Reed I.J., Muench Н.А. Стерильность полученной ассоциированной культуральной суспензии определяли путем высева в пробирки, содержащие такие бактериологические среды, как: мясопептонный бульон, мясопептонный агар, Сабуро (жидкое и твердое). Посевы выдерживали в термостате при (37+0,5)°С в течение 14 дней. Стерильными считали культуральные суспензии, высевы которых не давали роста посторонней микрофлоры. При изготовлении ассоциированной вакцины против ЧМЖЖ и оспы овец необходимо приготовить стабилизирующий раствор. Для приготовления 1 дм3 стабилизирующей среды необходимо в 500 см3 деминерализованной воды растворяют 60 г пептона и 500 см3 деминерализованной воды 40 г лактозы. После растворения обоих компонентов растворы объединяют в одной емкости, тщательно перемешивают, доводят pH до 7,3-7,4 добавлением 10% раствора гидроксида натрия (NaOH). Сосуды с раствором закрывают ватно-марлевыми пробками, двукратно стерилизуют текучим паром (100 ± 1)°С
- 3. 28903 3 по 30 мин(промежуток между стерилизациями 18- 20 ч.), полученную стабилизирующую среду до использования сохраняют при температуре (4 ± 1)°С в течение 30 сут. При лиофильном высушивании ассоциированную вирусную суспензию объединяли в соотношениях 1:1 со стабилизирующими средами, с добавлением антибиотиков из расчета 500 000 ЕД пенициллина, 0,5 мг стрептомицина и 25 000 ЕД нистатина на 1 дм3 вакцинной жидкости (ВЖ). После контакта с антибиотиками на протяжении 12 часов при плюс 4°С ассоциированную вакцинную жидкость розливали в ампулы по 2 см3 и лиофилизировали в сублимационной установке. Продолжительность иммунитета у вакцинированных животных составляет не менее 12 мес. при иммунизирующей дозе от 500-1000 ТЦЦ50. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ изготовления ассоциированной вакцины против чумы мелких жвачных животных и оспы овец, включающий внесение штамма вируса, культивирование, отличающийся тем, что используют штамм « G-45 МК» вируса чумы мелких жвачных животных и штамм «НИСХИ» вируса оспы овец, культивирование проводят в культуре клеток тестикулы ягнят при дозе заражения 0,01 ТЦД50/кл, длительность культивирования составляет 7 сут, при этом инфекционная активность составляет не менее 5,66 lg ТЦД50/см 3 , а при лиофилизации используют пептоно-лактозовые стабилизирующие добавки. Верстка Ж. Жомартбек Корректор Е. Барч