Download luận văn đồ án tốt nghiệp với đề tài: Nghiên cứu đa dạng sinh học của Hải miên (Porifera) tại Đảo Cồn Cỏ, tỉnh Quảng Trị, cho các bạn tham khảo

1. Nghiên cứu đa dạng sinh học của Hải miên (Porifera) tại Đảo Cồn Cỏ, tỉnh
Quảng Trị
LÊ THÀNH LONG

2. LỜI CẢM ƠN
Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành và sâu sắc tới TS. Trần Mỹ Linh, người đã
tận tình hướng dẫn, chỉ bảo, giúp đỡ và hỗ trợ tôi trong suốt quá trình học tập,
nghiên cứu và hoàn thành tốt luận văn này.
Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ths. Phan Minh Tuấn và các cán
bộ Phòng Phát triển Công nghệ y sinh, Trung tâm Phát triển công nghệ cao, Viện
Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam đã t ận tình giúp đỡ và hỗ trợ tôi trong
suốt thời gian thực hiện đề tài.
Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn tới các cán bộ Phòng tài nguyên sinh vật và
Phòng nghiên cứu cấu trúc, Viện Hóa sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học và Công
nghệ Việt Nam đã nhiệt tình giúp đỡ tôi trong thời gian thu thập số liệu và vật liệu
nghiên cứu để thực hiện luận án.
Nhân dịp này tôi cũng xin bày tỏ lòng biết ơn tới các thầy cô, bạn bè và gia
đình đã chỉ dẫn và giúp đỡ tôi trong suốt thời gian qua.
Xin chân thành cảm ơn.
Hà Nội, ngày tháng 1 năm 2016
Học viên
Lê Thành Long

3. MỤC LỤC
LỜI CẢM ƠN
MỤC LỤC
MỞ ĐẦU ....................................................................................................................1
CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU..................................................................3
1.1 Giới thiệu chung về hải miên............................................................................... 3
1.2 Đặc điểm cấu tạo và sinh lý ..................................................................................4
1.3 Đặc điểm sinh sản và phát triển ............................................................................6
1.4 Đa dạng sinh học của hải miên .............................................................................6
1.4.1 Hệ thống phân loại hải miên ............................................................................. 6
1.4.2 Tình hình nghiên cứu về đa dạng sinh học và phát sinh chủng loại của hải
miên............................................................................................................................ 7
1.5 Chỉ thị trong đánh giá đa dạng sinh học..............................................................12
1.6 Các chỉ thị DNA trong đánh giá đa dạng sinh học hải miên.............................. 14
CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.......................16
2.1 Vật liệu............................................................................................................... 16
2.1.1 Đối tượng nghiên cứu ..................................................................................... 16
2.1.2 Hóa chất .......................................................................................................... 16
2.1.2 Trang thiết bị................................................................................................... 17
2.2 Phương pháp nghiên cứu.................................................................................... 18
2.2.1 Phương pháp xử lý mẫu nghiên cứu ............................................................... 18
2.2.2 Phương pháp tách DNA tổng số từ hải miên .................................................. 18
2.2.3 Phương pháp PCR........................................................................................... 19
2.2.4 Phương pháp điện di kiểm tra kết quả ............................................................ 20
2.2.5 Phương pháp xử lý trình tự nucleotide........................................................... 20
CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN.........................................................23
3.1 Kết quả tách chiết DNA tổng số ........................................................................ 23
3.2 Kết quả PCR và xác định trình tự các đoạn DNA chỉ thị .................................. 24
3.3 Phân tích đa dạng di truyền của các mẫu hải miên nghiên cứu ......................... 25
3.4 Cây phát sinh chủng loại.................................................................................... 30
CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ.........................................................32
4.1 Kết luận .............................................................................................................. 32
4.2 Kiến nghị............................................................................................................ 32
TÀI LIỆU THAM KHẢO ......................................................................................33
PHỤ LỤC.................................................................................................................36

4. CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÍ HIỆU
CTAB Cetyl Trimethyl Amoni Bromid
DNA Deoxyribonucleic acid
rDNA 18S Gen ribosome DNA 18S
ETDA Ethylenediamine tetraacetic acid
PCR Polymerase Chain Reaction
RAPD Random Amplified Polymorphism DNA
RFLP Restriction fragment length polymorphism
RNA Ribonucleic acid
TAE Tris Acetate EDTA
Taq Thermus aquaticus
Tm Nhiệt độ nóng chảy (Melting Temperatures)
UV Ultraviolet (light)

5. DANH MỤC BẢNG
Bảng 1.1: So sánh một số đặc điểm cấu tạo giữa các lớp hải miên ........................... 7
Bảng 1.2: Số lượng loài hải miên qua các nghiên cứu tại Việt Nam....................... 11
Bảng 2.1: Danh sách mẫu hải miên.......................................................................... 16
Bảng 2.2: Danh sách mẫu hải miên.......................................................................... 17
Bảng 2.3: Thành phần cho phản ứng PCR với thể tích 25µl ................................... 19
Bảng 2.4: Chu trình nhiệt phản ứng PCR ................................................................ 20
Bảng 2.5: Danh sách trình tự của một số các loài hải miên lưu trữ trên ngân hàng
Genbank ................................................................................................................... 21
Bảng 3.1: Độ tương đồng (%) giữa trình tự nucleoitde của các mẫu hải miên nghiên
cứu và các trình tự tham khảo tương ứng ................................................................ 25

6. DANH MỤC HÌNH
Hình 1.1: Sơ đồ các kiểu cấu tạo cơ thể của hải miên ............................................... 5
Hình 1.2: Sơ đồ Khu vực nghiên cứu tại Đảo Cồn Cỏ ............................................ 12
Hình 3.1: Kết quả điện di DNA tổng số của mẫu Hải miên .................................... 23
Hình 3.2: Ảnh điện di sản phẩm PCR mẫu hải miên bằng mồi 18S........................ 24
Hình 3.3: Trình tự gen 18S mẫu hải miên................................................................ 27
Hình 3.4: Cây phát sinh chủng loại của 6 mẫu hải miên và các trình tự tham khảo
dựa vào đoạn DNA chỉ thị trên rDNA 18S.............................................................. 30

7. 1
MỞ ĐẦU
Ngành Porifera (được Grant phân loại năm 1836), tên thường gọi là hải
miên, là một trong những loài động vật biển có độ đa dạng cao nhất đồng thời đóng
vai trò quan trọng trong hệ sinh thái biển. Đặc biệt, hải miên được đánh giá là nhóm
sinh vật biển chứa nhiều hợp chất mới mang các hoạt tính sinh học liên quan y -
dược như chống ung thư, hỗ trợ điều trị thần kinh, tăng khả năng miễn dịch, giảm
đau, kháng virus, kháng vi sinh vật, vi khuẩn lao...
Việt Nam có nguồn tài nguyên sinh vật biển phong phú, đặc biệt là các loài
hải miên. Tuy nhiên, chỉ có một số ít nghiên cứu về hải miên ở biển Việt Nam liên
quan tới thành phần loài và phân bố của hải miên tại các vùng biển thuộc vịnh Nha
Trang và vịnh Hạ Long. Gần đây, các nghiên cứu về thành phần hóa học của một số
loài hải miên tại biển Việt Nam đã phân lập được nhiều hợp chất có cấu trúc mới và
nhiều hoạt chất có giá trị. Mặc dù vậy, hướng nghiên cứu về hải miên còn khá mới
mẻ, đáng chú ý là chưa có nghiên cứu nào ở mức độ sinh học phân tử hay đánh giá
đa dạng di truyền đối với hải miên ở biển Việt Nam. Từ trước tới nay, nghiên cứu
đa dạng loài hải miên mới dừng ở đa dạng hình thái. Số lượng loài hải miên tại Việt
Nam khá nhiều, nhiều loài có hình thái tương đối giống nhau; do vậy, các nghiên
cứu đánh giá đa dạng hải miên ở cấp độ sinh học phân tử sẽ góp phần tìm hiểu và
phát triển tiềm năng ứng dụng của hải miên. Do đó, vấn đề cấp thiết hiện nay là
phải phát huy được những giá trị và tiềm năng ứng dụng của hải miên bằng các
nghiên cứu thích hợp và có hệ thống.
Khu vực nghiên cứu được lựa chọn là Khu bảo tồn biển đảo Cồn Cỏ thuộc
tỉnh Quảng Trị. Đây là khu vực biển được đánh giá là một trong những vùng có
mức độ đa dạng sinh học biển khá cao ở Việt Nam, trong đó nhóm hải miên xuất
hiện phong phú cả về số lượng và thành phần loài.
Trên cơ sở đó, luận văn “Nghiên cứu đa dạng sinh học của Hải miên
(Porifera) tại Đảo Cồn Cỏ, tỉnh Quảng Trị” được thực hiện. Luận văn này có
mục tiêu bước đầu nghiên cứu phát triển các chỉ thị sinh học phân tử nhằm đánh giá
đa dạng di truyền và đa dạng sinh học, góp phần hỗ trợ cho việc định loài một số
mẫu hải miên thu thập được ở tại Đảo Cồn Cỏ, tỉnh Quảng Trị.

8. 2
Nội dung của luận văn gồm:
1. Tách chiết DNA tổng số từ các mẫu hải miên nghiên cứu.
2. Tối ưu hóa các điều kiện PCR để nhân dòng các đoạn DNA chỉ thị.
3. Đánh giá đa dạng di truyền của các mẫu hải miên nghiên cứu.

9. 3
CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.1 Giới thiệu chung về hải miên
Ngành Porifera (được Grant phân loại năm 1836), tên thường được gọi là hải
miên hay bọt biển, được tìm thấy trong hầu hết các môi trường nước, tuy nhiên, hải
miên sinh sống phổ biến và đa dạng nhất trong môi trường biển. Theo Van Soest và
cộng sự, 2016, có 8701 loài hải miên được ghi nhận [20], được phân loại thành 4
lớp, trong đó lớp Demospongiae (được Sollas phân loại năm 1885) là lớp đa dạng
nhất, chiếm 80% số loài hải miên được biết cho tới nay. Hải miên được coi là động
vật đa bào chưa hoàn thiện (Parazoa). Hải miên là nhóm động vật sống bám, tuy
vậy một số loài có khả năng vận động nhờ vào tế bào chất hay roi. Màu sắc, hình
dạng, kích thước cơ thể các loài hải miên rất đa dạng: loài bé nhất khoảng vài
milimét, loài lớn nhất có thể tới hàng mét. Hải miên hầu như có mặt trên toàn thế
giới, sinh sống trong một loạt các môi trường dưới đại dương, từ các vùng cực đến
các vùng nhiệt đới [11]. Thường hải miên phân bố ở các vùng yên tĩnh, bởi vì trầm
tích khuấy động bởi sóng hoặc dòng sẽ chặn các lỗ chân lông, làm cho chúng khó
khăn trong việc ăn và thở [7]. Phần lớn hải miên thường được tìm thấy trên bề mặt
vững chắc như đá, nhưng một số loài có thể gắn vào trầm tích mềm mại [9].
Hải miên dồi dào hơn ở vùng biển ôn đới nhưng ít đa dạng hơn so với vùng
nhiệt đới, có thể vì các sinh vật con mồi của chúng phong phú ở vùng biển nhiệt đới
[11]. Hải miên thuộc lớp Hexactinellida (hải miên thủy tinh) là phổ biến nhất ở
vùng biển Bắc cực và các khu vực sâu của vùng biển ôn đới và nhiệt đới cơ thể hải
miên thủy tinh rất xốp cho phép trích xuất thực phẩm từ các vùng biển nghèo thức
ăn mà không cần phải hoạt động nhiều. Hải miên thuộc lớp Demospongiae và hải
miên lớp Calcarea (hải miên đá vôi) phong phú và đa dạng ở các vùng nước có độ
sâu ít hơn [14].

10. 4
1.2 Đặc điểm cấu tạo và sinh lý
Hải miên được coi là động vật đa bào chưa hoàn thiện (Parazoa) vì có các
đặc điểm sau [3]:
- Cơ thể đa bào nhưng chưa có mô phân hóa. Có nhiều lỗ thủng trên thân,
trong thân có các khe, rãnh .
- Đối xứng phóng xạ hay chưa có kiểu đối xứng ổn định.
- Biểu bì có các tế bào gai dẹp, có lớp tế bào cổ áo làm nhiệm vụ dẫn nước
vào và đẩy nước ra.
- Tầng trung gian khá dày có các tế bào amip và gai xương. Xương là canxi,
silic hay sợi collagen (spongin).
- Chưa có miệng, tiêu hóa nội bào, bài tiết và hô hấp bằng thẩm thấu.
- Chưa có tế bào thần kinh, phản ứng với kích thích theo kiểu cảm ứng.
- Sinh sản vô tính bằng chồi hay mầm, sinh sản hữu tính bằng trứng và tinh
trùng. Phân hóa các lá phôi chưa ổn định, ấu trùng sống tự do.
Các loài hải miên có hình dạng rất phong phú, trường hợp đơn giản nhất là
cơ thể có dạng một cái cốc, có đáy bám vào giá thể, đối diện với đáy là lỗ thoát
nước (osculum) thành cơ thể có nhiều lỗ thủng thông nước (được gọi là ostium).
Nước từ ngoài vào xoang cơ thể qua ostium và thoát ra theo osculum. Nước vào
xoang không chỉ theo một ống thẳng mà có thể đi qua nhiều khoang khác nhau có
lát cắt tế bào cổ áo. Xoang cơ thể còn được gọi là xoang trung tâm hay xoang vị giả
(pseudogastrula). Tùy theo mức độ phức tạp của hệ ống dẫn nước và các phòng roi
lát bằng các tế bào cổ áo mà chia thành các kiểu cấu tạo cơ thể hải miên khác nhau
[3]. Có 4 kiểu cấu trúc cơ thể:
- Kiểu ascon: có rãnh dẫn nước thông trực tiếp với xoang.
- Kiểu sycon: nước qua hốc lõm mới vào xoang vị giả.
- Kiểu leucon: có hệ thống rãnh và hốc phức tạp.
- Kiểu ragon: có hệ thống phức tạp hơn nhiều (ví dụ Leuconic aspera chỉ cao
7cm, dày 1cm nhưng có tới 20.000 khoang và 80.000 rãnh dẫn nước)

11. 5
Hình 1.1: Sơ đồ các kiểu cấu tạo cơ thể của hải miên
Các loại tế bào của hải miên bao gồm : Thành cơ thể 2 lớp tế bào, giữa là
tầng trung giao (còn gọi là tầng keo – mesohyl). Lớp ngoài là biểu mô dẹp, che chở
cho cơ thể. Lớp tế bào trong là tế bào cổ áo có roi (cổ áo của các tế bào cổ áo xem
dưới kính hiển vi điện tử thấy đó là vành nguyên sinh chất gồm nhiều que tế bào
chất, ken dày với nhau). Roi của tế bào cổ áo hoạt động liên tục để đưa dòng nước
vào cơ thể hải miên. Khả năng lọc nước là rất lớn, với 1cm2
có thể lọc được 20 lít
nước trong một ngày. Tầng trung giao gồm nhiều loại tế bào: hình sao có chức phận
liên kết, gai xương có nhiệm vụ nâng đỡ, amip làm nhiệm vụ thực vào và hình
thành các loại tế bào khác khi cần biến đổi. Hoạt động sinh lý nhờ vào tế bào cổ áo
tạo dòng nước liên tục mang thức ăn và oxy qua các lỗ và thải ra theo osculum
(thức ăn gồm 4/5 là vụn bã hữu cơ, 1/5 là sinh vậy nhỏ). Trong xoang vị giả có các
tế bào amip thực bào. Ngoài ra có sự trợ giúp của các vi sợi quanh các lỗ [3].
Bộ khung CaCO3 hay SiO2 hoặc chất hữu cơ (sợi spongin) giống tơ tằm với
hàm lượng iôt cao (14%) có thể là nhiều trục hay một trục, xếp riêng lẻ hay từng bó.
Sợi spongin do nhiều tế bào hình thành, mỗi tế bào là một đoạn, từ các tấm spongin
có thể hủy từng đám tế bào để hình thành nên các lưới sợi.

12. 6
1.3 Đặc điểm sinh sản và phát triển
Hải miên có cả 2 hình thức sinh sản vô tính và hữu tính. Đối với sinh sản vô
tính, có 3 cách là : phân mảnh, nảy chồi và bằng cách sản xuất gemmules. Những
mảnh vỡ của hải miên có thể tách ra bởi các dòng chảy và sóng. Chúng sử dụng các
tính di động của pinacocytes, choanocytes và tái định hình của mesohyl lại gắn
mình vào một bề mặt phù hợp và sau đó xây dựng lại bản thân như hải miên nhỏ
nhưng diễn ra theo một quá trình trong một vài ngày. Một mảnh hải miên chỉ có thể
tái sinh nếu nó chứa cả collencytes để sản xuất mesohyl và archeocytes để sản xuất
tất cả các loại tế bào khác [21]. Một số rất ít loài sinh sản bằng cách nảy chồi [5].
Phần lớn hải miên lưỡng tính. Tế bào sinh dục được hình thành từ tế bào amip hay
tế bào cổ áo. Chúng ở trong tầng trung giao và nằm dưới các phòng roi. Tinh trùng
khi chín sẽ lọt vào phòng roi, theo dòng nước ra ngoài tìm cá thể khác để thụ tinh.
Sau đó hợp tử phát triển, hình thành phôi nang lưỡng cực (amphiblastula), tức là tế
bào phôi ở hai cực khác nhau [3].
Hải miên trong vùng ôn đới sinh sống ít nhất trong một vài năm, nhưng một
số loài sống ở vùng nhiệt đới và cũng có thể ở những đại dương sâu có thể sống 200
năm hoặc hơn. Một số ít bị vôi hóa chỉ tăng 0.2 mm mỗi năm và nếu tỉ lệ đó là hằng
số thì vật mẫu có kích thước 1 m phải được khoảng 5000 năm tuổi. Một số loài hải
miên bắt đầu sinh sản hữu tính khi chỉ một vài tuần tuổi, trong khi những loài khác
chờ đợi cho đến khi vài năm tuổi [21].
1.4 Đa dạng sinh học của hải miên
1.4.1 Hệ thống phân loại hải miên
Hải miên được phân loại theo truyền thống thành ba lớp: lớp
Demospongiae, lớp Calcarea (hải miên đá vôi) và lớp Hexactinellida (hải miên thủy
tinh). Các nghiên cứu phát sinh chủng loại gần đây đã chỉ ra rằng trong lớp
Demospongiae có sự phân biệt về phát sinh loài nên người ta chia lớp này thành
Demospongiae và Homoscleromorpha. Hiện nay, Homoscleromorpha đã được các
nhà khoa học công nhận là lớp thứ tư của hải miên [5] [20].

13. 7
Trong bảng thống kê hải miên (Catalogue of Life,
http://www.catalogueoflife.org/col/browse/classification/name/Porifera) xác định
lớp Calcarea có 715 loài (81 giống, 24 họ, 5 bộ); lớp Demospongiae có 7260 loài
(916 giống, 99 họ, 23 bộ); lớp Hexactinellida có 618 loài (194 giống, 20 họ, 5 bộ);
lớp Homoscleromorpha có 103 loài (8 giống, 2 họ, 1 bộ).
Bảng 1.1: So sánh một số đặc điểm cấu tạo giữa các lớp hải miên
Calcarea Hexactinellida Demospongiae Homoscleromorpha
Loại tế
bào
Nhân đơn,
màng đơn
bên ngoài
Lớp tế bào
ngoài là hợp
bào
Nhân đơn,
màng đơn bên
ngoài
Nhân đơn, màng đơn
bên ngoài
Gai CaCO3 (Có
1,3 hay 4
trục)
Silica
(6 tia)
Silica
(có 1 hay 4
trục)
Silica
(4 tia)
Sợi
Spongin
Không có Không có Ở nhiều loài Ở nhiều loài
Bộ khung
ngoài
Được làm
bằng
CaCO3 nếu
có
Không có Ở một số loài Không có
Hình
dáng cơ
thể
Asconoid,
syconoid,
leuconoid
Syconoid,
Leuconoid
Leuconoid
Sylleibid hoặc
leuconoid
1.4.2 Tình hình nghiên cứu về đa dạng sinh học và phát sinh chủng loại của hải
miên
 Các nghiên cứu ngoài nước:
Theo World Porifera Database (2016), có hơn 8700 loài hải miên được ghi
nhận, trong đó lớp Demospongiae (được Sollas phân loại năm 1885) là lớp đa dạng

14. 8
nhất, chiếm tới 80% số loài hải miên được biết cho tới nay. Nhiều loài hải miên trên
thế giới còn chưa được phát hiện và thống kê do các nghiên cứu hiện nay chủ yếu
tập trung ở một số vùng biển lớn như khu vực biển Caribbean, Địa Trung Hải và
Châu Úc trong khi rất nhiều vùng biển khác như khu vực đông nam Thái Bình
Dương, vùng biển Đông Nam Á...vẫn chưa được khảo sát đầy đủ. Các công trình
mô tả đầu tiên về hải miên ở biển Đông được thực hiện vào những năm cuối của thế
kỷ 18 và giữa thế kỷ 19 từ các bộ sưu tập của các nhà buôn châu Âu và một số điều
tra khoa học khởi thủy. Cho đến gần đây, có khoảng 1500 loài hải miên đã được
xác định ở khu vực biển Đông. Tuy nhiên, còn nhiều loài chưa được phát hiện và
định loại một cách rõ ràng [21].
Việc đặt Porifera vào đúng vị trí trong cây phát sinh chủng loại của các cơ
thể đa bào nói chung và động vật đa bào nói riêng là quá trình nghiên cứu lâu dài và
khó khăn. Nhóm sinh vật này lúc đầu được xếp vào nhóm thực vật-động vật và sau
đó thuộc Zoophyta hoặc Mesozoa và cuối cùng Parazoa. Chỉ sau khi kỹ thuật sinh
học phân tử phát triển thì mới có thể đặt nhóm có đặc điểm hình thái thuộc nhóm
Porifera trở thành một giới duy nhất: Metazoa. Những bằng chứng đầu tiên là việc
phát hiện và tách được những phân tử gắn kết tế bào-tế bào và mạng lưới tế bào ở
trong hải miên. Các phân tử này có độ tương đồng cao về trình tự và có chức năng
tương tự với các phân tử tương đương ở metazoan. Phần lớn nghiên cứu hải miên
dựa vào hệ thống phân loại truyền thống theo đặc điểm hình thái bộ khung
(skeleton) của hải miên trên cơ sở các công trình được xuất bản từ những thế kỷ
trước [5]. Trong một số công trình gần đây, các nhà khoa học trên thế giới đã kết
hợp các đặc điểm sinh học khác vào hệ thống phân loại hải miên như các chỉ thị
sinh học phân tử, hóa sinh…trong đó các chỉ thị phân tử đã có đóng góp quan trọng
trong việc phát hiện những loài mới, loài khó phân biệt về hình thái cũng như làm
sáng tỏ mối quan hệ phát sinh chủng loại ở hải miên [20].
Những công bố khoa học về đa dạng của sinh vật biển trong một vài thập kỷ
qua cho thấy đa dạng sinh học biển, trong đó có hải miên chưa được đánh giá đúng
ở tất cả các cấp độ từ di truyền, loài, hệ sinh thái và quy mô (không gian và thời
gian). Hàng loạt các marker phân tử đã được dùng ở các mức độ khác nhau để giải

15. 9
quyết quá trình phát sinh chủng loại của Porifera. Adams và cộng sự (1999) sử
dùng trình tự gen 18S rRNA để nghiên cứu mối quan hệ trong họ Porifera và tìm
thấy bằng chứng Demospongiae/Hexactinellida hình thành một nhóm riêng biệt và
Calcarea không thuộc vào nhóm này mà họp thành một nhánh với bộ Ctenophora.
McInerney và cộng sự (1999) xem xét tiềm năng của gen 18S và 28S rRNA khi
nghiên cứu bộ Astrophorida và phát hiện ra rằng vùng 700 bp ở đầu 5’ của 28S
rRNA có tiềm năng phân biệt ở mức độ họ và loài của nhóm này, trong khi đoạn
gen 18S rRNA dài 1300 bp lại có mức độ đa dạng thấp . Alvarez và cộng sự (2000)
phân tích mối quan hệ họ hàng của họ Axinellidae sử dụng một phần trình tự gen
28S rRNA và số liệu về hình thái và thấy rằng các loài trong họ Axinellidae đều có
cùng nguồn gốc (monophyly) theo số liệu hình thái và paraphyly theo số liệu phân
tử. Borchiellini và cộng sự (2001) đã cố gắng giải quyết trả lời câu hỏi là Porifera là
mono- hay là paraphyly sử dụng trình tự đầy đủ của gen 18S rDNA và chỉ ra rằng
Porifera là paraphyly. Vùng nối thứ nhất và thứ hai (internal transcribed spacer,
ITS-1 và ITS-2) giữa các gen 18S, 5,8 S và 28S ribosome RNA cũng đã được sử
dụng để nghiên cứu mối quan hệ trong và giữa các loài [22][6][16]. Ở các loài động
vật không xương sống khác gen 12S rDNA cũng như 16S rDNA của ty thể đã được
sử dụng phân tích đa dạng sinh học và phát sinh chủng loại [8]. Tiểu đơn vị
cytochrome c oxidase I (COI) cũng đã được sử dụng làm marker phân tử cho nhiều
loài khác nhau từ động vật bậc thấp đến cao [17].
 Trong nước:
Những nghiên cứu về hải miên ở biển Việt nam còn rất ít. Một vài công trình
được công bố như nghiên cứu của Lindgren, phát hiện của Dawydoff (trích dẫn bởi
Azzini và cộng sự, 2007), và những nghiên cứu trên bộ sưu tập hải miên ở Nha
Trang của Lévi (1961) và gần đây là công trình về nghiên cứu về hải miên “boring
sponges" [13]. Trong bảng thống kê hải miên ở biển Đông, Hooper và cộng sự
(2000) [12] xác định có khoảng 176 loài hải miên thuộc lớp Demospongiae trong
đó có 129 loài (được xác định ở mức độ loài) ở bờ biển của Việt Nam. Azzini và
cộng sự, (2007) [16] phát hiện tổng số có 63 loài Demosponge ở các đảo của Vịnh
Hạ Long. Trong số đó, có 36 loài được xác định loài hoàn chỉnh và 23/36 loài lần

16. DOWNLOAD ĐỂ XEM ĐẦY ĐỦ NỘI DUNG
MÃ TÀI LIỆU: 50283
DOWNLOAD: + Link tải: Xem bình luận
Hoặc : + ZALO: 0932091562