Dokumen tersebut membahas tentang validasi dan verifikasi metode analisis. Secara ringkas, dokumen menjelaskan tentang tujuan dan tahapan-tahapan validasi dan verifikasi metode untuk memastikan bahwa suatu metode dapat digunakan secara akurat dan konsisten untuk menganalisis sampel.
2. Validasi
Kualifikasi
•Suatu percobaan laboratorium
•Untuk membuktikan bahwa
karakteristik kinerja metode
analisis telah memenuhi
persyaratan yang telah ditetapkan
sebelumnya
Kualifikasi instrumen:
DQ, IQ, OQ dan PQ
•Suatu percobaan laboratorium
•Untuk membuktikan bahwa
laboratorium mampu
menggunakan metode analisis
standar pada kondisi nyata di
laboratoriumnya
3. Metode tidak baku,
Metode pengembangan
Metode baku yang
dimodifikasi
Metode baku yang
digunakan di luar
lingkup
Verifikasi
Validasi
4. Adopsi metode baku/standar
Untuk membuktikan bahwa suatu
laboratorium mampu melakukan analisis di
laboratoriumnya
untuk menunjukkan bahwa kinerja metode
dapat ditiru atau diulang oleh laboratorium
yang bersangkutan dengan hasil yang sama
5. Permintaan
Validasi/Verifikasi
Literature search
Telaah karakteristik Analit
Penyiapan bahan dan alat
Pengembangan/
optimasi Metode
Pembuatan
protokol
Validasi/verifikasi
Percobaan Lab
mengacu protokol
validasi/verifikasi
Analisis Data
Penyususnan Laporan
Validasi/Verifikasi
Penyerahan
dokumen
Tahapan Validasi/Verifikasi Metode
8. 8
Categories of Analysis
I. Quantitation of major components of bulk drug
substances/active ingredients
II. Determination of impurities/degradation products
A. Quantitative B. Limit Test
III. Determination of performance characteristics
(dissolution test, drug release etc.)
IV. Identification test
9. 9
Analytical
Performa
nce
Parameter
Assay
Category 1
Assay Category 2
Assay
Category
3
Quantitati
ve
Limit
Tests
Accuracy Yes Yes * *
Precision Yes Yes No Yes
Specificity Yes Yes Yes *
LOD No No Yes *
LOQ No Yes No *
Linearity Yes Yes No *
Range Yes Yes * *
Ruggedne
ss
Yes Yes Yes Yes
* May be required, depending on the nature of the specific test.
13. USP dan ICH menggunakan istilah
Specificity
IUPAC dan AOAC menggunakan istilah
Selectivity
AOAC: Specificity “highest selectivity”
13
14. Specificity (USP/ICH):
Kemampuan untuk mengetahui adanya analit
di dalam campuran , tanpa adanya pengaruh
dari zat lain seperti impurities, hasil urai dan
komponen matriks.
Kuliah Anfar II, 2008 FFUA
14
Selectivity menggambarkan kemampuan
suatu metode analisis untuk membedakan
analit dari komponen lainnya pada sampel
15. Suntikkan atau totolkan:
Blanko sampel/Placebo
(Sampel minus analit)
Zat Hasil degradasi
(degradants)
Zat yang memiliki struktur
mirip (Related
Substances
15
Jika tersedia zat hasil degradasi:
Selektif Rs ≥ 1,5
16. Lakukan forced degradation studies
Sampel disimpan pada suhu/kelembaban
tertentu atau penambahan oksidator
Bandingkan profil pemisahan peak
sebelum dan sesudah perlakuan
16
Jika tidak tersedia zat hasil degradasi (Degradants)
17. Heat Temperature (50 - 60 oC)
Humidity Kelembaban (70 to 80%)
Acid Hydrolysis HCl 0.1 N
Base Hydrolysis NaOH 0.1 N
Oxidation H2O2 (3 to 30%)
Light UV/Vis
17
18.
19. diode array detector spectra overlay
Evaluasi korelasinya (r, MF)
r> 0,99 or MF>990
Spectra overlay “upslope,
apex dan down slope”
Peak should be “pure”
19
MF = 1000 r = 1 100% pure peak
MF > 990 pure
MF < 900 impure
900 < MF < 950 contaminated
20. 20
Pure and Impure HPLC peaks
Peak purity tests can also be evaluated with
– The 3D-spectra of Photodiode array detectors
– Mass spectrometry
21.
22. Linieritas metode analisis menunjukkan
kemampuan suatu metode untuk
memperoleh hasil uji, yang baik langsung
maupun dengan definisi transformasi
matematis yang baik, proporsional dengan
konsentrasi analit dalam sampel pada
rentang tertentu (Leyva, 2008).
23. Melalui analisis statistik
Linear Regression (y = mx + b)
Correlation Coefficient, y-intercept (b), slope
(m), residual sum of squares
Disarankan menggunakan minimum 5 macam
konsentrasi analit
Disarankan terhadap sampel yang independen, bukan
dari sampel hasil pengenceran
23
26. Interval antara konsentrasi terbesar dan
terkecil dari analit dalam sampel
Memenuhi syarat dalam hal presisi, akurasi dan
linieritas
26
27. For Drug Substance & Drug product Assay
80 to 120% of test Concentration
For Content Uniformity Assay
70 to 130% of test Concentration
For Dissolution Test Method
+/- 20% over entire Specification Range
For Impurity Assays
From Reporting Level to 120% of Impurity
Specification for Impurity Assays
27
29. Biasanya dinyatakan dalam persen perolehan
kembali (% recovery)
Dapat dilakukan melalui pebandingan hasil
analisis antara metode yang divalidasi dengan
metode standar uji t harus tidak berbeda
makna
Dapat dilakukan metode adisi standar terhadap
blanko atau sampel.
29
30. Persen perolehan kembali (% recovery)
Persyaratan untuk assay validation = 98-102%
Dianjurkan menggunakan tiga macam konsentrasi
masing-masing 3 kali replikasi
Adisi standar pada blanko/plasebo dianjurkan
konsentrasi 80% - 120 %
30
%
100
Re
% x
ya
sesungguhn
Kadar
diperoleh
yang
Kadar
c
31. 31
KURVA AKURASI menurut Funk et. al.
- Untuk mengetahui ada atau tidaknya kesalahan sistematis,
Dibuat kurva regresi antara Xf (konsentrasi analit hasil
analisi) terhadap Xc (konsentrasi nominal analit)
Xf = af + bf. Xc
-Dihitung confidence range (Cr) dari intercept {VB(af)} dan
slope {VB(bf)} dari recovery Pada p = 0.05
Qxx
Xc
N
1
.
S
.
t
a
=
a
Cr
2
yf
table
f
f
Qxx
.S
t
b
=
b
Cr
yf
table
f
f
2
-
N
)]
X
-
b
+
(a
-
[X
=
S
2
i
f
f
if
yf
t = Student-t-factor f = N-2, P = 95 %.
32. 32
M. Yuwono & G. Indrayanto, Validation method of Chromatography Methods of
Analysis, Profiles of Drugs Substances, Excipients and Related Methodology,
Vol. 32, Elsevier Academic Press, San Diego, New York, Boston, London,
Sydney, Tokyo, Toronto. In Press (2005)
34. Kedekatan dari suatu seri pengukuran yang diperoleh
dari sampel yang homogen
Dalam bentuk RSD (relative standard deviation)
Meliputi:
- Repeatability
- Intermediate Precision
- Reproducibility
34
35. Kondisi sama pada interval waktu yang singkat
Satu larutan uji disuntikkan berkali-kali pada hari
yang sama, alat yang sama, analisis serta kondisi lain
yang sama.
Disebut juga
Intra-assay precision
35
36. 36
Disebut juga “within-laboratory variations”.
Berbeda hari, atau analis, atau instrument
(dalam satu laboratorium)
Sebagai bagian Ruggedness menurut USP
37. Repeatability test at different labs.
Berbeda analisis atau instrument dari laboratorium
yang berbeda
37
38. Dianjurkan menggunakan 3 macam
konsentrasi berbeda, misal 80, 100 dan 120 %
dari konsentrasi target
Masing-masing konsentrasi dilakukan 3
replikasi
Dianjurkan dilakukan pada hari yang berbeda
dan analisis yang berbeda
Kriteria penerimaan: RSD < 2% (Assay
validation)
38
41. Lowest amount of
analyte in a sample
that can be detected
but not necessarily
quantitated.
Estimated by Signal to
Noise Ratio of 3:1.
41
Lowest amount of
analyte in a sample
that can be quantified
with suitable accuracy
and precision.
Estimated by Signal to
Noise Ratio of 10:1.
Quantitation
Limit (QL)
42. 1. Based in Visual Evaluations
- Used for non-instrumental methods
2. Based on Signal-to Noise-Ratio
- 3:1 for Detection Limit
- 10:1 for Quantitation Limit
3. Based on Standard Deviation of the Response and
the Slope
42
Detection Limit (DL) and Quantitation Limit (QL)
43. Based on Visual Evaluation
may be used for non-instrumental
methods.
Based on Signal-to-Noise
Based on the Standard Deviation of the
Response and the Slope
43
45. where
s = the standard deviation of the response ( SD
of blank samples or SD of intercepts of regression line)
S = the slope of the calibration curve
45
46. Definition: Capacity to remain unaffected by small
variations in method parameters
Determination: Comparison results under differing
conditions with precision under normal conditions
Variations may include: stability of analytical solution,
variation of pH in a mobile phase, different column
(lot/supplier), temperature, flow rate.
46
Robustness
47. degree of reproducibility of test results
obtained by the analysis of same samples under a
variety of conditions,
such as different laboratories, analysts,
instruments, different lot of reagents,
days etc.
47
48. “When sponsors make changes in the
analytical procedure, drug substance, drug
product, the changes, may necessitate
revalidation of the analytical procedures.”
“The degree of revalidation depends on the
nature of the change.”
48